美法仑治愈荷瘤小鼠的过程与TNFα的关系

目的探讨单一剂量的美法仑治愈荷瘤野生型C57BL/6小鼠的过程与肿瘤坏死因子α(TNFα)的关系。方法以3种遗传背景相同、肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)基因型不同的TNFR1 / 、TNFR1 /-和TNFR1-/-C57BL/6小鼠为实验动物,皮下接种数量相同的小鼠淋巴瘤EL4细胞。接种瘤细胞后12d,给基因型不同的各组荷瘤小鼠腹腔内单次注射7.5mg/kg的美法仑。以荷瘤野生型C57BL/6小鼠(TNFR1 / )为对照,观察美法仑对荷瘤TNFR1 /-C57BL/6小鼠和荷瘤TNFR1-/-C57BL/6小鼠的治疗效应。结果在美法仑(7.5mg/kg)治疗后的1周内,基因型不同的各组荷瘤小鼠肿瘤消退的速度基本相同。在随后的2月内,荷瘤TNFR1 / 和TNFR1 /-C57BL/6小鼠的肿瘤结节逐渐消退、肿瘤治愈;而多数荷瘤TNFR1-/-C57BL/6小鼠的肿瘤结节缩小后又再次出现并逐渐长大、肿瘤复发。结论TNFα与美法仑治愈肿瘤的过程密切相关,其中美法仑的抗肿瘤作用与荷瘤小鼠TNFR1的表达无关,但在美法仑治疗后,机体预防或避免肿瘤复发方面需要TNFR1在机体细胞的表达,而不是在肿瘤细胞的表达。     

养胃合剂对环磷酰胺化疗荷瘤

目的:观察养胃合剂对环磷酰胺化疗荷瘤小鼠骨髓抑制的影响。方法:对C₅₇BL小鼠进行肉瘤180(S₁₈₀)接种造模,给予养胃合剂灌胃和环磷酰胺(CTX)腹腔注射,停药24h后,将各组小鼠断颈处死,每只小鼠取左侧股骨干,冲洗股骨骨髓,计数骨髓有核细胞。结果:用高、低剂量养胃合剂的荷瘤化疗小鼠骨髓有核细胞数,均显著高于荷瘤化疗组(P＜0.01)。结论:养胃合剂能减轻环磷酰胺化疗荷瘤小鼠的骨髓抑制。     

香加皮杠柳苷对荷瘤小鼠的免疫调节作用

目的:研究香加皮杠柳苷(CPP)对荷瘤小鼠的免疫调节作用及其作用机制.方法:建立BALB/c小鼠H22皮下移植瘤,观察低、中、高剂量CPP(0.25、0.50、1.00 mg/kg)对荷瘤小鼠免疫器官的影响,应用流式细胞术检测各组小鼠脾T淋巴细胞亚群的分布,应用MTT法检测ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖活性,用ELISA试剂盒测定各组荷瘤小鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-2和IL-12的含量.结果:对照组荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数均明显低于未荷瘤正常小鼠(P<0.05),而CPP组荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数较对照组明显增高,甚至高于正常对照组(P<0.05).CPP对荷瘤小鼠体内CD8+T细胞数量无影响,但可明显上调CD3+、CD4+T细胞数及CD4+/CD8+比值,其中CD3+、CD4+细胞百分率与正常小鼠无差别(P>0.05),CD4+/CD8+比值高于正常小鼠(P<0.05).CPP可明显增强ConA诱导的荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力,SI甚至超过正常对照组(P<0.05).不同剂量CPP组小鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-12水平均较对照组明显增高(P<0.05),并随剂量增加呈升高趋势,至接近或超过正常小鼠水平.结论:CPP可保护荷瘤小鼠的免疫器官不受损害,并可明显提高CD4+T细胞百分率和CD4+/CD8+比值,增强荷瘤小鼠T细胞增殖能力,促进细胞因子TNF-α、IL-2和IL-12的产生,表明CPP具有显著的免疫增强作用.     

软骨多糖作用下S_(180)荷瘤小鼠免疫功能的变化

研究软骨多糖作用下,S180荷瘤小鼠的免疫功能的变化。采用小鼠肉瘤S180细胞建立动物腹水瘤模型,然后随机将小鼠分为空白组、模型组和治疗组,连续腹腔注射生理盐水或软骨多糖,分别测量外周血中性粒细胞、T淋巴细胞亚型的变化,及巨噬细胞的活性变化。结果发现软骨多糖能够提高荷瘤小鼠中性粒细胞的数目,提高外周血细胞CD3+、CD4+细胞数,增加CD4+/CD8+细胞比值,显著提高巨噬细胞吞噬中性红和鸡红细胞的能力。软骨多糖能通过增强S180荷瘤小鼠的免疫功能而抑制肿瘤的生长。     

荷瘤小鼠肿瘤组织髓系抑制性细胞的比例变化及意义

研究荷瘤小鼠肿瘤组织中髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)的比例变化及分布特点,探讨其在机体抗肿瘤免疫中发挥的作用。采用肝癌细胞原位移植法建立小鼠原位肝癌模型,流式细胞仪检测荷瘤小鼠不同时间肿瘤组织中MDSC的比例;免疫组织化学法检测MDSC在肿瘤组织中的分布情况,以正常小鼠作对照。MDSC的比例在荷瘤小鼠肿瘤组织中比正常小鼠肝组织中明显升高,差别具有统计学意义(P0.05),且随着荷瘤时间的延长,MDSC的比例逐渐增加。正常小鼠肝组织中仅有极少量MDSC,而荷瘤后大量增加的MDSC主要分布于肿瘤组织与正常组织交界处。可见荷瘤小鼠肿瘤组织中MDSC的比例与肿瘤进展密切相关,提示荷瘤小鼠体内MDSC增多可能参与肿瘤的免疫逃逸,促进肿瘤细胞的生长。     

促红细胞生成素对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:检测促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对荷黑色素瘤小鼠免疫功能的影响.方法:将C57BL/6小鼠随机分为3组:正常对照组、盐水处理组和EPO处理组,盐水处理组和EPO处理组小鼠皮下接种黑色素瘤细胞B16.17天后,检测各组小鼠外周血中红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞压积(Hct)和白细胞(WBC)数量及脾脏脏器指数;应用流式细胞术检测脾细胞CD4+、CD8+T细胞亚群的分布;ELISA检测血清中IL-2和TNF-α细胞因子的水平.结果:盐水处理组荷瘤小鼠外周血中RBC、Hb和Hct含量明显低于正常对照组小鼠(P＜0.05),应用EPO可明显提高荷瘤小鼠外周血中RBC、Hb和Hct含量及脾脏脏器指数(P＜0.05),三组小鼠外周血中WBC数量无明显差别(P＞0.05);盐水处理组及EPO处理组荷瘤小鼠脾脏CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+T细胞比值明显低于正常小鼠(P＜0.05).EPO处理组与盐水处理组相比,CD4+T细胞百分率无差别(P＞0.05),而CD8+T细胞百分率下降(P＜0.05),致使EPO处理组小鼠CD4 +/CD8+T细胞比值升高(P＜0.05);盐水处理组及EPO处理组荷瘤小鼠血清中TNF-α、IL-2含量明显低于正常小鼠(P＜0.05),EPO处理组小鼠血清中IL-2水平与盐水处理组相比增高(P＜0.05),但该两组小鼠血清中TNF-α含量无明显差别(P＞0.05).结论:EPO在改善荷瘤小鼠贫血状态的同时,还可通过提高外周血CD4 +/CD8+T细胞比值和IL-2含量而增强小鼠的免疫功能.     

玉屏风散对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响

目的:探讨玉屏风散对荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响.方法:采用体外培养S180肉瘤细胞,接种健康小鼠,建立荷瘤小鼠模型,并给予玉屏风散治疗,观察计算抑瘤率,检测巨噬细胞吞噬活性,巨噬细胞NO分泌量,自然杀伤细胞(NK)活性,T淋巴细胞增殖能力及白介素-2(IL-2)的产生及活性.结果:玉屏风散可提高荷瘤小鼠吞噬细胞的功能,增加巨噬细胞NO分泌量,促进荷瘤小鼠白介素-2(IL-2)的产生,淋巴细胞的转化、及NK细胞活性.结论:玉屏风散可增强荷瘤小鼠的免疫功能,抑制模型鼠肿瘤的生长.     

HSP70多肽复合物修饰DCs疫苗抗胰腺癌荷瘤小鼠的实验研究

目的:探讨负载热休克蛋白70多肽复合物(HSP70-PC)抗原的树突状细胞(DCs)疫苗对胰腺癌荷瘤小鼠的免疫治疗作用.方法:采用低渗裂解、ConA-Sepharose亲和层析及ADP-Agarose亲和层析法,从小鼠胰腺癌(MPC83)肿瘤组织中纯化HSP70-PC,修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DCs),制备树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗,用MTT法检测混合淋巴细胞反应(MLR)中HSP70-PC致敏DC对CTL的增殖及活化效果;建立MPC83荷瘤小鼠模型,观察树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗对荷瘤小鼠治疗的效果和小鼠存活期.结果:经上述方法分离、纯化获得了较高纯度的HSP70-PC蛋白质;HSP70-PC在1.5～2.0 μg/ml范围内可达到刺激树突状细胞最强效果,用HSP70-PC修饰的DCs能增强T细胞的增殖和活化能力;应用树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗治疗荷瘤小鼠能显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠存活期.结论:采用低压亲和层析柱可从胰腺癌瘤块中获得较高纯度HSP70多肽复合物,其修饰的DCs疫苗用于荷瘤小鼠免疫治疗有显著疗效,为临床胰腺癌生物免疫治疗奠定基础.     

人肝癌HepG2细胞小鼠荷瘤模型的建立及免疫耐受的探讨

目的 建立正常免疫背景小鼠的人肝癌荷瘤模型,探讨人肿瘤细胞与胎鼠异种嵌合产生的免疫耐受。 方法 用绿色荧光蛋白（GFP）标记人肝癌细胞系HepG2,将GFP- HepG2细胞注射入孕16.5d的胎鼠腹腔内,观察新生小鼠腹腔内荷瘤情况及酶联免疫吸附法（ELISA）检测荷瘤小鼠血清人甲胎蛋白（AFP）含量; 小鼠成年后进行皮下成瘤实验及流式细胞术检测小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞亚群变化。 结果 观察到经胎鼠腹腔注射的人GFP- HepG2细胞在新生鼠体内种植并生长于肝脏,分泌人甲胎蛋白;皮下荷瘤实验观察到经胎体注射GFP HepG2细胞诱导免疫耐受后,部分小鼠成年后仍可支持皮下HepG2细胞荷瘤,流式细胞术检测表明,诱导耐受后的小鼠免疫系统仍对人肝癌细胞保留有较弱的攻击。 结论 通过胎鼠腹腔注射人GFP- HepG2细胞可以建立人肝癌细胞小鼠荷瘤模型,部分荷瘤后的小鼠具有免疫耐受的能力。     

亮菌多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能的研究

目的研究亮菌多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法用S180瘤细胞建立动物模型,通过腹腔注射观察亮菌多糖对荷瘤小鼠淋巴细胞增殖反应、NK细胞活性及IL-2诱生的影响。结果亮菌多糖能够显著提高荷瘤小鼠淋巴细胞的增殖能力、NK细胞活性、显著促进脾细胞产生IL-2。结论亮菌多糖能够显著提高机体免疫调节功能。     

艾灸对荷瘤小鼠免疫功能的增强作用

作者通过观察艾灸大椎穴对荷瘤小鼠脾淋巴细胞转化,NK细胞,LAK细胞活性,IL-2产生水平,探讨艾灸抑瘤效应的免疫学机理。结果显示:艾灸对荷瘤小鼠免疫功能低下或受抑状态,可起到正向免疫调节作用;艾灸治疗组小鼠T淋巴细胞转化,NK、LAK细胞活性;IL-2产生水平较荷瘤对照组明显增高。本研究结果也显示艾灸的治疗作用有选择性的相对的腧穴特异性,艾灸大椎穴组T细胞转化率、NK细胞活性明显高于艾灸非经穴对照组。艾灸抑瘤效应,可能是通过改善荷瘤机体非特异性免疫功能状态,抑制移植性肿瘤在新宿主的早期生长、发展的结果。     

大蒜素促进子宫内膜癌荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡

目的探讨大蒜素对子宫内膜癌荷瘤小鼠肿瘤组织的影响及其机制。方法取40只BALB/c裸鼠和人子宫内膜癌细胞系Ishikawa建立子宫内膜癌荷瘤小鼠模型。实验分为模型组(model)和腹腔注入大蒜素(allicin)10、20和40 mg/kg每组2 mL为干预组。测量瘤体积、计算抑瘤率、HE观察病理变化及流式细胞计量术检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TLR4和MyD88 mRNA表达;Western blot检测TLR4和MyD88蛋白表达。结果各干预组瘤体积缩小,呈剂量依赖性增加抑瘤率(P0.05);干预组细胞皱缩、核染色质向边缘集中、片状坏死等病理表现,肿瘤组织细胞凋亡率明显降低(P0.05);肿瘤组织TLR4、MyD88 mRNA及蛋白相对表达量降低(P0.05)。结论大蒜素可抑制子宫内膜癌荷瘤小鼠肿瘤增长及促进细胞凋亡。     

顺铂联合DC疫苗对荷瘤小鼠抗肿瘤作用观察

目的:观察顺铂联合DC疫苗对荷瘤小鼠抗肿瘤作用。方法:用终浓度20μg/ml的顺铂处理体外培养的小鼠黑色素瘤B16或B16-hsp70L1细胞,24小时后,Western blot方法观察HMGB1、hsp70蛋白表达;用顺铂处理的B16或B16-hsp70L1细胞裂解液负载DC,LPS诱导成熟,流式细胞仪分析DCs表面MHCⅠ、ICAM-1、CD86的表达。制备荷瘤小鼠模型,给荷瘤小鼠经腹腔注射顺铂(100μg/只),瘤内注射DC疫苗(3×106/只),观察肿瘤生长曲线、荷瘤小鼠脾脏中肿瘤抗原特异性CD8+T淋巴细胞IFN-γ的分泌及CTL活性。结果:顺铂显著促进B16或B16-hsp70L1细胞HMGB1的表达,对hsp70蛋白表达影响不明显;顺铂处理的B16或B16-hsp70L1细胞裂解液负载DC后,MHCⅠ、ICAM-1及CD86表达率分别为41%、39%、42%和47%、41%、42%;顺铂联合DC疫苗不仅显著抑制荷瘤小鼠肿瘤增殖(P0.05),对荷瘤小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞IFN-γ的分泌及CTL活性也有明显的提高。结论:顺铂处理的B16细胞裂解液可诱导DC活化;联合DC疫苗后不仅显著抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,对肿瘤特异性免疫应答也具有一定的促进作用。     

氯喹对S_(180)荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制

目的探讨氯喹(CQ)对小鼠移植性肉瘤S_(180)的抑瘤作用及其可能机制。方法采用40只S_(180)荷瘤小鼠分为模型组,氯喹低剂量组,氯喹中剂量组,氯喹高剂量组进行体内抑瘤实验,观察不同浓度氯喹对小鼠肉瘤S_(180)的抑制作用;透射电子显微镜观察氯喹作用下荷瘤鼠肿瘤细胞超微结构的变化;流式细胞术检测氯喹诱导荷瘤鼠S_(180)细胞凋亡的情况;免疫组织化学方法检测相关凋亡因子Bcl-2、细胞色素C和Cle-Caspase-3的表达情况;Western blotting检测荷瘤组织Bcl-2和Cle-Caspase-3蛋白表达水平的变化以及线粒体和细胞质中细胞色素C蛋白含量的变化。结果与模型组相比较,氯喹处理组小鼠移植肉瘤S_(180)生长速度显著减慢,肿瘤体积和瘤质量明显减小(P0.05);透射电子显微镜观察发现,与模型组比较氯喹处理组肿瘤细胞形态出现明显凋亡损伤改变,凋亡小体形成;各剂量组氯喹均可诱导荷瘤鼠S_(180)细胞凋亡,使抗凋亡因子Bcl-2表达下调,凋亡因子Cle-Caspase-3表达上调(P0.05);并且氯喹能够降低线粒体内细胞色素C蛋白的表达,提高细胞质细胞色素C蛋白的表达(P0.05),促使线粒体内细胞色素C向细胞质内释放。结论氯喹能够抑制小鼠S_(180)肉瘤的生长,可能是通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,从而发挥抑瘤的作用。     

荷瘤小鼠红细胞免疫功能观察

本实验利用小鼠可移植性组织细胞型淋巴瘤ＬⅡ接种于近交系６１５小鼠右后肢爪垫皮下，按宿主荷瘤时间以及肿瘤生长发展的不同阶段分期分批处死动物，每批动物均从眼房静脉窦取血，检测荷瘤小鼠红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ），红细胞免疫复合物花环率（ＲＢＣ－ＩＣＲ），观察荷瘤动物在肿瘤发展的几个不同时期红细胞免疫功能的变化情况。结果显示，荷瘤小鼠的ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ明显低于正常，并且随着肿瘤的发展呈下降趋势。在肿瘤侵袭早期和中期ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ下降十分迅速，而到肿瘤转移开始至转移晚期以后，其下降速度减慢。荷瘤小鼠的ＲＢＣ－ＩＣＲ高于正常，在肿瘤侵袭中期急骤增高，以后稳定在较高水平。本实验结果提示，肿瘤侵袭转移可能与宿主红细胞免疫功能有一定的关系，这些改变可作为评估肿瘤发展程度的参考指标之一，而且对于研究肿瘤转移机理有着十分重要的意义。     

养胃合剂对环磷酰胺化疗荷瘤小鼠骨髓抑制的影响

目的：观察养胃合剂对环磷酰胺化疗荷瘤小鼠骨髓抑制的影响。方法：对C57BL小鼠进行肉瘤180（S180）接种造模，给予养胃合剂灌胃和环磷酰胺（CTX）腹腔注射，停药24h后，将各组小鼠断颈处死，每只小鼠取左侧股骨干，冲洗股骨骨髓，计数骨髓有核细胞。结果：用高、低剂量养胃合剂的荷瘤化疗小鼠骨髓有核细胞数，均显著高于荷瘤化疗组（P＜0．01）。结论：养胃合剂能减轻环磷酰胺化疗荷瘤小鼠的骨髓抑制。     

荷瘤小鼠脾细胞淋转、NK和LAK活性

观察了Ｓ１８０腹水瘤荷瘤小鼠早期及晚期脾细胞部份免疫功能的变化，并分析了其变化的相关性。结果显示在荷瘤早期脾细胞ＮＫ活性、ＬＡＫ活性及淋巴细胞转化反应已明显下降，与荷瘤晚期比无显著差异。ＮＫ活性与ＬＡＫ活性变化呈正相关，但淋巴细胞转化与ＮＫ活性及ＬＡＫ活性变化无关。说明荷瘤小鼠的脾细胞免疫功能抑制发生较早，检测一项免疫指标不能全面反映细胞免疫功能。     

香菇多糖对荷瘤小鼠胸腺、脾和肿瘤的影响

目的:探讨香菇多糖不同给药次数对小鼠S180肉瘤的作用及其机制.方法:制备S180荷瘤小鼠动物模型,于接种肿瘤后第2日始分别隔日腹腔注射生理盐水或香菇多糖,按给药3次和7次后分刖处死各组小鼠,观察小鼠胸腺指数、脾指数、肿瘤指数等各项指标以及肿瘤组织的病理改变.结果:给药7次组与同时期荷瘤生理盐水组相比,胸腺指数、脾指数明显增加,且肿瘤生长缓慢,肿瘤重量明显降低,抑瘤率达到47.85%;而给药3次组各项指标的差别与同时期小鼠相比无统计学意义;病理学观察显示香菇多糖给药7次组肿瘤组织中的细胞间质显著增多,瘤细胞周围有较多的淋巴细胞浸润.结论:腹腔注射7次合适剂量的香菇多糖能明显抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长,其作用机制可能是通过增强荷瘤小鼠自身免疫功能来实现.     

沙棘汁对低白细胞模型小鼠白细胞和骨髓造血功能的调节作用

目的： 研究沙棘汁提升低白细胞模型小鼠白细胞数量和促进骨髓细胞增殖功能的作用。 方法： 应用环磷酰胺（CTX）（100 mg/kg）给小鼠腹腔注射，复制白细胞减少症模型，分组治疗处理后，于不同时段计数外周血白细胞总数并分类，计数骨髓有核粒细胞及其分裂指数，以评估沙棘汁提升白细胞及增强骨髓造血的能力。 结果： 低、中、高剂量沙棘汁均可显著提升模型小鼠的外周血白细胞数，并增加骨髓有核粒细胞数和促进有核细胞的分裂，效果均优于碳酸锂组；在疗效与剂量关系上呈明显的量效关系。 结论： 沙棘汁可明显增加低白细胞小鼠模型的外周血白细胞数量及骨髓细胞增殖功能。     

双氢青蒿素通过调控PI3K/AKT通路增强肝癌H22细胞荷瘤小鼠放疗效果

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对肝细胞癌H22细胞荷瘤小鼠放疗增效的影响。方法:构建肝癌H22细胞荷瘤小鼠模型,实验分为模型组、单放疗组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组和低、中、高剂量DHA组,每组8只,按照分组进行给药和放疗治疗。隔天测量各组荷瘤小鼠体重和瘤体积,给药结束后鼠尾取血后立刻脱颈处死小鼠。观察DHA对放疗的增效作用和对肿瘤生长的抑制作用,测定淋巴细胞转化程度和自然杀伤(NK)细胞活性,ELISA法检测小鼠血清白细胞介素2(IL-2)和IL-4水平,Western blot法测定小鼠肿瘤组织中PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果:成功构建肝癌H22细胞荷瘤小鼠模型。与模型组相比,单放疗组肿瘤3倍倍增时间(TGT3)显著升高(P0.05),瘤重、淋巴细胞转化程度、NK细胞活性、IL-2和IL-4水平、PI3K表达水平和AKT磷酸化水平均显著降低(P0.05);与单放疗组相比,随着DHA剂量升高,TGT3、增敏系数、抑瘤率、淋巴细胞转化程度、NK细胞活性及IL-2和IL-4水平随之升高(P0.05),PI3K表达水平和AKT磷酸化水平随之降低(P0.05)。结论:DHA可能通过抑制PI3K/AKT信号通路活性,提高荷瘤小鼠免疫能力,从而增强放疗效果。