全反式视黄酸对新生鼠头盖骨成骨细胞的影响

目的 :　探讨全反式视黄酸 ( ATRA)对体外培养的新生大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法 :　从新生大鼠颅骨分离出成骨细胞 ,细胞增殖实验采用噻唑盐 ( MTT)比色试验法 ;细胞分化实验采用氨基安替比林法 (金氏法 )测定碱性磷酸酶 ( ALP)的活性 ,并用免疫细胞化学法检测细胞周期调控蛋白 Cyclin D1表达的影响 ,研究 ATRA对成骨细胞代谢的影响及部分作用机制。结果 :　培养液中加入 1 0 -5、1 0 -6、1 0 -7、1 0 -8和 1 0 -9mol/L ATRA培养 72 h对成骨细胞有促细胞增殖作用 ,而 1 0 -5、1 0 -6、1 0 -7mol/L的 ATRA在 2 4、48、72 h均能显著促进成骨细胞分化 ,免疫细胞化学染色 Cyclin D1蛋白表达降低。结论 :　ATRA对成骨细胞具有促增殖和诱导分化作用 ,细胞周期调控蛋白可能在 ATRA诱导成骨细胞增殖和分化过程中发挥重要作用。     

视黄酸对胎鼠腭突融合的影响及其作用机制

目的探讨视黄酸(all-trans retinoic acid,atRA)对胎鼠腭突融合的影响及其作用机制。方法对孕13d胎鼠双侧腭突进行体外培养,HE染色观察atRA对腭突融合的影响;免疫双标记分析atRA对腭突组织细胞凋亡及层粘连蛋白降解的影响;Western blot检测腭突组织中Smad2磷酸化的变化。结果经72h培养,对照组双侧腭突完全融合;5μmol/L atRA实验组双侧腭突可接触但不能融合。共聚焦显微镜显示,双侧腭突接触处层粘连蛋白降解,上皮细胞向口侧和鼻侧三角处迁移,并逐渐凋亡;atRA抑制层粘连蛋白降解,接缝处上皮组织完好,上皮细胞无凋亡发生,间质组织中可观察到细胞凋亡。Western blot图片显示:在腭突融合过程中,Smad2磷酸化增强;相反,atRA实验组未检测到Smad2磷酸化。结论atRA抑制双侧腭突接缝处基底膜降解和上皮细胞向口、咽三角处迁移及凋亡,诱发腭间质组织细胞凋亡,进而抑制双侧腭突融合,其作用机制可能与中嵴上皮细胞中Smad2磷酸化被抑制相关。     

过量全反式视黄酸对腭突中嵴上皮细胞迁移的影响

目的通过细胞划痕实验观察过量全反式视黄酸(all-trans retinic acid,atRA)对原代腭突中嵴上皮细胞迁移的影响。方法以10 w龄昆明小鼠按雌雄比例2:1合笼,得到妊娠13 d孕鼠。将1只妊娠13 d孕鼠处死,分离得到全部胎鼠腭突,以中性蛋白酶分离腭突中嵴上皮,继以胰酶消化,用DMEM/F-12培养基调整细胞浓度后接种于培养瓶中,CO2培养箱中培养96 h。取同等细胞浓度接种于6孔板中,同样条件下培养24 h。弃去原培养基,在各孔贴壁细胞层划出一条划痕带,分别加入相应培养基后得到3孔5μmol/L atRA实验组和3孔对照组,继续原条件培养72 h。结果:原代腭突中嵴上皮细胞贴壁生长,多角形或卵圆形,成片生长;当细胞融合率>80%,呈现铺路石状外观。在培养过程中,对照组划痕逐渐弥合,培养72 h,爬行细胞几乎覆盖整个划痕带;而atRA实验组未见到向划痕区迁移的细胞,划痕宽度没有改变。结论:过量atRA可抑制腭突中嵴上皮细胞发生迁移。     

全反式视黄酸诱发胎鼠腭裂及抑制Smad2磷酸化的作用

目的观察过量全反式视黄酸(atRA)对胎鼠腭发育的影响及其对Smad2磷酸化的调节作用。方法将ICR孕鼠随机分为atRA实验组和溶剂对照组,在11天(查见阴栓为孕0天),分别灌胃给予80mg/(kg·d)atRA或等体积的玉米油溶剂。常规HE组织学染色观察胎鼠上腭发育情况;免疫组化和Western Blot检测突中嵴上皮内pSmad2的表达。结果80mg/(kg·d)atRA可导致90%胎鼠发生腭裂;在腭突融合过程中,中嵴上皮细胞内Smad2被内源性的激活,出现明显磷酸化,在80mg/(kg·d)atRA组,可检测到总Smad,但是不能检测到磷酸化pSmad2的表达。结论孕期过量atRA可导致胎鼠发生腭裂,其致畸作用机制可能与中嵴上皮细胞内Smad2磷酸化被抑制有关。     

小鼠腭板旋转培养模型的建立及其初步应用

目的为研究全反式视黄酸(atRA)对小鼠腭板发育的影响及其致腭裂的机制,建立腭板旋转培养模型。方法于妊娠第12天取下小鼠胚胎腭移植体,以10-5～10-1μmolLatRA诱导,在旋转培养装置中连续培养72h,观察腭板发育融合情况。结果经72h培养后,对照组正常融合,与体内发育一致。atRA在10-5μmolL能促进腭板的融合,≥10-4μmolL抑制腭板的发育及融合,造成腭裂,融合率下降,并呈显著的剂量-效应关系。结论本模型中,腭板能在体外培养中存活并继续生长、发育、融合;atRA在10-5μmolL能促进腭板融合,高于10-4μmolL呈剂量-效应关系的抑制融合,造成腭裂,证明小鼠腭板旋转培养模型建立成功。     

全反式视黄酸阻断苯并(a)芘致成纤维细胞周期改变的通路

目的 观察全反式视黄酸（ATRA）逆转苯并（a）芘诱导的人胚肺成纤维细胞（HELF）细胞周期紊乱过程中细胞周期素D1（cyclin D1）、细胞周期素依赖性激酶K4（CDK4）、转录因子E2F-1和E2F-4的作用.方法 用0.1 μmol/L ATRA预处理细胞后,再用2 μmol/L苯并（a）芘作用细胞,用Western blotting方法测定其蛋白表达水平;建立稳定转染了反义cyclin D1质粒和反义CDK4质粒的细胞系,应用反义技术证明上下游关系;用流式细胞技术 测定细胞周期.结果 2μmol/L苯并（a）芘作用于HELF24h后,cyclin D1、E2F-1蛋白表达水平明显增高,CDK4和E2F-4蛋白表达水平无明显变化;用0.1 μmol/LATRA预处理24h后,cyclin D1、E2F-1蛋白表达水平明显下降;与相同作用的对照组相比,苯并（a）芘刺激反义cyclin D1或反义CDK4细胞后E2F-1表达增加的幅度明显降低;与相同作用的对照组相比ATRA预处理的反义cyclin D1或反义CDK4细胞中,苯并（a）芘诱导的E2F-1过表达水平降低的幅度明显降低;流式细胞术测定结果显示,苯并（a）芘诱导细胞从G1期进入S期,ATRA通过聚积G1期细胞而阻滞苯并（a）芘诱导的细胞周期进程.结论 ATRA通过cyclin D1/E2F-1途径阻断苯并（a）芘诱导的HELF的细胞周期改变.     

孕期亚临床维生素A缺乏对胎鼠肺形态发育的影响

【目的】 探讨孕期亚临床维生素A(vitamin A,VA)缺乏对胎鼠肺形态发育的影响。 【方法】 建立孕期VA正常(vitamin A normal,VAN)和亚临床缺乏(marginal vitamin A deficiency,MVAD)动物模型,每组均于孕19 d剖宫取胎鼠,比较其体重、肺重、肝重和肺组织VA含量及其肺视黄酸受体(retinoic acid receptor,RAR)mRNAs的表达,HE染色光镜观察胎鼠肺的形态结构。 【结果】 1)胎鼠基本情况的比较 体重、肺重和肝重三个指标VAN组均显著高于MVAD组(P<0.05);2)胎肺大体形态比较 低倍镜(×200)与高倍镜(×400)下观察结果显示,VAN组肺泡样结构分布较规则,肺泡间隔较薄,肺实质发育较好,肺间质毛细血管较丰富,肺泡2型细胞较明显,大多处于小管期;而MVAD组上述指标均相对较差,发育幼稚,局部为小管期,大多为假腺体期;3)胎鼠肺单位组织VA水平 VAN组>MVAD组,差异均有统计学意义(P<0.05);4)胎鼠肺RAR-α、RAR-γ和RAR-β mRNAs表达水平VAN组P<0.05)。 【结论】 孕期VA水平不同能影响胎鼠基本发育、胎肺形态结构、肺单位组织VA水平及其RAR mRNAs的表达;孕期MVAD时其胎肺发育相对较差。     

孕鼠香烟烟雾染毒对胎鼠视杯和视泡上皮细胞凋亡的影响

[目的]观察孕鼠香烟烟雾染毒致胎鼠眼畸形的作用及对视杯、视泡上皮细胞和问充质细胞凋亡的影响.[方法]将怀孕的金黄地鼠随机分为吸烟组和对照组,吸烟组共3组(每组10只动物)分别于孕第6、7、8天开始用香烟烟雾染毒(即A、B、C组);对照组(共15只动物)除无烟熏外,其他条件同吸烟组.分别于染毒第3天时,在体视显微镜和光镜下观察各组鼠胚的发育情况及眼畸形的形态学变化;采用原位末端标记法定量分析金黄地鼠胎鼠视杯、视泡上皮细胞及间充质细胞凋亡的变化.[结果]孕鼠香烟烟雾染毒对胚胎有显著致畸作用,吸烟组总畸形率为40.08%,眼畸形率为10.32%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01),其中以孕7天开始染毒组畸形率最高(51.69%).吸烟组视杯、视泡上皮细胞及间充质细胞的凋亡细胞数明显高于对照组(P<0.05),且以孕7天开始染毒组凋亡细胞计数最高,为(29.1±2.1)个.组织学观察发现,吸烟组胎鼠视杯的发生明显迟干对照组.[结论]香烟烟雾染毒对胚胎有明显眼致畸作用;香烟烟雾可以诱导视杯、视泡上皮细胞及间充质细胞过度凋亡,导致视杯的发生明显延迟,这可能是香烟烟雾染毒致胚胎眼畸形发生的机制之一.     

菌灵诱导小鼠睾丸支持细胞凋亡及周期阻滞的研究

目的 观察多菌灵对小鼠睾丸支持细胞系（TM4）周期及凋亡的影响,并探讨其凋亡机制。方法 不同浓度(0.25、0.5、1、2、4、8 μg/ml)的多菌灵体外作用TM4细胞48 h,运用MTT法检测OD值及计算细胞存活率,PI染色法检测TM4细胞周期的分布变化,Annexin V/PI双标识标记法检测TM4细胞的凋亡情况,应用荧光探针DCFH - DA法检测TM4细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）的相对荧光强度,qRT - PCR法检测TM4细胞内Bax和Bcl - 2 mRNA的表达水平。结果 随着多菌灵浓度的升高,TM4细胞的增殖受到抑制,细胞周期分布发生变化,G2/M期的细胞呈现增加的趋势（P＜0.01）,胞内Bax mRNA和ROS表达水平也逐步升高（P＜0.05,P＜0.01）,而Bcl - 2 mRNA表达则逐步下降（P＜0.01）。结论 多菌灵可诱导TM4细胞凋亡并发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与Bax、Bcl - 2 mRNA及ROS的异常表达有关。     

妊娠期全氟辛烷磺酸盐暴露对胎鼠睾丸胚胎间质细胞雄激素合成的影响

目的 研究全氟辛烷磺酸盐(perfluorooctane sulfonate,PFOS)对睾丸胚胎间质细胞(fetal Leydig cell,FLC)合成雄激素的影响.方法 将20只健康SPF级SD妊娠大鼠随机分成4组,分别为对照(Tween-20)组和低(5mg/kg)、中(10mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量PFOS染毒组,每组5只.于妊娠第12～19天采用灌胃方式进行染毒,染毒容量为2 ml/kg,每天1次,连续8d.染毒结束后,观察雄性胎鼠睾丸FLC数量,检测睾丸内睾酮浓度、FLC中胆固醇脂蛋白结合受体(scavenger receptor class B member 1,SR-B1)、类固醇激素合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(cholesterol side chain cleavage enzyme,P450scc)mRNA的相对表达量.结果 与对照组相比,中、高剂量PFOS染毒组雄性胎鼠睾丸FLC数量减少;高剂量PFOS染毒组雄性胎鼠睾丸内睾酮浓度降低(P＜0.05);高剂量PFOS染毒组雄性胎鼠睾丸组织中StAR mRNA、P450scc mRNA的相对表达量下降(P＜0.05),SR-B1 mRNA相对表达量显著下降(P＜0.01).结论 妊娠期染毒高剂量PFOS可降低雄性胎鼠睾丸FLC合成睾酮的能力.     

Kaempferol induced the apoptosis via cell cycle arrest in human breast cancer MDA-MB-453 cells

The aim of present study was to investigate the effects of kaempferol on cellular proliferation and cell cycle arrest and explore the mechanism for these effects in human breast carcinoma MDA-MB-453 cells. Cells were treated with kaempferol at various concentrations (ranging from 1 to 200 µM) for 24 and 48 hrs. Kaempferol significantly inhibited cancer cell growth in cells exposed to 50 and 10 µM of kaempferol and incubated for 24 and 48 hrs, respectively. Exposure to kaempferol resulted in cell cycle arrest at the G2/M phase. Of the G2/M-phase related proteins, kaempferol down-regulated CDK1 and cyclin A and B in cells exposed to kaempferol. In addition, small DNA fragments at the sub-G0 phase were increased by up to 23.12 and 31.90% at 10 and 50 µM incubated for 24 and 48 hrs, respectively. The kaempferol-induced apoptosis was associated with the up-regulation of p53. In addition, the phosphorylation of p53 at the Ser-15 residue was observed with kaempferol. Kaempferol inhibits cell proliferation by disrupting the cell cycle, which is strongly associated with the induction of arrest at G2/M phase and may induce apoptosis via p53 phosphorylation in human breast carcinoma MDA-MB-453 cells.     

体外诱导胚胎干细胞分化为神经细胞特性的实验研究

目的研究体外利用全反视黄酸(RA)诱导小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为神经细胞的培养方法。方法悬滴3天转悬浮1天两者结合的培养方法得到胚体(EBs),再利用RA对其处理4天后,进行免疫组织化学、RT-PCR以及兴奋性功能的检测,观察神经细胞获得的效率及其生理特性。结果利用RA诱导方法得到的神经细胞,免疫组化表明nestin蛋白表达的阳性率为(53.49±6.02)%,且RT-PCR法分析其能表达nestin、glutaminase和Brn-3等神经细胞特异基因,同时在Glu刺激下具有与脑来源神经元相似的特性和功能。结论利用本实验诱导方法,获得神经细胞的比例较高,且具有与神经元相似的生物学特性。     

人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞对其细胞周期的影响

目的研究人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染人胚肺成纤维细胞（human embryoniclung fibroblast,HELF）后对其细胞周期的影响,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的HELF作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。用倒置相差显微镜观察两组细胞形态学变化至感染后7d。于感染后12h、24h、48h、72h和96h收获细胞,用免疫细胞化学法检测两组细胞核内HCMVIE172蛋白,流式细胞术检测细胞周期。结果模拟感染组未见细胞形态学改变,亦未出现HCMVIE172蛋白阳性产物。感染组感染后72h时即可见局部细胞变圆,膨胀,胞体及胞核巨大化,7d时可见所有细胞均发生病变;免疫细胞化学检测显示,其各时间点的细胞均在核内出现呈棕黄色颗粒的HCMVIE172蛋白。模拟感染组在感染后12h时有65.7%的细胞处于G1期,24h时有43.8%的细胞处于G1期;感染组在感染后12h时有70.4%的细胞处于G1期,24h时有69.9%的细胞处于G1期;两两比较,差异均有显著性（均P〈0.01）。结论HCMV感染HELF后在细胞核内进行复制、增殖,其影响了HELF周期,使大部分细胞停滞在G期。     

昆明鼠胚胎干细胞系建立中原代克隆生长及其传代方法的研究

目的:探讨昆明鼠胚胎内细胞团分离方法、原代干细胞克隆分离时机及干细胞传代方法对干细胞建系效率的影响。方法:取昆明鼠3.5d囊胚建胚胎干细胞系,比较全胚培养法与免疫外科法两种内细胞团分离方法对胚胎干细胞建系效率的影响,观察原代克隆的分离时机,机械法传代和酶消化传代对胚胎干细胞建系效率的影响。结果:全胚培养法30个囊胚建系3个,免疫外科法32个囊胚建系4个,两组均可以有效地形成胚胎干细胞系;昆明鼠原代干细胞克隆分离最佳时机是增殖4～6d;5代以前的干细胞以机械传代方法较好,5代后用酶消化法传代效果较好。结论:全胚培养法和免疫外科法均能有效建立昆明鼠胚胎干细胞系,采用机械化与酶消化法相结合传代更适合昆明鼠干细胞建系。     

三羟基苯甲酸对淋巴瘤细胞凋亡及周期影响

目的 观察不同剂量3,4,5三羟基苯甲酸化合物(TAD)对小鼠淋巴瘤细胞株EL-4细胞的存活率、细胞凋亡及细胞周期进程的影响,探讨其对肿瘤生长抑制的机制.方法 应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测经不同浓度(3.125~25μg/ml)TAD处理的EL-4细胞存活率、细胞凋亡率及细胞周期的变化.结果 EL-4细胞经过3.125,6.25,12.5和25μg/ml TAD处理后,各观察组细胞存活率依次为(80.60±6.01)%,(75.39±4.97)%,(71.42±3.73)%和(54.96±4.57)%;与对照组100%存活率相比明显降低(P<0.01,P<0.001).细胞凋亡率依次为(4.95±1.76)%,(19.58±7.91)%,(35.85±7.01)%,(11.67±2.96)%;明显高于对照组的(0.36±0.33)%(P<0.01,P<0.001).TAD引起细胞周期进程的改变,G1期细胞百分数明显高于对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.001),S期细胞百分数明显低于对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.001);G2期细胞无明显变化.结论 TAD能够降低EL-4细胞存活率,诱导EL-4细胞凋亡,阻止G1期细胞向S期进程,其抑制作用可能通过G0/G1期阻滞引起.     

PTEN在胚胎发育及细胞周期中的作用

PTEN基因,位于染色体10q23.3区,是具有磷酸酶活性的抑癌基因。其在细胞周期中的作用主要由聚集粘链激酶途径、3,4,5三磷酸磷酸肌醇以及促细胞分裂素激活的蛋白激酶等3条途径共同完成。在胚胎发育过程中,具有PTEN纯合性突变的胚胎干细胞形成畸形胚胎,并在胚胎早期死亡,而具有PTEN杂合性突变的小鼠在不同组织类型中肿瘤的发生率增高。该文综述了PTEN基因的结构特征、生物学特性以及其在细胞周期和胚胎发育过程中的作用,并对其研究前景作一展望。     

硫芥诱导淋巴细胞凋亡与细胞周期的关系

目的 探讨硫芥诱导体外培养大鼠脾脏淋巴细胞凋亡及与细胞周期的关系。方法 体外分离培养大鼠脾脏淋巴细胞。以流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳分别检测细胞凋亡，细胞周期，和DNA片段改变。结果 硫芥可诱导淋巴细胞凋亡(P＜0．05)，对细胞周期有明显影响，主要是S期和G2／M期明显降低，引起淋巴细胞生长阻滞在Gl期；流式细胞仪PI染色出现亚二倍体峰(凋亡峰)，其Gl期DNA含量明显增加，S期含量减少；琼脂糖凝胶电泳呈典型的“梯状”带(DNA ladder)。结论 硫芥可抑制体外培养的淋巴细胞由Gl期进入S期，抑制体外培养的淋巴细胞增殖，通过诱导淋巴细胞凋亡实现作用机制。     

苯乙基异硫氰酸盐对小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞过程中基因表达影响的研究

目的探讨苯乙基异硫氰酸盐(PEITC)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)体外定向诱导分化为神经样细胞中PKCα及其相关发育基因(pax-6、netrin-1)表达的影响。方法mESCs经RA法诱导后,第7天用RT-PCR法检测nestin、glutaminase、Brn-3基因等神经细胞特异性标志物。不同浓度PEITC作用条件下,分别取诱导后1、3、5、7及14天后的细胞,用RT-PCR方法测定细胞的PKCα及其相关发育基因pax-6和netrin-1的mRNA表达情况。结果诱导后第7天,分化的神经样细胞中nestin、glutaminase、Brn-3基因均高表达。正常诱导1天后,PKCα、pax-6和netrin-1基因的mRNA表达急剧下降,3、5、7天逐渐升高,至14天恢复至正常水平。PEITC作用下,PKCα、pax-6、netrin-1的mRNA在诱导后细胞中各阶段的表达水平与正常诱导条件下相比均下降,且随着作用浓度和作用时间的增加,下降趋势明显。结论PEITC对mESCs定向分化为神经样细胞过程中相关发育基因(pax-6、netrin-1)的表达的干扰作用可能与抑制PKCα的表达有关。     

儿茶素对LoVo细胞生长周期的影响和诱导凋亡的作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（ＥＧＣＧ）、表没食子儿茶素（ＥＧＣ）、表儿茶素没食子酸酯（ＥＣＧ）和表儿茶素（ＥＣ）对大肠癌ＬｏＶｏ细胞生长周期的影响和它们诱导ＬｏＶｏ细胞凋亡作用及其差异性。方法 用ＭＴＴ法、琼脂糖凝胶电泳、透射电镜和流式细胞术观察４种儿茶素处理ＬｏＶｏ细胞后,它们对ＬｏＶｏ细胞的生长抑制作用、细胞生长周期的改变以及诱导其凋亡形态学和生化方面的改变。结果 ＥＧＣＧ和ＥＧＣ对Ｌ