特发性弱精子症精子与正常精子蛋白质双向电泳图谱分析

目的:探讨双向电泳技术在人类精子差异表达蛋白研究中的应用。方法:运用固相pH梯度双向凝胶电泳分离4例正常人和4例弱精子症患者精液标本的总蛋白质,凝胶银染后,用PDQuest软件进行分析,分辨出差异表达蛋白。结果:按照5倍的表达量计算,发现有差异表达的蛋白质点7个,2个点在弱精子症精子中高表达,而在正常精子为低表达;相反,在正常精子中高表达的5个点,而在弱精子症为低表达。结论:初步建立了正常精子和弱精子症患者精子的双向电泳图谱,并发现两者之间存在一些差异表达蛋白,为进一步研究特发性弱精子症精子差异表达蛋白的分离及鉴定奠定了良好基础。     

弱精子症相关基因与蛋白研究进展

男性不育病因复杂,其中弱精子症是导致男性不育的常见原因之一。然而,弱精子症的发病机制仍然不明确。近年来对弱精子症的研究取得了一定进展,一些基因(如tejin-2、DNAI1、DNAH5、DNAH11、AKAP4、SEPT4和Smcp)和蛋白(如精子蛋白ACTB、ANXA5、PRM1、PRM2、SABP等和精原蛋白Tf、PSA、PAP、Fractalkine等)被证实与弱精子症的发生有关,这些分子标记物的发现将为阐述弱精子症的分子机制提供基础,同时可能成为弱精子症诊断和治疗的靶标。     

腺苷酸激酶家族在弱精子症患者精子中的表达特征

目的:探讨腺苷酸激酶(AK)家族在弱精子症患者精子中的表达特征。方法:收集弱精子症患者和正常男性(对照组)精子样本各30例,采用RT-PCR和Western印迹技术检测AK mRNA及蛋白相对表达量。免疫荧光、免疫组化检测目标AK组织定位,并检测其与精子运动能力的关系。结果:RT-PCR显示,AK家族中AK1-AK9在精子中均有表达,且AK1、AK6和AK7的表达在特发性弱精子症患者精子中显著低于对照组。Western印迹结果表明,弱精子症患者精子中AK1、AK6和AK7蛋白与对照组相比也显著降低。在睾丸中AK1和AK7广泛表达于精原细胞、精母细胞和圆形精子细胞的细胞质中,AK6表达于精母细胞和圆形精子的细胞核中。在精子中,AK1和AK7蛋白定位于精子鞭毛部,AK6定位于精子头部。抗体阻断实验显示,AK1、AK6或AK7抗体单独与精子共孵育对精子活动率和前向运动无显著影响,3种抗体一起与精子共孵育后与对照组相比可以显著降低精子活动率[(80.5±2.4)%vs(87.6±3.3)%,P0.05]和前向运动精子百分率[(60.6±3.6)%vs(70.2±2.3)%,P0.05]。结论:AK1、AK6和AK7 mRNA及蛋白在弱精子症患者精子中的表达下调可能与精子活力下降有密切联系。     

SEPT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨SEPT4蛋白在特发性弱精子症发生机制中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离和纯化精子,免疫细胞化学技术检测SEPT4在特发性弱精子症患者和正常男性精子中的定位及表达变化,同时用RT-PCR和W estern印迹技术,从基因和蛋白水平检测SEPT4的表达及差异。结果:免疫细胞化学表明,SEPT4定位于精子环并且在特发性弱精子症患者精子中的表达显著低于正常男性(94.75±19.95vs111.51±17.57,t=3.452,P<0.01);RT-PCR显示,特发性弱精子症患者精子中SEPT4 mRNA的表达水平与正常男性相比显著降低(0.56±0.15vs0.71±0.16,t=3.521,P<0.05);W estern印迹结果与RT-PCR结果一致,SEPT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达亦显著低于正常男性(0.48±0.20vs0.77±0.18,t=5.872,P<0.05)。结论:SEPT4在特发性弱精子症患者精子中的表达水平显著降低,可能是导致弱精子症发生的原因之一。     

蛋白质组学在弱精子症中的研究进展

男性不育是不孕不育的重要原因之一,这一疾病也严重困扰着患者和医生.据统计,不育症夫妇中50%是男性不育所致,其中,弱精子症占有相当大的比例.研究发现,精子活动能力下降与一氧化氮和超氧化物岐化酶、钙离子通道、微量元素异常以及蛋白质络氨酸磷酸化和膜流动性等很多因素相关.近来,蛋白质组学在弱精子症中的研究日趋兴起.     

TEKT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨TEKT4蛋白在特发性弱精子症发生机制中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离和纯化特发性弱精子症患者和正常男性精子,采用RT-PCR和Western印迹方法,从mRNA和蛋白水平检测TEKT4的表达及其差异。结果:RT-PCR结果表明,TEKT4 mRNA在特发性弱精子症患者精子中的表达水平与正常男性相比显著降低(0.59±0.13 vs 0.75±0.15,t=4.325,P<0.05);Western印迹结果与RT-PCR结果一致,TEKT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达水平与正常男性相比亦显著降低(0.48±0.14 vs 0.69±0.13,t=5.939,P<0.05)。结论:特发性弱精子症患者精子中TEKT4表达水平显著降低,可能是导致弱精子症发生的重要环节之一。     

弱精子症、少弱精子症患者血清、精浆和精子锌含量分析

目的:检测弱精子症和少弱精子症患者血清、精浆和精子锌的含量,分析锌含量的变化与精子密度和精子运动之间的关系。方法:按照WHO《人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》第四版的标准进行精液质量分析,随机筛选出90例弱精子症、60例少弱精子症患者以及20例精液质量正常的生育者作为研究对象,利用原子吸收光谱法检测其血清、精浆、精子的锌含量并进行统计学分析。结果:3组间血清锌含量没有显著差异;弱精子症、少弱精子症患者精浆锌含量均显著低于正常生育者(P<0.05);少弱精子症患者精子锌含量显著高于弱精子症患者和正常生育者(P<0.01)。结论:弱精子症、少弱精子症患者精子的发生及运动功能下降可能与精浆锌含量的低下呈正相关;但过高的精子锌含量与精子的发生和运动功能的关系尚不十分明了,有待进一步研究。     

弱精子症患者精子蛋白的初步研究

目的从蛋白质水平探讨弱精子症患者精子蛋白的改变,以期寻找精子活动力低下的原因。方法运用蛋白凝胶电泳技术分离90例特发性弱精子症患者和30例正常供精者精子标本的总蛋白质,结合免疫印迹技术鉴定差异蛋白,并对试验数据进行统计学分析。结果患者组与对照组精子蛋白表达量存在差异,且患者组中精子活力低下不同严重程度者的蛋白含量也存在差异(P<0.05),对于差异显著条带的Western Blotting分析显示差异蛋白为DDX4。结论精子活力与蛋白质差异表达有关,主要差异蛋白DDX4可作为评估精子活力的生物标志物。     

溶质载体家族22成员14和精子相关抗原6在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨溶质载体家族22成员14(SLC22A14)和精子相关抗原6(SPAG6),在特发性弱精子症患者精子中的表达情况。方法:收集精子库合格捐精者(正常对照组)和特发性弱精子症患者(弱精子症组)各50例精子样本,采用非连续密度梯度离心纯化精子,分别用RT-PCR和Western印迹检测SLC22A14、SPAG6 mRNA及蛋白的表达。结果:RT-PCR检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14、SPAG6 mRNA表达均显著低于正常对照组(SLC22A14:0.53±0.10 vs 0.77±0.08,t=12.834,P0.01;SPAG6:0.52±0.10 vs 0.77±0.06,t=13.755,P0.01),Western印迹检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14和SPAG6蛋白表达量同样均显著低于正常对照组,分别为(SLC22A14:0.55±0.10 vs 0.80±0.09,t=12.884,P0.01;SPAG6:0.56±0.09 vs 0.78±0.09,t=12.257,P0.01)。结论:在特发性弱精子症患者中SLC22A14和SPAG6表达降低可能是导致弱精子症的重要原因之一。     

左卡尼汀在特发性弱精子症患者中的水平测定

Objective To study the relationship between sperm activity and the level of L-carnitine in seminal plasma of patients with idiopathic asthenospermia by HPLC.Methods Experimental group:idiopathic asthenospermia 50 cases,and the control group:male with pregnancy history 10 cases.The semen parameters (volume,sperm density,viability,motility),and L-carnitine level in seminal plasma were detected with high performance liquid chromatography method.Results There were significant difference between A and B group about sperm density and the percentage of progressive motile spermatozoa,and the level of L-carnitine(P＜0.01).Conclusions The decrease of L-carnitine level in patients with idiopathic asthenospermia,is closely related to the low sperm motility,which shows that L-carnitine can be used to treat idiopathic asthenospermia effectively.     

精子核成熟性与少、弱、畸形精子症关系初探

目的探讨少、弱、畸形精子症以及精子头部形态缺陷和精子核成熟性的关系。方法2005年3月至2005年7月329例不孕不育患者(其中少精子症患者50例、弱精子症52例、畸形精子症83例)分别采用精液常规检查、精液改良巴氏染色检查以及精液苯胺蓝染色检查。结果①少精子症组患者精液苯胺蓝染色阳性率的中位数为12%(P=0.035),弱精子症组为8%(P=0.947),畸形精子症组为10%(P=0.033)。②少精子症患者精液苯胺蓝染色阳性率与锥形头畸形呈正相关(r=0.635),畸形精子症患者精液苯胺蓝染色阳性率与大头、小头呈正相关(r=0.368、0.304),而和梨形头畸形呈负相关(r=-0.396)。结论少精子症患者和畸形精子症患者中核未成熟精子比例增加,精子头部形态中大头、小头和锥形头畸形与核未成熟精子正相关。     

精子线粒体功能障碍在弱精子症中的研究进展

世界范围内大约有15%的夫妇受不育症困扰,其中男性不育者的精液异常多表现为精子活力低下。研究表明,精子中线粒体膜电位、活性氧、线粒体内Ca2+含量、线粒体酶以及蛋白组活性、线粒体超微结构、mtDNA等的异常可引起精子活力下降。本文通过回顾线粒体与弱精子症的相关文献,阐述精子线粒体功能障碍在弱精子症中可能的作用,为弱精子症发生发展机制的研究提供新的思路。     

Tankyrase1、TRF1及hTERT在肝细胞癌中的表达及意义

目的 检测端锚聚合酶1(Tankyrase 1)、端粒重复序列结合因子1(TRF1)及端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在肝细胞癌(HCC)组织中的表达,探讨其在肝癌发生过程中的作用及其临床意义.方法 应用RT-PCR技术对30例HCC及癌旁组织中Tankyrage1、TRF1及hTERT mR-NA的表达水平进行检测,分析其表达与HCC临床病理特征的关系.结果 HCC组织中Tankyrage1及hTERT mRNA表达相对强度明显高于癌旁组织(P<0.05);TRF1在肝癌组织中的表达相对强度明显低于癌旁组织(P<0.05);HCC组织中Tankyrase1及TRF1表达与年龄、性别、肝硬化、HbsAg(+)、肿瘤大小、肿瘤个数、术前Child-Push分级、TNM分期、Edmondson分级和血清AFP值均无显著相关(P>0.05);在HCC中Tankyrage1 mRNA和hTERT mRNA的表达呈正相关(r=0.519),Tankyrage1与TRF1 mRNA表达呈负相关(r=-0.395),TRF1 mRNA和hTERT mRNA表达呈负相关(r=-0.472).结论 HCC中Tankyragel表达增加和TRF1表达下降可能是hTERT表达增加的原因之一,其对肝癌的发生可能起重要作用.     

青少年特发性脊柱侧凸患者血浆matrilin-1蛋白水平及其临床意义

目的 探讨青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者外周血中matrilin-1蛋白水平的变化及其在AIS发病机制中的作用.方法 将2006年6月至2007年3月诊治的25例AIS患者作为AIS组,25名性别、年龄相匹配的健康体检青少年作为对照组.所有入选对象符合以下标准:无骨骼疾病、代谢疾病、生长发育异常;无影响骨代谢的系统疾病及其他情况;近期未服用激素;无先天性心脏病手术史.AIS组记录末次随访或术前最大Cobb角、侧凸弯型,并分为进展型及非进展型两组.进展型侧凸(侧凸进展成为严重脊柱侧凸)定义为骨骼发育未成熟时,Cobb角＞40°或骨骼发育成熟时,Cobb角＞50°.采用PCR-RFLP基因分型方法 对所有对象进行基因分型,运用酶联免疫吸附(ELISA)法检测AIS组与对照组外周血浆中matrilin-1蛋白浓度并比较其差异,并对不同基因型之间matrilin-1蛋白的表达进行比较.分析血浆matrilin-1蛋白浓度与脊柱侧凸进展的关系.结果 AIS组血浆matrilin-1蛋白浓度显著低于对照组(P=0.002).AIS组及对照组的基因型GG个体血浆matrilin-1蛋白浓度均低于基因型AA或AG个体,而对于相同基因型的个体AIS组血浆matrilin-1蛋白水平更低.进展型AIS患者血浆matrilin-1蛋白水平明显较非进展型AIS患者低.结论 AIS患者外周血matrilin-1蛋白水平与脊柱侧凸的进展相关.对外周血matrilin-1蛋白浓度的检测,有助于AIS的早期筛查及诊断,可作为预测脊柱侧凸进展的一个独立指标.     

Mutations in exons 5, 7 and 8 of the human voltage‐dependent anion channel type 3 (VDAC3) gene in sperm with low motility

Voltage‐dependent anion channels (VDACs1‐3) are pore‐forming proteins located in the outer mitochondrial membrane of various tissues and in human sperm flagella. VDACs are involved in metabolite fluxes between mitochondria and other cell compartments and play a role in the motility of mammalian spermatozoa. VDAC3‐deficient male mice lacking exons 5–8 were reported to be healthy but infertile ( Sampson et al., 2001 ). We analysed mutations in these exons of the human VDAC3 (hVDAC3) gene in spermatozoa of 32 asthenozoospermic patients. Previously, we reported on nucleotide substitution mutations in exon 6 ( Asmarinah et al., 2005 ); now, we continue with the examination of exons 5, 7 and 8. Amplification of the exon fragments of the hVDAC3 gene was carried out by polymerase chain reaction (PCR) using specific primers for each exon followed by sequencing. We found various types of mutations in the examined exons of the hVDAC3 gene, such as deletion and nucleotide substitution in spermatozoa from seven of the 30 asthenozoospermic sperm samples (and unconfirmed insertions in two other ones) but none in spermatozoa from normozoospermic controls. Our preliminary data, although of small numbers investigated, suggest that genetic mutations in the hVDAC3 gene could be an explanation for the aetiology of infertility in these asthenozoospermic patients.     

前列腺癌患者血清前梯度蛋白2的水平及其临床意义

目的 通过检测前列腺癌患者血清前梯度蛋白2(AGR2)的水平,探讨其在前列腺癌患者中的临床应用价值.方法 收集前列腺癌患者治疗前后血液标本46例,良性前列腺增生(BPH)患者血液标本20例,健康对照组血液标本20例,用酶联免疫吸附测定法检测三组血清AGR2水平.分析血清AGR2与前列腺癌病理分级及临床分期的关系.结果 ①前列腺癌组患者治疗前血清AGR2水平均明显高于BPH组和健康对照组(P＜0.01),BPH组和健康对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05);②前列腺癌组患者治疗后血清AGR2较治疗前明显降低(P＜0.01),行前列腺癌手术患者术前血清AGR2水平明显高于术后(P＜0.01),行内分泌治疗的前列腺癌患者治疗前AGR2水平明显高于治疗后(P＜0.01);③治疗前血清AGR2水平与前列腺癌临床分期、Gleason病理分级明显相关(P＜0.05),血清AGR2水平与PSA水平显著相关(P＜0.01);④ROC曲线下面积0.792(95％CI:0.698 ～ 0.886),当临界值为13.75 ng/mL,灵敏度71.7％,特异度75.0％.结论 前列腺癌患者血清AGR2水平增高,与临床分期及Gleason病理分级有关,提示AGR2在前列腺癌诊断、恶性程度以及疗效判断具有一定的临床意义.     

Hyperactivated motility of sperm from fertile donors and asthenozoospermic patients before and after treatment with ionophore

Hyperactivated motility of capacitated sperm was studied before and after contact for 30 min with the Ca2+ ionophore A23187. Sperm from fertile donors and asthenozoospermic infertile patients were incubated in the presence of increasing concentrations of A23187 in the medium. At 5-10 microM, the ionophore induced a significant increase (P less than 0.05) in the percentage of hyperactivation of sperm from asthenozoospermic subjects. Higher concentrations (20 and 30 microM) were needed to enhance hyperactivation of sperm in the fertile population. In the latter, extended contact with the ionophore induced no significant change compared to a 30-min incubation period. Since this type of movement is an essential feature of the fertilizing gamete, a low hyperactivation rate may partly explain fertilization failure in the asthenozoospermic group.     

香烟烟雾提取物对小鼠精子活力的影响

目的探讨香烟烟雾中所含外源活性氧物质(ROS)对小鼠精子活力的影响。方法香烟燃点后烟雾溶于二甲亚砜,配制成高ROS含量的香烟烟雾浓缩物(CSC)。釆用4周龄C57BL/6J小鼠45只,实验设置对照组(0mg/ml CSC)、低剂量组(0.2mg/ml CSC)和高剂量组(2.0mg/ml CSC)。连续饲喂含有CSC的饮用水4周,观察小鼠的生殖系统发育情况和可能的全身毒性反应,并检测肝功能指标。处死小鼠后即刻检测精子浓度和活力,检测睾丸内抗氧化酶类的表达水平,并制片观察睾丸组织病理变化。结果与对照组相比,低剂量和高剂量组小鼠精子浓度无显著变化,但高剂量组精子活力呈现显著下降。CSC低剂量组和高剂量组小鼠连续饲喂4周后精子总活动力分别为32%和19%,A级活动精子分别为13%和12%,均显著低于对照组(61%和24%)(P0.05)。但在本实验剂量范围内,CSC对小鼠发育和生殖系统无明显毒性损伤,对睾丸抗氧化基因表达无显著影响。结论 CSC对小鼠精子活力有显著影响,但是对小鼠全身和生殖系统无明显毒性作用。CSC饲喂法可推荐用于诱导小鼠弱精子症模型。     

MUC1和MUC7蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的 探讨MUC1(Mucins 1)和MUC7(Mucins7)蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及其与临床病理的相关性.方法 应用免疫组化技术检测50例膀胱尿路上皮癌和6例正常膀胱黏膜MUC1和MUC7蛋白的表达.结果 MUC1在正常膀胱黏膜及膀胱尿路上皮癌中都有不同程度的表达,50例膀胱尿路上皮癌标本中阳性表达是42例(84.0%),阳性表达率与肿瘤的病理分级、TNM分期显著相关.MUC7在正常膀胱黏膜无表达,50例膀胱尿路上皮癌中阳性表达37例(74.0%),MUC7的表达与临床分期有关,且有显著性差异,在浸润性膀胱癌中的表达高于表浅性膀胱癌,与肿瘤的病理分级无明显相关.结论 膀胱尿路上皮癌组织中MUC1和MUC7联合检测可作为判断膀胱尿路上皮癌分级,分期的一项参考指标.