Pin1在急性白血病中的表达及与Cyclin D1的相关性研究

目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1在急性白血病发生发展中的作用及其与Cyclin D1的相关研究。方法用S-P免疫细胞化学染色方法检测62例初治急性白血病（AL）,10例完全缓解期急性白血病（AL-CR）及15例正常对照组（骨髓像正常的非恶性血液病患者）骨髓单个核细胞中Pin1、CyclinD1的表达。结果初治AL组的Pin1表达阳性率为59.7%,AL-CR组的表达阳性率为0,正常对照组的表达阳率为0,初治组与AL-CR组、正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,Pin1与CyclinD1的表达呈正相关关系（r=-0.339,P〈0.05）,Pin1蛋白的高表达与患者的年龄、性别、外周血白细胞计数及髓外浸润无明显相关性（P〉0.05）。结论结论Pin1的表达与Cyclin D1的表达密切相关,Pin1和CyclinD1的异常表达可能参与了急性白血病的发生发展。     

细胞周期素D1和p27kip1在肾癌中的表达及其意义

目的:探讨cyclin D1、p27kip1在普通型肾细胞癌(conventional renal cell carcinoma,CRCC)发生、发展中的作用。方法:用定量RT-PCR和Western-blot方法检测25例CRCC组织和10例肿瘤远端的正常肾皮质中cyclin D1和p27kip1的mRNA和蛋白的含量;用免疫组化方法检测76例CRCC中cyclin D1、p27kip1的表达;分析cyclin D1、p27kip1的表达与肿瘤分期、分级及术后生存率的相关性。结果:CRCC中cyclin D1的mRNA和蛋白含量分别为0.488±0.399和1.069±0.371,高于正常对照组0.089±0.066和0.281±0.253(P均<0.01);cyclin D1的表达与肿瘤体积大小有关,体积大者cyclin D1高表达(P<0.05);CRCC中p27kip1mRNA和蛋白含量分别为0.191±0.111和0.146±0.051,低于正常对照组0.374±0.216和1.004±0.318(P均<0.01),随着p27kip1表达的降低,肿瘤的细胞核Fuhrman分级、TNM分期增高;p27kip1阳性组患者的5年生存率为84.26%,高于p27kip1阴性组25.25%(P<0.01)。结论:cyclin D1高表达和p27kip1的低表达与CRCC的发生有关;p27kip1的低表达可能促进肿瘤的演进,检测p27kip1可作为评价CRCC预后的参考指标。     

胰腺癌中的Pin1表达及其意义

目的检测胰腺癌及癌旁组织中Pin1的表达,探讨Pin1在胰腺癌发病中的作用。方法收集20例胰腺癌组织和相应的癌旁组织标本,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法（RTQRT—PCR）和westernblot检测Pin1mRNA和蛋白的表达。结果胰腺癌中Pin1mRNA和蛋白的表达明显高于癌旁组织（2．78±1．02VS4．36±1．27和5．48±1．69VS9．97±1．86,P〈0．05）。Pin1与肿瘤的临床分期和病理分化程度无明显的相关性（P〉0．05）。结论胰腺癌中Pin1的过表达可能在胰腺癌中起着重要作用。     

Pin1基因真核表达载体的构建及在宫颈癌HeLa细胞中的表达

目的构建一种含人肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在宫颈癌HeLa细胞中的表达。方法从人宫颈癌HeLa细胞中,以RT-PCR方法扩增出人Pin1基因全长cDNA序列(CDS),插入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测GFP-Pin1蛋白的表达。结果RT-PCR扩增出人Pin1基因;构建pEGFP-C1-Pin1重组质粒,体外成功转染入宫颈癌HeLa细胞,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法证实存在GFP-Pin1蛋白高表达;经G418筛选获得单细胞克隆。结论重组质粒pEGFP-Pin1体外转染HeLa细胞后,目的基因能够在细胞内有效表达,检测方法简便可靠,为利用转染该目的基因的细胞进行下一步研究提供了实验基础。     

Pin1和CyclinD1在原发性肝癌中的表达及意义

目的：检测原发性肝细胞癌（肝癌）及癌旁组织中Pinl及CyclinD1的表达,探讨Pinl及CyclinD1在肝癌发病中的作用。方法：采用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）方法,对收集的42例经手术切除及病理学证实的肝癌患者的癌组织标本及相应癌旁组织中Pin1及CyclinD1基因进行检测,分析两者之间的相关性及其与肝癌临床病理学特征的关系。结果：Pinl基因和CyclinD1基因在肝癌组织中均呈高表达,明显高于癌旁组织（分别为0．487±0．043与0．291±0．038及0．493±0．072与0．313±0．050,均P〈0．05）。Pin]和CyclinD1与肿瘤的大小、有无包膜、有无转移、AFP、分期均无明显的相关性（P〉0．05）,但Pin1与CyclinD1的表达有相关性（P〈0．01）。结论：肝癌中Pin1的过表达可能促进CyclinD1表达,由此诱导了肿瘤的发生;Pin1可能成为治疗肝癌的新靶点。     

细胞周期素D1在结肠癌中的表达

目的 探讨细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ１与ｐ５３基因在结肠癌中的表达意义及其关系。方法 应用原位杂交技术和免疫组织化学技术检测结肠癌中ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因ｍＲＮＡ和ｐ５３蛋白的表达。统计处理采用卡方检验。结果 发现结肠癌组织和癌旁组织中ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达阳性率分别为６３．４％（４０／６３）及４４．４４％（２８／６３）,两者之间差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达程度与癌组织分化程度及临床分期有关,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达与其他临床病理指标无关（Ｐ〉０．０５）。ｐ５３蛋白在结肠癌中阳性率为３８．０９％（２４／６３）,ｐ５３阳性的患者其ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的表达较之ｐ５３阴性者为高,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。结论 ｃｙｃｌｉｎＤ１的过表达及ｐ５３突变在结肠癌的癌变     

脯氨酰顺反异构酶Pin1和免疫炎症

Pin1是体内唯一一种特异性识别丝氨酸/苏氨酸-脯氨酸(pSer/Thr-Pro)基序的顺反异构酶,通过异构化作用,可影响多种蛋白质的生物学活性,调节体内多种细胞活动,最终导致疾病的发生、发展.已有研究报道,Pin1除在癌症、糖尿病、自身免疫性疾病、神经退行性疾病等发挥重要作用外,还可介导免疫信号参与炎症疾病的发生.因...     

Disabled-1在人乳腺癌细胞中的表达及其对细胞周期的影响

目的：探讨Disabled-1（Dab1）基因在乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞中的表达情况,并阐明Dab1对乳腺癌细胞周期的影响。方法：体外培养永生化的乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞MCF-7、BT-549和MDA-MB-231,实时荧光定量（Real-time PCR）法检测MCF-10A、MCF-7、BT-549和MDA-MB-231细胞中Dab1 mRNA的表达水平,Western blotting法检测Dab1蛋白的表达水平。取对数生长期的BT-549细胞,分为对照组、转染pKH3组和转染pKH3-Dab1组,采用流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况。结果：Real-time PCR法检测,与MCF-10A细胞（0.998±0.020）比较,乳腺癌细胞MCF-7（0.504±0.037）、BT-549（0.302±0.027）和MDA-MB-231（0.330±0.031）中Dab1 mRNA相对表达水平明显下降（P<0.05）。Western blotting法检测,与MCF-10A细胞（0.227±0.021）比较,乳腺癌细胞MCF-7（0.134±0.014）、BT-549（0.076±0.01）和MDA-MB-231（0.074±0.005）中Dab1蛋白表达水平明显下调（P<0.05）。流式细胞术检测,与对照组和转染pKH3组比较,转染pHK3-Dab1组BT-549细胞出现细胞周期G₁期阻滞。结论：Dab1在体外培养乳腺癌细胞系中表达下调,Dab1过表达可阻滞乳腺癌细胞G₁细胞周期进展。     

儿童急性白血病生存素和细胞周期素B1基因表达

目的:探讨基因生存素,细胞周期素B1的表达与儿童急性白血病(AL)的关系. 方法:采用RT-PCR对初治或复发AL患儿42例和完全缓解AL(AL-CR)患儿13例及非恶性疾病患儿15例骨髓单个核细胞进行基因生存素,细胞周期素B1表达的检测. 结果:初治和复发AL组生存素 mRNA表达水平分别为0.472和0.810,细胞周期素B1 mRNA为0.609和0.739,均高于AL-CR组(0)和对照组(0)(P＜0.01);复发AL组生存素 mRNA表达水平高于初治组,有统计学差异(P=0.025). 生存素基因的表达与白细胞总数及临床分型有关,与性别、年龄、免疫分型无明显相关性. 细胞周期素B1表达与性别、年龄、免疫分型、白细胞总数及临床分型无明显相关关系. 儿童AL中生存素与细胞周期素B1的表达呈正相关. 生存素 mRNA表达水平高者缓解率低. 结论:儿童AL中存在生存素,细胞周期素B1异常表达,两者表达存在相关性. 生存素是AL复发的高危因素;AL 生存素高表达者可以降低AL的化疗敏感性,生存素水平对AL有判断疗效和预后的价值.     

Pin1在肿瘤发生过程中的分子作用机制

近年来,肿瘤已成为威胁人类健康主要疾病之一,随着对肿瘤发病机制的不断深入研究,肽酰脯氨酰异构酶在肿瘤发生、发展过程中的作用日益受到人们的重视,其中微小菌素蛋白Pin1主要调节有丝分裂相关蛋白酶,本文通过对Pin1对肿瘤细胞周期运行的调节作用进行阐述,以了解其与肿瘤发生、发展的关系。     

Pin1抑制剂胡桃醌对乳腺癌细胞株MCF7Adr增殖、迁移及血管新生能力的影响

目的研究Pin1抑制剂胡桃醌对乳腺癌细胞株MCF7Adr增殖、迁移及血管新生能力的影响。方法培养乳腺癌细胞株MCF7Adr,分别用不含药物的DMEM(对照组)、Pin1抑制剂胡桃醌处理(处理组),采用流式细胞法检测细胞周期、划痕实验检测细胞的迁移能力、Western-blot检测Cyclin E的蛋白含量、酶联免疫吸附法检测细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)的水平。结果处理组的G2/M期比例高于对照组(t=21.848,P<0.01),G0/G1比例、S期比例低于对照组(t=6.234,6.658,均P<0.05),Cyclin E蛋白含量、(A0-A24)/A0值低于对照组(t=17.586,26.679,均P<0.01),处理组细胞的上清液中VEGFA、VEGFB、VEGFC水平低于对照组(t=15.237,13.894,16.382,均P<0.01)。结论 Pin1抑制剂胡桃醌能有效抑制乳腺癌细胞株MCF7Adr的增殖、迁移和血管新生能力,Pin1抑制剂可作为乳腺癌治疗的备选药物。     

细胞型局灶节段性肾小球硬化症的病理变化及其细胞周期调控蛋白的表达

目的:探讨细胞型局灶节段性肾小球硬化症(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)的病理学特征及其细胞周期调控蛋白的表达.方法:收集细胞型FSGS病例17例,肾活检标本进行系统的光镜、免疫荧光及电镜观察,通过免疫组化及免疫电镜方法,检测细胞周期蛋白(cyclin D1,cyclin E,cyclin A及cyclin B1),细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂(cyclin dependent kinase inhibitor-CKI,包括p2l,p27及p57)的表达.结果:细胞型FSGS以上皮细胞增生肥大伴有毛细血管襻的节段硬化或塌陷为突出特征;免疫荧光可见部分病例节段性IgM阳性或阴性;超微结构观察显示增生的细胞兼具足细胞及壁层上皮细胞的特征.细胞型FSGS的增生细胞,cyclin E、cyclin A、cyclin B1及p21表达阳性,而cyclin D1、p27及p57转为阴性.结论:细胞型FSGS的增生细胞可能为损伤的足细胞重现幼稚足细胞的表型特征,重新进入细胞周期进行增殖而形成细胞增生病变;细胞周期蛋白(cyclin E,cyclin A,cyclinB1)表达增加及CKI(p27,p57)表达降低与细胞增生病变的细胞周期调控有关.     

外源性APMCF1基因转染对人肝癌细胞系细胞生长和细胞周期的影响

目的：探讨外源性APMCF1基因对人肝癌细胞系（HHCC）细胞生长和细胞周期的影响. 方法： 将人全长APMCF1基因经脂质体包裹转染肝细胞肝癌HHCC细胞,经G418筛选获得转基因癌细胞克隆,采用半定量RT-PCR方法检测APMCF1的表达情况.通过单四唑（MTT）比色,绘制生长曲线,观察APMCF1基因对HHCC细胞生长的影响,流式细胞仪检测 HHCC细胞周期的变化. 结果：半定量RT-PCR结果显示,APMCF1基因被成功地转染至HHCC细胞.稳定表达外源性APMCF1基因的HHCC细胞生长速度明显慢于亲代细胞;细胞周期发生明显改变,G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显减少. 结论： 外源性APMCF1基因对HHCC细胞生长和细胞周期有明显的抑制作用,可能是一个细胞周期调节基因.     

Cyclin D1调控U87胶质瘤细胞周期研究

目的探讨细胞周期蛋白D1（Cyclin D1,CCND1）在U87胶质瘤细胞周期调控中的作用。方法根据NCBI GenBank中cyclin D1序列设计双链siRNA,利用Western blotting技术验证设计的siRNA序列的有效性,并通过流式细胞术检测抑制CCND1对U87胶质瘤细胞周期进程的影响。结果经Western blotting检测,成功抑制了CCND1的表达。并且抑制CCND1后,U87细胞周期停滞在G1期,抑制了U87细胞的G1／S期转换。结论U87细胞中抑制CCND1可以显著抑制细胞周期进程,使细胞周期停滞在G0／G1期,为进一步研究胶质瘤的靶向治疗奠定了理论基础。     

人端粒结合因子在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位与周期性表达的研究

目的:研究人端粒结合因子1(telomere repeat binding factor 1,TRF1)在端粒酶阳性和阴性细胞中的定位以及在细胞周期中的表达.方法:应用分子克隆技术扩增TRF1基因全长(TRF1FL)和N、C端缺失突变体(TRF1ΔNC)序列,并克隆入pEGFP-C2真核表达载体,表达绿色荧光(GFP)融合蛋白;将含目的基因质粒转染端粒酶阳性Hela细胞和端粒酶阴性WI38-2RA细胞,Western Blot验证目的蛋白分子量,荧光显微镜观察TRF1在间期细胞和染色体的定位;利用药物阻断HeLa细胞于不同周期,流式细胞仪检测细胞周期,半定量Western Blot检测TRF1在不同细胞周期中的表达.结果:TRF1FL、TRF1ΔNC序列长度分别为1.3 kb和0.9 kb;GFP融合TRF1FL、TRF1ΔNC分子量大小分别为80 kD和60 kD.TRF1FL在间期细胞胞核内呈点状表达,在染色体则表达于染色体未端,TRF1ΔNC在细胞核内呈弥散性表达;TRF1在端粒酶阴性细胞中与早幼粒细胞白血病小体(promyelocytic leukemia body,PML)共定位,在端粒阳性细胞中则没有共定位.TRF1在HeLa细胞中以M期表达量最高,G1/S表达最低,M期表达量是G1/S期的3.9倍(t=12.92,P<0.01).结论:TRF1在端粒酶阳性和阴性细胞中有不同的定位模式,在HeLa细胞中TRF1呈周期性表达.