活性维生素D对肾病大鼠的肾脏保护作用

目的观察转化生长因子-β1（TGF-β1）、α3β1整合素在Heymann肾病鼠肾小球的表达以及活性维生素D1,25-（OH）2D3对两者表达的影响。方法SD大鼠随机分为正常对照组（NC）和Heymann肾病模型组;后者经腹腔注射肾小管刷状缘抗原诱导肾病模型,再随机分为Heymann肾病组（HN）和1,25-（OH）2D3治疗组（HT）。HT组皮下埋置渗透性微量泵,给予1,25-（OH）2D3,3ng/（100g.d）,连用4周。检测大鼠血清中的肌酐（Cr）、钙（Ca）、磷（P）、甲状旁腺素（PTH）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）,尿蛋白（UP）、尿足细胞（UPC）。电镜观察每视野足细胞数、足突平均宽度。逆转录-聚含酶链反应法检测肾小球TGF-β1,α3整合素mRNA表达水平的变化。蛋白印迹检测肾小球TGF-β1,α3整合素蛋白的表达。结果与NC组相比,HN组大鼠Cr、P、PTH、AngⅡ明显升高,Ca降低;UP、UPC排泄明显增多;足细胞数目减少,足突宽度增加;肾小球TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平明显增加,而α3整合素mRNA和蛋白表达明显降低。与HN组相比,HT组Ca无显著差异,PTH、AngⅡ明显降低;UP、UPC排泄明显减少;足细胞数目增加,足突宽度变窄;肾小球TGF-β1mRNA和蛋白的表达下调,α3整合素表达上调。结论1,25-（OH）2D3可能是AngⅡ的负向调节因子,可减少Heymann肾病鼠尿蛋白及尿足细胞的排泄,下调肾小球TGF-β1的表达,增加α3β1整合素的表达,从而减少足细胞脱落,维持肾小球足细胞数量。     

人骨髓间充质干细胞Toll样受体3和4活化对IL-10、IL-12和IL-6分泌的影响

目的：研究人骨髓间充质干细胞（BM—MSCs）中Toll样受体（TLR）3和4的活化对IL-10、IL-12和IL-6分泌的影响。方法：用RT—PCR法检测体外培养的BM—MSCs中是否存在TLR3和TLR4的表达;用不同剂量的聚肌胞和脂多糖分别进行诱导后,用ELISA法检测培养上清中IL-10、IL-12和IL-6的变化。结果：BM—MSCs中有较高水平的TLR3和TLR4mRNA表达。聚肌胞可明显促进IL-6分泌（P〈0．05）,且0．025g／L组明显强于0．0025g／L组（P〈0．01）;明显抑制IL-10分泌（P〈0．01）,且0．25g／L组明显强于0．025g／L组（P〈0．05）;对IL-12的分泌无明显影响。脂多糖可明显促进IL-6的分泌（P〈0．01）,而对IL-12和IL—10的分泌无明显影响。结论：BM—MSCs中有较高水平的TLR3和TLR4表达。TLR3活化影响BM—MSCs对IL-6和IL-10的分泌,TLR4活化影响IL-6的分泌,TLR3或TLR4活化均不影响IL-12的分泌。     

8-Br-cAMP对THP1细胞中ABCA1及单核细胞趋化因子的影响

 目的 以THP1细胞株为靶点,研究8-Br-cAMP对ABCA1、MCP-1基因mRNA和蛋白质表达及IL-1β蛋白质的影响,阐明ABCA1基因在AS及泡沫细胞形成中新的可能机制.方法 复苏培养THP1细胞株,加入8-Br-cAMP(0.5 mmol/L)刺激3、6、12、24 h,荧光定量RT-PCR和Western蛋白印迹法及ELISA法检测ABCA1、MCP-1及IL-1βmRNA和蛋白表达量;用ABCA1的反义寡核苷酸(100 nmol/L)转染THP1细胞,给予上述8-Br-cAMP的刺激,同样的方法观察上述指标的改变.结果 予8-Br-cAMP刺激后,THP1细胞中ABCA1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平及IL-1β蛋白质水平均增高;给予反义寡核苷酸转染后,8-Br-cAMP刺激后3、6 h ABCA1、MCP-1mRNA的表达降低,12、24 h ABCA1、MCP-1及IL-1β蛋白质的表达水平降低.结论 在8-Br-cAMP刺激下,THP1细胞中ABCA1可增加炎症因子表达,参与AS的发生.     

Ox-LDL对主动脉平滑肌细胞中ABCA1及炎性因子表达的影响

 目的 研究氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导作用下,ATP结合盒转运子A1(ABCA1)对人主动脉平滑肌中单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA和蛋白质及白介素-1β(IL-1β)表达的影响.方法 复苏培养人主动脉平滑肌细胞CC2571、Ox-LDL (30 μg/ml) 刺激3、6、12、24 h后,以荧光定量RT-PCR法检测ABCA1、ICAM-1、MCP-1mRNA表达,Western蛋白印迹法及ELISA法检测ABCA1、ICAM-1、MCP-1及IL-1β蛋白质表达;用ABCA1的反义寡核苷酸抑制ABCA1表达后,观察上述指标的变化.结果 予Ox-LDL刺激后, CC2571细胞中ABCA1、MCP-1、ICAM-1的mRNA和蛋白及IL-1β蛋白质表达均增加,反义寡核苷酸转染后3、6 h时上述指标的mRNA表达降低,12、24 h蛋白质表达降低.结论 Ox-LDL诱导主动脉平滑肌细胞炎性因子的表达,ABCA1可能通过增强上述炎性因子表达参与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的发生.     

1,25(OH)2D3对关节滑膜蛋白聚糖-4基因表达及分泌的影响

 

目的 探讨维生素D体内活性形式1,25(OH)₂D₃对关节滑膜蛋白聚糖-4 (proteoglycan 4,PRG4)基因表达及分泌的影响。方法 新西兰大白兔,分离膝关节滑膜体外培养。首先用10 nM浓度1,25(OH)₂D₃进行试验。Real time-PCR检测PRG4基因表达,ELISA 法检测培养液中PRG4分泌量的变化,确定1,25(OH)₂D₃作用后PRG4基因表达和PRG4分泌的最佳时间点。之后用不同浓度1,25(OH)₂D₃进行刺激,在最佳时间点测定1,25(OH)₂D₃对关节滑膜PRG4基因表达及分泌的影响。结果 Real time-PCR分析显示,1,25(OH)₂D₃作用6 h后PRG4 mRNA水平开始上调,24 h时PRG4 mRNA表达水平达峰值。ELISA分析结果显示,1,25(OH)₂D₃作用12 h时滑膜培养液中PRG4蛋白含量开始明显升高,48 h时滑膜培养液中PRG4蛋白含量达最高。Real time-PCR分析显示,在0.1~100 nM 浓度范围内1,25(OH)₂D₃均促进关节滑膜PRG4基因表达,随着1,25(OH)₂D₃浓度的提高,PRG4基因表达上调逐渐提高。ELISA分析显示,1,25(OH)₂D₃在0.1~100 nM浓度范围内均促进关节滑膜分泌PRG4,随着1,25(OH)₂D₃浓度的提高,滑膜分泌PRG4量逐渐增加。结论 1,25(OH)₂D₃对滑膜PRG4基因表达及分泌有明显的促进作用。

     

术后疼痛大鼠切口组织Toll样受体4及其下游细胞因子表达的变化

目的 探讨术后疼痛大鼠切口组织Toll样受体4(TLR4)及其下游细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达的变化. 方法 健康成年雄性SD大鼠74只,体重200～250 g,建立大鼠术后疼痛模型.于术前1d、术后0.5,1,2,6,12h及1,2,3,5,7d测定术侧与非术侧机械缩足反射阈值(PMWT);于术前1d、术后2,8h、1,2,3,5,7d采用荧光定量PCR法检测皮肤切口组织TLR4、IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达. 结果 与术前比较,大鼠术侧术后0.5 h～5 dPMWT降低,术后2h术侧切口组织TLR4mRNA表达下调,之后逐渐升高,IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA于术后2,8h、1,2,3,5d表达上调(P＜0.05),非术侧PMWT差异无统计学意义(P＞0.05);术侧PMWT术后6h最低,之后逐渐升高,术侧切口组织TLR4mRNA术后2d表达水平最高,IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA分别于术后2h、1d、3d表达水平最高(P＜0.05).TLR4、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达水平与术侧PMWT呈负相关(r=-0.501,-0.743,-0.893,-0.657,P＜0.05),IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA与TLR4 mRNA表达水平呈正相关(r =0.764,0.283,0.667,P＜0.05). 结论 术后疼痛大鼠切口组织TLR4及其下游炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达上调,该变化可能参与了术后疼痛的产生和维持.     

脂联素对人脐静脉内皮细胞MCP-1和IL-8表达的影响

目的 探讨脂联素对肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌白细胞介素-8(IL-8)、单核细胞趋化因子-I(MCP-1)的影响.方法收集新生儿脐静脉并分离培养HUVECs,采用标记链霉素抗生物素-生物素法(LSAB法)荧光染色检测内皮细胞特有的Ⅷ因子相关抗原.将HUVECs随机分为对照组、TNF-α刺激组(分别以5、10、20、50μg/L TNF-α刺激)和脂联素干预组(以5、30、50mg/L脂联素进行干预,然后加入终浓度20μg/L的TNF-α).分别采用PCR及ELISA法检测各组IL-8及MCP-1的mRNA和蛋白表达水平.结果 荧光染色结果显示HUVECs胞质中Ⅷ因子相关抗原阳性,证实是血管内皮细胞.HUVECs经TNF-α刺激后,TNF-α刺激组IL-8及MCP-1的蛋白和mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.01),且随着TNF-α浓度的增加,MCP-1和IL-8的蛋白表达量也呈增加趋势.与20μg/L TNF-α刺激组相比,5mg/L的脂联素干预组IL-8及MCP-1的蛋白、mRNA表达均无显著差异;但30、50mg/L脂联素干预组IL-8及MCP-1的蛋白、mRNA表达明显减弱(P<0.01).结论 脂联素可能通过抑制血管内皮细胞趋化因子IL-8及MCP-1的表达来调节血管内皮细胞的炎症反应,从而发挥其抗炎、抗动脉粥样硬化的作用.     

P物质对高糖条件下成纤维细胞增殖及其单核细胞趋化蛋白-1合成的调节作用

目的 探讨外源性P物质(substance P,SP)对高糖条件下人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSF)增殖及其单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)合成的影响. 方法 用高糖DMEM培养基培养HSF;并用SP在不同浓度和不同时相点处理,ELISA法检测细胞上清液中MCP-1分泌水平,观察时问与剂量的时效关系;半定量RT-PCR、实时荧光定量(Real Time)-PCR、Western blot分别检测各组HSF内MCP-1 mRNA的表达和蛋白的合成;细胞增殖试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)检测不同浓度SP作用HSF后的增殖情况. 结果 经SP处理后8h可检测到MCP-1分泌增强(P＜0.05),24h达峰值(P＜0.01),在10,100 nmol/L的浓度下分泌最多(P＜0.01);SP可明显增加高糖条件下HSF MCP-1mRNA的表达和蛋白的合成,特别是在10 nmol/L的浓度下表达最为显著(P＜0.01);在10,1 000nmol/L的SP均明显促进HSF的增殖(P＜0.05). 结论 SP可促进高糖条件下HSF的增殖及MCP-1的合成,对促进糖尿病创面修复可能有一定意义.     

多黏菌素B拮抗内毒素活性的实验研究

目的 探讨多黏菌素B（PMB）拮抗内毒素（LPS）生物学活性的机制。方法 观察PMB（1mg／kg）对LPS（20mg／kg）攻击的脓毒症模型小鼠的保护作用；应用生物传感器技术检测PMB与LPS和活性中心类脂A（lipid A）的亲和力，动态浊度法鲎试验观察PMB对LPS（2ng／ml）的中和能力，酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测PMB对LPS（100ng／ml）刺激的小鼠腹腔巨噬细胞（PMФ）释放肿瘤坏死因子α-（TNF-α）及白细胞介素6（IL-6）的抑制作用，逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测PMB对LPS（100ng／m）刺激的小鼠PMФ的Toll样受体4（TLR4）、TNF-α和IL-6mRNA表达的影响。结果 PMB处理小鼠3d存活率为65％，显著高于LPS组的15％（P〈0．01）；PMB与LPS和Lipid A具有高亲和力，其与二者的解离常数分别为18、9nmol／L和11．1nmol／L，对LPS具有显著的中和作用，并在蛋白和核酸水平均显著抑制LPS诱导PMФ的TNF-α、IL-6和TLR4的释放和表达。结论 PMB可能通过抑制巨噬细胞活化实现对脓毒症小鼠的保护作用，其机制可能与PMB与Lipid A结合后中和LPS的活性有关。     

罗格列酮、5-AsA和VSI#3对SW480细胞TR4、PPARy、NF—KB表达的影响

目的探讨罗格列酮、5-ASA和VSL#3对SW480细胞TLR4-NF-KB信号途径关键位点蛋白表达的影响。方法 SW480细胞分为5组,4组以脂多糖（LPS）50ng／ml刺激24h,另一组仅加入无LPS的RMPI1640为对照组。刺激后,3组分别以罗格列酮（10μmol／L）、5-ASA（1mg／m1）和VSL#3（0．0lg／m1）干预2h。收集各组上清液,用WB法检测各组TLR4、NF-KB、PPARy蛋白的表达,用ELISA法测量IL-8生成量。结果VSL#3明显减少11LR4表达,促进PPARy表达,抑制NF-KB活化;罗格列酮、5-ASA明显促进PPARy表达,阻止NF-KB活化,对TLR4基本无影响。LPS组IL-8生成量明显高于对照组;罗格列酮、5-ASA、VSL#3干预可明显降低IL-8生成量。结论TLR4-NF-KB信号途径是重要的信号通路,PPARy对这条信号通路有抑制作用。VSL#3通过同时降低,rLR4表达和增加PPAR7的表达,抑制NF-KB的活性,抑制这条信号通路,最终缓解炎症。罗格列酮的作用可能主要是通过增加PPARy表达和促进其活性实现。PPAR1是5-AsA的作用靶点之一。     

脓毒症大鼠肝脏组织Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化规律

目的探讨脓毒疗人鼠肝脏组织内毒素复合受体—Toll样受体4（TLR4）／髓样分化蛋白-2（MD-2）mRNA的表达变化，研究其与肝脏组织肿瘤坏死因子-α（TNF—α）mRNA表达的父系。方法腹腔注射内毒素（LPS）5mg／kg制作大鼠脓毒症模型。动物分为正常对照组（20只）及内毒素注射后1h、2h、6h组（各20只）．检测肝脏组织TLR4／MD-2以及TNF-α mRNA的表达。结果LPS注射后1h，TLR4／MD-2及TNF-α mRNA表达开始升高并达高峰．伤后2～6h逐渐下降，各时间点的表达量均显著高于对照组（P〈0．01）．TLR4与MD-2 mRNA的表达呈明显正相关（P〈0．05）．且分别与TNF—α mRNA的表达呈显著正相关（P〈0．05）。结论LPS可迅速上调肝脏组织TLR4／MD-2的基闪表达并诱导早期炎症细胞因子TNF-α的基因表达。脓毒症时TLR4识别LPS是可能以TLR4／MD-2复合体的形式完成的．且在识别过程中MD-2是TLR4必需的作用分子。     

NOD2和TLR9激动剂诱导胃癌细胞SGC-7901合成IL-8的研究

目的探讨TLR9和NOD2在胃癌细胞SGC-7901中表达及诱导IL-8合成过程中的相互作用及意义。方法用不同浓度的NOD2激动剂（MDP）和TLR9激动剂（未甲基化的CpG ODN）以不同时间间隔单独或联合作用于体外培养的胃癌细胞SGC-7901,用ELISA法测定上清中的IL-8,用RT-PCR和Western Blot测定TLR9和NOD2的表达。数据采用SPSS13.0进行统计分析。结果相对于未刺激组,MDP和未甲基化CpG ODN能使SGC-7901NOD2和TLR9mRNA和蛋白的表达增强;细胞培养上清中IL-8的分泌增强,并呈现时间依赖性和浓度依赖性,差异具有统计学意义（P〈0.05）,8h浓度差异无统计学意义,二者共同作用还能协同诱导SGC-7901合成IL-8,也呈现时间和浓度依赖性,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 NOD2和TLR9在胃癌细胞SGC-7901中有所表达,二者在诱导SGC-7901分泌炎性因子的过程中有协同作用。     

褪黑素对高糖条件下牛主动脉内皮细胞保护作用的实验研究

观察褪黑素（Mel)对牛主动脉内皮细胞分泌舒张因子前列环素（PGI2），一氧化氮（NO）及表达诱生型一氧化氮合酶（iNOS)基因的影响，以探讨Mel的血管内皮保护作用，原代培养牛胸主动脉内皮细胞，取3－5代用于实验，实验分5组：A组为低糖对照组，培养液中葡萄糖浓度为5．5mmol/L;B组为高糖（33mmol/L）对照组；C组为高糖（33mmol/L)，亚生理浓度Mel(10^-13mol/L)组；D组为高糖（33mmol/L)、生理浓度Mel(10^-9mol/L)组；E组为高糖，药理浓度Mel(10^-5mol/L)组，体外孵育24h后，用放免法检测培养液中PGI2的代谢产物6－酮－前列腺素F1α(6-酮－PGF1α）浓度，比色法检测培养液中NOS活性，RT－PCR法检测内皮细胞iNOS mRNA表达，A组6－酮－PGF1a浓度，NOS活性及iNOS mRNA表达均显著低于B组（P＜0．01），B组与C组比较差异均无显著性意义（P＞0．05），而D组，E组6－酮－PGF1α浓度显著高于B组（分别为P＜0．05和P＜0．01）；D组、E组NOS活性均显著低于B组（P＜0．05）；D组、E组iNOS mRNA表达均显著低于B组（P＜0．01），提示生理及药理浓度Mel有改善内皮细胞舒张功能的作用。     

蜂毒肽MP-1对内毒素血症小鼠急性肺损伤保护作用的研究

目的探讨蜂毒肽MP-1对内毒素血症（ETM）小鼠急性肺损伤的保护作用。方法尾静脉注射内毒素（LPS）5mg/kg制备ETM小鼠模型。动物随机分为正常对照组（n=8）、ETM组（n=48）和MP-1治疗组（n=48,注射LPS的同时注射MP-1 3mg/kg）。ETM组和MP-1组分别于注射LPS后2、6、12、24、48、72h处死动物,采集血浆和肺组织标本,动态比浊法鲎试验检测各时相点血浆LPS水平,ELISA法检测血浆TNF-α和IL-6水平,real-ti me RT-PCR检测肺组织Toll样受体4（TLR4）、TNF-α和IL-6 mRNA表达,分光光度法检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性,并观察伤后12h肺组织的病理变化。结果ETM小鼠伤后2-48h血浆LPS、TNF-α和IL-6水平显著增高（P〈0.01）,肺组织TLR4、TNF-α、IL-6 mRNA表达和MPO活性也明显增强（P〈0.05或P〈0.01）。MP-1治疗可不同程度降低血浆LPS和各细胞因子水平（P〈0.05或P〈0.01）,抑制肺组织相关基因表达及减低MPO活性（P〈0.05或P〈0.01）,并可减轻肺组织的病理损伤。结论MP-1可能通过中和LPS,减少LPS诱导的炎症介质的合成与释放,进而减轻炎症介质对肺组织的损伤。     

慢性移植排斥反应诱导的小鼠肾炎发生因素的初步探讨

目的探究慢性移植排斥反应诱导小鼠肾炎的发生机制,为下一步药物治疗提供实验依据。方法建立DBA/2→B6D2F1（DBA/2J×C57BL/6）移植小鼠模型,通过尿蛋白检测以及组织病理学分析确定小鼠肾炎的发生;利用直接免疫荧光标记技术以及实时定量PCR分析慢性移植排斥反应诱导小鼠肾炎发生过程中T、B淋巴细胞的活化情况,以及靶组织器官中各种因子或蛋白的变化。结果与同系基因型移植对照组（B6D2F1→B6D2F1）小鼠相比,异体移植实验组（DBA/2→B6D2F1）小鼠脾细胞中CD4＋CD69＋、CD8＋CD69＋双阳性细胞百分比均明显增加,B220＋I-Ab＋双阳性细胞的I-Ab表达显著增强,提示T、B淋巴细胞的活化;另外,在实验组小鼠肾组织中,趋化因子如单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、受激活调节正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）、B淋巴细胞趋化因子（BLC）以及淋巴细胞趋化因子（Ltn）表达上升;炎性细胞因子（如IL-6、IL-1β）表达显著增强;促纤维生长因子如转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）以及纤维增生相关蛋白如Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ）的mRNA表达水平明显上升,提示组织炎症以及纤维化的发生。结论慢性移植排斥反应诱导肾炎发生可能与激活淋巴细胞以及炎症因子、趋化因子和促纤维生长因子的分泌表达有关。     

脂多糖结合蛋白对内毒素急性肺损伤大鼠肺巨噬细胞TLR4信号通路的影响

为研究脂多糖结合蛋白（LBP）对内毒素（LPS）急性肺损伤大鼠TLR4肺巨噬细胞信号通路的影响，探讨LBP对LPS炎症反应增敏作用的部分机制，运用RT-PCR和ELISA方法分别检测LBP对LPS刺激后大鼠肺巨噬细胞IL-1β、IL-18mRNA表达与TNF-α分泌量的作用，同时用RT-PCR与Western blot检测其TLR4mRNA与蛋白的表达水平。结果显示，LBP显著增加LPS刺激后大鼠肺巨噬细胞TNF-α的分泌和IL-1β、IL-18mRNA的表达，同时也增加TLR4的mRNA与蛋白表达水平，而LBP多抗能阻断上述作用。说明LBP可增强由TLR4介导的LPS信号跨膜转导功能，这可能是LBP对LPS起增敏作用的重要分子机制之一。     

间歇性高容量血液滤过对严重脓毒症患者Toll样受体表达及器官功能的影响

目的 探讨间歇性高容量血液滤过(pulse high volume hemofiltration,PHVHF)对严重脓毒症患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)表面Toll样受体2(Tolllike receptor 2,TLR2)和TLR4 mRNA表达的临床意义. 方法 40例严重脓毒症患者按随机数字表法分为常规治疗组和PHVHF组,每组20例.另选15例健康志愿者作为对照组.在治疗前、治疗24,48,72 h RT-PCR法检测单核细胞TLR2和TLR4 mRNA表达,ELISA检测血浆中TNF-α和IL-6浓度.比较各组生命体征、血清胆红素(BIL)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、乳酸水平(Lac)、氧合指数(PaO2/FiO2)、急性生理和慢性健康评估Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)评分、序贯器官功能衰竭(sequential organ failure assessment,SOFA)评分变化及预后,并监测治疗过程中的并发症. 结果 脓毒症组TLR2和TLR4 mRNA表达及TNF-α、IL-6的浓度水平均明显高于对照组(P＜0.01).PHVHF组72 h后,TNF-α和IL-6水平较治疗前明显下降(P＜0.01),PBMC表面TLR2和TLR4表达分别与常规治疗组同时相点比较显著降低(P＜0.01);而常规治疗组治疗前后比较差异无统计学意义.PHVHF组治疗72 h后,平均动脉压(MAP)和PaO2/FiO2较治疗前明显上升,Cr、BUN、Lac、APACHEⅡ评分和SOFA评分均较治疗前显著降低(P＜0.05),且与常规治疗组同时相点比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 PHVHF可降低严重脓毒症患者的全身炎症反应,改善重要器官功能水平,缩短ICU住院时间,下调PBMC 表面TLR2、TLR4表达可能是其治疗严重脓毒症的新机制.     

人脂肪组织NYGGF4基因表达的调控研究

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）对肥胖基因NYGGF4表达的调控作用。方法取适量大网膜脂肪组织进行体外培养,分别以10 ng/ml TNF-α和20 ng/ml IL-6干预6、12、24、48、72 h,应用荧光定量RT-PCR技术检测NYGGF4 mRNA表达水平的变化。结果 （1）TNF-α对人脂肪组织NYGGF4 mRNA表达具有明显的上调作用,且具有明显的时间依赖性,呈现随作用时间延长,效应逐渐增加的趋势。（2）IL-6具有降低人脂肪组织NYGGF4 mRNA表达的作用,但起效较慢,IL-6作用时间与脂肪组织NYGGF4 mRNA水平呈明显负相关关系。结论炎性细胞因子TNF-α、IL-6对人脂肪组织NYGGF4基因的表达呈现不同模式的调控作用,TNF-α可以促进人脂肪组织NYGGF4基因表达,而IL-6对NYGGF4的表达则具有抑制作用。     

诱生型一氧化氮合酶调节体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞中MMP的表达

目的 探讨在体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞(SMC)中，一氧化氮(NO)的产生及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化对基质金属蛋白酶MMP-2，MMP-9的调节。方法 酶消化法培养大鼠主动脉平滑肌细胞(SMC)，α—actin及电镜鉴定SMC后，取3～5代SMC用IL-10诱导iNOS表达，使用不同浓度的选择性iNOS抑制剂氨基胍，通过RT—PCR观察NO调节MMP-2，MMP-9的表达情况。结果 氨基胍抑制IL-1β诱导的SMC表达iNOS后，在一定范围内降低MMP-2 mRNA表达，但对MMP-9的表达无明显影响。结论 用不同浓度的氨基胍抑制IL-1β诱导体外培养的SMC表达iNOS，MMP-2 mRNA的表达在一定范围内呈浓度依赖性增加，提示NO对MMP-2表达的抑制作用可能在NO介导的以血管重构为特征的一系列血管疾病如腹主动脉瘤，经皮血管腔内成形术后再狭窄的病理生理机制中有重要作用，并可能为这些疾病的治疗提供新思路。     

可溶性TLR4/MD-2体外对炎症反应的抑制作用

目的探讨利用可溶性TLR4受体复合物（TLR4/MD-2）阻断LPS/TLR-4信号通路,缓解过度炎症反应的可行性及其机制。方法用大肠杆菌K12感染正常人外周血的方法建立体外感染模型,观察加入可溶性TLR4/MD-2受体复合物后炎症介质IL-6、IL-8以及中性粒细胞表面CD11b、巨噬细胞表面CD80等的表达变化。结果与结论可溶性TLR4/MD-2受体复合物能显著降低细菌感染后炎症性细胞因子IL-6、IL-8的分泌水平,以及炎症细胞表面共刺激分子的表达。可溶性TLR4/MD-2能有效阻断体外感染模型中炎症介质的释放,为探索新的炎症性损伤防治途径提供了实验依据。