从健康人外周血建立人软骨抗原凝集原G1区自身反应性T淋巴细胞株

为了研究健康人T细胞库中是否存在G1特异性T细胞 ,我们应用重组人软骨抗原凝集原G1为抗原 (rG1) ,采用国际标准半有限稀释建系法 ,从 4名正常人外周血中建立了 11株rG1特异性T细胞系。 4名健康供者的rG1特异性T细胞系出现频率分别为 0 6 / 10 6(RP )、 0 5 / 10 6(AC )、 1 6 / 10 6(YZ )和 2 0 / 10 6(JY ) ,平均为 1 1± 0 5 / 10 6。远远低于类风湿性关节炎病人外周血rG1特异性自身反应性T细胞。所有T细胞系与rG1及WT和PPD共同培养以观察其特异性反应性 ,结果发现所建立的 11株T细胞系对人软骨抗原凝集素G1区具有良好的特异性。本研究结果提示正常人外周血中确有rG1特异性T细胞系 ,但是出现频率远远低于类风湿性关节炎病人 (另文报道 )。     

表达HPA抗原的细胞株稳定性及应用的研究

建立血小板特异性抗原永生化细胞株,为血小板免疫学及血小板交叉配型提供永久的研究材料。采用EB病毒(Ep-stein-Barr virus)转化技术,把携带血小板特异性稀有抗原外周血淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞株。结果:成功地建立了13个稀有血小板特异性稀有抗原建立了永久细胞株,所有的细胞株传代、冻存和复苏的成功率为100%,细胞传至30代没有发现基因突变。由所建的细胞株抽提的DNA样本,分发给第14届国际血小板免疫学研究会做为参比试剂,34个国际实验室基因分型鉴定结果的一致率为97.85%。采用EB病毒转化技术,能成功地血小板特异性抗原外周血淋巴细胞转化成永生化细胞淋巴母细胞株,细胞株稳定传代,并可用作为参比试剂。     

鼠抗人CD28分子单克隆抗体的研制及生物学特性研究

目的 制备鼠抗人CD28分子的单克隆抗体（mAb),研究其在T细胞的活化、增殖及信号传导中的作用。方法 以小鼠淋巴瘤细胞转染人CD28基因的细胞株（CD28-T）为免疫原,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株,以体内诱生法生产腹水,并以免疫亲和层析法对其纯化,以快速定性试纸法鉴定mAb的Ig亚类,竞争抑制法分析mAb识别的抗原表位,3H-TdR掺入法研究mAb对T细胞的刺激效应,结果 成功地获得了5株分泌特异性抗入CD28mAb的杂交瘤细胞株,鉴定的1株（克隆18G8）属IgG2a,腹水效价（流式细胞仪分析）达1：2400以上,该mAb能60%阻断标准鼠抗入CD28抗体与相应抗原的结合,提示其识别的抗原表位与标准mAb不完全相同,mAb18G8可取代B7-1分子介导的协同刺激信号,促进人外周血T细胞增殖（ST=7）。结论 18G8是12株功能性mAb,具有重要的研究和应用价值。     

类风湿性关节炎患者血清TNF-α和外周血B细胞及T细胞亚群的探讨

目的：探讨了类风湿性关节炎患者血清TNF—α和外周血B淋巴细胞及T淋巴细胞亚群水平的变化。方法：分别应用放射免疫分析和单克隆技术测定了37例类风湿性关节炎患者血清TNF—α,和外周血B淋巴细胞及T淋巴细胞亚群的水平，并以30名正常健康人作比较。结果：类风湿性关节炎患者血清TNF—α和外周血B淋巴细胞数显著地高于正常人水平（P〈0．01），而CD3、CD4、CD4／CD8则显著地低于正常人水平（P〈0．01）。结论：类风湿性关节炎是一种自身调节免疫异常的疾病。     

人外周血T细胞系间接识别SLAⅠ类分子引起的异种细胞增殖反应

目的 确认猪→人异种移植中存在针对猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen，SLA)Ⅰ类分子的间接识别而引起的急性细胞性排斥。方法 用纯化的中国版纳猪SLA Ⅰ类P1基因工程蛋白为抗原，体外反复刺激健康人外周血T细胞，建立P1特异性T细胞系。观察抗原特异性CD4 T细胞系在自身APC存在下对版纳猪外周血单个核细胞与软骨细胞的反应性，以及HLA-DR单抗与氯喹的阻断作用。结果 建立10株SLA Ⅰ类P1抗原特异性T细胞系，其中8株以TCRαβ CD4 为主要表型，将其合并使用。该CD4 P1特异性T细胞系在自身APC存在下对相同品系版纳猪PBMC与软骨细胞均产生显著增殖反应。经抗人HLA-DR单抗与氯喹处理均能明显阻断其增殖反应。结论 健康人外周血T细胞可通过间接识别SLAⅠ类抗原对版纳猪细胞产生明显应答。     

树突状细胞负载肝癌可溶性抗原后的免疫应答

目的 用负载肝癌可溶性抗原的DC诱导肝癌特异性T细胞。方法 在体外用GM－CSF和IL－4诱导健康人外周血单核细胞，使其分化为高纯度树突状细胞（DC）。用负载人肝癌细胞株SMMC－7721可溶性抗原的DC诱导自身淋巴细胞。结果 诱导后淋巴细胞增殖指数大于1．5，表面CD56分子表达下降，CD3^ T/CD4^ T和CD3^ T/CD8^ T细胞比例增加，以CD3^ T/CD4^ T细胞比例增加最为明显。CD4／CD8比例由诱导前的0．84增加为1．04，活化前后γδ比例没有改变。活化后的淋巴细胞不但可杀伤SMMC－7721细胞，同时还可不同程度的杀伤其它3株肝癌细胞。另外，诱导7d的DC可不同程度的抑制4株肝癌细胞和胃癌细胞。结论 实验结果为肝癌DC疫苗的研究提供了理论基础。     

BsAb HER-2×CD3对过度表达HER-2乳腺癌细胞的细胞毒作用

目的 :研究应用抗HER 2抗原和CD3抗原的双向基因工程抗体BsAbHER 2×CD3介导T淋巴细胞对过度表达HER 2乳腺癌细胞的细胞毒作用。方法 :以过度表达HER 2的乳腺癌细胞株SK BR 3为靶细胞 ,T淋巴细胞为效应细胞 ,采用MTT法、3 H TdR掺入法测定BsAbHER 2×CD3对靶细胞、效应细胞的抑制作用及其介导的效应细胞对靶细胞的杀伤作用。结果 :BsAbHER 2×CD3具有MAbHER 2和MAbCD3的双重特性 ,既能抑制SK BR 3细胞生长 ,又可促进正常人外周血T淋巴细胞增殖。BsAbHER 2×CD3介导T淋巴细胞对靶细胞产生显著的细胞毒作用 ,明显强于MAbHER 2对靶细胞的作用 ,E∶T =2 0∶1为最佳效靶比。结论 :BsAbHER 2×CD3 ,既可以与HER 2过度表达的肿瘤细胞特异性结合 ,又可以介导T淋巴细胞对肿瘤细胞产生特异性杀伤作用 ,具有明显的抗肿瘤作用     

ECDI偶联的人抗原提呈细胞诱导供者抗原特异性CD8+ T细胞耐受的实验研究

目的：研究体外模拟异基因移植环境下,碳二亚胺（ECDI）偶联的供者抗原提呈细胞（ECDI-APCs）诱导受者T细胞针对供者抗原特异性耐受的效果。方法：每组以HLA-A、-B、-DR完全错配的3名志愿者外周血淋巴细胞建立混合淋巴细胞培养体系,模拟异基因移植环境。在-6 d将受者外周血单个核细胞（PBMCs）与供者ECDI-APCs共培养,第0天再次加入新鲜分离的原供者APCs或无关供者APCs模拟移植,第8天以流式细胞术检测受者T细胞的增殖情况。结果：ECDI偶联浓度为150 mg/ml,供、受者细胞共培养比例为0.1∶1时,ECDI-APCs可诱导出受者T细胞对原供者抗原刺激的耐受状态（P<0.05）,其中受者CD8⁺ T细胞的耐受具有供者抗原特异性（P<0.05）,而CD4⁺ T细胞的耐受无抗原特异性（P>0.05）。结论：ECDI-APCs能诱导CD8⁺ T细胞对同种异体抗原刺激的耐受状态,并且具有供者抗原特异性,可为临床器官移植术后供者抗原特异性耐受的建立提供实验依据。     

儿童原发性免疫缺陷病患者EBV转化的B淋巴母细胞系的建立及应用

目的: 建立原发性免疫缺陷病人外周血永生化B细胞系,保存原发性免疫缺陷病人特有的基因组资源,为进一步研究原发性免疫缺陷病提供丰富实验材料.方法: 采用密度梯度离心法分离PBMC,加入环孢菌素A、 EB病毒共培养以转化外周血淋巴细胞.结果: 成功建立14例原发性免疫缺陷病人外周血永生化B细胞系,建株成功率100%;对已建立的永生细胞株冻存和复苏,成功率为100%;转化前后制备细胞染色体和G显带核型分析无明显改变.结论: 经EB病毒成功转化外周血B淋巴细胞为永生细胞株,为进一步开展原发性免疫缺陷病的基础研究提供了资料.     

乙型肝炎外周血淋巴细胞CD3~+、CD3~+HLA-DR~+的表达

T淋巴细胞的CD3分子为成熟T淋巴细胞所特有的膜表面分子 ,它可代表T淋巴细胞总数。HLA DR是MHCII类分子 ,具高度多态性 ,在调控抗原递呈细胞 (APC )激活的T细胞活化的程度和特异性中起着重要作用。成熟T淋巴细胞受抗原激活后可表达MHCIl类分子 ,因此HLA DR分子可作为T细胞的活化标志。为观察乙型肝炎成熟T细胞量的变化及活化情况 ,我们测定了一些病人外周血CD3 、CD3 HLA DR 的表达。1　材料与方法1 1　临床资料　检测对象为 2 0 0 1年收治的乙型肝炎共 38例 ,男 34例 ,女 4例 ,平均年龄 36岁。慢性乙型肝炎 32例 ,其中轻度…