高效液相色谱法测定金钗石斛中石斛碱含量

 目的建立一种用HPLC测定石斛中石斛碱含量的方法。方法Waters XTerra^TM RP₁₈色谱柱(3.9mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水-三乙胺(21∶79∶0.005),流速为1mL·min^-1,检测波长为210nm。结果石斛碱在30.9～618mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=3191.5ρ+14191(r=0.9999),平均回收率为99.11%,RSD为2.60%。结论应用HPLC测定石斛中石斛碱含量的方法简便、准确、可行。     

泸州、赤水两地金钗石斛中石斛碱含量比较

目的:对四川泸州市合江县和贵州赤水市两地金钗石斛中石斛碱的含量进行比较。方法:采用气相色谱法,对两地77份不同生长年限(2~5年生)、不同栽种环境(贴树生和贴石生)金钗石斛样本中石斛碱含量进行测定,由于贴树生样本数太少,为了减小误差,本实验只对72份贴石生样本数据应用SPSS 19.0软件进行统计分析。结果:泸、赤两地同一生长年限(即2年生、3年生、4年生、5年生)样本中石斛碱含量的比较均无显著差异(P0.05);泸、赤两地样本中石斛碱的含量随着生长年限(2~5或4年)的增加而升高,差异极显著(P0.01),但石斛碱的含量增长速度变慢,至5年生时与4年生的比较无显著差异(P0.05)。结论:该研究可为金钗石斛的种植和产品开发提供科学依据。     

气相色谱法测定不同采收月份和年限金钗石斛中石斛碱

目的:测定不同采收月份和年限金钗石斛中石斛碱的含量,探索不同采收月份和年限石斛碱含量变化规律。方法:采用气相色谱法测定不同采收月份和年限金钗石斛中石斛碱的含量。结果:不同采收月份中,9月份石斛碱含量最低,为0.239%,1月份石斛碱含量最高,达0.559%,不同采收年限中,一年生石斛碱含量最高,达0.546%。结论:不同月份、不同年限的金钗石斛中石斛碱均有明显差异,实验为金钗石斛采收期的确定提供评价依据。     

金钗石斛中生物碱与多糖含量的测定

目的测定金钗石斛中生物碱与多糖的含有量。方法氨水、乙酸乙酯提取生物碱后,加水提取多糖。HPLC法测定石斛碱含有量,酸性染料比色法测定总生物碱含有量,苯酚-硫酸法测定多糖含有量。结果石斛碱在0.722 8~9.035 0μg范围内线性关系良好(r=1),平均加样回收率98.7%,RSD 0.99%。总生物碱在1.21~6.05μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 5),平均加样回收率99.7%,RSD 1.2%。多糖在21.24~84.96μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 7),平均加样回收率98.9%,RSD 1.7%。结论该方法准确环保,重复性良好,可用于金钗石斛的质量控制。     

不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱含量比较与分析

目的：研究不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱的含量变化规律。方法：采用气相色谱内标法,测定并比较不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱的含量差异。结果：不同生长年限和不同部位金钗石斛中石斛碱的含量均有明显差异,4 年生石斛中石斛碱含量高于3 年生,不同部位中石斛碱含量为：茎上段跃茎中段跃茎下段。结论：通过对不同生长年限和不同部位金钗石斛主要成分含量比较分析,为确定石斛采收期及对不同部位石斛资源的合理开发利用提供了参考依据。     

金钗石斛生物碱和水溶性多糖的累积规律

目的 探索金钗石斛体内生物碱和水溶性多糖累积规律.方法 生物碱、水溶性多糖分别采用氯仿、乙醇提取并测定其吸光度.结果 生物碱含量以思茅产最高,罗甸产最低,岩生基质高于树生基质,野外栽培和温室载培对金钗石斛生物碱含量无影响;水溶性多糖含量以赤水产最高,合江产最低,树生基质高于岩生基质,野外栽培高于温室栽培.结论 不同产地、不同生长条件下金钗石斛生物碱和水溶性多糖累积规律存在差异.     

金钗石斛中生物碱与多糖联合酶提工艺的优化

目的优化金钗石斛中生物碱与多糖的联合酶提工艺。方法以加酶量、酶解温度、酶解时间、料液比为影响因素,石斛碱、总生物碱、多糖含有量为评价指标,正交试验优化联合酶提工艺。结果木瓜蛋白酶提取的最佳条件为加酶量0.10 g,酶解温度45℃,酶解时间2 h,料液比1∶50,石斛碱、总生物碱、多糖含有量分别为3.495 5、4.341 8、35.898 7 mg/g;纤维素酶提取的最佳条件为加酶量0.30 g,酶解温度50℃,酶解时间2 h,料液比1∶40,3种成分含有量分别为3.514 8、4.351 3、36.331 2 mg/g;果胶酶提取的最佳条件为加酶量0.45 g,酶解温度55℃,酶解时间2.5 h,料液比1∶40,3种成分含有量分别为3.524 4、4.452 8、26.324 2 mg/g。结论该方法稳定、可靠、快速,可用于联合酶提金钗石斛中生物碱与多糖。     

金钗石斛中3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶基因的克隆及特征分析

目的克隆金钗石斛Dendrobium nobile中3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA synthase,HMGS)基因DnHMGS,并进行生物信息学和表达分析。方法采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得DnHMGS基因cDNA全长;生物信息学分析编码蛋白的理化特性、结构域等特征;用DNASTAR、MEGA软件分别进行氨基酸多序列比对和进化树构建分析;借助实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测基因组织表达模式。结果 DnHMGS基因全长为1 816 bp(GenBank注册号KX789180),编码一条由474个氨基酸组成的多肽,相对分子质量为52 458.47,等电点5.98。DnHMGS蛋白具有植物HMGS酶的典型结构域和活性中心,与凤梨、稻、玉米等单子叶植物亲缘关系较近。DnHMGS基因具有组织表达特异性,接菌前,DnHMGS转录本在金钗石斛叶中的表达量最高,为根、茎中的2倍以上。但接菌后DnHMGS基因表达情况转变为茎叶根。结论首次从金钗石斛中克隆得到HMGS基因的全长cDNA,该基因的分子鉴定为进一步揭示该基因在金钗石斛萜类物质合成代谢途径中的作用及菌根真菌影响石斛碱生物合成的调控机制奠定了基础。     

离子液体超声微波协同萃取金钗石斛总黄酮和石斛碱的研究

目的:应用离子液体超声微波协同萃取金钗石斛总黄酮和石斛碱。方法:研究不同离子液体、微波功率、提取时间及料液比对金钗石斛总黄酮和石斛碱提取得率的影响,在此基础上,利用响应面试验设计进一步优化。结果:最佳条件为:1.0 mol/L[Bmim]BF_4为萃取溶剂,微波功率328 W,提取时间185 s,料液比1∶22,测得金钗石斛总黄酮得率为0.490%,石斛碱得率为0.224%。与加热回流提取相比,金钗石斛总黄酮和石斛碱的得率均有所提高,提取时间从90 min缩短到185 s。结论:该提取技术能达到省时、高效的效果,可用于金钗石斛总黄酮和石斛碱的提取。     

基于UPLC-ESI-Orbitrap-MS技术对金钗石斛生物碱的分析

目的:通过UPLC-ESI-Orbitrap-MS技术对金钗石斛生物碱的主要化学成分进行分析。方法:采用Thermo Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱-色谱联用系统分析,以Hypersil Gold C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.9μm)为固定相,流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~2 min,5%B,2~15 min,5%~95%B,15~17 min,95%B),流速0.3 m L·min~(-1),柱温40℃,进样量2μL;质谱条件采用电喷雾离子化(ESI)方式,在正离子模式下,以full scan/targeted-dd MS2扫描模式检测,研究金钗石斛生物碱的主要化学成分。结果:通过与对照品比对、结合参考文献,分析多级质谱数据,根据化学成分的质谱碎片,推测色谱峰对应的化学结构,共归属8种倍半萜类金钗石斛生物碱,分别是石斛碱(dendrobine),mubironine B,石斛氨碱(dendramine),石斛醚碱(dendroxine),石斛酮碱(nobilonine),6-羟基金石斛碱(6-hydroxynobiline),N-异戊烯基石斛碱(N-isopentenyldendrobinium),N-异戊烯基-6-羟基石斛碱(N-isopentenyl-6-hydroxydendroxinium)。结论:建立了金钗石斛倍半萜类生物碱的主要化学成分的分析方法,为金钗石斛药材的鉴别及质量控制提供了科学依据。     

气相色谱法测定金钗石斛药材中石斛碱的含量

金钗石斛为兰科植物Dendrobium nobileLindl·的茎,是我国常用的名贵中药材之一,《本草纲目》称之有“强阴益精、厚肠胃、补内绝不足、轻身延年”的功效,因此常被中医用于治疗热病伤津、口干烦渴、病后虚热、舌光少苔、食少干呕、目暗不明等症。现代研究也证实它对咽喉疾病、肠     

不同地区金钗石斛的石斛碱含量测定及分析

目的测定不同地区的金钗石斛有效成分石斛碱的含量,对其质量作出初步评估。方法气相色谱法测定石斛碱的含量,DB-1毛细管柱(0.25μm×0.25mm×30m),以FID为检测器。结果所收集的材料中,除了三个地区的金钗石斛样本的石斛碱含量没有达到药典的标准(0.4%),其余地区的均达到了标准,其中含量最高的为桂-JX,达到1.73%,而含量较低的为琼-BS、川-SC、藏-MT,分别为0.39%、0.32%和0.33%,各样本间含量差距较大。结论实验对较大范围内的金钗石斛野生资源进行了收集和有效成分的含量测定,筛选出石斛碱含量较高的样本,在一定程度上为金钗石斛遗传新育种提供了支持,也为进一步对不同地区金钗石斛的质量评价奠定一定的基础。     

金钗石斛化学成分的研究

目的研究金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.的化学成分。方法金钗石斛95%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到8个化合物,分别鉴定为毛兰素(1)、石斛酚(2)、拖鞋状石斛素(3)、毛兰菲(4)、4,5-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲(5)、香豆素(6)、棕榈酸甲酯(7)、邻苯二甲酸二丁酯(8)。结论化合物1、3、5、6、7、8均为首次从该植物中分离得到。     

金钗石斛化学成分的研究

 目的　对金钗石斛 (Dendrobium nobile Lindl)茎的化学成分进行研究。方法　使用硅胶柱色谱进行分离纯化,理化性质和光谱分析鉴定结构。结果　分离并鉴定了5个单体化合物及2个系列混合物。分别为海松二烯,3-甲氧基-4-羟基反式肉桂酸二十二烷酯,3-甲氧基-4-羟基反式肉桂酸二十四烷酯,豆甾醇,对羟基顺式肉桂酸三十烷酯,对羟基反式肉桂酸直链烷酯的4个系列化合物的混合物,直链烷醇的5个系列化合物的混合物。结论　以上成分均为首次从该种植物中分得,其中海松二烯为首次从该属植物中分得。     

金钗石斛化学成分的研究

金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.是兰科石斛属植物,是《中国药典》收载石斛种之一,其应用历史悠久,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳之功效[1]。曾报道其主要化学成分是石斛碱等生物碱类、联苄和菲类以及倍半萜类成分等[2]。近年来,本课题组对金钗石斛的化学成分进行了研究,已经从中分离得到9个化合物,其中包括一个蒽醌、一个倍半萜、三个芴酮、两个联苄和两个生物碱类成分(另文发表)。本实验对该植物的茎的乙醚、醋酸乙酯及正丁醇萃取部位继续进行化学分离工作,分得8个化合物,鉴定了其中7个化合物,分别为对羟基反式肉桂酸三十烷基酯()…     

金钗石斛化学成分的研究

目的 研究金钗石斛的化学成分,为阐明其活性成分提供依据.方法 利用乙醇进行提取,硅胶柱层析、制备薄层层析和Sephadex LH-20柱层析进行分离纯化,波谱分析(核磁共振氢谱、碳谱和质谱)确定结构.结果 分离并鉴定了4 个化合物,分别为: moscatin (Ⅰ),gigantol (II),batatasin III (III),stigmasterol (IV).结论 化合物Ⅰ为首次从该植物中得到.     

金钗石斛中黄酮类和酚类成分HPLC指纹图谱研究

目的:建立金钗石斛药材中黄酮类和酚类成分的HPLC指纹图谱.方法:采用Phenomenex prodigy ODS(3)C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-0.1%乙酸溶液梯度洗脱,柱温25℃,流速1.0 mL/min,检测波长254 nm.结果:该方法可使金钗石斛中黄酮类和酚类成分得到较好的分离,并根据检测结果选定了10个共有指纹峰.结论:该法操作简便、重现性好,可作为金钗石斛药材质量控制的方法.     

十一种木本植物上栽培的金钗石斛中生物碱部分的气相色谱—质谱研究

本文对载培于十一种木本植物上的和石缝间野生的川石斛茎和叶中所含生物碱进行了-质谱研究,发现载培于杏树和喜树上的川石斛茎中存在多量的其他样品和石缝间野生川石斛中所不含有的成份(1种和3种)。说明载培植物对生于其上的川石斛成份有明显的影响。因此川石斛的载培方法应加以考虑。同时测定了各样品中石斛碱的含量,表明各种植物上载培的石斛中石斛碱的含量比石缝间野生石斛为低,未表明树上载培石斛的优越。并证明了叶片中石斛碱的含量也较高,可利用入药。     

不同产地的铁皮石斛和金钗石斛石斛多糖、石斛碱、氨基酸含量的比较

分析不同产区铁皮石斛、金钗石斛中石斛多糖、石斛碱和氨基酸的含量差异。采用硫酸苯酚法测定多糖含量,采用高效液相串联质谱法测定石斛碱及石斛中氨基酸的含量。这三种药用成分在石斛干茎中的含量依次为多糖、氨基酸和石斛碱。三种成分在不同材料中的含量有明显差异,浙江乐清1号铁皮石斛的多糖含量最高,赤水旺隆1号金钗石斛的石斛碱含量最高,赤水宝源1号金钗石斛的氨基酸含量最高。不同产地的铁皮石斛其多糖和石斛碱的含量有明显差异,而同一产地的金钗石斛中这两种成分的含量也会表现出显著差异。铁皮石斛的多糖和石斛碱含量主要受环境因素影响,氨基酸的含量则主要受基因型决定,而金钗石斛的多糖和石斛碱含量主要受基因型影响。浙江乐清的环境适宜于铁皮石斛多糖的积累,赤水宝源乡较适宜于金钗石斛碱和氨基酸的积累。赤水旺隆的1号和3号金钗品系可以作为研究金钗石斛碱和多糖的良好材料。     

金钗石斛生物碱的提取技术及临床前药理作用研究进展

金钗石斛是我国珍稀名贵中药,富含生物碱。石斛碱是金钗石斛的特征性生物碱成分,用于评价金钗石斛药材的品质。文章通过系统查阅有关书籍、期刊、数据库等资料,列举了近五年金钗石斛生物碱最新的含量测定方法和提取技术,列出了金钗石斛倍半萜生物碱的化学结构,重点阐述了金钗石斛生物碱的保护神经、肝脏、心肌,降血糖、抗白内障和抗癌的临床前药理作用及机制,简述了金钗石斛的临床应用。