迟发性神经元损伤的实验研究——沙土鼠脑组织水和离子含量的变化

本文以结扎沙土鼠双侧项总动脉5min,然后使血流再通的方法制作迟发性神经元损伤动物模型。用原子吸收分光光度法测定了沙土鼠脑6个分区水和离子含量在脑缺血及缺血后重灌流1～96h的经时变化。实验结果表明,至重灌流24h,海马CA_1区组织钙浓度开始明显增高;随后在48h,水和钠含量亦增多;到96h,钾含量才出现显著性降低。除CA_1区外其它部位的脑组织中则没有上述变化。从本实验可以得出结论,即钙的过负荷加速了迟发性神经元损伤现象的产生。     

迟发性神经元损伤的实验研究沙土鼠脑海马区组织酶谱及同工酶谱的变化

本文用蒙古沙土鼠制作迟发性神经元损伤(DND)动物模型。在5min脑缺血及缺血后重灌流1～96h,测定了动物脑海马CA_1区组织乳酸脱氢酶(LDH)、α—羟丁酸脱氢酶(α—HBDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)和碱性磷酸酶(ALP)的活性以及LDH及CK同工酶分布的经时变化。本实验的结果进一步证实了能量代谢的变化是DND发生机理中最重要的因素。     

脑缺血-再灌注后海马迟发性神经元死亡的实验研究

目的：用重复脑缺血－再灌注小鼠模型的海马切片观察迟发精神元死亡的形态学特点。方法：用重复双侧颈总动脉夹闭方法制作不完全脑缺血－再灌注动物模型。于造模后24h、72h、7d取材，HE染色及原位DNA末端标记法观察海马切片的病理改变。结果：造模后7d海，海马锥体细胞出现广泛的细胞坏死，以CA1区最明显。使用原位DNA末端标记法，在坏死神经元的邻近部位以及CA2，CA3区，齿状回可见部分膜结构完整的神经细胞核内出现特征性阳性颗粒，为细胞核内DNA链断裂所引起的凋亡细胞。结论：海马神经元的迟发性死亡表现为坏死与凋亡共存现象，海马CA1段锥体细胞的病理改变以坏死为主，齿状回颗粒细胞的改变以凋亡为主。对于迟发性神经元死亡的原因，生物学过程，及与神经系统退行性变的关系进行了初步探讨。     

沙土鼠短暂性脑缺血后海马损伤的形态学特征

本实验通过结扎沙土鼠双侧颈总动脉20分钟,再灌流7天内,动态观察背侧海马组织的形态学变化。光镜观察表明:海马各区对缺血的反应性不同,其中以 CA_1区锥体细胞对缺血最为敏感,并且 CA_1区神经元的损伤是迟发性的,再灌流4天后才出现大量神经元的坏死、消失,即“迟发性神经元死亡”(NDN)。电镜下发现:缺血再灌流早期(1～2天),CA_1区神经细胞质内有大量粗面内质网增多。本实验结果表明:短暂性脑缺血所致的海马损伤与脑组织其他区域神经元损伤不同。     

MAPK家族在沙土鼠前脑缺血再灌注期间海马神经元表达的动态变化

目的:探讨MAPK家族三成员在脑缺血再灌注期间其于海马不同亚区神经元的表达及活性变化。方法:采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断缺血再灌注损伤模型。随机分为假手术组(SH)、3min缺血组(IA)及5min缺血组(IS);各组根据再灌注15 min、2 h、4 h、6 h、1 d、3 d、5 d及7 d又分8个亚组(n=8)。在预定时间点行免疫组化法测定海马各亚区MAPK蛋白及其磷酸化水平。结果:三组海马三区ERK、JNK及p38三种蛋白的总体水平在缺血后再灌注期间未发生改变。IS组磷酸化ERK(p-ERK)在缺血后CA3/DG区颗粒细胞及神经元树突上表达,而在CA1区几无表达;磷酸化JNK(p-JNK)在缺血后再灌注7 d内CA3区神经元均有少量表达,在CA1区表达量多并有二次表达高峰(2 h和1 d);磷酸化p-38(p-p38)缺血后再灌注期间的表达区域与p-JNK相似,有一次表达高峰(2 h)。IA组三激酶磷酸化水平均较IS组明显减少(P<0.05),表达规律相同。结论:脑缺血再灌注可导致MAPK三成员在海马各亚区差异性表达,此特征可能与MAPK的作用相关。     

脑缺血后迟发性神经元损伤与细胞凋亡

细胞凋亡是指细胞受到一些特殊信号刺激后 ,通过启动其内部遗传机制 ,按照固有程序 ,形成级联式信息传导和基因表达 ,最终导致细胞死亡。近年来的研究表明 ,脑缺血后迟发性神经元与细胞凋亡关系密切。对脑缺血后迟发性神经元死亡与细胞凋亡关系的研究将有助于更进一步了解脑缺血的发病机制及防治药物的研制 ,因此具有重要的意义。现就脑缺血后迟发性神经元损伤与细胞凋亡的研究概述如下。1　细胞凋亡的特征及与坏死的区别细胞凋亡是机体的一种基本生理机制 ,贯穿于机体的整个生命过程中。其形态学特征表现为细胞首先变圆 ,随即与邻近细胞脱…     

脑缺血后海马迟发性神经元死亡的研究进展

海马CA1区神经元对缺血极为敏感,Kirino采用沙土鼠短暂性脑缺血模型率先发现CA1区神经元呈迟发性死亡.近年,各国学者对迟发性神经元死亡(delayed neuronal death,DND)进行了不懈地研究,海马神经元的迟发性死亡表现为坏死与凋亡共存现象.文章综述了引起迟发性神经元死亡的诸多因素,如胶质细胞过度活化增殖、细胞周期调控、线粒体损伤、自由基过度生成及兴奋性氨基酸扩散性抑制等.     

p38MAPK在沙土鼠脑缺血再灌注海马神经元损伤中的作用

目的　探讨p38MAPK在沙土鼠脑缺血再灌注损伤海马神经元中的作用。方法　采用沙土鼠双侧颈动脉阻断前脑缺血模型 ,随机分成假手术组 (sham组 )、缺血再灌注组 (IR组 )、对照组 (control组 )、SB2 0 2 190组及P7935 0组 ,后 3组分别侧脑室注射 1%DMSO、p38MAPK特异性抑制剂SB2 0 2 190和激动剂P7935 0。每组根据再灌注时间不同再分为 1天、3天和 5天 3个亚组 ,每亚组 6只动物。在预定时间点行开阔法行为学检查 ,显微镜下计数海马CA1、CA3区存活神经元数目 ,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果　SB2 0 2 190可以显著减少沙土鼠再灌注 3天、5天的探索活动 ,增加存活海马神经元数目 ,减少CA1区神经元的凋亡 (P <0 .0 5 ,vsIR组 ) ;而P7935 0可以显著增加沙土鼠再灌注 1天、3天、5天的探索活动 ,减少海马CA1、CA3区存活神经元数量 ,增加海马CA1区神经元的凋亡 (P <0 .0 5 ,vsIR组 )。结论　抑制p38MAPK的激活可以减轻脑缺血再灌注引起的海马神经元损伤。     

孕酮对前脑缺血沙土鼠海马神经元的保护作用

目的 研究孕酮对沙土鼠前脑缺血海马受损神经元的保护作用。方法 采用同时夹闭双侧颈总动脉制成沙土鼠前脑缺血动物模型,测定腹腔注射孕酮后海马CA1区锥体细胞层神经元数目的变化。结果 前脑缺血组沙土鼠海马CA1区锥体细胞层神经元数目明显丢失,CA3区和齿状回相应层次的神经元数无明显变化。前脑缺血再灌注后腹腔注射孕酮可使海马CA1区锥体细胞层神经元丢失明显减少。结论 孕酮对脑缺血所引起的神经元损伤具有明显的神经保护作用。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c-fos表达和神经元的凋亡

目的研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马c fos表达和神经元的凋亡。方法wistar大鼠双侧颈总动脉夹闭 30min ,造成全脑缺血 ,松开动脉夹再灌注。动物均于再灌注 1h行c fos原位杂交 ,再灌注 4 8h行TUNEL染色 ,观察海马神经元的凋亡情况。结果缺血再灌注后 ,大鼠海马CA1区c fos基因表达增强 ,缺血再灌注大鼠的TUNEL染色可见CA1区有大量阳性细胞 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论脑缺血再灌注后导致海马c fos基因的表达显著增强 ,细胞凋亡明显增加。     

阿司匹林铜对沙土鼠脑缺血损伤的保护作用

采用沙土鼠双侧颈总动脉夹闭１０ｍｉｎ或２０ｍｉｎ后再灌７ｄ或１ｄ，造成脑缺血再灌损伤模型，观察阿司匹林铜对沙土鼠脑组织钙、水含量的影响，及对海马ＣＡ１区神经元迟发性损伤的保护作用．结果显示：阿司匹林铜（７．５ｍｇ／ｋｇ）即能减轻脑组织钙累积，剂量１５ｍｇ／ｋｇ能增加脑缺血后海马ＣＡＩ区的神经元密度．提示阿司匹林铜对缺血再灌脑组织损伤有一定的保护作用．     

沙土鼠脑缺血后海马CA_1区的电镜研究

用20只沙土鼠,雌雄各半,在中断双侧颈动脉血流20分钟,养活1周及1月。其中有8只的脑缺血后海马CA_1区在光镜下观察未见明显的缺血性改变。进一步取背侧及腹侧海马的CA_1区作透射电镜观察,发现CA_1区锥体细胞质内粗面内质网大量增多,高尔基复合体增多,线粒体固缩以及脂褐素增加。此外,还观察了胶质细胞及毛细血管的变化。     

高压氧治疗对沙土鼠脑缺血再灌注海马CA1区神经元凋亡的影响

目的:观察高压氧 (HBO) 作用下沙土鼠脑缺血再灌注海马CA1区神经元凋亡的变化,探讨HBO对脑缺血再灌注损伤的疗效及其机制.方法:建立沙土鼠脑缺血后再灌注模型,用HBO治疗连续3 d后,应用H-E和TUNEL染色方法,观察海马CA1区神经元的凋亡情况.结果:两种方法均显示沙土鼠脑缺血再灌注3 d后海马CA1区大量神经元凋亡,HBO治疗组凋亡细胞数明显减少(P<0.01),并以0.25 ATA HBO治疗组为佳.结论:HBO治疗对海马神经元缺血性损伤有保护作用,能减少其凋亡,是HBO治疗脑缺血性损伤的疗效机制之一.     

羟丁酸钠对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察羟丁酸钠（γ－ＯＨ）地脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 采用沙土鼠双侧颈总动脉结扎法制作前脑缺血再灌注损伤的模型,观察γ－ＯＨ对脑缺血沙土鼠行为学和病理学的影响。结果 γ－ＯＨ能明显降低脑缺血再灌注沙土鼠的定向运动活性,减轻海马ＣＡ１区锥体细胞的损害。结论 γ－ＯＨ对脑缺血再灌注损伤有保护作用。     

加压素在脑缺血再灌注海马迟发性神经元损伤中的作用

用沙土鼠制作迟发性神经元损伤动物模型，采用密度梯度法和放射免疫分析技术观察了脑缺血再灌注０～９６ｈ海马ＣＡ１区含水量和精氨酸加压素（ＡＶＰ）含量的变化，同时还应用侧脑室微量注射技术观察了ＡＶＰ，ＡＶＰ抗血清对脑缺血再灌注９６ｈ的海马ＣＡ１区Ｃａ２＋和Ｎａ＋－Ｋ＋ＡＴＰ酶活力的影响。结果表明ＡＶＰ参与了脑缺血再灌注后海马迟发性神经元损伤（ＤＮＤ）的病理生理过程，其机理可能是通过特异性加压素受体介导的细胞内机理改变，使神经元发生Ｃａ２＋超载并抑制Ｎａ＋－Ｋ＋ＡＴＰ酶活力     

脑缺血—复灌沙土鼠海马HSP70基因的表达变化

目的 研究沙土鼠海马ＨＳＰ７０基因在缺血－复灌过程中的表达变化，以及不同缺血程度对该基因诱导表达的影响。方法 以蒙古沙土鼠双侧颈总动脉结扎（ＢＣＡＯ）建立全脑缺血复灌模型，用人的ＨＳＰ ７０基因探针，通过斑点杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析观察沙土鼠海马ＨＳＰ ７０ｍＲＮＡ水平。     

沙土鼠脑缺血再灌流损伤的实验研究

采用阻断沙土鼠双侧颈总动脉60min,继之再灌流120min的实验模型,检测了皮层脑电图(EEG),大脑皮层水、电解质、前列腺素及超微结构等变化。结果表明,脑缺血再灌流后EEG严重抑制;脑组织水、钠、钙含量增加;血栓素(TXB_2)增加;前列环素(6-Keto-PGF_(1α))减少;缺血神经元的超微结构损伤进一步加重。提示沙土鼠脑缺血再灌流后脑组织损伤加重。对上述变化发生的可能机制进行了讨论。