休克期切痂对大鼠肺组织ICAM-1、TNF-α mRNA表达的影响

目的 研究烧伤后肺组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达和肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性变化的规律,探讨实施休克期切痂对上述指标变化的影响。方法 Wistar大鼠176只,30％体表面积Ⅲ度烫伤,采用逆转录PCR方法分别观察伤后不同时相点及不同时机切痂后肺组织ICAM-1、TNFα mRNA的表达及肺脏：MPO活性变化。结果烫伤后肺组织ICAM-1及TNFα的mRNA表达在伤后4h即已升高,分别在伤后12h和24h达到高峰,伤后8h和24h切痂组动物切痂后再次出现一峰值,但低于第一个峰值,伤后96h恢复正常。未切痂组和96h切痂组在伤后7d仍未恢复正常;休克期切痂动物的肺组织MPO活性伤后96h恢复正常,而非休克期切痂组动物一直维持较高水平。结论 尽早切痂去除坏死组织可阻断炎症介质及细菌毒素的释放,避免了内皮细胞大量合成ICAM-1等粘附分子,减轻由粘附分子介导的中性粒细胞对内皮细胞的进一步损害。     

休克期切痂对烫伤大鼠肺高迁移率族蛋白B1表达的影响及其意义

目的　探讨休克期切痂对烫伤大鼠肺高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响及其与急性肺损伤的关系。方法　将 3 0 %Ⅲ度烫伤Wistar大鼠随机分为 2 4和 72h切痂植皮组。RT PCR和免疫组织化学法检测肺HMGB1变化 ,肺髓过氧化物酶 (MPO)结合病理形态学观察肺损伤情况。结果　伤后 4d、2 4h切痂组肺HMGB1mRNA和Ⅱ型上皮细胞HMGB1蛋白表达较烫伤对照和72h切痂组均有明显下调 (P <0 .0 5 )。伤后大鼠肺MPO活性增强近 2倍 ,而 2 4h切痂大鼠 4d肺MPO活性明显降低。结论　休克期切痂可下调肺组织HMGB1表达 ,部分减轻烫伤后急性肺损伤。     

休克期切痂对大鼠肝组织ICAM-1及TNF-αmRNA表达的影响

目的研究烧伤后肝组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及肝组织髓过氧化物酶(MPO)变化的规律,探讨实施休克期切痂对上述指标变化的影响,论证及早切除焦痂的重要性.方法Wistar大鼠176只,30%Ⅲ°烫伤,采用逆转录PCR方法分别观察伤后不同时相点及不同时机切痂后肝组织ICAM-1、TNF-α mRNA的表达及肝组织MPO活性变化.结果烫伤后肝组织ICAM-1及TNF-α的mRNA表达在伤后4h即已升高,分别在伤后12h和24h达到高峰;8h和24h切痂组动物切痂后再次出现一峰值,但低于第一个峰值,伤后96h恢复正常;未切痂组和96h切痂组在伤后7天仍未恢复正常.休克期切痂组MPO活性96时恢复正常,未切痂组和非休克期切痂组伤后7天仍未恢复正常.结论及早切痂去除了坏死组织,阻断了炎症介质及细菌毒素的释放,避免了内皮细胞大量合成ICAM-1等粘附分子,减轻了由粘附分子介导的中性粒细胞对内皮细胞的进一步损害.     

不同肠内营养液与生长激素联合应用对烫伤大鼠炎性反应的影响

目的 了解标准肠内营养(EN)、肠内免疫营养(EIN)液与重组人生长激素(rhGH)联合应用对烫伤大鼠炎性反应的影响. 方法 将128只SD大鼠按随机数字表法分为EN、EIN、EN+rhGH、EIN+rhGH组,每组32只.将大鼠制成总面积30%TBSA的Ⅲ度烫伤模型,分别于伤后1、4、7、10 d抽取各组大鼠静脉血,检测血清内毒素、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;切取大鼠肝组织检测其CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达.另取8只SD大鼠作为对照组,检测上述指标. 结果 伤后各组各时相点大鼠血清内毒素、IL-6、TNF-α水平以及肝组织中的CD14 mRNA、TNF-α mRNA表达均高于对照组(P＜0.01).伤后4、7、10 d,EIN组和EN+rhGH组血清内毒素、IL-6、TNF-α水平以及肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA表达均低于EN组(P＜0.05或P＜0.01);伤后10 d,EIN+rhGH组血清内毒素[(0.37±0.07)EU/mL]、IL-6[(289±49)ng/L]、TNF-d[(1.87±0.32)μg/L]水平以及肝组织CD14 mRNA(0.39±0.05)、TNF-α mRNA(0.47±0.03)表达均低于EIN组[(0.48±0.08)EU/mL、(364±53)ng/L、(2.50±0.48)μg/L、0.67±0.06、0.66±0.05,P＜0.05或P＜0.01]. 结论 EN、EIN液与rhGH联合应用可减轻大鼠烫伤后的炎性反应,且rhGH具有明显的协同作用.     

休克期切痂对大鼠肺组织ICAM-1、NF-QmRNA表达的影响

目的研究烧伤后肺组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)表达和肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性变化的规律,探讨实施休克期切痂对上述指标变化的影响。方法Wistar大鼠176只,30％体表面积Ⅲ度烫伤,采用逆转录PCR方法分别观察伤后不同时相点及不同时机切痂后肺组织ICAM-1、TNF-amRNA的表达及肺脏MPO活性变化。结果烫伤后肺组织ICAM-1及TNF-a的mRNA表达在伤后4h即已升高,分别在伤后12h和24h达到高峰,伤后8h和24h切痂组动物切痂后再次出现一峰值,但低于第一个峰值,伤后96h恢复正常。未切痂组和96h切痂组在伤后7d仍未恢复正常;休克期切痂动物的肺组织MPO活性伤后96h恢复正常,而非休克期切痂组动物一直维持较高水平。结论尽早切痂去除坏死组织可阻断炎症介质及细菌毒素的释放,避免了内皮细胞大量合成ICAM-1等粘附分子,减轻由粘附分子介导的中性粒细胞对内皮细胞的进一步损害。     

肠内免疫营养对烫伤大鼠内毒素和CD14/肿瘤坏死因子-α mRNA表达的影响

目的研究肠内免疫营养物对烫伤大鼠内毒素和CD14 mRNA、肿瘤坏死因子 (TNF)-α mRNA表达的影响及机制。方法致64只SD大鼠总体表面积(TBSA)30％Ⅲ度烫伤, 随机分为肠内免疫营养组(EIN组,32只)和标准肠内营养组(EN组,32只),另取8只大鼠作为伤前正常对照组(N组)。EIN组和EN组均给予等热量(125 Kcal／dl)肠内营养液。分别于伤前、伤后 1、4、7、10 d抽取静脉血和肝组织,检测血清内毒素和TNF-α浓度,RT-PCR检测肝组织CD14 mR- NA、TNF-α mRNA。结果烫伤后EN、EIN组血清内毒素、TNF-α浓度比伤前血清内毒素 (0．125±0．050)和TNF-α浓度(0．85±0．27)显著升高(P<0．01),且肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达明显增多;在伤后4、7、10 d,EIN组血清内毒素和TNF-α浓度以及肝组织CD14 mR- NA、TNF-α mRNA的表达均比EN组显著降低(P<0．05或P<0．01)。结论肠内免疫营养与标准肠内营养相比,可明显降低烫伤后血清内毒素水平,减少肝组织CD14 mRNA、TNF-α mRNA的表达,从而降低血清TNF-α浓度,改善烫伤后机体炎症反应。     

休克期切痂对烫伤大鼠γ干扰素、白细胞介素4 mRNA表达的影响

目的探讨烫伤大鼠伤后不同时间切痂对Th1细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和Th2细胞因子白细胞介素4(IL-4)循环水平的变化及其mRNA在脾脏T淋巴细胞表达的影响。方法160只健康雄性Wistar大鼠背部30％Ⅲ度烫伤后,随机分为单纯烫伤对照组和伤后8h、24h、96h切痂组,分别在伤后4、12、24、48、96、120、168h活杀动物,采集血液和脾脏标本。ELISA法检测血浆内IFN-γ、IL-4浓度;Ficoll分离液法、贴壁法和尼龙毛柱吸附法提取纯化脾脏T淋巴细胞,一步法提取细胞总RNA、RT-PCR法扩增目的基因、琼脂糖凝胶电泳分析IFN-γ和IL-4 mRNA的表达。结果烫伤4h大鼠循环内上述细胞因子的浓度大幅升高,同时其mRNA表达迅速上调。Th1型细胞因子IFN-γ及其mRNA表达在烫伤后24h达峰值,其后逐渐下降;Th2型细胞因子IL4的循环浓度及mRNA表达进行性增加;伤后7d出现明显偏向Th2型反应的现象。切痂组两个细胞因子浓度增加及其mRNA表达上调的变化幅度小于单纯烫伤对照组,其中8h切痂组的变化最小,24h和96h切痂组次之。结论休克期切痂有利于抑制严重烧伤后Th2型细胞因子的过度表达。     

烫伤大鼠组织肿瘤坏死因子mRNA表达与内毒素血症的关系

目的探讨烫伤后不同组织肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA 的动态表达及其与内毒素血症的关系。方法采用大鼠35%体表面积Ⅲ度烫伤模型,实验动物随机分为正常对照组、烫伤组、多粘菌素 B 治疗组。血浆内毒素水平采用改良过氯酸预处理血浆偶氮显色法鲎试验定量测定;组织 TNF-α mRNA 含量采用逆转录聚合酶链反应检测。结果烫伤后门静脉及体循环内毒素水平均显著升高,8h 达高峰,24h 则逐渐下降。给予低剂量多粘菌素 B 治疗可显著降低门静脉内毒素峰值(P<0.05)。另一方面,烫伤后2h 肺、肝、肠、肾等组织 TNF-α mRNA 表达较伤前值即有显著升高(P<0.05～0.01),烫伤后8h 达高峰,约为伤前值的1.7～2.6倍,且一直持续至伤后24h。给予多枯菌素 B 抗内毒素治疗后可不同程度抑制 TNF-α mRNA 的表达(P<0.05～0.01)。相关分析显示,门静脉内毒素水平同肺、肠、肾组织 TNF-α mRNA 呈显著正相关关系(r 值分别为0.365,0.381,0.484,P<0.05),但与肝组织无显著相关。结论肺、肝、肠、肾等组织 TNF-α mRNA 表达在烫伤早期即显著增多,并呈一逐渐升高的趋势。创伤后内毒素血症对机体多种组织 TNF-α基因表达具有重要影响。     

不同时期切痂对烫伤大鼠骨骼肌和脂肪组织葡萄糖转运蛋白-4 mRNA表达水平的影响

目的 -探讨大面积烫伤后实施休克期切痂对大鼠骨骼肌、脂肪组织葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA表达水平的影响。方法采用30％Ⅲ度TBSA烫伤大鼠模型,分别于伤后8、24、96h切痂,测定血清胰岛素、胰高血糖素、皮质醇及血糖水平,采用RT-PCR法检测烫伤和切痂后大鼠骨骼肌、脂肪组织GLUT4 mRNA表达水平。结果休克期切痂使血糖、胰高血糖素、皮质醇水平下降;伤后骨骼肌、脂肪组织GLuT4 mRNA表达水平下降,休克期切痂可促使其回升。结论大面积烫伤后大鼠骨骼肌、脂肪组织GIMT4 mRNA表达减少,休克期切痂可促使其恢复,有利于糖代谢的改善,减轻高代谢状态。     

乌司他丁对致死性烫伤大鼠肺微血管通透性和肺组织含水率的影响

目的:研究乌司他丁对50%总体表面积烫伤大鼠炎症介质、肺微血管通透性和肺组织含水率的影响。方法:40只雄性SD大鼠随机分为烫伤组和乌司他丁组(n=20),两组均用80℃水浴造成50%总体表面积Ⅲ度烫伤。于烫伤后即刻静脉分别注射生理盐水1ml和乌司他丁40 000U/kg。分别于烫伤后6h、24h采用伊文斯蓝(EB)法测定肺微血管通透性,干/湿重法测定肺组织含水率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织TNF-α、IL-6和IL-8的活性。结果:烫伤后6h、24h乌司他丁组TNF-α、IL-6和IL-8均低于单纯烫伤组,其中烫伤后24h乌司他丁组TNF-α、IL-6和IL-8的变化差异更显著(P<0.01);与单纯烫伤组比较,乌司他丁组肺组织EB含量和含水率均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:乌司他丁能减轻致死性烫伤休克大鼠肺组织炎症水平,抑制血管内皮细胞活化和通透性增加,减少烧伤休克时血容量丢失和补液量,用于烧伤休克的早期治疗和改善存活率有潜在价值。     

休克期切痂对血浆内皮素及NO水平的影响

目的观察烧伤休克期切痂和休克期后切痂对血浆内皮素及一氧化氮水平的影响。方法利用小型猪制成35％Ⅲ度烧伤动物模型,分为两组,休克期切痂组(S组)于伤后24小时切痂,对照组(C组)于伤后96小时切痂,分别检测血浆内皮素(ET)、一氧化氮(NO),并计算ET/NO。结果两组ET及NO均高于伤前,伤后96小时开始S组ET明显低于C组;而NO水平S组明显高于C组;ET/NO亦显示伤后24小时开始S组明显低于C组。结论休克期切痂可减轻内皮细胞损伤,减轻渗出与水肿,减少组织缺氧,改善微循环。     

休克期切痂对血浆内皮素及NO水平的影响

观察烧伤休克期切痂和休克斯后切痂对血浆内皮素及一氧化氮水平的影响。方法 利用小型猪制成３５％Ⅲ度烧伤动物模型，分为两组，休克期切痂组于伤后２４小时切痂，对照组于伤后９６小时切痂，分别检测血浆内皮素，一氧化氮，并计算ＥＴ／ＮＯ。结果 两组ＥＴ及ＮＯ均高于伤前，伤后９６小时开始Ｓ组ＥＴ明显低于Ｃ组；     

休克期切痂对血浆内皮素及NO水平的影响

目的观察烧伤休克期切痂和休克期后切痂对血浆内皮素及一氧化氮水平的影响。方法利用小型猪制成３５％Ⅲ度烧伤动物模型，分为两组，休克期切痂组（Ｓ组）于伤后２４小时切痂，对照组（Ｃ组）于伤后９６小时切痂，分别检测血浆内皮素（ＥＴ）、一氧化氮（ＮＯ），并计算ＥＴ／ＮＯ。结果两组ＥＴ及ＮＯ均高于伤前，伤后９６小时开始Ｓ组ＥＴ明显低于Ｃ组；而ＮＯ水平Ｓ组明显高于Ｃ组；ＥＴ／ＮＯ亦显示伤后２４小时开始Ｓ组明显低于Ｃ组。结论休克期切痂可减轻内皮细胞损伤，减轻渗出与水肿，减少组织缺氧，改善微循环     

丙酮酸乙酯对烫伤延迟复苏大鼠肾组织高迁移率族蛋白B1表达和急性肾损伤的影响

目的观察丙酮酸乙酯（EP）对烫伤延迟复苏大鼠肾组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达及急性肾损伤的影响。方法采用30％体表面积Ⅲ度烫伤延迟复苏大鼠模型,78只大鼠随机分为假伤组（n=18）、烫伤组（n=30）和EP治疗组（n=30）;采用逆转录聚合酶链反应检测各组大鼠肾组织HMGB1 mRNA表达,蛋白印迹法及免疫组化法检测。肾组织HMGB1蛋白表达;同时测定血尿素氮（BUN）含量并观察。肾组织病理变化。结果与假伤组比较,严重烫伤后。肾组织HMGBl基因／蛋白表达于伤后8～72h显著增强（P〈0．05）,BUN含量在伤后8h及24h显著升高（P〈0．05）。与烫伤组比较,EP治疗组肾组织8、24、72h时HMGBl表达均显著下调,BUN含量在8、24h时亦明显下降（P〈0．05）;光镜下观察烫伤组肾组织炎性细胞浸润,肾小管结构破坏出现浊肿、变性,而EP处理后。肾脏病理改变不同程度地减轻。结论HMGB1作为晚期炎性因子参与了烫伤后。肾组织炎症反应的病理过程,应用EP治疗可有效下凋。肾组织HMGB1表达,并显著减轻烫伤延迟复苏所致的急性肾损伤。     

高迁移率族蛋白B1在烧伤小鼠大脑中表达的研究

目的：检测烫伤小鼠高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在大脑中的表达.方法：应用BALB/c小鼠15%TBSAⅢ度烫伤（95 ℃热水浸烫8 s）和假伤（室温水,8 s）模型,并以正常小鼠作为对照（6只）.在4、8、24和48h（每个时间点6只）处死动物.采用苏木精-伊红染色观察大脑形态学改变,免疫荧光方法检测caspase-3和HMGB1在大脑的表达,ELISA方法检测大脑组织HMGB1含量.结果：15%体表面积Ⅲ度烫伤8 h即导致大脑发生显著性病理改变,如炎性细胞浸润,烫伤24h大脑终纹出现caspase-3阳性细胞,而在假伤组未见特异性染色.免疫荧光染色发现,HMGB1位于假伤组小鼠神经细胞的胞核;而在烫伤后4h即释放至细胞浆.释放到脑组织中的细胞外HMGB1在烧伤后 24和48h,显著高于假伤组和对照组（P〈0.01）.结论：烫伤导致小鼠大脑HMGB1的分布和含量发生改变,可能参与了烧伤后脑损伤的病理过程.     

脓毒症大鼠多器官高迁移率族蛋白B1基因表达的信号机制与意义

目的探讨Janus激酶／信号转导和转录激活因子（JAK／STAT）通路对盲肠结扎穿孔术（CLP）所致脓毒症大鼠多器官高迁移率族蛋白B1（HMGBl）基因表达的影响及其意义。方法采用CLP模型,大鼠随机分为正常对照组（10只）、假手术组（10只）、CLP组（60只）、JAK2抑制剂AG490干预组（24只）、STAT抑制剂雷帕霉素（RPM）干预组（24只）。留取肝、肺、肾、肠组织测定HMGB1mRNA表达和STAT1／3的DNA结合活性。结果CLP后,肝、肺、肾、肠组织中STATl在脓毒症早期即迅速活化,6-12h后活化达高峰。肝、肺组织中STAT3的活化特点与STAT1相似,但相对较弱;在肾、肠组织中未探测到STAT3的活化。同时,CLP组除肾组织HMGB1mRNA表达改变不明显外,肝、肺、肠组织其表达均明显增强（P＜0．05或P＜0．01）。AG490早期处理后24—48h,肝、肠组织HMGB1mRNA表达显著低于CLP组（P＜0．05或P＜0．01）;RPM干预组肝、肺、肠组织HMGB1mRNA表达均呈现不同程度地抑制,其中以肺组织下降幅度尤为明显。结论严重腹腔感染可导致机体主要脏器JAK／STAT通路迅速活化,该信号途径参与了HMGB1mRNA的表达调控过程。     

Tissue lipopolysaccharide-binding protein expression in rats after thermal injury: potential role of TNF-alpha

Recent studies have suggested that levels of lipopolysaccharide-binding protein (LBP) might play a harmful role by up-regulating the host's sensitivity to endotoxin. Our previous studies demonstrated that local endotoxin could up-regulate LBP expression after acute insults, however, the definite molecular mechanisms downstream of endotoxin action remain unclear. This study investigates whether tumor necrosis factor (TNF-alpha) might be responsible for the LBP formation during endogenous endotoxemia postburn. Wistar rats were anesthetized, and a 35% TBSA full-thickness burn was created. Animals were randomly divided into normal control, thermal injury and anti-TNF-alpha mAb treatment group. A significant elevation of plasma endotoxin concentration was observed after acute insults. TNF-alpha levels in plasma also rapidly increased after thermal injury. Meanwhile, LBP mRNA expression markedly increased in liver, lungs, kidneys and intestine postburn. There was no detectable TNF-alpha in the plasma of anti-TNF-alpha mAb treated animals. Treatment with anti-TNF-alpha mAb also resulted in significantly lower concentrations of LBP mRNA in local tissues. Additionally, several organ function parameter levels in plasma significantly decreased in treatment group. These results demonstrated that an increase of plasma TNF-alpha levels caused by burns might be associated with a marked elevation of tissue LBP mRNA expression, which could contribute to the development of multiple organ damage.     

细胞外信号调节激酶抑制剂对烫伤脓毒症大鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响及意义

目的　观察细胞外信号调节激酶 (ERK)抑制剂对烧伤后金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )脓毒症动物组织肿瘤坏死因子 (TNF) α表达及多器官功能损害的影响。方法　采用SD大鼠 2 0 %总体表面积Ⅲ度烫伤后金葡菌攻击所致脓毒症模型 ,34只动物随机分为正常对照组 (n =6 )、烫伤对照组 (n=6 )、烫伤后金葡菌感染组 (n =12 )和ERK抑制剂AG12 6拮抗组 (n =10 ) ,检测动物肝、肾、肺组织中ERK磷酸化和TNF α基因 /蛋白表达的改变。结果　烫伤脓毒症后 0 5～ 2 0h肝、肺、肾组织ERK均呈现不同程度的活化 ,其中 2 0h分别为正常对照组的 1 94倍 (P <0 0 5 )、2 86倍 (P <0 0 1)、1 4 1倍。AG12 6拮抗组肺组织磷酸化ERK水平在 2 0h下降 70 6 % (P <0 0 1) ,而肝、肾组织其磷酸化水平不同时相点几乎完全抑制 ,同时各组织中TNF α基因及蛋白表达水平明显下调 (P<0 0 5或 0 0 1)。与烫伤脓毒症组相比 ,AG12 6拮抗组 2 0h肝、肾功能指标明显改善 ,肺组织髓过氧化物酶活性下降 4 0 3% (P <0 0 5 )。结论　ERK信号通路参与了严重烧伤后金葡菌感染所致炎症反应与急性组织损伤的病理过程 ,针对该环节进行早期干预可有效缓解多器官功能异常改变。     

烫伤休克期切痂植皮对骨骼肌蛋白降解率影响的实验研究

目的　探讨严重烫伤休克期切痂的必要性。　方法　用大鼠 30 %Ⅲ度背部烫伤模型 ,观察大鼠严重烫伤后骨骼肌蛋白降解率的变化 ,以及实施休克期切痂前后骨骼肌蛋白分解的变化。大鼠随机分为烫伤组、休克期切痂组和非休克期切痂组 3组 ,每组 5个时间点 (含伤前对照 )每时间点8只大鼠。两切痂组分别于伤后 1d和 4d切痂植皮 ,采用无创技术和骨骼肌充分氧供离体孵育系统测定伸趾长肌蛋白降解率。　结果　烫伤后 1d伸趾长肌总蛋白降解率较伤前显著增加 (t=2 988～3 12 4均P <0 0 1) ,差异均有非常显著意义 ;余时间点变化不明显 ,烫伤组、休克期切痂组和非休克切痂组相比差异无显著性意义。然而伸趾长肌肌纤维蛋白降解率在烫伤后各时间点均较伤前值显著增加 (均t=2 977～ 4 72 5 ,P <0 0 1) ,差异均有非常显著性意义。休克期切痂组组较大休克切痂组在伤后 2、4、5d显著降低 (tz=2 311,P <0 0 5 ;t4,5=3 0 5 4 ,3 319,P <0 0 1) ,差异均有显著和非常显著性意义 ;其中休克期切痂组伸趾长肌肌纤维蛋白降解率均值分别为每 3h 3 17、2 33、1 75nmol/g。两切痂组比较差异无显著意义 ,仅在伤后 5d轻度下降。结论　休克期切痂有助于减轻烫伤后骨骼肌蛋白的高分解代谢反应。