水飞蓟素对人骨肉瘤Saos-2细胞的抑制作用及相关机制

目的研究水飞蓟素对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法设置对照组及不同浓度水飞蓟素组,作用人骨肉瘤Saos-2细胞。倒置相差显微镜观察细胞形态变化;CCK-8法测定细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2及cleaved caspase-3蛋白表达。结果水飞蓟素抑制Saos-2细胞增殖,呈时间及浓度依赖性;水飞蓟素诱导Saos-2细胞凋亡,呈浓度依赖性;水飞蓟素降低Saos-2细胞p-ERK1/2蛋白表达,增加Saos-2细胞cleaved caspase-3蛋白表达,呈浓度依赖性,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论水飞蓟素能够抑制人骨肉瘤Saos-2细胞增殖及诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制ERK信号通路及上调caspase-3蛋白表达有关。     

MAPK/ERK信号通路在益气解毒方水提物诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用

目的研究益气解毒方水提物对鼻咽癌细胞凋亡的影响,并从MAPK/ERK信号通路探讨其诱导凋亡的作用机制。方法 CCK-8法检测益气解毒方水提物对CNE1、CNE2细胞增殖的影响;Hoechst 33342染色法、JC-10染色法、荧光双染流式细胞仪检测其对CNE1、CNE2细胞凋亡的影响;Western blot法检测其对CNE1、CNE2细胞蛋白表达的影响。结果益气解毒方水提物能抑制CNE1、CNE2细胞增殖(P<0.05)、诱导凋亡(P<0.05);药物作用48 h后,Survivin、XIAP、Bcl-2表达下降,Bax表达上升,MAPK/ERK信号通路关键蛋白p-c-Raf、p-MEK、p-ERK表达下降(P<0.05);在此基础上,加入激活剂ISO和益气解毒方水提物后,与单用益气解毒方水提物相比,p-c-Raf、p-MEK、p-ERK1/2表达上调,Survivin、XIAP、Bcl-2表达增加,Bax表达下降,促凋亡效应也降低(P<0.05)。结论益气解毒方水提物可诱导鼻咽癌细胞凋亡,该效应与其抑制MAPK/ERK信号通路关键蛋白p-c-Raf、p-MEK、p-ERK1/2表达,进而下调Survivin、XIAP、Bcl-2表达,上调Bax表达有关。     

紫杉醇脂质体联合卡铂对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的 研究紫杉醇脂质体联合卡铂对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法 用设定浓度的紫杉醇(0.5和1μmol/L)单独或联合(0.5和25 mg/L)卡铂分别处理Hela细胞24 h。用MTT比色法检测细胞活力,荧光探针检测细胞内活性氧,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western blot检测凋亡蛋白p53、Bax和Bcl-2的表达量。结果 与空白对照组相比,紫杉醇、卡铂单独处理组可降低细胞活力,提高ROS含量,使p53和Bax蛋白表达升高,降低Bcl-2蛋白表达,使Hela细胞发生凋亡。且紫杉醇联合卡铂对Hela细胞的杀伤作用显著大于单独作用组。结论 本实验初步证明紫杉醇和卡铂均通过引起Hela细胞活性氧升高,诱导p53蛋白介导线粒体凋亡通路,导致Hela细胞凋亡的发生,还进一步证明紫杉醇联合卡铂对Hela细胞的杀伤作用显著大于二者单独作用。     

细胞外调节蛋白激酶参与RANKL诱导的SGC-7901胃癌细胞迁移

目的检测RANK在胃癌细胞系SGC-7901细胞中的表达,并进一步探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路在RANKL诱导的胃癌细胞迁移中的作用。方法流式细胞术检测SGC-7901细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK(p-ERK1/2)及ERK1/2的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变。检测数据用x±s表示,采用SPSS16.0软件分析实验数据。结果 SGC-7901细胞表达RANK蛋白。RANKL诱导SGC-7901细胞迁移能力增强,RANK抑制剂rOPG抑制RANKL诱导的细胞迁移,RANKL刺激后,SGC-7901细胞p-ERK1/2表达升高,应用MEK/ERK的抑制剂PD98059显著抑制RANKL诱导的胃癌细胞SGC-7901迁移。结论胃癌细胞系SGC-7901细胞表达受体RANK,ERK1/2信号通路参与RANKL诱导的SGC-7901细胞迁移。     

肺癌组织ERK1/2磷酸化水平与化疗患者预后的关系评估

目的探讨细胞外信号调节激酶(Extracellular regulated kinase,ERK)的磷酸化水平与肺癌细胞生物学行为及化疗患者预后的关系。方法采用双染免疫组化检测50例非小细胞肺癌(NACLC)组织中ERK1/2和p-ERK1/2的表达,并分析二者与肺癌生物学行为、化疗疗效、患者生存期的关系。结果 50例肺癌标本ERK1/2阳性率62.0%,p-ERK1/2阳性率46.0%;ERK1/2和p-ERK1/2分化低、有淋巴结转移的肺癌表达明显升高,p-ERK1/2水平还与临床分期密切相关;ERK1/2和p-ERK1/2表达与肺癌化疗疗效有关,ERK1/2和p-ERK1/2阳性组肺癌治疗有效率明显低于相应的阴性组肺癌;Kaplan-Meier生存曲线及log-rank分析发现,p-ERK1/2表达水平与肺癌患者总生存期(OS)和无瘤生存期(DFS)明显相关,p-ERK1/2高表达组肺癌患者OS和DFS比阴性组肺癌缩短,而ERK1/2与患者OS和DFS无明显相关。结论肺癌组织存在ERK1/2信号蛋白激活现象,ERK1/2被激活后的磷酸化水平能够反映肺癌的生物学行为,并对患者的预后判断有一定帮助。     

氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的作用机制

目的:探讨氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的可能作用机制。方法:人肺癌细胞株A549和NCI-H460细胞先加入终浓度IL-1β11μg/L刺激24h,再加入不同浓度氯美昔布继续培养24h,采用Western blot法检测ERK2、p-ERK及Bcl-2表达水平。氯美昔布体外处理A549、NCI-H460后,采用Western blot法检测Bcl-2、Bax表达水平。结果:氯美昔布作用后肺癌细胞中ERK2及p-ERK的磷酸化水平均下降,并伴有Bcl-2水平的下降,差异有统计学意义(P<0.01)。并且随着氯美昔布浓度的增大,Bcl-2蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达在A549细胞中增强,在NCI-H460细胞中不变,Bcl-2/Bax的比值下降。结论:氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的机制可能与通过ERK信号转导途径调节肺癌细胞产生Bcl-2,进而诱导Bcl-2/Bax的比值下降有关。     

mTOR抑制剂雷帕霉素对肺癌LK2细胞的抑制作用

目的观察mTOR抑制剂雷帕霉素对肺癌LK2细胞生长的影响。方法 LK2细胞在0.25、0.5、1、2、4、8μmol/L不同浓度的雷帕霉素组以及0μmol/L雷帕霉素空白对照组作用下,采用MTT比色法检测细胞生长情况,流式细胞术检测细胞的凋亡改变。结果雷帕霉素能够抑制LK2细胞增殖,且具有时间-剂量效应关系。流式细胞仪检测提示,雷帕霉素各浓度组均可以促进肺癌细胞LK2凋亡,且随着雷帕霉素浓度的升高,LK2细胞凋亡率逐渐增加。结论雷帕霉素对肺癌LK2细胞有抑制作用。     

杨梅素作用于人肝癌HepG-2细胞凋亡信号转导途径的研究

目的研究杨梅素对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响。方法 MTT法和SRB法分析杨梅素对肝癌HepG-2细胞增殖的影响,透射电镜和流式细胞仪分别观察杨梅素诱导HepG-2细胞凋亡作用,Western blot检测相关蛋白表达水平变化,分析杨梅素诱导HepG-2细胞凋亡机制。结果杨梅素以剂量依赖方式抑制肝癌HepG-2细胞的生长,IC50值为207.99μmol·L-1;杨梅素不同剂量组作用72 h后,HepG-2细胞表现出明显的凋亡特征,且HepG-2细胞G2/M期比例上升。HepG-2细胞中p-AKT,p-ERK和p-BAD蛋白随着剂量的增加表达水平均下降,AKT和ERK蛋白表达无明显改变。结论杨梅素可抑制HepG-2细胞增殖并诱导其凋亡,在一定浓度范围内呈剂量效应关系,并可将HepG-2细胞阻滞于G2/M期;通过下调p-AKT,p-ERK和p-BAD蛋白表达而起促凋亡作用。     

雷帕霉素联合紫杉醇诱导卵巢癌细胞A2780和SKOV3凋亡及其分子机制

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。本研究观察特异性mTOR抑制剂雷帕霉素联合紫杉醇对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的作用及内在的分子机制。方法：A2780和SKOV3细胞经雷帕霉素和紫杉醇处理后，以MTT法检测细胞的增殖情况，金正均法计算q值判断两药的相关作用。以流式细胞仪检测细胞凋亡，逆转录聚合酶链反应检测survivin的表达。结果：雷帕霉素联合紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞的增殖，且随时间延长抑制作用越显著，[第一段]     

斑蝥酸钠联合多西紫杉醇诱导A549细胞凋亡及对Caspase-8 表达的影响

目的 探讨斑蝥酸钠联合多西紫杉醇抑制人肺腺癌A₅₄₉细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用,初步探讨其作用机制。方法 采用MTT法测定细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞仪测定细胞凋亡率;Western印迹法测定Caspase-8活性。结果 斑蝥酸钠和多西紫杉醇均能抑制人肺腺癌A₅₄₉细胞的增殖(P<0.05),合用与单用相比抑制率明显提高,诱导12 h时CI值为0.88,24 h时为0.96,36 h时为1.02。Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测提示斑蝥酸钠可增强多西紫杉醇的凋亡诱导作用。Western印迹法显示多西紫杉醇、斑蝥酸钠及联合加药组均可见凋亡相关蛋白Caspase-8的裂解条带,联合加药组的裂解条带最明显。结论 多西紫杉醇和斑蝥酸钠均可明显抑制人肺腺A549细胞增殖诱导细胞凋亡,联合使用作用更强,多西紫杉醇和斑蝥酸钠诱导细胞凋亡可能与促进Caspases-8表达有关。     

LncRNA ITGB2-AS1靶向miR-338-3p对肺癌细胞多西他赛耐药性的影响

目的 研究lncRNA ITGB2-AS1对肺癌细胞增殖、凋亡及多西他赛耐药性的影响及潜在的分子机制.方法 用不同浓度(6.25μg/L、12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L)多西他赛(DTX)处理肺癌A549和多西他赛耐药细胞A549/DTX细胞,CCK8法测定DTX对A549...     

氧化苦参碱对人食管癌细胞株Eca109增殖及凋亡的影响

目的:观察氧化苦参碱(Oxy)对食管癌细胞株Eca109的抑制增殖及诱导凋亡作用。方法:培养食管癌细胞株(Eca109),以MTT比色法、生长曲线、及流式细胞术测定Oxy对食管癌细胞株Eca109抑制增殖及诱导凋亡的作用。免疫沉淀法并ERK活性试剂盒测定ERK活性;免疫印记法测定p-ERK1/2、Cyclin D1、p21waf/cip1、Bax及Bcl-2表达。结果:MTT实验及生长曲线显示Oxy明显抑制Eca109细胞增殖,流式细胞术显示Oxy可诱导Eca109细胞凋亡;免疫沉淀法显示Oxy可抑制ERK活性,免疫印记法显示Oxy抑制p-ERK1/2、Cyclin D1及Bcl-2表达,同时上调p21waf/cip1和Bax表达,Bax/Bcl-2比值增加。结论:氧化苦参碱可以抑制食管癌细胞株Eca109增殖,机制与影响ERK及下游CyclinD1、p21waf/cip1表达有关;其诱导凋亡途径与上调Bax表达,降低Bcl-2表达有关。     

盐酸埃克替尼对人非小细胞肺癌HCC827细胞凋亡及EGFR下游信号通路蛋白表达的影响

目的 探讨盐酸埃克替尼(Icotinib)对人非小细胞肺癌(NSCLC)HCC827细胞凋亡及EGFR下游信号通路蛋白表达的影响.方法 通过噻唑蓝比色(MTT)法检测Icotinib对HCC827细胞增殖的影响,流式细胞仪观察Icotinib对HCC827细胞凋亡的诱导作用,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(AKT)、胞外信号调节激酶(ERK)、p-EGFR、p-AKT、p-ERK和Survivin等EGFR下游信号通路蛋白的表达水平.结果 Icotinib抑制HCC827细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用具有浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05);随着Icotinib对HCC827细胞作用的药物浓度升高,p-EGFR、p-AKT、p-ERK和survivin等EGFR下游信号通路蛋白的表达水平均明显下调(P<0.05).结论 Icotinib可能通过抑制EGFR下游信号通路蛋白的表达,进而有效抑制HCC827细胞的增殖和诱导HCC827细胞的凋亡.     

栀子苷通过抑制VPO1/ERK1/2信号通路减轻糖尿病心肌病大鼠的心肌细胞凋亡

目的:探讨栀子苷(geniposide,GE)改善大鼠糖尿病心肌病的作用及其具体机制。方法:24只成年雄性SD大鼠,随机分为3组:正常组(Control组,8只)、糖尿病心肌病组(DCM组,8只)、糖尿病心肌病组+栀子苷组(DCM+GE组,8只),采用高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病心肌病大鼠模型,应用次氯酸(HOCl)诱导H9C2损伤模型。干预12周后,HE和Masson染色观察心脏组织病理学改变;TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡水平;免疫组化检测及Western blot检测法检测VPO1/ERK1/2信号通路及凋亡相关蛋白表达水平。给予次氯酸刺激心肌细胞后,Western blot检测法检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的改变。给予ERK1/2酶抑制剂U0126后,用Western blot检测法再次检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的改变。结果:HE及Masson染色显示,与Control组相比,DCM组出现心肌纤维排列紊乱、心肌胶原含量明显增多,而DCM+GE组心肌损伤情况明显改善(P<0.05)。与Control组相比,DCM组心肌细胞凋亡水平及Bax/Bcl-2比值明显增加,而DCM+GE组心肌凋亡情况得到明显好转(P<0.05)。免疫组化和Western blot结果显示,在DCM组中VPO1、p-ERK1/2蛋白表达水平升高,而DCM+GE组中VPO1、p-ERK1/2蛋白表达水平得到了抑制(P<0.05)。进一步对H9C2细胞行HOCl干预发现,与Control组相比,次氯酸组出现p-ERK1/2蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值增加,而加入ERK1/2酶抑制剂U0126后p-ERK1/2蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值下降(P<0.05)。结论:栀子苷通过抑制VPO1/ERK1/2信号通路抑制心肌细胞凋亡从而改善糖尿病引起的心肌损伤。     

消癌平辅助丝裂霉素对肺癌细胞化疗增效的研究

目的：通过消癌平联合丝裂霉素对肺癌 A549细胞增殖,细胞周期、凋亡及相关基因表达的影响,探讨化疗增效机制。方法MTT 检测消癌平（2、8、21μl／ml）联合丝裂霉素（2μg／nl）对肺癌 A549细胞生长抑制（联合用药 A、B、C 组）,并设立对照组、丝裂霉素组和消癌平组;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;RT－PCR 检测 P53、CyclinD1基因表达。结果MTT 检测显示在24、48、72 h 联合用药 A、B、C 组 OD（光密度）均比丝裂霉素低（ P ＜0．05）;流式细胞术检测表明消癌平、丝裂霉素与对照组相比,肺癌细胞均阻滞于 G0／G1期,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。联合用药组 G0／G1期细胞比率、细胞凋亡率与丝裂霉素组比较,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。消癌平组、丝裂霉素组与对照组比较,均能提高 P53 mRNA 表达（ P ＜0．05）,联合治疗组 P53 mRNA 表达高于丝裂霉素组（ P ＜0．05）。消癌平组、丝裂霉素组与对照组比较均能降低 Cyclin D1基因的表达（ P ＜0．05）。与丝裂霉素组比较,联合用药可显著减低CyclinD1基因的表达（ P ＜0．05）。结论消癌平辅助丝裂霉素对肺癌细胞化疗增效可能与上调 P53 mRNA 表达,增强细胞凋亡作用,以及下调 CyclinD1 mRNA 表达,阻滞细胞周期于 G0／G1期有关。     

橘红素上调Cyclin B1和抑制ERK磷酸化诱导人胃癌AGS细胞周期阻滞

目的探讨橘红素对人胃癌AGS细胞增殖和周期的作用及其机制。方法采用MTT法观察橘红素对人AGS胃癌细胞增殖的作用;流式细胞仪检测橘红素对细胞周期的影响;Western blot检测橘红素对Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E1和ERK、p-ERK蛋白表达的影响。结果橘红素可明显抑制AGS胃癌细胞的增殖(P<0.01),呈时间和剂量依赖性。橘红素作用于AGS细胞24 h,S期细胞百分比明显增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);作用48和72 h,S期阻滞消失,G2/M期细胞百分比增高(P<0.05,P<0.01)。作用48 h,橘红素可上调Cyclin B1蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),对Cyclin D1和Cyclin E1蛋白表达无明显影响;对ERK蛋白表达无影响,可降低p-ERK蛋白的表达(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论橘红素可明显抑制人AGS胃癌细胞的增殖,使细胞阻滞于S期和G2/M期,主要机制可能是通过抑制ERK磷酸化和上调CyclinB1蛋白表达。     

2-甲基-正丁酰紫草素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡机制的研究

2-甲基-正丁酰紫草素[(2-methyl-n-butyl)shikonin,MBS,图1]是从紫草科植物紫草的根部提取得到的一个萘醌类化合物。研究表明,紫草素具有抗炎、抗菌、抗肿瘤的作用[1?3]。体外实验证实紫草素通过增加caspase-3的活化诱导多种肿瘤细胞的凋亡,如白     

ERK1/2通路在哮喘大鼠的表达和作用

目的：探讨哮喘大鼠肺组织中磷酸化的ERK1/2（p-ERK1/2）的表达情况，以及其与肺组织炎性评分之间的相关性。方法清洁级雄性SD大鼠20只，随机分为正常对照组和哮喘组，每组10只。 HE染色，半定量评定大鼠肺组织炎症程度；用免疫组织化学染色法观察p-ERK1/2在哮喘大鼠肺组织的表达。结果哮喘组大鼠肺组织炎性评分及p-ERK1/2表达显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01），p-ERK1/2主要表达于气道周围，两者呈显著正相关（r=0.779，P＜0.01）。结论哮喘大鼠的肺组织 p-ERK1/2表达水平显著增加，提示p-ERK1/2可能参与了哮喘的发病过程，且与肺部炎症有一定关系。     

CD137L在肺癌细胞株的表达及其生物学功能

目的研究人CD137配体(CD137L)在人肺癌细胞株的表达及其生物学功能。方法采用RT-PCR及流式细胞术检测人CD137L在肺癌细胞株A549、H460、A2、SK-MES-1、SPC-A1的表达水平。用细胞计数试剂盒8检测A2细胞在PBS(A组)、IgG1-FC(B组)或CD137-FC(C组)包被处理后的增殖情况,并用Annexin V/PI双染方法检测其凋亡率。结果 CD137LmRNA及蛋白在多种肺癌细胞株上均有表达。C组细胞增殖较A、B组明显增加(P<0.05),但三组间细胞凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CD137L在各种肺癌细胞株上均有表达,CD137L介导的逆向信号能促进肺癌细胞增殖,可能在肺癌发生、进展中起重要作用。