宫颈癌组织ATM和DNA-PKcs表达与放疗敏感性及预后关系研究

放射线是通过导致细胞DNA双链断裂(DNA-double strand breaks,DSB)来起到杀死肿瘤细胞的作用,细胞被照射后DNA损伤修复能力是影响肿瘤放射敏感性的主要因素.笔者选择DSB修复通路中毛细血管扩张性共济失调症突变(ataxia telangiectasia mutated,ATM)、DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)两个主要蛋白分析在不同放疗敏感性宫颈癌中的表达差异,初步探明其与宫颈癌放疗敏感性的关系.     

DNA依赖性蛋白激酶催化亚基在非同源末端连接修复中作用的研究进展

DNA的精确复制对维持基因组稳定性具有重要作用,而DNA双链断裂(DSB)损伤可能诱导细胞凋亡和染色质重排,在肿瘤的发生发展过程中发挥作用。DNA依赖性蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)是磷脂酰肌醇3-激酶样蛋白激酶(PIKK)家族中相对分子质量最大及表达量最高的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。与Ku70/80结合后,DNA-PKcs在离子辐射诱导DSB后的非同源末端连接(NHEJ)有效修复过程中,发挥非常重要的作用。DNA-PKcs或其他NHEJ修复因子的缺失会导致辐射敏感性和DSB的未修复,以及V(D)J重组缺陷和免疫缺陷。本文主要对DNA-PKcs的结构,在DSB位点的募集与激活,在NHEJ修复中的作用过程及其与疾病的关系进行总结与展望,希望能为DNA-PKcs的深入研究及临床应用提供理论基础。     

DSB修复蛋白ATM DNA-PKcs与肿瘤放射敏感性关系的研究进展

放射线主要通过导致细胞DNA双链断裂(DSB)而起到杀死肿瘤细胞的作用,但细胞都有不同程度的DSB修复能力,研究证实DSB 修复水平与细胞放射敏感性关系密切.在人类细胞内有2 种DSB 修复途径:一种是以DNA 依赖蛋白激酶(DNA-PK)复合物为主的非同源末端连接(NHEJ)修复,另一种是以毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白(ATM)为主的同源重组(HR)修复.在人体内,NHEJ修复是最主要的修复途径,DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)是DNA-PK复合物的主要功能单位.DNA-PKcs的激酶活性是NHEJ修复所必须的,其在DSB修复中起核心作用.近年来的研究显示ATM、DNA-PKcs蛋白表达水平与肿瘤放射敏感性有关.该综述将有关ATM、DNA-PKcs的功能、在肿瘤组织中的表达及与肿瘤放射敏感性关系的研究进行简要回顾.     

DNA-PKcs在乳腺癌组织中的表达与分期相关性研究

目的:探讨乳腺癌组织中DNA依赖蛋白激酶(DNA dependent protein kinase,DNA-PK)的催化亚单位DNA-PKcs的表达变化与分期的相关性.方法:采用免疫组化SP法检测30例Ⅰ期乳腺癌组织,11例ⅢB、ⅢC期乳腺癌组织及19例Ⅳ期乳腺癌组织中DNA-PKcs的表达情况.结果:DNA.PKcs在Ⅰ期乳腺癌组织中和其癌旁正常组织中均呈高表达,两者表达具有一致性(P＞0.05).DNA-PKcs在ⅢB、ⅢC期和Ⅳ期乳腺癌组织中的表达明显低于Ⅰ期乳腺癌(P＜0.05和P＜0.01).同时,把ⅢB、ⅢC期和Ⅳ期合并后,与Ⅰ期比较,DNA-PKcs表达差异有极显著性意义(P＜0.01).结论:DNA-PKcs的低表达在乳腺癌发生进展和远处转移中有重要意义,对乳腺癌的分期有一定指导意义,可能成为乳腺癌分期的生物学指标.     

GLUT-1和DNA-PKcs在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其意义

背景与目的:已知肿瘤细胞生长所需能量是通过葡萄糖转运体蛋白1(glucose transporter protein 1,GLUT-1)完成的葡萄糖代谢来提供的.另外,参与基因损伤修复的催化亚单位--DNA蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)在肿瘤形成中也起着非常重要的作用.本研究旨在探讨GLUT-1和DNA-PKcs在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其与肿瘤生物学行为的关系和意义.方法:免疫组化方法检测80例卵巢浆液性肿瘤组织中GLUT-1、DNA-PKcs的表达,分析其异常表达与临床病理参数之间的相关性.以正常卵巢组织20例为对照.结果:正常卵巢组织GLUT-1表达全阴性,DNA-PKcs表达全阳性.GLUT-1在良性、交界性、恶性卵巢浆液性肿瘤中的表达呈增高的趋势,与卵巢浆液性肿瘤的发生发展呈正相关(rs=0.943,P＜0.01);在恶性肿瘤中的阳性率(100%)明显高于交界性(55%).DNA-PKcs在良性、交界性和恶性卵巢浆液性肿瘤中的阳性率分别为95%、90%、60%,差异有统计学意义(P＜0.01).GLUT-1与DNA-PKcs的表达呈负相关(rs=-0.270,P＜0.01).GLUT-1表达与临床分期、腹腔种植、腹水、淋巴结转移均相关(P＜0.05);DNA-PKcs仅与临床分期和淋巴结转移相关(P＜0.05),与腹水、腹腔种植无关(P＞0.05).结论:GLUT-1的异常表达和DNA-PKcs的丢失与卵巢浆液性肿瘤恶变相关.     

DNA-PKcs在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的:DNA双链断裂(DNA double-strand break,DSB)是射线杀灭肿瘤细胞的主要机制,而同源重组(homologous recombination,HR)和非同源性末端连接(DNA nonhomologous end-joining,NHEJ)是DSB的两条重要修复途径.DNA-PK催化亚单位(catalytic subunit of DNA-dependent protein kinase,DNAPKcs)是NHEJ途径的主要修复蛋白之一,在DSB中发挥着重要作用.本研究旨在通过检测鼻咽癌组织中DNA-PKcs的表达情况,探讨其与鼻咽癌临床病理特征及预后的关系.方法:采用免疫组化SP法检测223例鼻咽癌患者组织中DNA.PKcs的表达,并结合患者的临床及预后资料进行分析.结果:223例鼻咽癌患者中,DNA.PKcs的过表达率为36.8%.卡方检验显示,DNA.PKcs表达强弱与患者的性别、年龄、病理分型及N分期的相关性均无统计学意义(P>0.05),与TNM分期、T分期、M分期均有关(P<0.05).单因素生存分析显示,DNA-PKes过表达患者5年总生存率低于低表达患者(54.6%vs.79.4%),差异有统计学意义(P<0.05).多因素Cox回归模型分析显示T、N、M分期及DNA-PKcs表达水平是影响鼻咽癌患者预后的独立因素(P<0.05).结论:DNA-PKcs在大部分鼻咽癌组织中均有表达,DNA-PKcs的表达水平与鼻咽癌患者预后相关,对患者的预后判断有一定的指导意义.     

DNA依赖蛋白激酶在人支气管上皮细胞癌变株和肺癌组织中的异常表达

目的:探讨辐射诱发人支气管上皮细胞癌变株和肺癌组织中DNA依赖蛋白激酶(DNA dependent protein kinase, DNA-PK)的激酶活性或表达变化。方法:用Western blot和p53蛋白为特异性底物的磷酸化反应分别检测癌变细胞中DNA-PKcs表达和激酶活性,用免疫组化结合病理图像定量分析技术检测肺癌组织和癌旁组织中DNA-PKcs蛋白的表达情况。结果:a粒子辐射诱发的人支气管上皮细胞癌变株BERP35T-1的DNA-PKcs表达水平比亲本细胞BEP2D提高30%,激酶活性显著提高。所检测的14例非小细胞肺癌组织中DNA-PKcs蛋白表达水平普遍高于相对应的癌旁组织,两组之间有显著性差异(P < 0.05)。结论:非小细胞肺癌组织中DNA-PKcs表达增加,可能成为肺癌的一个生物标记物。     

DNA-PKcs、Ku80及ATM备选宫颈癌放疗增敏靶点的体外研究

背景与目的:DNA双链断裂(DNA double strand break,DSB)是细胞受辐射后最致命的损伤,而DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)、Ku80和ATM(ataxia-telangiectasia mutated)为DSB的主要修复蛋白.宫颈癌是以放疗为主要治疗手段的肿瘤.但其肿瘤细胞对放射线的敏感性不同.本实验拟研究3种DSB修复蛋白的表达与宫颈癌细胞放射敏感性的关系.并探讨DSB修复蛋白成为宫颈癌放疗增敏靶点的可能性.方法:免疫组化法检测41例宫颈癌患者组织中DNA-PKcs、Ku80和ATM蛋白的表达情况;Western blot检测8株肿瘤细胞(包括4株宫颈癌细胞)中3种蛋白的表达,克隆形成实验检测SF2 (suivival fraction at 2 Gv)、α值,分析蛋白表达水平和SF2、α值的关系;利用靶向抑制DNA-PKcs的shRNA表达质粒和小分子抑制剂LY294002,分别抑制HeLa细胞DNA-PKcs蛋白表达和活性后,克隆形成实验和流式细胞仪检测HeLa细胞受6 MVX线照射后的SF2、α值和凋亡率变化.结果:在41例宫颈癌组织中,Ku80、DNA-PKcs和ATM的阳性率分别为70.73%、68.29%和19.51%:8株肿瘤细胞中Ku80、DNA.PKcs和ATM蛋白的相对表达量与各细胞SF2、α值各不相同,作Pearson线性相关分析后得出DNA-PKcs的表达水平与SF2之间有明显的正相关关系(r=0.72,P=0.04);靶向抑制DNA-PKcs的shRNA可以促进HeLa细胞的放射敏感性,其SF2值为0.37,显著低于对照HeLa细胞的0.53(P＜0.05);单独接受50 μmol/L LY294002作用1 h HeIa细胞的凋亡率未见明显增加,但先经LY294002处理再照射6 Gy的HeLa细胞在48 h和72 h的凋亡率比单独照射6 Gy的HeLa细胞凋亡率显著增加(48 h点:t=3.25,P=0.03;72h点:t=3.01,P=0.04).结论:DNA-PKcs在宫颈癌组织中表达较高,且其表达水平可以预示肿瘤细胞的放射敏感性:抑制DNA-PKcs的表达或活性可以促进HeLa细胞的放射敏感性.     

NSCLC中DNA—PKcs的表达及其与凋亡相关蛋白关系的研究

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)中DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)的表达,探讨其与凋亡相关蛋白表达之间的关系.方法采用免疫组化SP法检测113例NSCLC患者肿瘤组织中DNA-PKcs、p53和bcl-2的表达.结果 NSCLC中DNA-PKcs、p53和bcl-2的检出率分别为89.38%、61.95%及59.29%;DNA-PKcs的表达顺序依次为细支气管肺泡癌>腺癌>腺鳞癌>鳞癌,而且DNA-PKcs表达水平随肿瘤分化程度的增高亦逐渐增高,差异均具有高度显著性(P<0.05),但其表达与淋巴结转移无明显关系;p53在不同临床病理类型NSCLC中的表达无明显差别;bcl-2在不同组织学类型NSCLC中的表达顺序依次为鳞癌>腺鳞癌>腺癌>细支气管肺泡癌,差异具有高度显著性(P<0.01),但其表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移无关;DNA-PKcs与p53(P<0.01)、p53和bcl-2(P<0.05)的表达之间有显著相关性.结论 DNA-PKcs高表达导致的DNA损伤修复系统活性增高以及突变型p53和bcl-2过表达导致的凋亡抑制相互影响、共同作用,可能是形成NSCLC放疗抗拒性的重要因素.     

葡萄糖转运体p63和DNA蛋白激酶在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其意义

目的研究在卵巢浆液性肿瘤中葡萄糖转运体(GLUT-1)、p63和:DNA蛋白激酶(DNA-PKcs)的表达及其意义。方法应用免疫组织化学的方法检测卵巢浆液性肿瘤中GLUT-1、p63和DNA-PKcs的表达,用χ2检验分析其异常表达与临床病理参数之间的相关性。结果正常卵巢组织中,GLUT-1、p63表达均为阴性,DNA-PKcs表达为阳性。GLUT-1、p63在恶性卵巢浆液性肿瘤中的表达明显高于良性和交界性卵巢浆液性肿瘤,差异有统计学意义(P<0.01);DNA-PKcs在良性、交界性、恶性卵巢浆液性肿瘤中的阳性表达率分别为95.0%、90.0%和60.0%,差异有统计学意义(P< 0.01)。GLUT-1表达与年龄、临床分期、腹腔种植、腹水、淋巴结转移均相关(P<0.05);p63除与腹水无关外,与其他临床病理参数均有关(P<0.05);DNA-PKcs仅与临床分期和淋巴结转移有关(P< 0.05),与腹水、腹腔种植无关(P>0.05)。结论GLUT-1、p63和DNA-PKcs的异常表达与卵巢浆液性肿瘤的生长、恶变、侵袭及转移均有密切关系,有望成为卵巢浆液性肿瘤恶变的标志物。     

DNA-PKcs短发夹RNA载体的构建及其表达

目的构建DNA-PKcsshRNA表达载体,观察该基因的抑制对A2780细胞增殖活性的影响。方法将针对人DNA-PKcs基因的不同部位设计的shRNA插入到真核表达质粒并转染人卵巢A2780细胞,RT-PCR和WesterBlot检测其对该基因mRNA和蛋白水平的抑制效率,MTT法测定DNA-PKcs基因的抑制对肿瘤细胞增殖活性的影响。结果 DNA测序分析证实DNA-PKcs shRNA表达载体pSIRENDNA-PKcs shRNA构建成功并在细胞中表达,转染重组载体的A2780细胞DNA-PKcs的表达在mRNA和蛋白水平均明显下降;重组载体转染细胞增殖活性明显降低。结论成功构建DNA-PKcs shRNA表达载体为进一步研究DNA损伤修复基因DNA-PKcs奠定了基础;DNA-PKcs表达的抑制可能会导致肿瘤细胞增殖活性降低。     

ERCC1、DNA-PKcs蛋白在非小细胞肺癌中的表达与预后的关系

背景与目的已有的研究结果显示:ERCC1、DNA-PKcs是重要的DNA损伤修复因子,在肿瘤发生及预后中起着重要作用,本研究的目的是探讨DNA修复因子ERCC1,DNA-PKcs蛋白在非小细胞肺癌中表达的临床意义及其与NSCLC预后的关系。方法收集116例非小细胞肺癌组织及12例癌旁正常肺组织石蜡标本制成组织芯片,利用免疫组化SP法检测ERCC1、DNA-PKcs的表达,并分析其与临床各因素的关系。结果116例NSCLC组织中ERCC1、DNA-PKcs蛋白的阳性表达率分别为40.5%(47/116)、75%(87/116),ERCC1在肺癌组织和癌旁正常肺组织中的表达无统计学差异(P>0.05),而DNA-PKcs在癌组织中表达高于癌旁组织(P=0.000)。ERCC1的表达与肺癌分化程度、肿瘤大小和TNM分期密切相关(P<0.05),ERCC1阳性表达组5年生存率(53.2%)高于阴性表达组(26.1%)(P=0.014),但ERCC1表达不是独立的预后因素。DNA-PKcs表达与临床病理特征及预后无关。结论ERCC1阳性者预后较好,提示其表达对预后评估有一定的指导价值。     

DNA-PKcs表达与乳腺癌临床病理特征关系的研究

目的:研究DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)表达与浸润性乳腺癌临床病理特征的关系。方法:应用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测101例浸润性乳腺癌中DNA-PKcs以及ER、PR、c-erbB-2的表达情况,采用χ2检验及Spearman秩和相关检验分析结果。结果:DNA-PKcs表达与浸润性乳腺癌的肿瘤大小、淋巴结转移数量、TNM分期均呈负相关(分别为r=-0.319,P=0.001;r=-0.378,P=0.000;rs=-0.428,P=0.000);与ER表达呈正相关(rs=0.279,P=0.005);与患者年龄、肿瘤组织学分级、及PR、c-erbB-2表达的关系无统计学意义(P>0.05)。结论:DNA-PKcs低表达与浸润性乳腺癌的进展及淋巴结转移关系密切,有可能成为预测乳腺癌预后重要的生物学指标。     

miR-516b-5p靶向ATM调控鼻咽癌细胞HONE1 DNA修复的机制研究

目的探讨鼻咽癌细胞HONE1中抑制DNA修复的潜在机制。方法使用ETP处理鼻咽癌细胞HONE1造成DNA损伤后,通过高通量测序检测鼻咽癌细胞HONE1中miRNA的表达谱。过表达差异miRNA后,通过基于I-PpoI的可诱导DSB系统检测DNA双链断裂处(DNA double-strand breaks,DSB)的DNA-PKcs含量。通过miRDB在线分析miRNA的潜在靶标。通过荧光素酶报告系统检测miRNA靶向mRNA。结果ETP处理后hsa-miR-9983-3p、hsa-miR-4731-5p、hsa-miR-3675-5p、hsa-miR-516b-5p、hsa-miR-4437、hsa-miR-7114-5p、hsa-miR-637、hsa-miR-5008-5p的表达水平上升至少8倍。miR-516b-5p mimics导致DSB的DNA-PKcs含量减少(P<0.05),而miR-516b-5p inhibitor导致DSB的DNA-PKcs含量增加(P<0.05)。在鼻咽癌细胞HONE1中过表达miR-516b-5p后,ATM mRNA的表达水平和蛋白表达水平下降,DNA-PKcs的磷酸化水平下降;而抑制miR-516b-5p表达后,ATM mRNA的表达水平和蛋白表达水平上升,DNA-PKcs的磷酸化水平上升。同时,miR-516b-5p靶向ATM的3端非编码区。过表达ATM后,DSB的DNA-PKcs含量上升(P<0.05),而敲低ATM后,DSB的DNA-PKcs含量下降(P<0.05)。结论miR-516b-5p通过靶向ATM mRNA的3端非编码区,降解了ATM mRNA,抑制了ATM的翻译,随后DNA-PKcs的磷酸化水平下降,DNA-PKcs与DSB的结合减少,最终抑制了鼻咽癌细胞HONE1的DNA修复。     

协同抑制Ku80和DNA-PKcs对HeLa细胞放射生物学功能的影响

目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和LY29400抑制单个或多个DNA双链断裂(DNA double-strand break,DSB)修复蛋白后,HeLa细胞放射敏感性和细胞周期的变化.方法:Ku80受抑细胞HeLa/Ku80-siRNA和对照细胞HeLa/Neg-siRNA分别转染可以靶向抑制DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)表达的siRNA.或用DNA-PKcs活性抑制剂LY294002处理,经6 MV X线照射后,克隆形成实验检测细胞放射敏感性的变化,FCM法检测细胞周期.结果:DNA-PKcs-siRNA转染后的HeLa/Ku80-siRNA细胞,其2 Gy照射后的存活分数(sur-vival fraction,SF2)为0.08±0.01,LY294002作用后HeLa/Ku80-siRNA的SF2达0.03±0.01,均远低于未处理HeLa/Ku80-siRNA细胞的0.20±0.05.各组细胞照射6 Gy后均出现G2/M期阻滞,转染DNA-PKcs-siRNA的HeLa/Neg-siRNA细胞以及经LY294002处理的HeLa/Ku80-siRNA、HeLa/Neg-siRNA细胞G2/M期阻滞逐渐缓慢出现,照射后72 h仍末达到顶点,而其他细胞G2/M期阻滞均于照射后48 h达到顶点.结论:在抑制Ku80已达95%的基础上,DSB修复功能可以由其他DSB修复蛋白如DNA-PKcs和共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutant,ATM)代偿,协同抑制上述蛋白可以明显增加,如HeLa细胞的辐射敏感性;Ku80、DNA-PKcs和ATM在细胞的G2/M期阻滞过程中发挥的作用不同.     

DNA-PKcs抑制剂香兰素对宫颈癌患者细胞放化疗增敏效果探讨

目的探讨DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)抑制剂香兰素作用下宫颈癌Hela细胞对顺铂或电离辐射的敏感性,研究DNA-PKcs抑制剂对宫颈癌的放化疗增敏作用。方法采用四氮唑蓝还原法(MTT)检测香兰素联合顺铂对Hela细胞的增殖抑制作用;采用克隆形成试验(平板法)检测香兰素联合电离辐射对Hela细胞的增殖抑制作用。结果香兰素明显增加顺铂对Hela细胞的生长抑制作用,并呈一定剂量依赖性;香兰素也明显增加Hela细胞对电离辐射的敏感性,放射增敏比(SERDq)=1. 57。结论 DNA-PKcs抑制剂香兰素可能对顺铂治疗宫颈癌有增敏作用,也可能对宫颈癌放射治疗有增敏作用。     

DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株辐射抗性的影响

背景与目的:DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)是一种双链断裂修复蛋白,可以修复细胞的DNA双链断裂损伤。本研究通过转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株,探讨DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株的放射敏感性的影响。方法:利用LipofectamineTM2000转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-1-wtp53;设0、0.5、1、2、4、6、8Gy7个放射剂量点,用集落形成法分析转染反义寡核苷酸前后细胞的存活情况,并分别用线性二次模型和单击多靶模型拟合出细胞的剂量存活曲线,求出放射生物学参数α、β、α/β、SF2、D0、Dq和N值,评价细胞放射敏感性的变化。结果:转染DNA-PKcs反义寡核苷酸前,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.03、0.05,SF2值分别为0.73、0.50,D0值分别为2.08Gy、1.13Gy,Dq值分别为2.04Gy、1.36Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.04、0.26,SF2值分别为0.45、0.21,D0值分别为1.07Gy、0.83Gy,Dq值分别为1.24Gy、0.73Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,鼻咽癌细胞的α值增大,SF2、D0、Dq值均减小。结论:DNA-PKcs反义寡核苷酸可逆转CNE-1的辐射抗性,该逆转作用不依赖细胞的p53功能状态。     

结肠腺癌组织中DNA-PKcs的表达及临床意义

目的 探讨DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)在结肠腺癌(COAD)组织中的表达特征及在COAD预后中的预测价值。方法 通过GEPIA在线网站分析275例COAD组织和349例正常对照组织的DNA-PKcs表达;利用Kaplan-Meier Plotter在线网站分析DNA-PKcs表达与COAD患者(1061例)生存情况的关系。选取本院2019年1月至2021年6月行手术切除治疗的58例COAD患者为研究对象,采用免疫组化检测COAD组织中DNA-PKcs表达并分析其与临床病理特征的关系;Pearson相关分析评估DNA-PKcs表达与癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线评估DNA-PKcs、CEA、CA199对COAD不良预后的预测价值。结果 在线分析提示COAD组织中DNA-PKcs的表达水平高于正常对照组织(P<0.05),且789例DNA-PKcs低表达者的中位总生存期为134个月,优于272例高表达者的106个月(P<0.05);DNA-PKcs表达在不同TNM分期、分化程度、神经侵袭、浸润深度、复发...     

非同源末端连接修复通路DNA-PKcs基因在胶质瘤中表达及其机制研究

目的:研究DNA双链断裂损伤修复通路主要成员Ku70、Ku80、ERCC4、Lig4 和DNA-PKcs 基因在人脑胶质瘤中的mRNA 表达及其与肿瘤发生的关系。方法:采用SYBR Green实时定量PCR 技术检测36例人原发脑胶质瘤组织和12例正常脑组织中的Ku70、Ku80、ERCC4、Lig4 和DNA-PKcs 的mRNA 水平。用亚硫酸盐处理基因组DNA后,采用甲基化特异的聚合酶链式反应（MSP）检测正常脑组织和胶质瘤组织中DNA-PKcs 基因的甲基化水平变化。结果:与正常脑组织相比,Ku70、Ku80、ERCC4、Lig4 基因表达量在脑胶质瘤和正常脑组织中无显著性变化（P>0.05）,DNA-PKcs 基因在脑胶质瘤中表达显性著上调（P=0.002）。DNA-PKcs 基因在脑胶质瘤组织中表达量随胶质瘤恶性程度升高而增加。DNA-PKcs 基因启动子甲基化程度在正常组织中高于肿瘤组织,表明甲基化程度的减少是引起胶质瘤中DNA-PKcs 基因表达增高的原因。结论:DNA-PKcs 基因在人脑胶质瘤中较正常脑组织表达显著上调,并且表达与脑胶质瘤的恶性程度相关。DNA-PKcs 基因甲基化程度的降低是引起胶质瘤中DNA-PKcs基因表达增高的原因。      

DNA—PKcs在乳腺癌组织中的表达与分期相关性研究

目的：探讨乳腺癌组织中DNA依赖蛋白激酶（DNA dependent protein kinase，DNA—PK）的催化亚单位DNA—PKcs的表达变化与分期的相关性。方法：采用免疫组化SP法检测30例Ⅰ期乳腺癌组织，11例ⅢB、ⅢC期乳腺癌组织及19例Ⅳ期乳腺癌组织中DNA-PKcs的表达情况。结果：DNA-PKcs在Ⅰ期乳腺癌组织中和其癌旁正常组织中均呈高表达，两者表达具有一致性（P〉0．05）。DNA-PKcs在ⅢB、ⅢC期和Ⅳ期乳腺癌组织中的表达明显低于Ⅰ期乳腺癌（P〈0．05和P〈0．01）。同时，把ⅢB、ⅢC期和Ⅳ期合并后，与Ⅰ期比较，DNA—PKcs表达差异有极显著性意义（P〈0．01）。结论：DNA．PKcs的低表达在乳腺癌发生进展和远处转移中有重要意义，对乳腺癌的分期有一定指导意义，可能成为乳腺癌分期的生物学指标。