pH对心脏к—阿片受体调节Ca^2＋瞬变作用的影响

目的　研究 p H对κ-阿片受体调节心肌细胞内钙瞬变作用的影响 .方法　用光谱荧光法 ,以 Fura- 2为 Ca2 + 指示剂测定大鼠单个心肌细胞电刺激引起的钙瞬变 ,观察激动 κ-阿片受体对钙瞬变的影响及在不同 p H值时该作用的变化特点 .结果　当细胞外液 p H为 7.4时 ,U5 0 ,4 88H(κ-阿片受体选择性激动剂 )在 10μmol· L- 1 ～ 30μmol· L- 1 浓度范围内剂量依赖性地降低心肌细胞的钙瞬变 ,该作用具有时间依赖性 .当细胞外液的 p H为 6 .8时 ,U5 0 ,4 88H的作用曲线明显右移 ,表明其作用减弱 .当细胞外液的 p H为 8.0时 ,U5 0 ,4 88H的作用曲线明显左移 ,而且其最大效应提前发生 ,表明U5 0 ,4 88H的作用被加快和加强 .结论　 p H对κ-受体介导的钙反应具有调节作用 ;临床酸化血液可能对阿片中毒者具有抗毒效应 ,而碱化血液可能会加重阿片类药物的毒性作用     

U50,488H对大鼠血压的影响及机制

目的：观察κ-阿片受体激动剂U50，488H对大鼠血压的影响，并探讨其作用机制。方法：在正常大鼠急性分离的心肌细胞中，采用细胞动缘检测系统记录心肌细胞收缩，光谱荧光法检测心肌细胞内钙，膜片钳技术记录L型钙电流；分离正常大鼠腹主动脉，以血管环方法检测血管舒张功能。结果：在整体水平，静脉注射U50，488H可显著降低大鼠平均动脉压，降低心率及心脏的收缩、舒张功能；在细胞水平，U50，488H抑制单个心肌细胞收缩呈剂量依赖性，抑制心肌细胞L型钙电流，降低细胞内钙瞬变；在离体水平，U50，488H对血管收缩产生显著的剂量依赖性舒张效应。以上效应均可被选择性κ-阿片受体阻断剂nor-BNI所阻断。结论：U50，488H通过激动κ-阿片受体引起降血压效应，抑制心肌细胞收缩力和舒张血管是其降压的主要机制。     

κ-阿片受体的负性肌力作用及其对β-肾上腺素受体的调节

目的研究U50, 488H（选择性κ-阿片受体激动剂）对心脏的负性肌力作用特点及对β-肾上腺素受体（β-AR）的调节作用. 方法①整体动物实验，观察U50, 488H对家兔心率（HR）、动脉压（ABP）、左心室内压（LVP）及其微分（±dp/dtmax）的影响；②利用Langerdoff装置离体灌流大鼠心脏，观察U50, 488H对HR，LVP和±dp/dtmax及β- AR正性肌力作用的影响. 结果①U50, 488H可显著降低家兔的HR，ABP，LVP及±dp/d tmax；②U50, 488H对离体大鼠心脏的HR, ABP, LVP及±dp/dtmax有降低作用；③在U50, 488H 存在的情况下，激动β-AR所引起的LVP的升高可被显著抑制. 结论①U50, 488 H对心脏具有负性肌力作用；②U50,488H可抑制β-AR的正性肌力作用，提示κ-阿片受体对β- AR具有负性调节作用.     

κ阿片受体激动对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的抑制作用

目的 通过观察κ阿片受体激动对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的作用,研究κ阿片受体激动剂对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的抑制作用.方法 以体外培养的乳大鼠心肌细胞为模型,应用血管紧张素Ⅱ1 μM诱导心肌肥大,观察U50488H1 μM对它的作用,并和洛沙坦(los)1 μM组做对比观察κ阿片受体的激活对心肌肥大的作用.用Lowry法检测心肌细胞蛋白含量;用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;用[3H]-leueine掺入法测定心肌细胞蛋白的合成.结果 AngⅡ1 μM使心肌细胞总蛋白含量,蛋白表迭及细胞体积明显增加;U50488H1 μM能够降低由AngⅡ引起的心肌细胞蛋白含量,蛋白表达,以及体积的增加,从而抑制心肌肥大,并且抑制程度与los1 μM相似.结论 κ阿片受体激动剂U50488H能够抑制由AngⅡ诱导的心肌细胞肥大.     

κ-阿片受体介导缺血后处理的心肌保护作用及其受体后机制

目的:探讨κ-阿片受体是否参与缺血后处理的对抗心肌缺血/复灌(I/R)损伤和心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的作用及其机制。方法:采用离体大鼠心脏Langendorff灌流模型,全心停灌30 m in、复灌120 m in复制I/R模型,测定心室力学指标和复灌各时点冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。实验结束测定心肌组织form azan含量。酶解分离的心肌细胞采用缺氧60 m in、复氧60m in复制H/R模型,测定心肌细胞存活率。结果:在离体心脏模型上,与I/R组相比,缺血后处理组心肌组织的form azan含量明显增高,复灌期间冠脉流出液中LDH含量明显降低,同时缺血后处理明显改善心室力学指标,缓解冠脉流量的减少;在分离心肌细胞模型上,缺氧后处理明显提高心肌细胞存活率。κ-阿片受体阻断剂nor-b inaltorph im ine(nor-BN I)和线粒体ATP敏感性钾通道(m itoKATP)阻断剂5-hydroxydecanoate(5-HD)在离体大鼠心脏模型和分离心肌细胞模型上均能明显减弱缺血后处理的作用。同时在心肌细胞模型上,与H/R组相比,κ-阿片受体激动剂U 50488H明显提高心肌细胞存活率,其作用可被m itoKATP阻断剂5-HD所阻断。结论:缺血后处理具有抗心肌缺血/复灌损伤的作用,这种保护作用可能与其激活κ-阿片受体和m itoKATP有关。     

U50,488H对正常及缺氧心肌细胞钾电流的作用

目的观察U50,488H(κ阿片受体选择性激动剂)对正常及缺氧心肌细胞钾电流的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,记录了急性分离的正常及缺氧大鼠心室肌细胞的钾电流。结果U50,488H(1～500μmol/L)可以剂量依赖性地抑制正常心肌细胞的钾电流,该作用可被κ阿片受体特异性阻断剂Nor-BNI(100μmol/L)所阻断。而细胞缺氧后,钾电流虽有所下降,但与正常对照差异无显著性。U50,488H(1～500μmol/L)可以剂量依赖性地抑制低氧心肌细胞的钾电流,并且U50,488H对心肌细胞钾通道电流的抑制作用不受缺氧的影响。结论心脏阿片受体参与了对心脏钾离子通道功能的调节,这可能是阿片类物质抗心律失常的原因之一。     

k—阿片受全的负性肌力作用及其对β—肾上腺素受体的调节

目的　研究 U 5 0 ,488H (选择性κ-阿片受体激动剂 )对心脏的负性肌力作用特点及对β-肾上腺素受体 (β- AR)的调节作用 .方法　 1整体动物实验 ,观察 U5 0 ,488H对家兔心率 (HR)、动脉压 (ABP)、左心室内压 (L VP)及其微分 (±dp/ dtmax)的影响 ;2利用 L angerdoff装置离体灌流大鼠心脏 ,观察 U 5 0 ,488H对 HR,L VP和± dp/ dtmax及β- AR正性肌力作用的影响 .结果　 1U5 0 ,488H可显著降低家兔的 HR,ABP,L VP及± dp/ dtmax;2 U5 0 ,488H对离体大鼠心脏的HR,ABP,L VP及± dp/ dtmax有降低作用 ;3在 U 5 0 ,488H存在的情况下 ,激动 β- AR所引起的 L VP的升高可被显著抑制 .结论　 1U5 0 ,488H对心脏具有负性肌力作用 ;2 U5 0 ,488H可抑制β- AR的正性肌力作用 ,提示κ-阿片受体对β-AR具有负性调节作用 .     

人参皂苷对κ-阿片受体激动剂诱导的小鼠抗感受伤害作用的调节

曾有研究证实脑室内给予 U50-488H(一种K一阿片受体激动剂)可诱导抗感受伤害作用。作者研究了脑室内或鞘内注射人参总皂昔部位及几种单体人参皂昔对脑室内注射U50-488H诱导抗感受伤害作用的调节作用。     

κ阿片受体对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的：采用选择性κ阿片受体激动剂U50488H激活κ阿片受体，研究大鼠发生心肌缺血-再灌注损伤时κ阿片受体介导的心脏保护作用。方法：建立心肌缺血-再灌注损伤动物模型，将实验大鼠按随机原则分组，监测大鼠心率（HR）、动脉压（ABP）、左心室内压（LVP）及收缩（＋dp／dtmax）和舒张功能（-dp／dtmax）等血流动力学指标，观察κ阿片受体激活后对心肌缺血-再灌注损伤大鼠心肌超微结构、心肌梗死面积、心律失常以及心肌酶谱等方面的影响。结果：①U50488H可显著降低大鼠HR、ABP、LVP及．4-dp／dtmax。②在心肌缺血前预先给予U50488H具有心脏保护作用，具体表现在可以减轻缺血-再灌注大鼠心肌超微结构的损伤、缩小心肌梗死面积、降低缺血-再灌注性心律失常的发生以及减少心肌酶的漏出。结论：U50488H具有负性肌力作用，可通过激活心脏κ阿片受体发挥心脏保护作用。上述作用可被选择性κ阿片受体阻断剂Nor—BNI阻断。     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡

目的:观察血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用及其作用受体.方法:体外培养的Wistar乳鼠心肌细胞,以AⅡ10-11～10-5 mol*L-1孵育24 h,采用流式细胞术及TUNEL方法检测凋亡细胞;然后加入AⅡⅠ型受体阻断剂氯沙坦与AⅡ共同孵育,观察其对AⅡ诱导的心肌细胞凋亡的影响.结果: AⅡ 10-11 mol*L-1组凋亡细胞数量与对照组差异无显著性[(14.63±3.18)% vs (10.55±2.67)%, P>0.05]; AⅡ10-9 mol*L-1组凋亡心肌细胞数量显著高于对照组[(22.18±3.59)% vs (10.55±2.67)%, P<0.01]; AⅡ浓度为10-9 mol*L-1、10-7 mol*L-1和10-5 mol*L-1三组间,凋亡细胞数量差异无显著性[(22.18±3.59)%, (19.07±3.27)%, (25.06±5.64)%,P>0.05].氯沙坦抑制AⅡ诱导的心肌细胞凋亡[(12.87±4.31)% vs(19.07±3.27)%,P<0.05].TUNEL染色支持以上结果.结论:血管紧张素Ⅱ可以诱导乳鼠心肌细胞凋亡,其作用可能通过AⅡⅠ型受体介导.     

κ-阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注损伤的直接保护作用

目的：探讨选择性κ-阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注（I/R）损伤冠状微循环和心肌超微结构的影响,明确其对I/R心肌是否具有直接保护作用.方法：将32只大鼠随机分为4组,即假手术组,I/R组,U50488H＋I/R组和Nor-BNI（特异性阿片受体阻断剂）＋U50488H＋I/R组,每组8只.实验组通过开胸结扎冠脉前降支制备大鼠I/R模型,观察各组大鼠心肌超微结构和冠状微循环的改变.结果：①U50488H＋I/R组与I/R组和Nor-BNI＋U50488H＋I/R组比较,微血管显著扩张（P〈0.05）,毛细血管腔内血细胞明显减少,心肌间质中偶见红细胞.②U50488H＋I/R组与I/R组和Nor-BNI＋U50488H＋I/R组比较,心肌超微结构损伤明显减轻.结论：U50488H可通过激活心脏κ-阿片受体,明显改善大鼠I/R心肌的微循环,减轻心肌超微结构的损伤,从而发挥对心脏的直接保护作用,该作用可被选择性的κ-阿片受体阻断剂Nor-BNI所拮抗.     

四氢小蘖碱对豚鼠心肌细胞钙通道的影响

目的探讨四氢小蘖碱(THB)对豚鼠单个心肌细胞钙通道的作用.方法利用膜片钳全细胞记录方法检测四氢小蘖碱对豚鼠心肌细胞钙离子电流峰值的变化.结果当钳制电位为-40mv ,去极化至0mv,保持时间为250ms,THB1 μmol·L-1和10μmol·L-1使心肌细胞钙电流峰值分别从(300.75±54.69)PA和(420.45±94.45)PA降至(176.75±27.16 )和(155.58±82.23)PA(P<0.01),其下降百分率分别为41.23%和63.02%,给药前后钙电流(Ica)的翻转电位不变,其最大激活电位为0mv,给药后经台氏液冲洗,Ica峰值逐渐恢复.结论 THB对心肌细胞钙通道具有阻滞作用,并呈浓度依赖性.     

钙信号在尾加压素-Ⅱ促血管平滑肌增殖中的作用

目的:探讨钙信号在尾加压素-Ⅱ(urotensin-Ⅱ,UⅡ)促血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖中的作用.方法:在离体培养的VSMC上,用流式细胞仪和3H-TdR参入的方法探讨UⅡ的促增殖效应;在离体孵育的大鼠主动脉平滑肌组织上观察UⅡ对平滑肌45Ca2+摄入的影响;应用激光共聚焦显微镜检测UⅡ作用后细胞内游离钙的改变.结果:UⅡ(10-9～10-7molL-1)浓度依赖地刺激VSMC的DNA合成,并诱导细胞由静止向增殖状态转化.与对照组相比10-8 mol*L-1 UⅡ使细胞的增殖指数[(G2-M+S)%]增加192%(P<0.01).钙通道阻断剂尼卡地平和Ca2+螯合剂EDTA均可阻断UⅡ对VSMC的促增殖效应,其中UⅡ(10-8 mol*L-1)与尼卡地平(10-5 mol*L-1)共同孵育的VSMC DNA合成量仅为单纯UⅡ(10-8 mol*L-1)组的59.0%. UⅡ(10-10～10-8 mol*L-1)可浓度依赖地使胸主动脉对45Ca2+的摄入增加,尼卡地平(10-5 mol*L-1)也可显著对抗UⅡ(10-8 mol*L-1)对45Ca2+摄入的诱导作用(P值均小于0.01).用激光共聚焦显微镜观察发现UⅡ作用后细胞内Ca2+浓度迅速升高,持续约3 min,形成钙波.结论: UⅡ可通过促进细胞Ca2+摄取和增加细胞内Ca2+浓度,发挥其促进VSMC增殖的作用.     

心先安对大鼠肥厚心肌的作用

应用测定心肌细胞钙瞬变的方法研究心先安外源性cAMP对正常及肥厚心室肌钙瞬变的作用 ,结果发现 :①正常与肥厚大鼠心肌细胞的钙瞬变无显著差异 (2 0 2 .37± 2 0 .87vs 188.74± 2 2 .0 6 ,P >0 .5 ) ;②心先安 (5 0 μmol·L-1)可使正常及肥厚大鼠心肌细胞钙瞬变均明显增加 (P <0 .0 0 1) ,且对正常大鼠的作用更强 (P <0 .0 5 ) ;③尼卡地平 (1μmol·L-1)可使正常及肥厚大鼠心肌细胞的钙瞬变明显减小 ,有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。提示心先安对肥厚大鼠也具有正性变力作用     

哇巴因与地高辛对大鼠肝脏钠泵α亚单位基因表达的影响

目的研究新的二氢吡啶类钙拮抗剂Mn9202对5-HT引起胃底平滑肌收缩的影响. 方法通过离体实验,观察不同浓度的Mn9202 (1,10 μmol*L -1)孵育时5-HT的量效曲线,以及Ca2+的影响,同时与胃底平滑肌5-HT竞争性拮抗剂米安舍林(mianserin)[1]对比. 结果细胞外钙减少,5-HT收缩胃底平滑肌的量效曲线的最大效应降低,但5-HT的浓度范围不变; Mn9202呈剂量依赖性地使5-HT的最大反应降低,并使曲线右移,分别使最大反应降低至(75 ±1.8)%和(55±3.2)%,除去细胞外钙时,Mn9202 1 μmol*L-1使5-HT的量效曲线右移至3×10-3,最大反应降低至原来的18%,此时在灌流液中加入2.5 mol*L-1 CaCl 2,最大反应上升为原来的60%. mianserin使5-HT的量效曲线平行右移,最大反应不变. Mn9202能够取消mians erin对5-HT的拮抗作用. 结论在大鼠的胃底平滑肌,Mn9202能够非特异性地拮抗5-HT的作用,这种作用与细胞外钙有关, 同时也与非竞争性地拮抗5-HT2受体有关.     

U50,488H对大鼠肾动脉的舒张作用及其机制

目的:观察U50,488H(选择性κ阿片受体激动剂)对大鼠肾动脉的舒张作用,并探讨其机制. 方法:采用离体血管灌流方法,测定血管张力的变化. 结果:① U50,488H对大鼠肾动脉具有明显的剂量依赖性舒张作用;②去除内皮细胞可增强U50,488H对大鼠肾动脉的舒张作用;③ U50,488H的舒张血管效应不受优降糖、L-NAME、消炎痛、阿托品和心得安等各种受体阻断剂的影响. 结论:首次证实U50,488H可显著扩张大鼠肾动脉,其舒张肾动脉的效应可被内皮细胞所减弱,并且与KATP通道、NO,前列腺素、M受体及β受体无关.     

二氢吡啶类钙拮抗剂Mn9202对5-HT收缩胃底平滑肌的影响

目的研究新的二氢吡啶类钙拮抗剂Mn9202对5-HT引起胃底平滑肌收缩的影响. 方法通过离体实验,观察不同浓度的Mn9202 (1,10 μmol*L -1)孵育时5-HT的量效曲线,以及Ca2+的影响,同时与胃底平滑肌5-HT竞争性拮抗剂米安舍林(mianserin)[1]对比. 结果细胞外钙减少,5-HT收缩胃底平滑肌的量效曲线的最大效应降低,但5-HT的浓度范围不变; Mn9202呈剂量依赖性地使5-HT的最大反应降低,并使曲线右移,分别使最大反应降低至(75 ±1.8)%和(55±3.2)%,除去细胞外钙时,Mn9202 1 μmol*L-1使5-HT的量效曲线右移至3×10-3,最大反应降低至原来的18%,此时在灌流液中加入2.5 mol*L-1 CaCl 2,最大反应上升为原来的60%. mianserin使5-HT的量效曲线平行右移,最大反应不变. Mn9202能够取消mians erin对5-HT的拮抗作用. 结论在大鼠的胃底平滑肌,Mn9202能够非特异性地拮抗5-HT的作用,这种作用与细胞外钙有关, 同时也与非竞争性地拮抗5-HT2受体有关.     

激活κ阿片受体改善大鼠心肌缺血导致的血流动力学变化及心律失常

目的 观察κ阿片受体激动剂(U50488H)对心肌缺血所致大鼠血流动力学及心律失常的效应.方法 实验大鼠随机分为4组,Ⅰ组:对照组(手术但未实施缺血再灌注及药物干预);Ⅱ组:缺血/再灌注(I/R)组;Ⅲ组:I/R+U50488H干预组;Ⅳ组:I/R+U50488H+κ阿片受体阻断剂(Nor-BNI)共同干预组.常规监测心电图、心率(HR)、动脉压(ABP)等血流动力学指标;记录发生室性心律失常的种类及其持续时间.结果 选择性κ阿片受体激动剂可显著降低大鼠HR和ABP;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组大鼠心肌缺血导致心室纤颤发生率分别为0、50%、30%、40%;Ⅲ组与Ⅱ、Ⅳ组相比,心室纤颤的发生率和Pugsley评分最低,心动过速的持续时间缩短(P<0.05).结论 U50488H通过上调心脏κ阿片受体的兴奋性产生了抗大鼠心肌缺血所致室性心律失常的作用.     

碱性成纤维细胞生长因子拮抗大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)拮抗大鼠心肌细胞缺氧 /复氧(hypoxia/reoxygenation ,H/R)损伤的机制。 方法 :H/R处理的大鼠心肌细胞的孵育液中 ,对照组不加任何处理因素 ,其它各组分别加bFGF(10 μg·L-1)、bFGF与丝裂素活化蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinase,MAPK)抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)、蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)抑制剂H7(40 μmol·L-1)、一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯 (NG nitro L argininemethylester,L NAME ,5 0 μmol·L-1)。孵育完毕 ,测定细胞活力、ATP含量及孵育液中乳酸脱氢酶 (lactatedehydrogenase,LDH)含量。 结果 :H/R组心肌细胞活力较对照组降低 32 % (P <0 .0 1) ,细胞ATP含量减少 5 8% (P <0 .0 1) ,孵育液中LDH活性增加 5 .8倍 (P <0 .0 1) ;bFGF组心肌细胞活力较H/R组增高 17% (P <0 .0 1) ,细胞ATP含量增加 45 % (P <0 .0 1) ,孵育液中LDH活性降低 31% (P <0 .0 1) ,细胞PKC、MAPK活性分别增加 32 % (P <0 .0 1)和 10 % (P <0 .0 5 )。PD980 5 9、H7、PD980 5 9+H7及L NAME各组心肌细胞活力较bFGF组分别降低 13%、17%、2 4%和 2 7% (均P <0 .0 1) ,细胞ATP含量分别减少 2     

组胺H3受体对垂体瘤AtT-20细胞分泌ACTH的调节作用

目的　观察组胺受体激动剂对AtT-20细胞分泌ACTH的影响,并探讨G蛋 白在组胺H3 受体信号转导机制中的作用. 方法　选用文献报道的高表达组胺H3受体 的垂体细胞瘤AtT-20 作为观察系统,用放免分析法测定给予组胺受体激动剂后各时间点细胞上清液中ACTH分泌量 的变化,并观察药物对细胞增殖的影响. 结果　组胺H3受体激动剂R- (α)- MeHA（0.1 μmol*L-1）作用8 h能明显促进ACTH的释放,释放量为1920 μg * L-1,与同时间对照组（780 μg*L-1）相比,明显增高（P<0.01）;H 1和H2激动剂则无此作用. 且R-(α)-MeHA引起ACTH分泌 的效应能被H3受体特异性拮抗剂thioperamide所拮抗,而H1受体和H2受体拮抗剂均不 影响 R-(α)-MeHA的效应. R-(α)-MeHA作用8和24h,对细胞增殖无明显影响. 用G蛋白失活 剂NEM 预先处理细胞后,取消了R-(α)-MeHA增强AtT-20细胞ACTH分泌的效应. 结论 　特异性激动组胺H3受体后能引起兴奋-分泌耦联过程,其信号转导过程中有G蛋白的参与.