白细胞介素1β通过植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1途径促进人肾小球系膜细胞摄取氧化低密度脂蛋白

目的 研究白细胞介素（IL）1β是否促进人肾小球系膜细胞（HMC）摄取氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）以及对其植物血凝素样受体（LOX-1）表达的作用,探讨IL-1β影响脂质摄取的可能作用途径。 方法 脂质化学染色、流式细胞计数观察IL-1β对HMC脂质摄取的影响,分析LOX-1受体的功能及IL-1β影响脂质摄取的可能作用途径。实时定量 PCR和Western印迹方法检测IL-1β对LOX-1表达的影响。 结果 油红“O”染色发现IL-1β增强HMC对Ox-LDL的摄取;流式细胞仪计数发现IL-1β呈剂量和时间依赖性促进HMC摄取荧光Dil标记的Ox-LDL（Dil-Ox-LDL）,抗LOX-1抗体部分阻断IL-1β诱导的HMC 对Ox-LDL的摄取,约为单纯IL-1β组的89.8%（P < 0.05）。5 μg/L IL-1β刺激HMC,LOX-1 mRNA于6 h达高峰,为对照的6.87倍,IL-1β剂量依赖性促进LOX-1 mRNA的表达,当刺激HMC 12 h,LOX-1 mRNA于10 μg/L组达高峰,为对照的6.57倍。IL-1β剂量和时间依赖性促进LOX-1蛋白的表达。5 μg/L IL-1β刺激HMC,LOX-1蛋白表达于24 h达高峰,为对照的1.88倍。10 μg/L 组刺激细胞24 h达高峰,LOX-1蛋白为对照的2.57倍。 结论 HMC基础状态下摄取Ox-LDL,IL-1β可能通过LOX-1途径增强对Ox-LDL摄取,促进细胞内脂质的摄取,加重细胞内脂质失调。     

白细胞介素1和白细胞介素4对肾小球系膜细胞p27表达的影响

白细胞介素（ＩＬ）－１可以诱导肾小球系膜细胞增生,但有关分子机制却处于探讨之中。ＩＬ－４与肾小球系膜细胞增生及其调控的关系尚未见明确报道。我们观察了ＩＬ－Ｉ和ＩＬ－４对ｐ２７表达的影响,旨在细胞周期水平阐明有关作用机制。 一、材料与方法 １．肾小球系膜细胞培养与鉴定： （１）培养：６～８周龄 Ｗｉｓｔａｒ大鼠,无菌条件取肾脏,分离肾皮质,剪成碎块,置于１００目筛网上研磨,收集过筛悬液,倒在１５０目筛网上反复冲洗,将悬液倒在２００目筛网上,再冲洗后,吸出少许,在倒置显微镜下观察。若肾小球纯度达９８％以…     

白细胞介素13对肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素1β表达的影响

目的：探讨白细胞介素13（IL－13）对体外培养的大鼠系膜细胞的增殖及其产生白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法：用四甲基偶氮唑（MTT）法测定系膜细胞增殖,用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）及酶联免疫吸附（ELISA）法测定系膜细胞IL－1β mRNA表达IL-1β蛋白水平。结果IL－13在1．0,10,100ng/ml浓度范围呈剂量依赖性地抑制系膜细胞的增殖。含5％小牛血清（FCS）的RPMI 1640培养状态下的系膜细胞检测不出IL－1β,IL－13在抑制系膜细胞的增殖的相应浓度坷显著地抑制LPS诱导的系膜细胞IL－1β mRNAg表达及L-1β分必,IL－13在10ng/ml浓度时即可几乎完全抑制LPS诱导的系膜细胞IL－1β mRNA表达,结论：IL－13对体外培养的系膜细胞增殖及炎症效应具有抑制作用。     

白细胞介素13抑制肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素1β的分泌

目的：探讨白细胞介素13（IL-13）对体外培养的大鼠系膜细胞的增殖及其产生白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法：用四甲基偶氮唑（MTT）法测定系膜细胞增殖,用酶联免疫吸附（ELISA）法测定培养系膜细胞的上清液IL-1β蛋白水平。结果：IL-13在1.0、10、100ng/ml浓度范围呈剂量依赖性地抑制系膜细胞的增殖;含5?S的RPMI1640培养状态下的系膜细胞几乎检测不出IL-1β分泌,加入LPS可诱导系膜细胞分泌IL-1β,IL-13在抑制系膜细胞的增殖的相应浓度范围可显地抑制诱导的系膜细胞IL-1β。结论：IL-13对体外培养的系膜细胞增殖具有抑制作用 ,IL-13可能对肾小球系膜细胞炎症具有拮抗作用。     

ABCA1在胆固醇结石患者胆囊黏膜上皮的表达

胆石病是一种常见病、多发病,受多种因素影响.腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ATP binding cassette transport A1, ABCA1)是细胞膜脂质转运调节蛋白,促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出,在胆固醇逆转运(RCT)和高密度脂蛋白(HDL)生成的起始步骤中起重要作用[1]. 本研究通过检测胆囊黏膜中ABCA1的表达水平,以进一步探讨胆石病的发病机理.[通讯作者] 周启胜, E-mail: zhouqisheng56@163.com     

通脉口服液对肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素β1、白细胞介素10表达的影响

目的：探讨中药复方“通脉口服液”对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）增殖及其产生白细胞介素融（IL-β1）和白细胞介素10（IL-10）的影响。方法：应用细胞培养技术进行肾小球系膜细胞的传代培养，采用血清药理学方法，制备通脉口服液含药血清，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定通脉口服液含药血清对过度增殖状态下肾小球系膜细胞增殖的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录聚合酶链反应（RT—PEn）法测定系膜细胞IL—β1 mRNA和IL-10mRNA表达及其蛋白水平。结果：通脉口服液含药血清在5％～20％浓度范围明显抑制脂多糖（LPS）刺激的系膜细胞增殖；在观察的2个时间点（6h、24h）上，LPS均可刺激系膜细胞IL-β1 mRNA的表达及提高IL-β1 分泌水平，在6h时间点上LPS可刺激系膜细胞IL-10mRNA的表达及提高IL-10分泌水平；而通脉口服液在10％浓度上能够明显抑制LPS诱导的系膜细胞IL-β1 分泌及其mRNA的表达，在6h时间点上促进LPS诱导的系膜细胞IL-10分泌及其mRNA的表达。结论：中药复方“通脉口服液”可抑制肾小球系膜细胞的增殖及LPS诱导的系膜细胞IL-β1 的产生，促进LPS诱导的系膜细胞IL-10的产生；肾小球系膜细胞是通脉口服液防治慢性肾炎，延缓肾小球硬化的重要靶细胞之-。     

雷帕霉素对炎性反应状态下肾小球系膜细胞内脂质稳态的影响

Objective To investigate the effect of rapamycin on cholesterol homeostasis of glomerular mesangial cells and the underlying mechanism. Methods Glomerular mesangial cell line (HMCL) cells were cultured and divided into control group, IL-1β group and different concentration rapamycin groups. Intracellular cholesterol accumulation was observed and measured by oil O staining and HPLC. Real-time quantitative PCR and Western blot were used to detect the mRNA and protein expression of LDLR, PPARγ, LXRα, ABCA1 in HMCL after the treatment with IL-1β and rapamycin. Results Rapamycin had no significant influence on intracellular cholesterol concentration under normal condition. IL-1β significantly increased the intracellular cholesterol concentration by 143％ of control (P<0.05), and 10, 50, 100 ?滋g/L rapamycin could significantly inhibit the effect of IL-1β (87％, 116％, 96％ of control respectively, all P<0.05). Rapamycin could suppress the increased expression of LDLR caused by IL-1β on both mRNA and protein level in a dose-dependent manner（P<0.01）. Rapamycin dose-dependently up-regulated the reduced mRNA and protein expression of ABCA1, the decreased mRNA expression of PPARγ and LXRα induced by IL-1β as well (P<0.01）. Conclusion Rapamycin may contribute to the maintenance of intracellular cholesterol homeostasis in glomerular mesangial cells under inflammatory state by both reducing cholesterol uptake and promoting cholesterol efflux.     

肾茶对肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素1β表达的影响

目的 :探讨肾茶煎剂对原代培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及其产生白细胞介素 1(IL - 1β)的影响。 方法 :用四甲基偶氮唑 (MTT)法测定肾茶对系膜细胞增殖的影响 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)测定系膜细胞IL - 1β蛋白水平。结果 :肾茶在 5 0 μg/ml～ 2 5 0 μg/ml浓度范围明显抑制血清或脂多糖刺激的系膜细胞增殖 (与对照组比较 ,P <0 .0 1) ,在相同浓度范围内能够明显抑制脂多糖诱导的系膜细胞IL - 1β分泌 (与对照组比较 ,P <0 .0 1)。 结论 :肾茶对体外培养系膜细胞的增殖及IL - 1β分泌具有抑制作用     

白细胞介素13通过下调核因子—kB活化抑制系膜细胞白细胞介素1β的表达

目的：研究白细胞介素13（IL－13）对脂多糖（LPS）引起的肾小球系膜细胞核因子－kB（NF－kB)活化及白细胞介素1β（IL-1β）表达的影响,以探讨其抗炎作用的机制。方法：以体外培养的大鼠肾小球系膜细胞为靶细胞,用凝胶电泳迁移率试验（EMSA）测定NF－kB活性;用酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）观察系膜细胞IL－1β蛋白及基因表达。结果：LPS可诱导系膜细胞NF－kB活化及IL－1β表达,这作用能被NF－kB抑制剂吡咯二硫氢基甲醋酯（PDTC）抑制。IL－13亦有此抑制作用。结论：IL－13对于系膜细胞炎症反应的抑制 作用可通过抑制NF－kB活化而实现。     

PPAR－γ激动剂对炎症状态下人系膜细胞LOX－1表达的影响

目的研究过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPAR－γ)激动剂15－脱氧前列腺素J₂(15d－PGJ₂)对炎症因子白细胞介素1β(IL－1β)作用下人肾小球系膜细胞(HMC)氧化低密度脂蛋白(Ox－LDL)植物血凝素样受体1(LOX－1)表达的影响。 方法激光共聚焦显微镜观察IL－1β对HMC脂质摄取的影响;实时定量PCR和Western印迹方法检测不同剂量的PPAR－γ激动剂15d－PGJ₂对IL－1β诱导的LOX－1表达的影响。 结果激光共聚焦显微镜检查发现5 ng/ml的IL－1β促进HMC摄取荧光标记的Ox－LDL;IL－1β能够促进HMC的LOX－1 mRNA和蛋白表达,15d－PGJ₂呈剂量依赖性抑制IL－1β诱导的LOX－1表达。与单纯IL－1β(5 ng/ml)刺激组相比,15d－PGJ₂浓度2.5、5、10 μmol/L处理组细胞LOX－1 mRNA表达分别下调为73.13%、66.54%、35.23%;15d－PGJ₂浓度5、10 μmol/L处理组细胞LOX－1蛋白表达分别下调为82.39%、63.17%。 结论炎症因子IL－1β促进HMC摄取Ox－LDL;PPAR－γ激动剂15d－PGJ₂剂量依赖性抑制IL－1β诱导的LOX－1 mRNA和蛋白表达,对炎症因子导致的系膜细胞脂质失衡可能具有保护作用。     

白细胞介素6反义RNA对肾小球系膜细胞的影响

目的 为了观察白细胞介素6(IL-6)反义RNA对肾小球系膜细胞(MC)的影响。方法 将IL-6反义RNA用脂质体导入包装细胞PA_(317),经C_(418)筛选,PCR技术分析,并用~3H-胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入法、KD_(83)细胞株、North-ern杂交技术分别检测IL-6反义RNA对肾小球系膜细胞增殖、分泌IL-6以及表达IL-6mRNA的影响。结果 重组假病毒滴度为1×10~7CFU/ml,肾小球系膜细胞~3H-TdR掺入率及IL-6产生与mRNA表达均明显低于对照组。结论 IL-6反义RNA可抑制MC增殖,下调MC中IL-6的产生与表达。     

白细胞介素1β通过p38信号通路上调大鼠肾小球系膜细胞骨调素mRNA的表达

目的 探讨p38信号通路(1938MAPK)在白细胞介素1(IL-1)β介导的大鼠肾小球系膜细胞表达骨调素(OPN)中的作用。方法 应用Western印迹检测p38MAPK在IL-1β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度。应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察p38MAPK特异性阻断剂SB203580对IL-1β诱导的系膜细胞促炎症介质OPNmRNA的影响。结果 IL-1β以时间和剂量依赖方式刺激系膜细胞引起p38MAPK的活化，并明显上调系膜细胞OPNmRNA的表达。p38MAPK特异性抑制剂SB203580以剂量依赖性方式显著抑制IL-1β诱导的OPNmRNA的表达。结论 p38MAPK在IL-16介导的肾小球系膜细胞上调表达黏附分子OPN中起重要作用。     

表达白细胞介素10的系膜细胞基因转移载体的建立

目的为特异性地将病毒性白细胞介素１０（ｖＩＬ１０）基因转移到肾脏提供一种手段。方法应用逆转录病毒载体介导的基因转移技术将外源性基因ｖＩＬ１０转移到大鼠肾脏系膜细胞,应用ＲＴＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ方法检测其表达,并通过对混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）的影响对其活性进行分析。结果ｖＩＬ１０在转染的系膜细胞表达２００００ｐｇ·（１０６细胞）－１／２４ｈ,应用３ＨＴｄＲ掺入法检测ｖＩＬ１０对ＭＬＲ的影响,实验组明显低于对照组（Ｐ＜００５）。结论外源性基因在系膜细胞有效地转录和表达,并对ＭＬＲ有抑制作用。     

白细胞介素8对培养的人类肾小球系膜细胞增殖的影响

白细胞介素８（ＩＬ－８）如何影响肾小球细胞增殖仍不清楚,是否具有直接的促增殖作用亦认识不一。我们初步观察了ｒｈＩＬ－８在有和无中性粒细胞（ＰＭＮ）参与的两种情况下,对培养的人胎肾肾小球系膜细胞（ＭＣ）增殖的影响。 一、材料与方法 １．ＭＣ培养与鉴定：参照文献［１］。 ２．实验设计与分组：标记４块９６孔培养板分为１２ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ、９６ ｈ ４个时相点。每块孔板设计为Ａ、Ｂ组。Ａ组用于无ＰＭＮ参与的实验出组用于有ＰＭＮ参与的实验。Ａ、Ｂ组又各分４个小组：对照组、实验组１、实验组２、实验组３,每小…     

氧化低密度脂蛋白对大鼠肾脏系膜细胞增殖及LOX-1、TNF-α表达的影响

目的：应用MTT酶标分析法,检测在不同浓度、不同时长氧化低密度脂蛋白（ ox-LDL）干预下的大鼠肾小球系膜细胞（ RMC）的增殖情况以及不同浓度ox-LDL干预下LOX-1和TNF-α的表达,探讨其相互关系。方法：体外培养RMC,使用不同浓度ox-LDL在不同时间对RMC干预,经MTT法检测,并进行分组分析。用浓度为5μg/ml和50μg/ml的ox-LDL干预RMC 24 h,使用RT-PCR法和Western blot法检测LOX-1和TNF-α的mRNA和蛋白表达量,并进行分析比较。结果：Ox-LDL干预RMC 在时间点为24 h的结果显示,在1-30μg/ml范围内呈生长促进效应,浓度大于30μg/ml后呈生长抑制效应;干预48 h组对细胞效应趋势基本与作用24 h后一致,但生长抑制效应从30μg/ml开始;而72 h组,ox-LDL在各个浓度均显示出生长抑制效应。5μg/ml及50μg/ml浓度ox-LDL干预RMC后,均可使LOX-1和TNF-α的mRNA和蛋白表达升高,且50μg/ml较5μg/ml效果明显,结果差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：Ox-LDL对RMC增殖影响具有浓度及时间依赖性。较低及较高浓度ox-LDL均能导致RMC中LOX-1和TNF-α的表达增高,且浓度较高时效果更明显。其机制可能为ox-LDL导致LOX-1表达增多,引起炎症因子的产生和趋化,发生细胞损伤,提示脂质代谢紊乱在肾脏疾病中的重要作用。     

内皮素对人肾小球系膜细胞表达细胞粘附分子的影响

目的 探讨内皮素-1(ET1-1)对体外培养的人肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)的调节作用。方法 利用Northern杂交技术和细胞ELISA方法分别从mRNA和蛋白质两个水平观察ICAW-1和VCAM-1的变化。结果 在正常培养条件下,人肾小球系膜细胞仅低水平表达一定量的ICAM-1、VCAM-1的mRNA和蛋白质;ET-1(10~(-7)mol)刺激后,这两种细胞粘附分子的mRNA表达迅速上调,且随后其相应蛋白质表达也显著增加并呈时间依赖性。结论 提示ET-1对粘附分子表达的促进作用可能在传小球疾病的发生中具有重要意义。     

白细胞介素-13对肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨白细胞介素—13(IL—13)对肾小球系膜细胞(MC)增殖及其细胞周期的影响。方法：用甲基偶氮唑法(MTT)测定MC增殖，流式细胞术分析细胞周期。结果：IL—13在1ng／ml、5ng／ml、10ng／ml、100ng／ml浓度范围呈剂量依赖性抑制5％FCS培养的和脂多糖(LPS)诱导的MC增殖，抑制率分别为19．8％和29．23％、24．35％和37．05％、30．03％和46．6％、46．93％和55．23％。IL—13作用MC48h，使MC较多滞留于G1期，而S期细胞减少。结论：IL—13通过参与细胞周期的调控而抑制MC增殖。     

IL-6、IL-1和PDGF对大鼠肾小球系膜细胞生长的影响

目的：探讨白细胞介素－６（ＩＬ－６）、白细胞介素－１（ＩＬ－１）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对大鼠肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）增殖的影响。方法：采用改良的ＭＴＴ法和ＢｒｄＵ掺入法检测ＳＤ大鼠体外ＭｓＣ悬液中加入ＩＬ－６、ＩＬ－１及ＰＤＧＦ后１２ｈ及２４ｈ的增殖情况。分７组进行观察。结果：ＩＬ－６组、ＩＬ－１组和ＰＤＧＦ组１２ｈ及２４ｈ的光密度（ＯＤ值）与标记指数（ＬＩ）均为２％ＦＣＳ组也均高,但所有实验组均不能达２０％ＦＣＳ组的细胞增殖水平。联合应用双因子刺激１２ｈ及２４ｈ均未见明显的协同促增殖作用。结论：ＩＬ－６、ＩＬ－１及ＰＤＧＦ均能在一定程度上刺激大鼠肾小球ＭｓＣ增生。联合应用双因子刺激无明显的协同效应。     

高糖刺激对人THP-1巨噬细胞肝X受体和三磷酸腺苷结合盒转运子A1表达的作用

目的 探讨高糖对人THP-1巨噬细胞肝X受体（LXR）和三磷酸腺苷结合盒转运子A1（ABCA1）表达的影响。 方法 人THP-1单核细胞经佛波脂（PMA）诱导转化成巨噬细胞。用CD68检测巨噬细胞表面标志物表达。以不同浓度葡萄糖（5.6、11.1、22.2、33.3 mmol/L）和不同时间（0、0.5、2、6、12、24、48、72 h）刺激巨噬细胞,用实时荧光定量PCR法检测其LXRα、LXRβ、ABCA1 mRNA表达;Western 印迹法检测LXRα、LXRβ和ABCA1蛋白的表达,并分析其相互间作用。 结果 PMA诱导72 h后,TPH-1细胞CD68呈阳性表达。与正常浓度糖（5.6 mmol/L）刺激比较,高糖刺激24 h后,TPH-1巨噬细胞LXR和ABCA1 mRNA和蛋白表达均下调。高糖刺激30 min后, LXRα、LXRβ和ABCA1 mRNA和蛋白表达上调;2 h后开始下调,随着时间延长而逐渐减少。 结论 高糖可能通过抑制LXR和ABCA1的表达,参与了动脉粥样硬化的发生和发展。     

转化生长因子-β1对肾小球系膜细胞TRPC6表达的影响

目的：观察转化生长因子-β1（TGF-β1）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）瞬时受体势C6（TRPC6）表达的影响,并探讨糖尿病肾病（DN）的发病机制。方法：GMC予TGF—β1 10ng／ml刺激24h后,间接免疫荧光法检测GMC TRPC6的表达;免疫印迹法观察TRPC6的表达。结果：GMC存在TRPC6的表达,以细胞膜表达为主;TGF-β1刺激GMC可有TRPC6表达下调（P〈0．05）。结论：肾小球系膜细胞存在TRPC6的表达,TGF-β1刺激后TRPC6表达下调;TGF-β1可能通过下调TRPC6参与了DN的发病。