INF-γ和TGF-β1对视网膜色素上皮细胞端粒酶活性的影响

目的 探讨不同浓度的干扰素-γ(interferon-γ，INF-γ)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-βl，TGF—β1)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞端粒酶活性的影响。方法 使用不同浓度的INF-γ和TGF—βl处理RPE细胞24h后，采用端粒重复序列扩增法定性、定量检测上述细胞因子作用下的RPE细胞端粒酶活性。结果 随着上述细胞因子浓度的增加，RPE细胞端粒酶活性逐渐降低，且呈剂量依赖性，2种细胞因子具有协同作用。结论 INF-γ和TGF—βl对RPE细胞端粒酶活性具有抑制作用，细胞因子有可能成为治疗增生性玻璃体视网膜病变的新靶点。     

卡巴胆碱对人视网膜色素上皮细胞D407自分泌TGF-β2的调控

目的:研究卡巴胆碱对人视网膜色素上皮细胞株D407表达及分泌转化生长因子β2(transforming growth factor β2,TGF-β2)的影响。方法:常规培养D407细胞,分为实验组,加入卡巴胆碱10-8~10-4mol/L;空白组:不加药物。处理后2,4,8,16,24,48h采用ELISA法检测上清液中TGF-β2的含量,分析时效与量效关系;采用细胞免疫化学法检测卡巴胆碱孵育24h后D407细胞TGF-β2蛋白质的表达,运用图像分析软件Image-ProPlus6.0行半定量分析。统计学方法采用单因素方差分析。结果:空白组细胞上清液中TGF-β2含量于培养4h后开始上升,24h达586.9±28.5ng/L,各时间点比较有统计学意义(F=86.59,P<0.01)。实验组细胞上清液中TGF-β2含量较空白组增加,随孵育时间的延长该效应逐渐明显,各浓度(10-8~10-4mol/L)组内比较均有统计学意义(F=65.21,183.52,237.07,250.08,344.40;P<0.01);各干预时间点(2,4,8,16,24,48h)实验组细胞上清液中TGF-β2含量随卡巴胆碱浓度升高逐渐增加,组内比较均有统计学意义(F=191.19,293.32,444.26,473.21,315.83,329.08;P<0.01)。孵育24h后实验组D407细胞TGF-β2蛋白质的表达较空白组增高(F=26.11,P<0.01)。结论:卡巴胆碱可促进人视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β2。     

TGF-β对体外培养人胚视网膜色素上皮细胞的影响

目的 研究转化生长因子-β（TGF-β）对体外培养人胚视网膜色素上皮（RPE）细胞的影响，从细胞生物学水平和分子生物学水平探讨近视眼的发病机制。方法 外源性TGF-β刺激人RPE细胞后，通过绘制生长曲线、MTT法检测细胞活性及观察透射电镜研究其细胞自身的生长情况；采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定其分泌HGF、bFGF和TGF-β的量；采用RT-PCR法检测其细胞表达HGF的情况，从而分析外源性TGF-β对体外培养的RPE细胞的影响。结果不同质量浓度的TGF-β均可抑制人胚RPE细胞的生长，随时间的延长作用更加明显；TGF-β可使RPE细胞超微结构发生变化；ELISA结果显示TGF-β对其他两种因子的分泌均有抑制作用，但对自身有促进作用，为正反馈调节；同时可明显抑制RPE细胞内HGF的表达。结论 TGF-β可影响RPE细胞增生、改变超微结构及抑制HGF的表达。     

卡巴胆碱对人视网膜色素上皮细胞转化生长因子β_2表达的调控

目的研究卡巴胆碱对人视网膜色素上皮（RPE）细胞株D407表达转化生长因子β2（TGF-β2）的调控,进而阐明胆碱能药物在近视眼巩膜重塑中的作用。方法常规培养D407细胞,药物干预前换用无血清培养基培养24h。将传代细胞分为实验组和空白组,实验组分别加入1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4mol/L卡巴胆碱,空白组不加药物。于处理后2、4、8、16、24、48h分别采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Westernblot法检测细胞中TGF-β2mRNA及TGF-β2蛋白的表达,分析时效与量效关系。结果空白组细胞TGF-β2mRNA、蛋白质表达水平恒定。实验组D407细胞中TGF-β2mRNA的表达随卡巴胆碱作用时间的延长而逐渐升高,差异有统计学意义（F=4455.148,P〈0.01）;且随卡巴胆碱浓度的升高逐渐增加,各组的总体比较差异有统计学意义（F=1102.240,P〈0.01）。卡巴胆碱浓度与干预时间对TGF-β2mRNA表达的影响存在交互作用（F=249.609,P〈0.01）。实验组D407细胞中TGF-β2蛋白的表达随时间延长而逐渐升高,各时间点的总体比较差异有统计学意义（F=2619.21,P〈0.01）,不同浓度卡巴胆碱组TGF-β2蛋白的表达总体比较差异有统计学意义（F=2918.62,P〈0.01）,卡巴胆碱浓度与干预时相TGF-β2蛋白表达的影响存在交互作用（F=186.02,P〈0.01）。结论 RPE细胞可表达TGF-β2,卡巴胆碱可以浓度和时间依赖的方式调控RPE细胞中TGF-β2的表达。     

补体C5b-9复合物对人视网膜色素上皮细胞TGF-β_2表达的影响

目的 观察补体C5b-9复合物对人视网膜色素上皮(RPE)细胞TGF-β2表达的影响.方法 采用大鼠血清接触兔红细胞提取补体C5b-9复合物.提纯、鉴定后的补体C5b-9复合物作用于体外培养的人RPE细胞,用半定量RT-PCR法测量TGF-β2表达水平.结果 补体C5b-9复合物刺激质量浓度为80μg/mL和40μg/mL时,光学显微镜示REP细胞结构破坏;低于或等于20μg/mL时,光学显微镜未见REP细胞结构明显改变.20μg/mL补体C5b-9复合物作用RPE细胞4h后,TGF-β2 mRNA表达水平可提高2倍.结论 补体C5b-9复合物对RPE细胞的破坏作用有溶破量和亚溶破量之分,亚溶破量可诱导RPE细胞TGF-β2表达上调.     

不同波长的光照射对视网膜色素上皮细胞生长及其分泌生长因子的影响

背景近视的发病机制是眼科研究的一个热点,近年来发现,由神经视网膜细胞及视网膜色素上皮（RPE）细胞分泌的细胞因子可能参与近视的发病,RPE细胞因子的分泌功能受光照射的影响,而RPE细胞对不同波长光的吸光度（A）值是不一样的。目的研究不同波长的光照射对人胚RPE细胞增生及其分泌肝细胞生长因子（HGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bVGF）和转化生长因子-β（TGF—β）的影响,从细胞水平和分子生物学水平探讨近视的发病机制。方法第4～5代人胚RPE细胞置于白光、波长为775nm的红光及波长为480nm的蓝光下照射和培养48h,MTT比色法检测各组人RPE细胞的增生情况,并用透射电子显微镜观察各组传代细胞的超微结构。分别于光照射后12、24、48、72h收集培养液,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定培养基中HGF、bFGF和TGF—β的质量浓度。用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测不同波长光照射24h后RPE细胞中HGFmRNA的表达水平,分析蓝光、红光、白光照射对体外培养RPE细胞的影响。结果蓝光组、红光组、白光组和对照组RPE细胞的A490值分别为0．0218±0．0014、0．0353±0．0025、0．0371±0．0024和0．0445-0．0046。4个组中RPE细胞的增生速度明显不同,差异有统计学意义（F=12．579,P〈0．05）,蓝光组和红光组A490值均明显低于对照组,差异均有统计学意义（t=2．043、t=2．024,P〈0．05）。ELISA结果显示人胚RPE细胞可以分泌HGF、bFGF和TGF-β,在受到不同波长的光照射后,不同时间点HGF、bFGF和TGF—β的分泌量不同,随着时间的变化,4个组HGF、TGF—β的质量浓度均逐渐升高,二者在72h和48h均高于12h（P〈0．05）,红光组与蓝光组更为明显,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。各波长组bFGF的质量浓度随着光照时间的延长在RPE细胞中的表达均逐渐降低,72h与12h时相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR结果显示,不同波长光照射后RPE细胞中HGFmRNA的表达水平不同,蓝光下培养的RPE细胞HGFmRNA表达量最少,白光组、红光组和蓝光组HGFmRNA的表达量（A490）与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。透射电子显微镜下红光组、白光组人胚RPE细胞与对照组相比超微结构均无明显变化,但蓝光组RPE细胞核染色质稀疏变淡,细胞器减少,细胞界膜不清或消失。结论不同波长的光照射可影响人RPE细胞的增生及其分泌HGF、bFGF和TGF—β的功能,提示近视的形成可能与不同波长的光相互作用有关。     

端粒酶相关因素对培养的视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的探讨端粒酶相关因素对培养的视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞增生的影响。方法用常规培养法培养人RPE细胞后，分别用端粒酶抑制剂二甲基亚砜、热休克蛋白90抑制剂、无血清培养、端粒酶反义寡核苷酸、P16反义寡核苷酸处理，然后提取细胞mRNA，PCR扩增后电泳检测端粒酶mRNA表达。然后用MTT法检测无血清培养组、端粒酶反义寡核苷酸处理组、P16反义寡核苷酸处理组与常规培养组细胞增生状况。结果二甲基亚砜组、热休克蛋白90抑制剂组、无血清培养组、端粒酶反叉寡核苷酸处理组，端粒酶mRNA表达受到抑制，凝胶分析系统软件分析结果电泳H值分别为80、116、90、81，而P16反义寡核苷酸处理组端粒酶mRNA表达增强，电泳H值为255。常规培养组H值为162，阴性对照组为0，阳性对照组（胃癌细胞）为255。MTT法显示：无血清培养组，端粒酶反义寡核苷酸处理组细胞活性下降，细胞生长抑制率上升。而P16反义寡核苷酸处理组细胞活性上升，细胞生长抑制率下降。结论端粒酶抑制剂二甲基亚砜、热休克蛋白90抑制剂、无血清培养、端粒酶反义寡核苷酸可抑制RPE细胞端粒酶mRNA表达，从而抑制RPE细胞增生；P16反义寡核苷酸可促进RPE细胞端粒酶mRNA表达，从而促进RPE细胞增生。     

不同光照形式对豚鼠视网膜色素上皮细胞TGF-β2表达的影响

目的：探讨不同光照形式对豚鼠视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞表达转化生长因子-β₂(transforming growth factor β₂,TGF-β₂)的影响。

方法：幼年健康豚鼠(2周龄)10只,体外培养RPE细胞,传代、鉴定后,将细胞分为聚焦光组、离焦光组、平行光组和空白对照组,前3组分别接受聚焦光、离焦光(均为将平行光经透镜转化)和平行光照射,空白对照组不接受照射。于照射后24h采用免疫细胞化学法、实时荧光定量PCR法(real-time fluorescence quantitative PCR, RTFQ-PCR)检测细胞中TGF-β₂及TGF-β₂ mRNA的表达,分析不同光照形式与效应的关系。

结果：免疫细胞化学法显示各组TGF-β₂表达均为阳性,病理VISTA图像分析软件测量单位面积中平均光密度(optical density,OD)值进行半定量分析,聚焦光组明显高于其它各组,组间比较有统计学差异(F=11.08,P<0.05); RTFQ-PCR法显示,聚焦光组TGF-β₂mRNA表达水平较其它各组明显增加,组间比较有统计学差异(F=133.01,P<0.05)。

结论：不同形式光线可影响豚鼠RPE细胞TGF-β₂表达,以聚焦光最明显。     

缓激肽对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导视网膜色素上皮细胞发生上皮间充质转化的影响

目的　制作增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）细胞模型,研究缓激肽（bradykinin,BK）对视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞发生EMT的影响,并探讨BK对PVR的影响机制。方法　体外培养人RPE细胞株ARPE-19细胞,采用不同浓度转化生长因子-β1（transforming growth factor- β1,TGF- β1）分别作用于ARPE-19细胞24 h、48 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用CCK-8检测细胞增殖情况,确定TGF-β1浓度及作用时间;利用Western blot和细胞免疫荧光检测EMT标志蛋白E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和波形蛋白（Viminten）表达情况;细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移能力。同时采用Western blot检测TGF/Smad通路下游pSmad3和Smad7的表达。结果　TGF- β1刺激ARPE-19细胞后可以成功诱导EMT体外细胞模型。当TGF-β1浓度为10 μg·L^-1、作用时间为48 h时,细胞增殖最明显。BK在TGF- β1诱导的EMT中可以降低α-SMA、Viminten的表达,升高E-钙黏素的表达并且降低细胞迁移能力。这些影响能被BK-2受体拮抗剂HOE-140逆转。TGF-β1诱导ARPE-19细胞发生EMT时,pSmad3表达量升高;TGF-β1刺激前给予BK刺激,pSmad3表达量减少;加入BK前预敷HOE-140,然后给予TGF-β1刺激,BK作用减弱,pSmad3表达量升高。Smad7表达趋势与pSmad3表达趋势相反。结论　10 μg·L^-1 TGF-β1可导致ARPE-19细胞发生EMT。BK通过TGF-/Smad信号通路上调Smad 7的表达、下调pSmad 3的表达,从而逆转TGF-β1诱导的EMT。提示BK可能是一种新的、有效的治疗PVR的方法。     

缺氧和高糖对视网膜色素上皮细胞增生及VEGF、TGF-β1表达的影响

目的 探究缺氧、高糖环境对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞生长、增生及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达变化的影响.方法 采用酶消化法进行C57小鼠RPE细胞的体外原代培养.通过组织形态学观察和免疫化学染色对培养的RPE细胞进行鉴定.实验缺氧组:在DMEM培养液中加入CoCl2,使其浓度分别为50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1;实验高糖组:在DMEM培养液中加入D-葡萄糖,使其浓度分别为15 mmol·L-1、30 mmol·L-1、45 mmol·L-1.分别向培养的RPE细胞中加入上述培养液,共6组,每组3份;正常对照组加入含5.5 mmol·L-1葡萄糖、不含CoCl2的培养液.观察各组细胞在不同培养条件下的活力、倍增时间及增生情况.采用ELISA法检测各组细胞在培养不同时间后(24 h、48 h、72 h)上清液中VEGF及TGF-β1表达量的变化.结果原代培养及传代早期的RPE细胞生长较为旺盛;在缺氧和高糖培养条件下所培养的细胞活力和分裂次数均较正常对照组有所降低或减少,而倍增时间较正常对照组延长.在缺氧和高糖培养条件下培养24 h、48 h、72 h后,细胞上清液中VEGF和TGF-β1表达量均较正常对照组高(P<0.05);当CoCl2浓度为100 μmol·L-1和D-葡萄糖浓度为30mmol·L-1时,VEGF和TGF-β1在24 h、48 h、72 h表达均高于其他浓度,缺氧状态下48 h表达量分别为(43.28±0.88)ng·L-1和(8.90±1.38)ng·L-1,高糖状态下分别为(39.76±0.56)ng·L-1和(8.81±0.92)ng·L-1;缺氧组2种细胞因子表达量在48 h达到高峰,而高糖组在72 h达到高峰.结论 应用酶联合消化法可获得纯度较高的体外C57小鼠培养RPE细胞;缺氧和高糖状态可对RPE细胞增生起到明显抑制作用,但能够明显上调RPE细胞的VEGF、TGF-β1表达量.     

槲皮素对转化生长因子β1介导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化过程的影响

目的 探讨槲皮素对转化生长因子β1(TGF-β1)介导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、迁移、I型胶原蛋白含量、上皮-间质转化相关标志物表达以及Smad信号通路的影响.方法 取人RPE细胞系(ARPE-19细胞)进行培养,依据干预药物浓度筛选结果设置4个组:对照组、10.0 mg·L-1 TGF-β1组、10.0 m...     

视网膜色素上皮细胞 LncRNA MEG3在不同葡萄糖浓度下的表达情况及对VEGF和 TGF-β1表达的影响

目的　探讨长链非编码RNA母系表达基因3（LncRNA MEG3）在不同浓度葡萄糖下表达情况及对血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。 方法　按照不同浓度d-葡萄糖培养ARPE-19细胞,随机分为5 mmol·L^-1 d-葡萄糖组、15 mmol·L^-1 d-葡萄糖组、30 mmol·L^-1d-葡萄糖组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测各组ARPE-19细胞LncRNA MEG3、VEGF mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达水平。ARPE-19细胞转染PCDNA-MEG3及PCDNA-NC质粒,建立LncRNA MEG3过表达ARPE-19细胞及转染空质粒的ARPE-19细胞。以含30 mmol·L^-1d-葡萄糖的DMEM分别培养以下各组ARPE-19细胞:LncRNA MEG3过表达ARPE-19细胞(O组);转染空质粒的ARPE-19细胞（NC组）;加入PBS的正常ARPE-19细胞(G组);同时以含5 mmol·L^-1d-葡萄糖的DMEM培养正常ARPE-19细胞（C组）;以上各组细胞培养24 h后,采用RT-qPCR法及Western blot法检测各组ARPE-19细胞VEGF mRNA和VEGF蛋白、TGF-β1 mRNA和TGF-β1蛋白的相对表达水平。 结果　与5 mmol·L^-1 d-葡萄糖组比较,15 mmol·L^-1 d-葡萄糖组和30 mmol·L^-1 d-葡萄糖组ARPE-19细胞LncRNA MEG3相对表达水平降低,VEGF mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达水平升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与15 mmol·L^-1 d-葡萄糖组比较,30 mmol·L^-1 d-葡萄糖组ARPE-19细胞LncRNA MEG3相对表达水平降低,VEGF mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达水平升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与G组和NC组比较,O组ARPE-19细胞VEGF mRNA和VEGF蛋白、TGF-β1 mRNA和TGF-β1蛋白相对表达水平均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论　高糖下调ARPE-19细胞LncRNA MEG3的表达,上调VEGF和 TGF-β1的表达。LncRNA MEG3过表达降低高糖诱导的VEGF和 TGF-β1表达的升高。LncRNA MEG3可能通过抑制VEGF和 TGF-β1的表达调节糖尿病视网膜病变的发展。     

骨形态发生蛋白-6对转化生长因子-β2所致视网膜色素上皮细胞迁移的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白-6(BMP-6)对转化生长因子-β2(TGF-β2)所致视网膜色素上皮(RPE)细胞迁移的影响.方法 RPE细胞常规培养后,用5μg·L-1 TGF-β2处理48 h,Western blot检测细胞中BMP-6蛋白水平的变化,Transwell法检测细胞迁移能力变化.随后,筛选BMP-6 s...     

ALK5抑制剂对转化生长因子-β1（TGF-β1）致视网膜色素上皮细胞纤维化的干预作用

目的　探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta1，TGF-β1）对人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial，RPE）细胞向成纤维细胞转化的影响，及活化素受体样激酶5（activated receptor kinase 5，ALK5）抑制剂（SB-431542）对这一影响的干预作用。方法　体外培养人RPE细胞，随机分为对照组、TGF-β1处理组、TGF-β1+SB-431542处理组、SB-431542处理组。对照组不做任何处理，其余三组分别用10 μg·L^-1 TGF-β1、10 μg·L^-1 TGF-β1+30 μmol·L^-1 SB-431542、30 μmol·L^-1 SB-431542处理细胞24 h。MTT法检测各组RPE细胞增殖率；划痕实验观察各组处理后0 h、12 h、24 h RPE细胞迁移情况；免疫荧光法检测各组细胞ALK5蛋白的分布和表达；Western blot法检测各组ALK5、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、Ⅰ型胶原（collagen typeⅠ，ColⅠ）以及纤维粘连素（fibronectin，FN）蛋白的表达。结果　与对照组相比，TGF-β1作用于RPE细胞24 h后，可改变RPE细胞表型，使其呈成纤维细胞样外观，并明显促进RPE细胞增殖和迁移。10.0 g·L^-1 TGF-β1作用24 h后RPE细胞增殖率为对照组的（1.33±0.08）倍，30 μmol·L^-1 SB-431542作用24 h后RPE细胞增殖率为10.0 g·L^-1 TGF-β1处理组的（67.77±6.78）%。经TGF-β1作用24 h后RPE细胞内ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白的表达显著上调，分别是对照组的（3.69±0.37）倍、（1.76±0.05）倍、（2.58±0.18）倍、（1.86±0.11）倍、（1.74±0.08）倍；SB-431542可逆转TGF-β1诱导的ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白表达上调，分别是TGF-β1处理组的（67.73±5.15）%、（71.71±3.50）%、（79.87±0.05）%、（63.59±3.16）%、（83.07±2.31）%，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。结论　TGF-β1可促进RPE细胞增殖、迁移，向成纤维细胞转化，并能显著上调RPE细胞内ALK5、VEGF、α-SMA、ColⅠ及FN蛋白的表达；SB-431542可通过抑制TGF-β1的作用而抑制RPE细胞的纤维化。     

潜伏转化生长因子β结合蛋白2(LTBP2)对氧化型低密度脂蛋白诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响

目的 探索潜伏转化生长因子 β结合蛋白2(LTBP2)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人视网膜色素上皮(ARPE)细胞氧化损伤的影响.方法 0 mg·L-1、50 mg·L-1、100 mg·L-1和200 mg·L-1 ox-LDL处理ARPE-19细胞,CCK-8试剂盒和细胞凋亡检测试剂盒检测细胞活力和凋...     

全反视黄酸对豚鼠视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β2及细胞内第二信使IP3和cAMP的影响

目的 观察全反视黄酸(ATRA)对培养的豚鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖以及分泌转化生长因子β2(TGF-β2)的影响,并观察细胞内第二信使cAMP和IP3的含量变化.方法 培养原代豚鼠RPE细胞,传2代后用于实验.实验分3组进行.第1组用不同浓度ATRA(5×10-6、10×10-6、40×10-6 mol/L)作用于豚鼠RPE细胞,24 h后用MTY法检测细胞增殖情况.第2组加入10×10-6 mol/L的ATRA.分别于2、4、6、8、16 h后收集培养液,用ELISA方法检测RPE细胞TGF-β2的分泌量.第3组以10×10-6 mol/L的ATRA作用于豚鼠RPE细胞,分别于0 min、5 min、30 min、2 h,6 h后收集细胞裂解液,行放射免疫和ELISA方法检测细胞内cAMP和IP3的含量变化.每组均以等量溶剂DMSO作为对照.对不同浓度ATRA组间MTT结果行方差分析,其余实验组与对照组间比较行配对t检验.结果 5×10-6、10×10-6、40×10-6 mol/L ATRA作用RPE细胞24 h后,OD值分别为0.099±0.008、0.117±0.008、0.0871±0.011.与对照组(0.103±0.017)比较,40×10-6 mol/L ATRA作用时OD值显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),其他浓度组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).10×10-6 mol/L的ATRA作用RPE细胞后,TGF-β2的分泌量在作用2、4、6 h时较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).8 h时无明显变化,16 h时降低(P<0.05).10×10-6 mol/L的ATRA作用于豚鼠RPE细胞后,IP3的含量在各时间点均较对照显著下降,且随时间的延长下降越明显;cAMP的含量只有在作用30 min和2 h时升高,其他时同变化不明显.结论 浓度为40×10-6 mol/L的ATRA对豚鼠RPE细胞的增殖有抑制作用.10×10-6 mol/L的ATRA作用RPE细胞后,TGF-β2的分泌量在6 h内增加,之后随时间延长而降低.ATRA对RPE细胞的作用可能与IP3的下降有关.     

缺氧对人视网膜色素上皮细胞增生和VEGF表达的影响

目的　观察缺氧对培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelial,RPE)细胞增生和血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响。 方法将培养的人RPE细胞接种于 2 4孔板 ,分别放入正常和缺氧环境中培养 ,于 1、2、3、4、5d后用四甲基偶氮唑蓝 [3 ( 4 ,5 dimethylthiazole 2yl) 2 ,5 diphenyltetrazoliumbromide ,MTT]比色法检测RPE细胞的增生 ,于 6、12、2 4h后用免疫组织化学法检测RPE细胞对VEGF的表达 ,经计算机图像处理 ,定量分析。结果　缺氧组的MTT实验吸光度 (A值 )均高于正常组 (P <0 .0 1) ;抗VEGF抗体染色 ,缺氧组明显强于正常组 (P <0 .0 5 )。结论缺氧可促进RPE细胞的增生及其对VEGF的表达 ,控制RPE细胞的活动是抑制脉络膜新生血管生成的关键     

TGF-β1诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡过程中Survivin基因的表达及意义

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡过程中Survivin基因的表达及意义。方法用免疫组织化学染色法检测人RPE细胞Survivin蛋白的表达;用AnnexinVFITC标记法测定TGFβ1作用下的人RPE细胞凋亡发生率;用RTPCR方法检测不同质量浓度TGFβ1作用下人RPE细胞Survivin基因的表达。结果免疫化学染色法显示:人RPE细胞表达Survivin基因;AnnexinVFITC标记法检测结果显示:人RPE细胞的凋亡率随着TGFβ1质量浓度的升高而增高;RTPCR结果显示:随着TGFβ1质量浓度的升高,Survivin基因的表达逐渐降低。结论Survivin基因在人RPE细胞的凋亡过程中起着非常重要的作用。     

PI3K/Akt信号通路介导的胰岛素促RPE细胞增生及分泌转化生长因子β2作用

背景 胰岛素具有促进近视发生的作用,胰岛素受体已被证实存在于视网膜色素上皮(RPE)细胞上,转化生长因子β2(TGF-β2)是RPE细胞分泌的重要的近视信号因子之一.目的 研究胰岛素是否通过磷脂酰肌醇-3-羟基酶/苏氨酸激酶(PI3K/Akt)通路促进RPE细胞增生及分泌TGF-β2.方法 使用含质量分数10％胎牛血清的DMEM培养基常规培养人RPE细胞株ARPE-19细胞,分别将10×103 U(商品单位)/ml胰岛素、LY294002、10× 103 U/ml胰岛素+LY294002、Wortmanin和10× 103 U/ml胰岛素+Wortmanin20 μmol/L各20μl加入培养基,另设常规培养的细胞作为空白对照.作用后48 h,采用MTS法检测各组RPE细胞的增生情况,采用ELISA法检测各组RPE细胞上清液中TGF-β2质量浓度,以评估细胞分泌TGF-β2的能力;各种药物作用后1h和2h,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测各组细胞中TGF-β2mRNA的相对表达量.结果 MTS结果显示,胰岛素+LY294002组RPE细胞的增生值(A值)明显低于胰岛素组(0.75±0.03 versus0.98±0.04),差异有统计学意义(P＜0.05),而胰岛素+Wortmanin组RPE细胞增生与胰岛素组相比,差异无统计学意义(0.97±0.07 versus 0.98±0.04,P＞0.05).ELISA法检测结果显示,胰岛素+LY294002组和胰岛素+Wortmanin组RPE细胞上清液中TGF-β2质量浓度分别为(11.59±2.85)pg/ml和(49.16±10.94) pg/ml,明显低于胰岛素组的(548.50±35.18) pg/ml,差异均有统计学意义(P＜0.05),且胰岛素+LY294002组细胞上清液中TGF-β2质量浓度的下降值明显高于胰岛素+Wortmanin组,差异有统计学意义(t=8.131,P=0.000).RT-PCR结果显示,药物作用后1h和2h,胰岛素+LY294002组和胰岛素+Wortmanin组细胞中TGF-β2mRNA的相对表达量均明显低于胰岛素组,差异均有统计学意义(P＜0.05),胰岛素+ LY294002组细胞中TGF-β2mRNA相对表达量的下降程度稍大于胰岛素+Wortmanin组,作用后1h差异有统计学意义(t=4.176,P=0.014),但作用后2h差异无统计学意义(t=0.756,P=0.492).结论 胰岛素可以通过PI3 K/Akt途径促进RPE细胞增生,并促进RPE细胞分泌TGF-β2以进行信号传递,可能是胰岛素促进近视发生的机制之一.     

TGF-β1对RPE细胞bcl-2/Fas mRNA和Caspase-3表达的影响

目的观察转化生长因子-β1（transforming grawthfactor-β1，TGF-β1）诱导人视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium，RPE）凋亡的作用机制。方法使用逆转录多聚酶链反应检测不同浓度TGF-β1作用下的人RPE细胞中凋亡相关基因bel-2和Fas mRNA的表达。使用Western-Blot蛋白印迹法检测不同浓度TGF-β1处理过的PRE细胞中Caspase-3蛋白的表达。结果逆转录多聚酶链反应正示，随着TGF-β1岛浓度的增高，人RPE细胞中bcl-2mRNA表达降低，Fas mRNA的表达逐渐增高；Western-Blot结果显示。随着TGF-β1浓度的增高，Caspase-3蛋白表达逐渐增高。结论TGF-β1可上调RPE细胞表面Fas基因的表达，从而激活Caspase-3的活性而诱导RPE细胞凋亡，Caspase-3在RPE细胞凋亡过程中起着非常重要的作用。[眼科新进展2006；26（3）：194-197]