浓缩铀诱发PC12细胞的凋亡

细胞凋亡是一种正常生理条件下的程序性死亡和外来因素的细胞自杀过程 ,是细胞针对所处环境因素的特定改变所产生的应答 ,与细胞生长一样 ,在机体中承担着重要调节作用[1 ] 。大剂量照射产生细胞坏死 ,但是发生细胞凋亡的剂量远远低于细胞快速死亡所需的剂量。研究辐射诱发细胞凋亡的量效、时相关系以及阐明细胞凋亡和有关的影响因素具有极为重要临床应用意义[2 ] 。随着α辐射体在核燃料和工业、医疗等方面的应用[3] ,由放射性核素所产生的内照射危害已成为一个具有现实意义的重要课题。笔者研究了浓缩铀诱发神经元样细胞凋亡的时相关系。…     

组织蛋白酶B在β-淀粉样蛋白刺激星形胶质细胞炎性反应中的作用

目的：研究组织蛋白酶B（Cathepsin B,CB）与β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein,Aβ）激活星形胶质细胞诱导炎性反应的关系。方法：应用免疫细胞化学方法鉴定体外培养的星形胶质细胞;四唑盐法检测细胞活性,加入不同浓度溶解状态的Aβ1-40后观察细胞形态学改变,western blot法测定细胞上清CB水平。结果：在5~60μmol/L溶解状态的Aβ1-40作用24 h的条件下,星形胶质细胞的活性没有受到影响,其细胞形态无明显变化,但是随着时间的延长星形胶质细胞逐渐出现肿胀、坏死。40~60μmol/L的溶解状态Aβ1-40诱导的星形胶质细胞上清中检测到CB。结论：Aβ1-40可激活星形胶质细胞,诱导其释放CB,提示CB的神经毒性作用可能是通过诱导神经细胞凋亡实现的。     

阿魏酸钠对抗Aβ_（25-35）诱导的鼠神经元凋亡作用研究

目的探讨阿魏酸钠对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）通过谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡的影响。方法 培养的皮层神经元分别与谷氨酸（20μmol/L）、Aβ25-35（5μmol/L）、Aβ25-35（5μmol/L）＋谷氨酸（20μmol/L）孵育,采用Hoechst 33258荧光染色法分析神经细胞凋亡;然后用谷氨酸（50μmol/L）诱导神经元凋亡,采用荧光染色法和Western blot观察阿魏酸钠的保护作用。结果单独应用Aβ25-35（5μmol/L）和单独加入谷氨酸（20μmol/L）引起的皮层神经元凋亡率与对照组无明显差异;Aβ25-35与皮层神经元共同孵育5天,接着用谷氨酸处理24h,细胞凋亡率从正常的9.2%±1.5%增加到43%±8%;阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞凋亡百分比至21%±5%,并对抗谷氨酸引起的Bcl-2蛋白表达的降低。结论阿魏酸钠能够减弱Aβ25-35提高谷氨酸毒性诱导的鼠皮层神经元凋亡。     

广藿香醇对β-淀粉样蛋白神经毒性的抑制作用

目的研究雌激素受体卢亚型（estrogen receptor β,ERβ）选择性激动剂广藿香醇（patchouli alcohol,PA）对β-淀粉样蛋白（β-amyloidpe ptide,Aβ）片段神经毒性的体外抑制作用。方法Aβ25-35位氨基酸片段（Aβ25-35）作用于人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）之前不同浓度PA预防给药,荧光探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平和细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋];）,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果PA（0．05、0．5、5μg·ml^-1）能够抑制Aβ25-35引起的细胞内ROS水平和[Ca^2＋];升高,使细胞凋亡减少。结论PA对Aβ25-35的神经毒性具有抑制作用。     

β淀粉样蛋白显像剂2-(4'-N-11C-甲胺苯基)-6-羟基苯并噻唑的研究

目的 用改良法合成β淀粉样蛋白(AB)显像剂2-(4'-N-11C-甲胺苯基)-6-羟基苯并噻唑(N-11CH3-6-OH-BTA-1),并评价其生物学性质.方法 采用改良法合成N-11CH3-6-OH-BTA-1,即"C-CH3-Triflate与1～2 mg的6-OH-BTA4)(前体)丙酮溶液在-20℃下捕获,80℃反应,再经高效液相色谱仪(HPLC)纯化,固相萃取分离.同时用常规法合成N-11CH3-6-OH-BTA-1,比较2种方法的合成效率.研究NH正常小鼠体内N-11CH3-6-OH-BTA-1的生物学分布.选阿尔茨海默病(AD)患者1例,健康志愿者1名,研究N-11CH-6-OH-BTA-1在其体内的摄取及清除.结果 改良法的不校正合成效率为29.8%(合成次数n=22),与常规法(30.2%,合成次数n=3)接近,但前体量<1 mg,效率下降至14%.改良法产品放化纯>95%,比活度为18.0 TBq/mmol.NH小鼠脑摄取N-11CH3-6-OH-BTA-1较多,2 min每克组织百分注射剂量率(%ID/g)达(5.46±1.06)%ID/g;清除快,30 min时为(0.22±0.02)%ID/g.AD患者在注射N-11CH3-6-OH-BTA-1后45 min时,颞叶及枕叶有明显的放射性滞留,而健康志愿者45 min时脑内放射性基本清除.结论 改良法合成N-11CH3-6-OH-BTA-1可降低前体用量.N-11CH3-6-OH-BTA-1有可能成为临床AD诊断及治疗中评价Aβ分布的显像剂.     

脑红蛋白减轻硝普钠诱导的PC12细胞损伤

目的:探讨脑红蛋白(NGB)对硝普钠(SNP)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法:利用一氧化氮(NO)供体——硝普钠诱导制备NO损伤细胞模型,通过转染真核表达载体方式在PC12细胞中过表达NGB,采用Western印迹方法检测NGB表达水平,采用RT-PCR方法检测细胞内bcl-2基因的表达变化,并检测细胞活性(MTT法)、LDH释放量和胞内胞外NO含量.结果:过表达NGB可提高PC12细胞的存活率,增加bcl-2基因的表达,但不改变胞内、外NO的含量.结论:NGB可保护硝普钠诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与增加抗凋亡基因bcl-2的表达有关.     

对抗β-淀粉样蛋白神经毒性药物治疗阿尔茨海默病研究进展

本综述对抗β-淀粉样蛋白神经毒性药物治疗阿尔茨海默病研究进展情况。用于阿尔茨海默病治疗药物较多，本主要对抗氧化剂及自由基清除剂、阻止钙机能失调药物、减弱谷氨酸兴奋性毒性的药物、调节N0产生药物、对抗脑血管机能衰退药物、阻止神经元凋亡药物、对抗中枢炎性反应药物、乙酰胆碱酯酶抑制剂、干扰Aβ产生量药物、防止Aβ斑形成药物、神经营养和生长因子等进行报道和评述。虽然在研的治疗阿尔茨海默病药物不少，但是，距离实际应用仍有较大差距，仍需深入地研究。     

银杏叶提取物对Aβ_（25-35）诱导的神经细胞毒性的防治作用

目的探讨银杏叶提取物对Aβ25-35诱导体外培养神经细胞毒性的防治作用。方法 培养大鼠大脑皮质神经元细胞,构建AD细胞模型,制模前后加用银杏叶提取物（EGb）干预,四甲基噻唑蓝比色法（MTT）测定神经细胞活力,West-ern印迹分析法测Caspase3、Bcl-2、Bax表达。结果 EGb显著提高预防组细胞活力（P〈0.01）,增强预防组及治疗组Bcl-2表达（P〈0.01）,明显抑制预防组及治疗组Caspase3、Bax表达（P〈0.01）。结论 EGb可有效的对抗Aβ25-35的神经毒性作用,抑制细胞凋亡。     

β-淀粉样蛋白的特异性显像剂及研究进展

β-淀粉样蛋白(Aβ)为阿尔茨海默病(AD)老年斑(SP)的主要核心成分，是神经退行性变的重要病理特征之一。Glenner和wong等于1984年将其分离和序列化，其结构是淀粉样前体蛋白(APP)在加工修饰过程中经不同剪切方式形成、由39—43个氨基酸残基组成的疏水非糖基化多肽，在异常神经轴突周围以淀粉样纤维出现(多为Aβ40与Aβ42)，可在细胞内外沉积，形成片层聚合物，     

持续性压力对PC12细胞增殖和细胞骨架蛋白表达的研究

 目的 研究持续性压力对PC12细胞增殖和细胞骨架蛋白表达的影响.方法 利用自制压力可控性细胞损伤装置,对PC12细胞分别施加0.1、0.3、0.5 mPa的持续压力,且在不同压力值作用下分别持续加压10、30、60 min,应用MTT法和免疫组化染色法分析不同压力值及持续时间对PC12细胞增殖和细胞骨架蛋白表达的影响.结果 正常PC12细胞呈上皮样细胞生长,表现出神经细胞特性.当加压损伤后,PC12细胞出现凋亡、坏死现象.对照组MTT结果显示,PC12细胞的OD值随观察期延长而逐渐升高;而加压组中,当压力≥0.3 mPa、持续时间≥30 min后的细胞增殖显著受抑(P<0.05).β-tubulinⅢ免疫组化染色结果显示0.5 mPa压力作用10 min后,细胞骨架蛋白β-tubulinⅢ逐渐断裂降解,且降解程度随持续作用时间的延长而增强.结论 在急性压迫性脊髓损伤中,早期神经细胞增殖受限和β-tubulinⅢ蛋白降解,可随压力值和持续时间增加而增强,这种现象可能参与了ASCI后机械信号转变为生物学信号的过程.     

阿尔茨海默病脑内β-淀粉样蛋白沉积与血液β-淀粉样蛋白的相关性研究

目的探讨基于体素阿尔茨海默病(AD)PET显像的β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积程度与血液生物标志物Aβ间的相关性。方法回顾性分析2015年1月至2018年12月间陆军军医大学大坪医院经临床诊断为AD并行11C-匹兹堡化合物B(11C-PIB)PET显像阳性的患者23例,男9例,女14例,年龄(68.5±9.0)岁,病程(40.9±23.3)个月;轻度患者8例,中重度患者15例。收集患者简易精神状态检查量表(MMSE)评分及临床痴呆评定量表(CDR)评分等临床信息,测量患者血液Aβ42、Aβ40浓度。分析轻度和中重度患者上述指标及Aβ42/Aβ40的差异。对所有患者11C-PIB PET图像进行基于体素的单样本t检验,对轻度和中重度患者11C-PIB PET图像进行基于体素两独立样本t检验,对血液生物标志物指标与11C-PIB PET图像的Aβ沉积程度进行基于体素的Pearson相关分析。结果中重度AD患者MMSE评分低于轻度AD患者[(9.67±4.37)与(17.13±2.80)分;t=4.349,P<0.001],病程长于轻度AD患者[(48.8±23.8)与(26.0±13.5)个月;t=-2.489,P<0.05]。AD患者Aβ主要沉积于双侧额叶、右侧颞叶、右侧枕叶及后扣带回(t值:0.44~0.67,均P<0.001)。相对于血液中Aβ42(r值:-0.33~0,均P>0.05)和Aβ40(r值:-0.41~0,均P>0.05),Aβ42/Aβ40(r值:-0.62~-0.41,0.41~0.66,均P<0.05)与Aβ沉积有更加密切联系。结论基于体素的11C-PIB PET显像分析可以更直接、客观地反映脑内Aβ沉积,AD血液生物标志物Aβ42/Aβ40具有预测脑内Aβ沉积的潜力。     

神经类固醇对皮质酮诱导大鼠PC12细胞损伤的影响

神经类固醇是指在脑内合成的中枢源性类固醇和经血脑屏障进入中枢神经系统发挥作用的外周类固醇及它们的代谢衍生物。按神经类固醇与ＧＡＢＡ受体的作用方式 ,可将其分为γ 氨基丁酸 (ＧＡＢＡ)受体激动性和ＧＡＢＡ受体拮抗性神经类固醇 ,前者主要包括 3α 5α 四氢孕酮 (3α 5α ＴＨＰ)、3α 5β 四氢孕酮(3α 5β ＴＨＰ )等 ;后者主要有孕酮 (ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ ,ＰＲＯＧ)及脱氢表雄酮 (ｄｙｈｙｄｒｏｅｐｉａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅ ,ＤＨＥＡ)及它们的硫酸酯衍生物 (ＰＳ ,ＤＨＥＡＳ)。在应激反应中皮质酮大量释放 ,同时各…     

β淀粉样前体蛋白与弥漫性轴索损伤

弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后,β淀粉样前体蛋白(β-arnyloid precursor β-APP)在轴索内积聚,是轴索损伤的一个重要病理标志。许多研究通过β-APP的检测,对轴索损伤的程度进行评估。β-APP在病理状况下分解生成β淀粉样蛋白(amyloid betaprotein,Aβ),后者具有多方面的神经毒性作用。笔者现对β-APP的结构、功能、代谢和它在DAI后的表达、作用及其机制进行如下综述。     

吲哚美辛对β淀粉样蛋白1-42刺激BV-2细胞产生一氧化氮的抑制作用

目的研究吲哚美辛对β淀粉样蛋白1-42（A-β1—42）刺激小胶质细胞（MG）释放一氧化氮（N0）的抑制作用。方法应用高度纯化的BV-2小胶质细胞作为体外小胶质细胞模型，应用不同浓度吲哚美辛（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5mol／L）与20μmol／L Aβ1—42单独或同时培养12h，测定细胞上清NO含量及细胞iNOS活性；RT-PCR法测定BV-2细胞iNOS mRNA的表达。结果吲哚美辛单独作用对BV-2细胞产生NO、iNOS活性及iNOS mRNA表达无明显作用。Aβ1—42可以刺激产生NO、提高细胞iNOS酶活性、增加iNOS mRNA表达，这些作用均可被吲哚美辛所抑制，吲哚美辛浓度为10^-7～10^-5mol／L时抑制作用较为明显。结论在体外吲哚美辛可以降低Aβ1—42介导的BV-2细胞iNOS活性及iNOS mRNA表达，从而减少NO的产生，上述抑制作用可能参与了吲哚美辛在AD治疗中的神经元保护机制。     

β-淀粉样蛋白诱导的大鼠神经元损伤及神经生长因子的影响

实验测定β-淀粉样蛋白(β-AP)刺激新生大鼠培养神经元上清液中,LDH活性及神经元MTT值,初步研究了β-AP诱导的神经元毒性。结果发现,β-AP诱导的神经元培养上清液LDH活性增高与剂量呈正相关,并呈时间依赖性,说明β-AP具有特异的神经元毒性。实验过程中,对培养神经元结构的形态学观察也与测定结果符合。提示,β-AP在早老性痴呆的发生发展过程中具有重要作用。NGF对β-AP诱导神经元损伤的作用与剂量密切相关,在较低浓度(50～200U·ml~(-1))下,可有效地抑制LDH的活性增高和MTT值降低,具有保护作用;在较高浓度下(>200U·ml~(-1)),却出现与β-AP协同的神经毒性,加重损伤程度。     

与原代皮层细胞共培养促进PC12细胞在NGF诱导下向神经元分化

目的　建立体内细胞移植环境的体外共培养系统 ,研究原代皮层神经细胞对PC12细胞向神经元分化的影响。方法　将绿色荧光蛋白 (GFP)标记的PC12细胞植入原代神经细胞建立共培养系统 ,并以神经生长因子(NGF)诱导其中的PC12细胞向神经元分化 ,同时以单独培养的PC12细胞作为对照。激光共聚焦显微镜观察共培养体系及对照组中PC12细胞的分化和神经突起的形成情况。结果　与原代皮层细胞共培养的PC12细胞受NGF诱导后 ,分化的比例更高(由 5 7 13%提高到 6 7 77% ,P <0 0 1) ;数量多于对照组 (由 3 11提高到 4 0 7,P <0 0 0 1) ;神经突起的长度明显高于对照组 (由 14 6 34μm提高到 2 72 17μm ,P <0 0 0 1)。结论　与原代皮层细胞共培养有利于PC12细胞在NGF作用下分化为神经元样细胞及形成神经突起。     

电离辐射诱导PC12细胞分化的蛋白质组学分析

目的探索辐射诱导PC12细胞分化的分子机理，筛选神经系统辐射损伤的分子靶标。方法16Gyγ射线照射PC12细胞，照射48h，提取正常与照射后细胞总蛋白，进行双向电泳分析，并对部分差异表达蛋白质进行质谱鉴定。结果电泳中共发现差异表达蛋白质位点876个。鉴定出表达水平增高的蛋白泛素羧端水解酶L1，表达水平降低的蛋白HP1α类似蛋白。结论应用蛋白质组技术鉴定出部分辐射后差异表达蛋白质，为辐射诱导PC12细胞分化的分子机理研究提供了线索。     

纯化后海藻硫酸多糖-蛋白复合物诱导人肝癌细胞SMMC- 7721 凋亡作用的研究

目的 研究海藻硫酸多糖蛋白复合物(Sulfated Polysaccharide-Protein Complex,SPPC)诱导肿瘤细胞凋亡的效率和机制.方法 选用人肝癌细胞株SMMC-7721为实验对象,用MTT法,流式细胞术,DNA凝胶电泳法,细胞形态学检测方法对纯化后不同剂量SPPC处理的SMMC-7721细胞凋亡情况进行观察分析;并用Western blot 法检测凋亡相关蛋白 procaspase-3的表达量变化.结果 纯化后SPPC中、高剂量组(2.0、10.0mg · ml-1)可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡, SMMC-7721细胞内凋亡相关蛋白procaspase-3有不同程度的表达降低,DNA凝胶电泳法检测到DNA ladder现象,流式细胞检测显示纯化后SPPC在10.0mg · ml-1浓度下出现了典型的二倍体峰.结论 一定浓度的海藻硫酸多糖蛋白复合物有诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用,其生化机制可能是通过caspase-3 的活化来实现的.     

不同海拔地区血清β-AP含量的测定分析

为了解部分高海拔地区（3310m、4680m）正常人血清β—AP含量以及中度海拔地区（2260m）不同年龄钮的血清β—AP含量变化,分别选择了116例不同海拔地区正常人（分为3组）,另选择了229例中度海拔地区不同年龄正常人（分为7组）,均采用放射免疫法进行血清β—AP含量的测定。结果显示：随海拔高度的增加β—AP含量也明显增高,而增龄与β—AP含量呈明显相关。     

晚期氧化蛋白产物诱导HaCaT细胞凋亡的实验研究

目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPPs)对HaCaT细胞凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 人血清白蛋白(HSA)与次氯酸钠溶液反应制成AOPPs.MTT法检测经不同浓度(0、50、100、200、400μg/ml)AOPPs处理24h后HaCaT细胞的活力,以选择AOPPs的工作浓度.根据时间效应或浓度效应对HaCaT细胞进行分组处理,流式细胞技术检测细胞凋亡率,二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blotting技术检测细胞内NOX4、Bax及Bcl-2蛋白的表达.结果 400μg/ml AOPPs作用后HaCaT细胞活力较其他浓度明显降低(p＜o.05).随AOPPs作用时间的延长和浓度的增加,HaCaT细胞凋亡率明显增加(P＜0.05),细胞内ROS产生增多(P＜0.05),NOX4和Bax蛋白表达量增加(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达量降低(P＜0.05).结论 AOPPs可能通过NADPH氧化酶途径诱导HaCaT细胞凋亡.