阿魏酸对培养视网膜神经细胞增殖活性的影响

目的 研究阿魏酸促进视网膜神经细胞活性的可能机制,为治疗退行性视网膜病变提供依据。方法 以7个月人胚胎视网膜、新生小牛视网膜和生后4个月小鼠视网膜为研究对象,以细胞培养、MTT法和氚标记胸苷掺入法等为研究手段,检测阿魏酸、脑源性神经营养因子(BDNF)和葛根素作用72h后,视网膜神经细胞增殖和DNA合成变化。结果 阿魏酸对3种视网膜神经细胞均具有促增殖作用,细胞活性强度呈现剂量依赖性,对于小鼠视网膜神经细胞,阿魏酸在15．6—1000．0mg／L内均具有促细胞增殖作用;对于新生小牛和7个月人胚胎视网膜神经细胞,阿魏酸在125．0～1000．0mg／L内具有促细胞增殖作用。对7个月人胚胎视网膜神经细胞,阿魏酸在62．5—1000．0mg／L内具有促DNA合成作用,最佳效应浓度为500．0mg／L;BDNF在12,5～50．0μg/L内具有促细胞增殖作用,最佳效应浓度为50．0μg／L;葛根素未见明显促增殖效应。结论 阿魏酸对3种视网膜神经细胞的促增殖作用明显强于BDNF。阿魏酸能有效提高视网膜神经细胞活性,有望成为一种新的防治退行性视网膜病变的有效成分。     

谷氨酸对视网膜内层神经细胞影响的研究

目的探讨谷氨酸对视网膜内层神经细胞(inner stratum retinal neurons, ISRN)的影响及其毒性作用的量效关系。方法将30只新生小鼠神经层视网膜组织块均匀接种于2块24孔培养板(48孔),将其 分成正常对照组、谷氨酸作用24 h组和正常培养18 h后,谷氨酸继续作用6 h组。培养24 h 后, 将视网膜组织块常规进行切片,HE染色,油镜下观察视网膜神经节细胞层(retinal ganglion cells, RGCs)和内核层(inner nuclear layer, INL)的细胞形态,并分别计算细胞形态正常的RGCs数和INL细胞数 。结果视网膜组织正常培养24 h后,ISRN(RGCs和INL细胞)中可见少数细胞胞核固缩和坏死。谷氨酸作用24 h组：当谷氨酸浓度为2、4 mmol时,ISRN的细胞形态与对照组之间差异无显著性意义(P>0.05);谷氨酸浓度≥6 mmol,视网膜内层形态正常的神经细胞数量明显较对照组减少(P<0.05),且随着谷氨酸浓度的增加,其数量逐渐减少。谷氨酸后6 h作用组：谷氨酸浓度为6 mmol时,INL中形态正常的细胞数量明显较对照组减少(P <0.05),而RGCs层中形态正常的细胞数量与对照组之间差异无显著性的意义(P>0.0 5); 谷氨酸浓度≥8 mmol时,RGCs层和INL中形态正常的细胞数量均较对照组明显减少(P<0. 05)。 结论谷氨酸对离体视网膜内层神经细胞具有毒性作用,其毒性作用呈剂量依赖性。(中华眼底病杂志,2001,17:311-314)     

石斛散对人视网膜神经细胞钙离子变化的影响

目的通过观察石斛散对人视网膜神经细胞内钙离子持续升高导致的细胞凋亡的保护作用,探讨其在治疗视网膜变性类疾病方面的作用及机制,为临床治疗同类疾病提供药理学依据。设计实验性研究。研究对象体外培养的人眼视网膜神经细胞。方法利用体外培养的贴壁、伸展以及生长良好人视网膜神经细胞,用Fluo3／AM标记,通过激光共焦扫描显微镜动态观察和记录石斛散和维拉帕米对细胞内钙离子水平以及谷氨酸引起的钙超载的影响。主要指标细胞内钙离子水平(荧光强度)。结果加入谷氨酸后,荧光强度较原基础值增加88％;而石斛散可使荧光强度降低14．8％;维拉帕米降低幅度为57．3％。对先用谷氨酸干预的细胞,石斛散不能降低胞内钙离子水平,但预先用石斛散干预的细胞,谷氨酸升高胞内钙离子30％,与未干预组比较有统计学差异(P=O．000)。结论石斛散具有降低体外培养人视网膜神经细胞内钙离子的作用,同时可以抵抗谷氨酸损伤细胞后引起的胞内钙离子升高,提示其具有抵抗钙超载,抑制视网膜细胞凋亡的作用。     

银杏叶对成人视网膜神经细胞活性的影响

目的 研究银杏叶对视网膜神经细胞活性的影响,为治疗退行性视网膜疾病等提供参考依据.方法 以成人视网膜为研究对象,以24 h和72 h MTT检测,透射电镜超微形态学观察,细胞线粒体膜电位测定等为研究手段,研究银杏叶对成人视网膜神经细胞活性的影响.结果 细胞超微形态学观察发现,银杏叶药物组培养2周的细胞外节段盘膜排列规整,内节段线粒体丰富,细胞核染色质均匀.MTT检测发现,银杏叶能够较好地促进视网膜神经细胞增生,且以15.625 mg/ml时保护作用最明显.银杏叶能够显著升高视网膜神经细胞的膜电位并使兴奋性呈波动性变化.结论 银杏叶对培养的视网膜神经细胞有良好的保护作用.     

石斛散对人视网膜神经细胞凋亡的影响

目的探讨石斛散治疗视网膜变性类疾病方面的作用及机制，为临床治疗同类疾病提供药理学依据。方法以人视网膜神经细胞为研究对象，用AnnexinV＋PI为染料标记的凋亡试剂盒，利用流式细胞仪分析药物干预后不同组别中各类凋亡细胞及活细胞的比例。结果正常情况下，对照组活细胞占61．32％，石斛散组为73．8％，两组比较有显著统计学差异。用1mmol／L的谷氨酸干预细胞2h后，活细胞比例降为44．23％，而晚期凋亡细胞和死亡细胞分别增为24．90％和21．63％。预先给予石斛散干预的中药组，活细胞明显多于对照组，其他各类细胞少于对照组。结论石斛散具有抵抗符氨酸损伤，延缓视网膜神经细胞凋亡过程的作用。     

成年人视网膜神经细胞体外培养的实验研究

目的建立成年人视网膜神经细胞的体外培养体系,研究细胞体外生长特性和结构特点。设计实验性研究。研究对象体外培养的成年人视网膜神经细胞。方法以成年人视网膜为研究对象,进行体外细胞培养;取培养7～10天的细胞行免疫组织化学鉴定;取培养10天的细胞行扫描电镜超微形态学检查。主要指标细胞形态,结构。结果在适宜的条件下,成年人视网膜神经细胞可以在体外培养并表现特有的结构特点和生长特性,免疫组化鉴定显示大部分细胞神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性,说明所培养细胞大部分为神经细胞。扫描电镜下观察贴壁伸展生长细胞主要为感光细胞、双极细胞、水平细胞等神经细胞和少量胶质细胞。结论在适宜的培养条件下,成年人视网膜神经细胞可以在体外进行培养并且表现出良好的生长活性。     

褪黑素对糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞凋亡的影响

目的研究褪黑素对糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞凋亡的影响。方法将54只健康雄性8周龄SD大鼠,随机分为正常对照组、糖尿病组及褪黑素组各18只,各组再按4周、8周、12周3个时间点随机分为3小组,每组各6只大鼠。正常对照组不进行干预;糖尿病组大鼠给予一次性腹腔注射链脲佐菌素60mg·kg-1,以诱导糖尿病大鼠模型;褪黑素组在成功建立糖尿病大鼠模型后给予褪黑素(10mg·kg-1·d-1)灌胃进行干预。每只大鼠取左眼眼球,制作石蜡组织病理学切片,应用TUNEL法检测视网膜神经细胞凋亡情况。结果正常对照组4周、8周、12周均未见视网膜神经细胞凋亡。糖尿病组4周可见视网膜神经细胞凋亡,糖尿病组8周和12周视网膜神经节细胞凋亡指数较同期正常对照组大鼠均明显升高,糖尿病组4周、8周、12周凋亡指数分别为(0.48±0.53)%、(5.66±2.10)%和(11.83±1.58)%,8周及12周与同期正常对照组相比差异有统计学意义(均为P=0.000)。褪黑素4周组与同期糖尿病组神经细胞凋亡情况无明显差异,褪黑素组8周及12周较同期糖尿病组神经细胞凋亡情况有不同程度的减轻,视网膜神经节细胞凋亡指数有所下降,褪黑素组4周、8周、12周凋亡指数分别为(0.30±0.74)%、(1.67±0.54)%和(7.73±0.95)%,褪黑素组8周及12周时与同期糖尿病组相比差异有统计学意义(均为P=0.000)。结论褪黑素能够通过减轻糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞的凋亡,达到神经保护的目的。     

神经生长因子对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响

目的 观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响,研究NGF对糖尿病视网膜神经的保护作用.方法 选择清洁级雄性2月龄SD大鼠60只,随机分成正常组、糖尿病组和NGF组,每组20只,后两组制作糖尿病模型.NGF组给予NGF腹腔注射(1000 U·kg-1),每天1次,共注射10 d,正常组和糖尿病组腹腔注射等体积生理盐水,3组分别在注药后4周末和8周末随机选取10只大鼠处死,取视网膜组织,做电镜标本观察视网膜超微结构,制备视网膜石蜡切片,采用TUNEL法进行凋亡细胞原位标记,行视网膜神经细胞凋亡计数,对所有数据进行统计学分析.结果 电镜下正常组视网膜结构正常;糖尿病组膜盘局部模糊,线粒体肿胀,嵴消失,染色质边集;NGF组神经细胞无明显改变,仅见视杆细胞膜盘局部模糊不清,内核层和外核层染色质轻度密集,改变较糖尿病组轻.视网膜凋亡指数4周、8周时正常组分别为(3.30±1.52)％和(3.40±1.10)％,糖尿病组分别为(21.53±5.34)％和(31.40±10.15)％,NGF组分别为(12.36±5.26)％和(15.47±6.73)％,不同时间点3组间差异均有统计学意义(均为P=0.000).结论 NGF能有效降低糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡,对糖尿病视网膜神经细胞有保护作用.     

成人视网膜神经细胞的原代培养和初步鉴定

目的建立成人视网膜神经细胞培养系统，为深入研究视网膜细胞及观察药物作用提供基础。方法采用组织块培养法，以含100g·L^-1 FBS的IMDM作为细胞培养液，培养成人视网膜细胞，对培养7—10d的细胞进行初步细胞鉴定。结果体外培养成人视网膜细胞原代培养可达80d左右，早期培养的细胞中视网膜神经细胞占65％左右，其中可见多数带有外节段的感光细胞。结论这种培养方法提供的视网膜细胞早期主要以神经细胞为主，可用于视网膜神经细胞的药物作用研究。     

当归提取液对培养的成年人视网膜神经细胞活性的影响

 目的  研究当归提取液对体外培养的成年人视网膜神经细胞活性的影响。设计 实验研究。 研究对象 成年人视网膜神经细胞。方法 体外培养成年人视网膜神经细胞,加入倍比稀释浓度（1.25、2.50、5.00、10.00、 20.00、40.00、80.00 g/L）的当归提取液各50 μl,培养至24 h和72 h时,以MTT法检测细胞存活和生长情况;共聚焦显微镜测定细胞线粒体膜电位荧光强度值变化,记录培养液未加入当归提取液以及两次加入当归提取液（两次加药相隔94秒）后细胞线粒体膜电位荧光强度的变化,比较首次加药、再次加药及未加药间细胞荧光强度峰值。主要指标 细胞存活和生长情况,细胞线粒体膜电位峰值。结果 成年人视网膜神经细胞培养至24 h及72 h时MTT法检测显示,80.00 g/L当归提取液对成年人视网膜神经细胞保护作用分别相当于对照组的256%和261%。线粒体膜电位检测荧光强度的变化显示,首次加入当归提取液后荧光强度峰值（26.02±7.62）较加药前（4.95±0.02）增加了437%（P＜0.001）;再次加入当归提取液后荧光强度峰值（54.17±14.15）较加药前（4.95±0.02）增加了997%（P＜0.001）。表明当归提取液能够显著升高成年人视网膜神经细胞的膜电位并使其兴奋性呈波动性变化。 结论  当归提取液对成年人视网膜神经细胞有一定的保护作用,有望成为一种新的防治视网膜疾病的辅助治疗药物。     

神经营养素在视网膜及视神经疾病方面的研究

神经营养素是一类结构和功能相近的多肽类家族,广泛分布于人体各种组织细胞中,有着重要的生物学特性,在临床已广泛应用,在眼科方面也有研究。对神经营养素及其受体在视网膜组织的分布作了描述和分析,并对神经营养素在视网膜及神经疾病方面的基础及临床研究作了综述。     

神经生长因子对糖尿病大鼠神经视网膜超微结构的影响

目的:通过观测实验性糖尿病动物的神经视网膜的超微结构变化,从视网膜的神经功能角度来探讨糖尿病视网膜病变的发生机制以及相关药物干预后的影响作用。方法:用链脲佐菌素制作糖尿病大鼠动物模型,分为正常对照组(CON组)、糖尿病对照组(DM组)、糖尿病神经生长因子治疗组(D+N组)。分别于病程3,6,9,12mo取大鼠眼球制备石蜡切片,将视网膜组织行HE染色,并将上述标本制备超薄切片,用透射电镜观察并分析。结果:从病程3mo开始,DM组视网膜血管内皮细胞及周细胞的核变形、线粒体肿胀变性、基底膜增厚。视神经节细胞水肿,胞器减少,线粒体变性。光感受器细胞(视锥、视杆)膜盘间隙扩大,线粒体及核也有病理改变。上述病变随病程延长而逐渐加重。经过NGF治疗后,上述DM改变有所减轻,主要表现在感光细胞外节膜盘间隙较DM组缩小,平行度好转;神经细胞突起水肿减轻,胞器水肿好转。各组DM大鼠的视网膜血管、神经网膜及视神经的糖尿病性病变之间未见明显的先后因果关系。结论:神经生长因子对DM大鼠视网膜形态学上所见的视网膜血管、感光细胞和神经节细胞的超微结构改变有着明确的改善作用。在DR的发病过程中,视网膜血管的病变与视网膜神经组织的病变可能是同时存在、互相促进,共同造成糖尿病视网膜病变和视功能的损害。     

阿魏酸对视网膜色素变性小鼠血浆内皮素-1表达的影响

目的　研究不同浓度阿魏酸作用下,出生后不同时期的视网膜色素变性（ｒｅｔｉｎｉｔｉｓｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ,ＲＰ）动物模型（ｒｄ小鼠）血浆中内皮素－１（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－１,ＥＴ－１）动态表达特征,探讨阿魏酸对ｒｄ小鼠表达ＥＴ－１的作用特点。方法　取新出生的ｒｄ小鼠９０只及Ｃ５７／ＢＬ６小鼠１８只,按照阿魏酸灌胃浓度的不同分成４组,０．２５ｇ? Ｌ－１组、０．５０ｇ? Ｌ－１组、０．７５ｇ?Ｌ－１组、１．００ｇ?Ｌ－１组,每组再按照给药时间分为２周组、３周组、４周组,以上１２组为药物处理组,每组各６只。相同周龄的ｒｄ小鼠各６只不作处理作为病变对照组,相同周龄的Ｃ５７／ＢＬ６小鼠各６只作为正常对照组。ＥＬＩＳＡ法检测血浆ＥＴ－１浓度。结果　２周组、３周组、４周组病变对照组小鼠ＥＴ－１浓度均高于正常对照组,尤其３周组、４周组与正常对照组相比差异有统计学意义（Ｐ＝０．０２４、０．０１０）。经阿魏酸治疗后２周时,０．５０ｇ?Ｌ－１组、０．７５ｇ?Ｌ－１组ＥＴ－１水平低于病变对照组,但差异无统计学意义;３周时,０．２５ｇ?Ｌ－１组、０．５０ｇ?Ｌ－１组、０．７５ｇ?Ｌ－１组ＥＴ－１水平低于病变对照组,其中０．５０ｇ?Ｌ－１组差异有统计学意义（Ｐ＝０．０３４）;４周时,０．２５ｇ?Ｌ－１组、０．５０ｇ?Ｌ－１组、０．７５ｇ?Ｌ－１组ＥＴ－１水平低于病变对照组,差异均有统计学意义（Ｐ＝０．０１１、０．０２７、０．０２１）。各浓度治疗组中,仅１．００ｇ?Ｌ－１组治疗３周和４周时与正常对照组相比差异有统计学意义（Ｐ＝０．０１３、０．００９）。结论　ｒｄ小鼠在病变过程中,血浆ＥＴ－１水平明显升高,可能与ＲＰ的发生发展有关。在不同浓度阿魏酸治疗下,ｒｄ小鼠ＥＴ－１水平不同程度下降,其中０．５０ｇ?Ｌ－１、０．７５ｇ?Ｌ－１治疗效果最明显。     

Effect of long-term weightlessness on retina and optic nerve in tail-suspension rats

AIM: To evaluate the effect of long-term weightlessness on retina and optic nerve in tail-suspension (TS) rats. METHODS: A stimulated weightlessness model was established by suspending rats’ tail. After 12wk, the ultrastructure and the number of optic nerve axons were observed by transmission electron microscope. The number of survival retinal ganglion cells (RGCs) was calculated by fluorescent gold retrograde labeling. Retina cells apoptosis was detected by TUNEL staining. The function of optic nerve and retina was evaluated by the visual evoked potential (VEP) and oscillatory potentials (Ops). RESULTS: The optic nerve axons were swollen and sparsely aligned, and the lamellar separation and myelin disintegration occurred after 12wk in TS rats. The density of optic nerve axons was 32.23±3.92 (vs 37.43±4.13, P=0.0145), the RGCs density was 1645±46 cells/mm2 (vs 1867±54 cells/mm2 P=0.0000), the incidence rate of retinal cells apoptosis was 5.38%±0.53% (vs 4.75%±0.54%, P=0.0238), the amplitude of VEP-P100 was 15.43±2.14 µV (vs 17.67±2.17 µV, P=0.0424), the latency of VEP-P100 was 69.05±5.34ms (vs 62.43±4.87ms P=0.0143) and the sum amplitude of Ops was 81.05±8.34 µV (vs 91.67±10.21 µV, P=0.0280) in TS group and the control group, respectively. CONCLUSION: Long-term weightlessness can induce the ultrastructural changes and functional depress of the optic nerve, as well as retinal cell damages in TS rats.     

半乳糖对离体晶状体上皮细胞游离钙影响的实验研究

目的 观察高浓度半乳糖诱导正常离体晶状体上皮细胞中游离钙的变化以及钙离子阻滞剂维拉帕米对它的阻滞作用。方法 钙离子指示剂fluo-3与离体的正常品状体上皮细胞中游离钙螯合后，用激光扫描共聚焦显微镜观察35mmol／L半乳糖在不同条件下致细胞内荧光强度的变化。结果 35mmol半乳糖作用于离体品状体上皮细胞后可见细胞内与钙离子的荧光强度呈持续上升趋势，各个细胞上升的幅度及反应的速度有细微差别，但100s左右均出现上升趋势。先加2mg／mL的维拉帕米，2min后加半乳糖溶液至终浓度为35mmol，观察5min只见基本正常的钙波动，未见明显的钙上升或下降改变。结论 半乳糖溶液能致离体晶状体上皮细胞中游离钙升高，维拉帕米能有效地抑制此过程。     

视网膜神经纤维层检查在青光眼早期诊断中的应用

青光眼是一组以眼压升高、视功能和视神经受损为综合表现的致盲性疾病,严重危害人类的健康。早期诊断常依赖于视野检查,现有研究证实,视网膜神经纤维的受损早于视野缺损,通过视网膜神经纤维层检查有利于青光眼的早期诊断,其检查方法可分形态学检查和厚度测量法两大类。包括：手持检眼镜检查、无赤光眼底照相、视神经纤维分析仪、视网膜厚度分析仪、扫描激光拓扑仪、光学相干断层扫描仪、激光偏振扫描仪等,本文将国内外现状进行综述。     

Rapid increase of intracellular Ca2+ concentration caused by aminoadipic acid enantiomers in retinal Müller cells and neurons in vitro

The ability of the gliotoxic compounds D,L-, D- or L-2-aminoadipic acid (AAA) to increase selectively the intracellular concentration of free calcium ion ([Ca²⁺]_i) was examined in Müller cells cultured with or without retinal neurons. The monitoring of [Ca²⁺]_i following exposure to 0.06 to 6 mM AAA was performed by a microfluorometry using a fluorescent Ca²⁺ indicator, Fura-2 acetoxymethyl ester. A rapid increase of [Ca²⁺]_i occurred in the Müller cells following exposure to a relatively low concentration of the L-isomer. This is compatible with the known strong gliotoxicity of this isomer. The D,L- and D-forms of AAA activated neurons at low concentrations and activated the Müller cells at higher concentrations. The D-isomer appears to act selectively on retinal neurons and may be an agonist of an excitatory amino acid receptor. These results indicate that the ability of AAA to elevate cytosolic [Ca²⁺]_i depends on the stereospecificity of the AAA and on cell type.     

干细胞移植治疗视网膜和视神经变性疾病的现状和进展

不可逆性的视网膜和视神经退行性变会导致视功能严重损伤甚至致盲.近年来,干细胞移植治疗视网膜和视神经损伤的研究进展为组织的修复和再生带来了希望.干细胞既可以用于细胞替代治疗,也可以通过分泌细胞因子发挥神经营养保护作用.胚胎干细胞、间充质干细胞、诱导多能干细胞和Müller细胞等各种来源的干细胞都极具发展前景,为眼科此类难治性疾病提供了丰富的资源.     

缺氧缺血对新生大鼠视网膜线粒体Ca2+含量的影响

目的 :观察缺氧缺血不同时期新生大鼠视网膜线粒体Ca2 含量的变化规律 ,探讨缺氧缺血对视网膜的损伤机制。方法 :将新生SD(sprague dawley)大鼠结扎右颈总动脉并吸入 96%N2 4%O2 制成缺氧缺血模型 ,以原子吸收火焰法测定线粒体Ca2 含量。结果 :假手术对照组 ,缺氧缺血组 (缺氧 1 5,30 ,60和 1 2 0min)和缺氧后供氧组Ca2 含量 ( μg/gpro)分别为 32± 0 0 3,4 7 5± 5 98,97 5± 3 54,54±6 0 2 ,4 5 3± 3 66和 1 51 5± 9 2 0。结论 :缺氧缺血使视网膜线粒体Ca2 含量增高