准分子激光原位角膜磨镶术后应用非甾体类抗炎药的治疗效果

目的评价准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK)后非甾体类抗炎药的治疗效果。方法采用随机对照研究,试验组LASIK术后使用普拉洛芬滴眼液1个月,对照组使用氟米龙滴眼液1个月,两组患者除此不同外,在术前准备、手术方法及术后用药等方面均相同。观察指标包括术前、术后1d、10d、1个月及3个月的眼部症状,包括疼痛感和异物感,以及体征,包括裸眼视力、眼压、弥漫性角膜基质炎(diffuse lamellar keratitis,DLK)、等效球镜度等检查。等级资料采用秩和检验,计量资料采用t检验进行统计学分析。结果两组术后眼压与术前眼压相比差异有显著统计学意义,所有术眼术后眼压水平均低于术前。在裸眼视力、等效球镜度数、DLK方面及眼部疼痛、异物感方面手术前后两组差异均无统计学意义。结论LASIK术后应用非甾体类抗炎药可获得与激素类药物相同的临床效果,并可有效预防DLK,可减少或替代LASIK术后激素类药物的使用。     

神经生长因子对角膜上皮细胞增殖的影响

目的 探讨神经生长因子（nerve growth factor,NGF）对角膜上皮细胞增殖的影响,寻找促进角膜上皮损伤修复的有效方法。方法 在培养兔角膜上皮细胞的培养液中加浓度为5u/ml、50u/ml和500u/ml的NGF,加药后的第3、7天,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,于酶标仪上测定570nm波长处的吸光度值来观测细胞增殖情况。结论 浓度为50u/ml和500u/ml的NGF对兔角膜上皮细胞增殖有明显促进作用,且两组间有差异,呈剂量依赖性（P＜0.05）,而浓度为5u/ml的NGF促细胞增殖作用不显著（P＞0.05）。结论 外源性NGF对培养的兔角膜上皮细胞增殖有明显促进作用。表明NGF具有临床应用的可能性。     

microRNA-182抑制人角膜上皮细胞增殖和迁移

目的：通过体内动物实验与体外细胞实验来阐明microRNA-182（miR-182）在角膜上皮损伤修复中的功能。方法：实验研究。体内实验选取5 只C57BL/6J野生型小鼠,通过机械刮伤法构建小鼠角膜上皮损伤修复模型作为实验组,对侧眼作为对照组,通过实时定量RT-PCR法检测miR-182 在损伤修复过程（ 损伤后48 h）的表达。体外实验采用脂质体介导的方法将miR-182和随机序列寡核苷酸链转染入人角膜上皮细胞（HCECs）,通过细胞增殖实验（MTS法）和细胞克隆形成实验检测细胞增殖和生长能力,流式细胞术检测细胞周期,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。MiR-182 表达量及细胞实验各参数2 组间比较采用独立样本t检验。结果：体内实验中,与对照组相比,实验组中5 个样本量的miR-182 在角膜上皮损伤修复过程中表达水平显著下调（t=147.6、79.2、136.8、41.3、89.8,均P<0.001）。体外实验中,miR-182组相对细胞数目为（81±5）%,与阴性对照组（100%）相比显著减少（t=6.6,P=0.003）,同时miR-182组细胞克隆数明显少于阴性对照组。细胞周期检测结果显示实验组处于G1期细胞数量比例为（49±7）%,明显高于阴性对照组的（35±4）%（t=-3.0,P=0.041）。此外,细胞迁移实验结果显示miR-182组HCECs细胞迁移的距离为（99±12）μm,而阴性对照组的迁移距离为（213±14）μm（t=10.8,P=0.001）,迁移速度明显变慢。结论：miR-182通过抑制角膜上皮细胞的增殖与迁移,从而对角膜上皮损伤修复起到负调控的作用。     

眼局部应用非甾体类抗炎药的研究进展

非甾体类抗炎药(NSAID)抑制前列腺素的合成,可以减轻炎症和疼痛,在眼科临床有较广泛的适应证.但由于其副作用,使其全身应用受到了一定限制,而眼局部用药在眼科疾病中得到了广泛的应用,尤其是近几年在眼部新生血管的治疗方面取得了较大进展.目前眼科临床上局部应用的NSMD主要有0.1%双氯芬酸钠滴眼液、0.5%及0.4%酮咯酸氨丁三醇滴眼液、0.03%氟比洛芬钠及1.0%苏洛芬钠.此外,还有0.1%吲哚美辛和0.09%溴芬酸等.由于NSAID在某些方面比糖皮质激素更具优势,因此本文就NSAID在眼科的局部应用进行综述,希望能引起临床医生的重视.     

非甾体类抗炎药治疗干眼的研究进展

干眼是一类累及眼表及泪膜的多因素疾病,通常伴有泪液渗透压的升高和眼表组织的炎症。抗炎治疗已成为干眼治疗的重要方面。非甾体类抗炎药物(non steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)具有抗炎效果佳、副作用少等优点,并逐渐被应用于干眼的治疗。本文就近年关于NSAIDs在干眼相关治疗中作用的研究作一综述。     

非甾体抗炎药在眼科的临床应用

 非甾体抗炎药是一类化学结构不同、药理机制相近、具有抗炎及镇痛作用的药物。近年来,眼科非甾体抗炎药的应用逐渐广泛,其合理应用主要依赖于临床医生对此类药物作用、适应证、不良反应的了解与掌握以及临床应用经验的及时总结。     

双氯芬酸钠对角膜上皮细胞抑制作用的实验研究

目的探讨双氯芬酸钠对角膜上皮细胞体外增殖的抑制作用并初步探讨其机理.方法选用原代及传代兔角膜上皮细胞,实验组中加入含不同浓度双氯芬酸钠的培养液,对照组加入等量空白培养液,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl thiazolium,MTT)比色法检测其对细胞增殖的抑制,光学显微镜和透射电子显微镜进行形态学观察.结果双氯芬酸钠浓度为27.27μg/ml～54.55 μg/ml时,作用24、48、72 h均明显抑制角膜上皮细胞的增殖(P＜0.01),并具有剂量依赖性.结论双氯芬酸钠对角膜上皮细胞的增殖具有明显抑制作用,呈现剂量-效应关系.双氯芬酸钠可能是通过诱导凋亡而发挥其抗增殖作用.     

神经生长因子对人角膜上皮细胞增殖的影响

目的研究神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)在体外培养的人角膜上皮细胞中的表达,观察外源性给予NGF对人角膜上皮细胞增殖的作用,进一步探讨NGF在角膜疾病治疗中的意义。方法采用刮片法进行人角膜上皮细胞培养,外源性给予NGF作用于第2代～第3代培养的人角膜上皮细胞,通过四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyltetrazolium,MTT)法测定其对细胞增殖的影响,并用流式细胞仪检测角膜上皮细胞中细胞增殖核抗原的表达情况。结果本实验成功培养出人角膜上皮细胞,加入外源性NGF后,培养的人角膜上皮细胞的增殖率较对照组明显增加(P<0.01),流式细胞仪检测到的细胞增殖核抗原的表达也较对照组明显增多(P<0.01)。结论外源性给予NGF对体外培养的人角膜上皮细胞的细胞增殖有明显的促进作用。     

非甾体类抗炎药在眼科中的应用研究进展

依据近年来的文献资料进行分析、整理、归纳,简述眼部致炎机制以及非甾体抗炎药在眼科中的作用机制和应用范围。介绍几种新型的治疗眼科疾病的非甾体抗炎药滴眼剂,并对眼部疾病患者使用非甾体抗炎药的临床疗效和安全性进行评估。     

非甾体抗炎药与激素类药物治疗泡性结膜炎的疗效观察

目的 比较非甾体抗炎药双氯芬酸钠滴眼液与激素类药物治疗泡性结膜炎的临床疗效.方法 对临床确诊为泡性结膜炎的42例患者分别使用1 g·L-1双氯芬酸钠滴眼液和l g·L-1氟米龙滴眼液进行治疗,分别记录患者的自觉症状及临床体征评分,将所得结果进行统计学分析以评价其治疗效果.结果 双氯芬酸钠滴眼液和氟米龙滴眼液治疗后的症状评分和体征评分与治疗前比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05).双氯芬酸钠滴眼液与氟米龙滴眼液治疗后异物感、眼痒、流泪及眼痛等症状比较,差异无统计学意义(均为P>0.05);治疗后分泌物、结膜充血及结膜滤泡等体征比较,差异也均无统计学意义(均为P>0.05);42例泡性结膜炎的患者全部治愈,无不良反应发生,2种药物治疗泡性结膜炎的效果相同.结论 非甾体抗炎药治疗泡性结膜炎是十分有效和安全的.     

双氯芬酸钠抑制角膜上皮细胞体外增殖作用的免疫组化研究

目的从免疫组化的角度初步探讨双氯芬酸钠抑制角膜上皮细胞体外增殖的作用机理。方法选用原代及传代兔角膜上皮细胞,实验组加入双氯芬酸钠药液使其终浓度为12.5mg·L-1,对照组加入等量空白培养液,采用链霉素亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(strept avidin-biotin-enzyme complex,SABC)法检测凋亡指标的改变。结果免疫细胞化学显示加药组细胞野生型p53、Caspase-3表达增加,PCNA表达减弱。结论双氯芬酸钠可能通过诱导凋亡和细胞周期停止而发挥其抗增殖作用。     

角膜上皮干细胞定位及功能的研究进展

角膜上皮干细胞定位于角膜缘已被广泛认可,并被命名为角膜缘干细胞,且认为角膜缘干细胞在角膜上皮的自我更新和损伤修复中起重要作用.但近年来的一些研究却提出了与之相悖的观点:整个眼表层均含有寡能干细胞,且角膜缘干细胞在维持自我更新及稳态方面并未起到至关重要的作用.这些发现提示可能还有其他干细胞存在并维持着角膜上皮的自我更新,但也有人对这些新观点提出质疑.本文通过对最新研究的不同观点及证据的阐述,对近年来角膜上皮干细胞的定位及其功能等方面的进展作一综述.     

Acellular porcine corneal matrix as a carrier scaffold for cultivating human corneal epithelial cells and fibroblasts in vitro

AIM: To investigate the feasibility of corneal anterior lamellar reconstruction with human corneal epithelial cells and fibroblasts, and an acellular porcine cornea matrix (APCM) in vitro. METHODS: The scaffold was prepared from fresh porcine corneas which were treated with 0.5% sodium dodecyl sulfate (SDS) solution and the complete removal of corneal cells was confirmed by hematoxylin-eosin (HE) staining and 4’, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining. Human corneal fibroblasts and epithelial cells were cultured with leaching liquid extracted from APCM, and then cell proliferative ability was evaluated by MTT assay. To construct a human corneal anterior lamellar replacement, corneal fibroblasts were injected into the APCM and cultured for 3d, followed by culturing corneal epithelial cells on the stroma construction surface for another 10d. The corneal replacement was analyzed by HE staining, and immunofluorescence staining. RESULTS: Histological examination indicated that there were no cells in the APCM by HE staining, and DAPI staining did not detect any residual DNA. The leaching liquid from APCM had little influence on the proliferation ability of human corneal fibroblasts and epithelial cells. At 10d, a continuous 3 to 5 layers of human corneal epithelial cells covering the surface of the APCM was observed, and the injected corneal fibroblasts distributed within the scaffold. The phenotype of the construction was similar to normal human corneas, with high expression of cytokeratin 12 in the epithelial cell layer and high expression of vimentin in the stroma. CONCLUSION: Corneal anterior lamellar replacement can be reconstructed in vitro by cultivating human corneal epithelial cells and fibroblasts with an acellular porcine cornea matrix. This laid the foundation for the further transplantation in vivo.     

角膜缘上皮细胞体外培养、冻存和复苏的实验研究

目的 建立兔角膜缘上皮细胞体外培养、冻存和复苏的方法。方法 兔角膜缘上皮细胞组织块接种培养。取第三代细胞进行冻存。于冻存后第2周，3、6个月复苏细胞。用MTT法测细胞生长曲线。结果 兔角膜缘上皮细胞体外生长良好。培养细胞AE1单克隆抗体染色阳性，PAS染色阴性。冻存细胞复苏成功。冻存细胞复苏后生长曲线良好。结论 兔角膜缘上皮细胞可以在体外培养、冻存和复苏。     

Maxadilan 对兔角膜上皮细胞的促增殖作用

目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)的PAC1受体特异激动剂Maxadilan对角膜上皮细胞的促增殖作用。方法分离新西兰大白兔角膜上皮细胞,并在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基中培养。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测兔角膜上皮细胞PACAP的PAC1受体;细胞增殖实验采用CCK-8法检测,角膜上皮细胞培养基中分别加入0.01μmol.L-1、0.03μmol.L-1、0.05μmol.L-1、0.10μmol.L-1、0.15μmol.L-1Maxadilan作为实验组,未加入Maxadilan作为对照组,检测不同浓度的Maxadilan对角膜上皮细胞增殖的影响;流式细胞仪分析0.10μmol.L-1Maxadilan对细胞周期的影响。结果 RT-PCR检测显示兔角膜上皮细胞含有PACAP的PAC1受体;CCK-8法检测显示0.05μmol.L-1、0.10μmol.L-1、0.15μmol.L-1Maxadilan实验组分别比对照组细胞增多29.1%、41.5%、32.5%,与对照组相比差异有统计学意义(P分别为0.001、0.000、0.000);流式细胞仪分析显示0.10欁μmol.L-1Maxadilan组细胞增殖指数平均值为35.98%,与对照组细胞细胞增殖指数平均值29.48%相比,差异有统计学意义(P=0.014)。结论角膜上皮细胞存在PACAP的PAC1受体,Maxadilan对角膜上皮细胞有促增殖作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外可诱导分化为角膜上皮细胞

目的:探讨骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cell,MSC) 分化为角膜上皮细胞的可塑性及其重建角膜上皮的可能性.方法:用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSC,经体外与角膜基质细胞共培养诱导分化,免疫荧光法检测角膜上皮细胞特异标志物K12的表达.结果:体外培养的大鼠骨髓MSC表现出很强的增殖潜能,原代培养的骨髓MSC CD29免疫荧光染色阳性,CD34和CD45为阴性,符合骨髓MSC的特征.MSC与角膜基质细胞共培养1wk后大部分细胞分化为间质细胞,少部分细胞形态上相对偏小,免疫荧光检测这部分细胞表达角膜上皮细胞特异性标志角蛋白K12.结论:体外培养的MSC在角膜基质细胞的诱导下可横向分化为角膜上皮细胞.     

以羊膜为底物培养鸡角膜缘上皮细胞的实验研究

目的为眼表面重建术提供良好的移植材料。方法用胰酶及EDTA消化法去除羊膜上皮将消化、离心获得的鸡角膜缘上皮细胞调成1×107/mlDMEM悬液,接种在6孔培养板底的羊膜基底膜面,放人37℃,5％CO2孵箱培养。结果48h羊膜上培养细胞形成单层,较培养板上培养的同种细胞小,细胞表面的微绒毛及侧面足状突丰富,立体感明显。结论以羊膜基底膜为底物培养的鸡角膜缘上皮细胞可以着床生长并形成完整的单层上皮,为眼表重建使用羊膜及基底膜面培养的角膜上皮细胞提供了实验材料。同时表明羊膜在体外也可以促进鸡角膜缘上皮细胞生长。     

角膜上皮细胞Pax—6基因表达分析

目的检测体外培养角膜上皮细胞Pax-6基因的表达,探讨维持角膜缘干细胞特性的基因因素.方法地高辛标记cDNA探针进行DNA印迹杂交和蛋白质免疫印迹,检测培养的角膜上皮细胞中Pax-6基因表达状况.结果EcoRⅠ酶切角膜缘上皮细胞中9.1kbp的DNA片断与探针序列相同,其中原位和原代培养细胞、传第l代明显测出,角膜中央上皮细胞的原位和原代细胞中也能测出.Western     

聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响

目的：观察聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响。

方法：观察不同浓度聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响,取体外培养的生长良好的角膜上皮细胞按随机数字法分为：对照组、低浓度组、中浓度组和高浓度组。观察不同消毒时间聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响,取体外培养的生长良好的角膜上皮细胞按随机数字法分为：对照组、短时间组、中等时间组和长时间组。采用ELISA检测各组丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,采用倒置显微镜、CCK-8法检测各组细胞活性,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。

结果：聚维酮碘浓度越高,角膜上皮细胞的MDA含量越高,SOD含量越低,细胞活性越低,凋亡率越高。聚维酮碘对角膜上皮细胞的氧化损伤呈浓度依赖性,组间有差异(均P<0.01)。聚维酮碘消毒时间越长,角膜上皮细胞的MDA含量越高,SOD含量越低,细胞活性越低,凋亡率越高。聚维酮碘对角膜上皮细胞的氧化损伤呈时间依赖性,组间有差异(均P<0.01)。

结论：聚维酮碘对角膜上皮细胞有氧化损伤作用,损伤呈浓度和时间依赖性。     

氧化石墨烯对大鼠角膜上皮细胞的致损伤作用

目的 探讨氧化石墨烯(oxidation of graphene,GO)对大鼠角膜上皮细胞的毒性作用.方法 体外培养Wistar雌鼠角膜上皮细胞分为正常对照组、GO干预组,正常对照组不做任何处理,GO干预组在培养时加入不同浓度(0.005 μg·L-1、0.010μg·L-1、0.020 μg·L-1、0.050 μg·L-1、0.100μg·L-1)的GO.MTT法绘制角膜上皮细胞的生长曲线、检测细胞活性;流式细胞术检测细胞的状态分布;HE染色后显微镜下观察亚细胞结构;用DAPI/PI双染以及台盼兰染色的方法进一步验证经GO干预后的细胞状态.结果 经GO干预后的角膜上皮细胞通过HE染色发现细胞内有GO的进入与残留,且细胞形态发生不规则改变,伪足部分出现纤维状结构;MTT结果显示随着GO浓度的增加,细胞活性由(81.55±1.31)％降低至(64.08±0.27)％,随着最低有效浓度的GO(O.005 μg·L-1)干预时间的增加,细胞活性由(82.61±1.36)％降低至(47.92±1.06)％;流式细胞术显示细胞破碎、死亡的比例随着GO浓度的升高,由52.9％上升至92.8％,而凋亡细胞的比例未发生明显变化;DAPI/PI双染及台盼兰染色结果均显示经GO干预后细胞死亡数目的比例急剧升高(均为P＜0.01).结论 GO对大鼠角膜上皮细胞具有毒性作用,提示GO的生物安全性存在隐患.