核因子κB和c-myc在尖锐湿疣皮损角质形成细胞中的表达

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)和c-myc在尖锐湿疣皮损角质形成细胞中的表达。方法 采用原位杂交方法检测尖锐湿疣50例,确定为HPV6/11阳性;采用免疫组化En Vision二步法检测50例尖锐湿疣患者皮损和25例正常人皮肤(包皮)中NF-κB和c-myc的表达及分布。结果 ①与正常人皮肤对照组相比,尖锐湿疣皮损角质形成细胞中NF-κB和c-myc的表达均有不同程度增强(前者U=6.286,P<0.01;后者U=4.356,P<0.01)。NF-κB表达主要分布于棘细胞层,阳性信号定位于胞浆。c-myc表达主要分布于表皮全层或棘细胞层和基底层,阳性信号定位于胞核。②尖锐湿疣皮损中,NF-κB与c-myc的表达呈正相关(r=0.89,P<0.01)。结论 在HPV6/11感染时,角质形成细胞中转录因子NF-κB和c-myc的表达增高,可能均参与HPV感染细胞增殖的调控。     

Stat1和含SH2区域的SHP-1在尖锐湿疣中的表达

目的 探讨JAK/STAT通路中信号转导和转录激活因子Stat 1和含SH2区域的酪氨酸磷酸酶SHP-1在尖锐湿疣中的异常表达。方法 原位杂交技术诊断HPV6/11相关尖锐湿疣,SP免疫组化染色技术检测40例HPV6/11阳性尖锐湿疣患者皮损、20例正常人皮肤(包皮)中Stat 1和SHP-1的表达及分布。结果 尖锐湿疣皮损中Stat 1和SHP-1的表达均强于正常人上皮中的表达,两者比较差异均有统计学意义(前者W=382.5,P<0.01;后者W=369,P<0.01)。尖锐湿疣患者皮损中Stat 1和SHP-1阳性细胞主要分布于棘细胞层,Stat 1阳性反应定位于胞浆或胞核,SHP-1阳性反应主要定位于胞浆。尖锐湿疣患者中Stat 1和SHP-1的表达呈显著相关性(tau-b=1.0,P<0.01)。结论 HPV6/11阳性尖锐湿疣中Stat 1和SHP-1表达增强,提示HPV6/11感染时可能通过JAK/STAT通路,在角质形成细胞过度增殖中起作用。     

神经性皮炎皮损处神经纤维的数量及其与朗格汉斯细胞关系的研究

目的探讨神经性皮炎患者皮损处神经纤维的数量变化及其与朗格汉斯细胞接触的关系.方法用辣根过氧化物酶结合的链霉亲和素-生物素技术观察24例神经性皮炎患者皮损处神经纤维的表达及数量变化.用免疫荧光双标记及共聚焦激光扫描显微镜技术观察神经性皮炎患者皮损处神经纤维与朗格汉斯细胞接触数量关系.用实时定量PCR方法检测皮损处神经生长因子mRNA的表达情况.结果 神经性皮炎患者皮损处神经纤维长度显著增加,与皮损周边对照(t=6.90,P<0.001)及正常人对照(t=5.71,P<0.001)比较差异有统计学意义.皮损表皮内有神经纤维接触的朗格汉斯细胞占朗格汉斯细胞总数的百分数明显增多,与皮损周边对照(X²=43.91,P<0.001)及正常人对照(X²=46.11,P<0.001)比较差异有统计学意义.皮损处神经生长因子mRNA高表达,与皮损周边对照(t=3.25,P<0.01)及正常人对照(t=3.67,P<0.01)比较差异有统计学意义.结论 神经性皮炎患者皮损处存在高水平活性的NGF导致神经纤维增生.     

端粒酶活性与细胞凋亡在尖锐湿疣患者组织中的表达

目的 探讨尖锐湿疣(CA)皮损中端粒酶活性与细胞凋亡表达情况及其两者之间的相关性。方法 采用端粒重复序列扩增文件-酶标法(TRAP-ELISA)检测了30例尖锐湿疣患者皮损端粒酶活性,并与正常组织和肿瘤细胞株作对照;原位末端标记法(TUNEL)检测皮损中细胞凋亡。结果 27例(90%)尖锐湿疣皮损中端粒酶活性A₄₅₀值为0.50~2.76,平均1.302,明显高于正常皮肤组织,差异有显著性(t=6.12,P<0.01);24例皮损中有凋亡细胞,占80%,且端粒酶活性与凋亡指数呈显著负相关,r=-0.52,P=0.004。结论 端粒酶可以在一些非恶性皮肤病中表达,且影响细胞凋亡,可能参与CA发病。     

寻常型银屑病患者血管内皮生长因子及单核细胞趋化因子-1表达的研究

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)在银屑病患者皮肤中的表达及其意义。方法 用免疫组化法检测银屑病患者皮损、非皮损及正常人皮肤中VEGF、MCP-1的表达与分布。用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测患者血清中VEGF、MCP-1水平。结果 ①银屑病患者皮损及非皮损中VEGF表达较正常人皮肤明显增强(P<0.05).皮损中MCP-1表达较非皮损及正常人皮肤明显增强(P<0.05).②患者血清中VEGF水平明显高于正常人(P<0.05),MCP-1水平与正常人比较差异无显着性(P>0.05).③皮损角质形成细胞中VEGF、MCP-1的表达与PASI评分无显着相关性(P>0.05)。结论 VEGF、MCP-1的表达增强在银屑病的发病机制中可能起重要作用。     

角质形成细胞生长因子及神经细胞生长因子在银屑病患者皮损中的表达

目的 探讨角质形成细胞生长因子(KGF)及神经细胞生长因子(NGF)与银屑病的关系及银屑病皮损中间质细胞与角质形成细胞的相互作用。方法 应用免疫组化技术分别检测33例银屑病患者皮损、8例非皮损和13例正常人皮肤中KGF、KGF受体、NGF、NGF受体的表达。结果 KGF、KGF受体在银屑病患者基底层和棘细胞下层有极强的表达,与非皮损组及正常对照组间差异有显着性(P<0.05),而非皮损组与正常对照组间差异无显着性(P>0.05).KGF、KGF受体在真皮层未见表达。NGF、NGF受体则主要表达在颗粒层和棘细胞上层,皮损组与非皮损组之间及非皮损组与正常组之间均差异有显着性(P<0.05)。结论 银屑病患者皮损中KGF及NGF可能介导了角质形成细胞的增殖与分化不全;银屑病皮损中存在着间质细胞和角质形成细胞相互作用的紊乱。     

尖锐湿疣患者皮损中SOCS1和PIAS1的表达及意义

目的 探讨尖锐湿疣(CA)皮损角质形成细胞中细胞因子信号转导JAK/STAT通路负调控蛋白细胞因子信号抑制剂-1(SOCS1)和活化STAT的蛋白抑制剂-1(PIAS1)的表达。方法 采用SP免疫组化染色技术检测40例CA患者皮损、20例宫颈癌和20例正常人皮肤(包皮)中SOCS1和PIAS1的表达及分布。结果 ①CA患者皮损中SOCS1和PIAS1的表达阳性细胞分布主要位于棘细胞层,为棕黄着色,阳性反应定位胞质;宫颈鳞状细胞癌亦为胞质阳性表达,棕黄着色,呈弥漫性分布;而正常包皮少数阳性着色主要定位于基底层细胞的胞质,呈浅黄着色。②CA皮损中SOCS1和PIAS1的表达阳性率分别为85%和80%,高于在正常人上皮中的表达(阳性率分别为30%和35%),两组比较差异均有统计学意义(前者χ²=18.15,P<0.01;后者χ²=11.87,P<0.01);宫颈癌中SOCS1和PIAS1的表达阳性率分别为90%和85%,虽较CA有升高,但两者比较差异均无统计学意义(两者均P>0.05)。③CA中SOCS1与PIAS1的表达无显著相关性(r_s=0.14,P>0.05)。结论 CA皮损中可能通过细胞因子信号转导负调控蛋白SOCS1和PIAS1在角质形成细胞过度增殖或恶性转化过程中起调控作用。     

尖锐湿疣患者外周血CD8+T细胞细胞因子的表达

目的 检测尖锐湿疣患者外周血CD8⁺T细胞白介素-2、白介素-12、干扰素-γ、白介素-4的表达水平,探讨其在尖锐湿疣发病中的作用.方法 应用流式细胞仪检测60例尖锐湿疣患者和20例正常人对照者外周血CD8⁺T细胞白介素-2、白介素-12、干扰素-γ、白介素-4的表达水平.结果 尖锐湿疣患者外周血CD8⁺T细胞白介素-2、白介素-12、干扰素-γ阳性细胞百分比均显著下降(P<0.01);白介素-4+CD8⁺T细胞百分比与正常人对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);干扰素-γ+/白介素-4+T细胞比值显著低于正常人对照组(P<0.01).结论 尖锐湿疣患者Tc1细胞水平低下,Tc1/Tc2显著低于正常人对照.     

二期梅毒患者外周血淋巴细胞凋亡及其Fas、Bcl-2表达的研究

目的 检测二期梅毒患者外周血淋巴细胞(PBLC)凋亡及其Fas、Bcl-2的表达,探讨二期梅毒患者免疫功能异常与淋巴细胞凋亡的关系。方法 采用流式细胞仪检测33例二期梅毒患者和30例正常人PBLC细胞凋亡及其Fas、Bcl-2的表达。结果 梅毒患者PBLC及CD4⁺细胞Fas表达明显高于对照组(P<0.01),而Bcl-2表达明显低于对照组(P<0.01)。CD8⁺、CD19⁺细胞Fas、Bcl-2表达两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。梅毒患者PBLC及CD4⁺细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01),CD8⁺及CD19⁺细胞凋亡率两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。梅毒患者PBLC及CD4⁺细胞凋亡率分别与其Fas表达呈显著正相关(r=0.68,P<0.01;r=0.71,P<0.01),但与Bcl-2表达呈显著负相关(r=-0.82,P<0.01;r=-0.74,P<0.01)。结论 二期梅毒患者细胞免疫功能异常可能与淋巴细胞凋亡过度有关,而淋巴细胞凋亡过度与Fas、Bcl-2表达异常有关。     

Patched-1和Gli-1在银屑病皮损中的表达

目的 探讨Patched-1、Gli-1在银屑病皮损中的表达。方法 应用免疫组化和原位杂交的方法,检测银屑病皮损及正常人皮肤中Patched-1、Gli-1的表达和分布情况。结果 在银屑病皮损中Patched-1表达高于正常人皮肤(免疫组化χ²=6.53,P<0.05;原位杂交χ²=7.93,P<0.05),Gli-1表达显著高于正常人皮肤(免疫组化χ²=19.21,P<0.01;原位杂交χ²=14.34,P<0.01),主要分布于表皮细胞胞浆中,在毛囊、浸润的炎细胞及血管内皮细胞中也有阳性表达。结论 银屑病皮损表皮中Patched-1和Gli-1均处于高表达状态,Hedgehog信号转导通路可能在银屑病发病中起一定作用。     

细胞周期素E、p21、转录因子E2F-1在尖锐湿疣中的表达

目的　探讨细胞周期相关因子细胞周期素E(cyclinE)、p2 1(WAF1/CIP1)、核转录因子E2F 1在尖锐湿疣 (CA)皮损中的变化及其意义。方法　应用原位杂交技术检测HPV 6/ 11相关CA ,应用SP免疫组化技术检测 3 8例HPV 6/ 11阳性CA患者皮损和 13例正常人皮肤中cyclinE、p2 1、E2F 1与分布。 结果　①CA皮损中cyclinE、p2 1、E2F 1的表达均较正常皮肤增强 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,阳性信号主要分布于表皮棘层和颗粒层。②CA皮损中cyclinE与p2 1的表达间存在正相关性 ,cyclinE与E2F 1、p2 1与E2F 1间无相关性。 结论　HPV 6/ 11CA可能通过细胞周期调控蛋白的相互协调与制约 ,引起角质形成细胞的过度增殖     

尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒感染与生存素和增殖细胞核抗原的表达

目的 探讨人乳头状瘤病毒（HPV）6／11、16／18在尖锐湿疣（CA）组织中的感染情况及其与生存素和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的关系。方法 HPV分型PCR检测试剂盒检测HPV6／11、16／18在41例尖锐湿疣组织、23例正常皮肤组织中的表达情况，同时用SP免疫组化法检测生存素及PCNA蛋白的表达。结果 ①正常对照组未检测到HPV6／11、16／18感染；HPV6／11在尖锐湿疣中的感染率为87．80％（36／41），与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．005）；HPV16／18在尖锐湿疣中的感染率为19．51％（8／41），与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。②生存素和PCNA在尖锐湿疣组织中的阳性率分别为53．66％（22／41）和87．80％（36／41），在正常皮肤组织中的阳性率分别为8．70％（2／23）和47．83％（11／23）。尖锐湿疣组中生存素和PCNA表达的阳性率与正常对照组比较差异均有统计学意义．且尖锐湿疣中两者的阳性表达呈正相关（P=0．009）。③生存素及PCNA在有HPV6／11感染患者中的表达明显强于无HPV6/11感染患者。结论 HPV感染可上调生存素与PCNA的表达。     

光线性角化病和鳞状细胞癌表皮生长因子受体与MAPK信号通路的研究

目的 探讨磷酸化ERK1/2、JNK和p38MAPK与其上游因子表皮生长因子受体（EGFR）及下游转录因子Elk-1在光线性角化病（AK）和皮肤鳞状细胞癌（SCC）中的表达。 方法 收集确诊为AK和高、中、低分化SCC患者各30例的病变组织,同时收集30例非癌患者正常皮肤组织作为正常对照组。采用免疫组化及Western印迹法分别检测p-EGFR、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK及p-Elk-1蛋白在AK和不同分化程度SCC中的表达情况。 结果 p-EGFR在SCC组中的表达高于AK组及正常对照组（P < 0.05）,AK组与正常对照组表达差异无统计学意义;p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK及p-Elk-1在SCC的表达均高于AK组及正常对照组（P < 0.05）,且在AK中的表达又均高于正常对照组（P < 0.05）。除p-EGFR和p-Elk-1在高分化和中分化SCC中的表达差异无统计学意义,p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK随着SCC分化程度的降低,其表达逐渐增高（P < 0.05）。相关性分析显示,在SCC中p-EGFR的表达与p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK的表达强度呈正相关（r = 0.843、0.819、0.902,均P < 0.01）,且p-Elk-1的表达与p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK的表达强度亦呈正相关（r = 0.874、0.843、0.893,均P < 0.01）;在AK中p-EGFR的表达仅与p-p38MAPK的表达强度呈正相关（r =0.707,P = 0.022）。 结论 p-EGFR、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK及p- Elk-1蛋白在皮肤SCC中的表达与其病理分级有关。磷酸化EGFR→ERK1/2、JNK、p38MAPK→Elk-1信号转导途径可能在AK和SCC的发生发展中起作用。     

Simultaneously detected aberrant p53 tumor suppressor protein and HPV-DNA localize mostly in separate keratinocytes in anogenital and common warts

Abstract The E6 oncoprotein of human papillomavirus (HPV) is known to inactivate the control function on cell cycle exerted by p53 tumor suppressor protein in vitro by binding to p53 and thus facilitating the degradation of p53. We have applied a simultaneous in situ demonstration method for detecting p53 protein and HPV-DNA on formalin-fixed tissue sections, and investigated the in vivo interrelationship of p53 protein and HPV-DNA. Immunohistochemical staining for p53 protein with polyclonal and monoclonal antibodies, recognizing both wild-type (wt) and mutated p53 protein, was performed first and in situ DNA hybridization (ISH) for HPV types 6/11 or 16/18 with digoxigenin-labelled probes thereafter. 47% (25/53) of 48 histologically confirmed primary or recurrent condylomata acuminata (CA), 2 Bowenoid papulosis (BP) and 3 common wart (CW) biopsies, positive for HPV 6/11 or HPV 16/18 DNA, showed keratinocytes immunopositive for p53 protein. Of these. 11 lesions with abundant numbers of p53-positive cells were further analyzed with the double method. Signals for abnormal p53 protein and HPV-DNA were detected in separate cell nuclei in all biopsies and, additionally, in the same cell nuclei in 3 biopsies (1 BP, 1 CA, 1 CW). Usually the p53 positivity localized more basally in the epidermis than HPV-DNA, although p53- and HPV-positive keratinocytes were always located closely. The findings were similar for HPV-types 6/11 and 16/18. Our finding of both p53 and HPV-6/11 signals in the same cell nuclei may indicate complexing of p53 and low-risk HPV's without degradation of p53. Our results show abnormal p53 expression in HPV-infected skin lesions, and suggest that p53 protein is susceptible to aberrations even in the cells in the vicinity of productive HPV infection. However, it is not yet fully understood how HPV interferes with p53 protein in these cells.     

尖锐湿疣皮损中HPV类型及p53、bcl—2分子表达研究

目的 探讨尖锐湿疣(CA)中HPV（人乳头瘤病毒）感染类型及其p53和bcl－2（B细胞淋巴瘤样因子2）分子在HPV6／11阳性尖锐湿疣发病中的可能作用。方法 用PCR法检测了22例CA皮损中HPV6／11和HPV16／18,用免疫组化方法检测了尖锐湿疣组织中p53和bcl－2分子的表达。结果 （1）所有标本均为HPV6／11阳性,未检测出HPV16／18;（2）40．9％的尖锐疣皮损在表皮角质形成细胞中有p53蛋白的表达,但阳性细胞数量较少,主要散在分布于基底层;（3）bcl－2蛋白在CA及鳞状细胞癌中未见表达。结论 （1）HPV6／11是CA的主要致病病毒;（2）CA中部分出现p53分子表达提示这部分细胞可能已出现恶性转化倾向;（3）bcl-2可能与角质形成细胞来源的良性增生性疾病以及恶性肿瘤关系不大。     

人类乳头瘤病毒16全基因在体外培养的正常人角质形成细胞中的瞬时表达

目的 利用含有人类乳头瘤病毒(HPV)16全基因的质粒转染正常人角质形成细胞,观察HPV16 mRNA在转染细胞的表达。方法 用FuGENE^TM6转染试剂,将携带HPV16全基因的质粒pSV2-neo/16转染体外培养的正常人角质形成细胞,在转染后24h提取细胞总RNA和DNA,进行RT-PCR和Southern印迹分析。结果 24h后,RT-PCR成功地扩增出110bp的片段,转染细胞中已出现HPV16 mRNA的表达,Southern印迹证实转染细胞中含有HPV16全基因7.9kb。结论 pSV2-neo/16转染正常人表皮角质形成细胞,24h内即可检测到HPV16mRNA表达。     

外阴HPV相关疾病中p~(53),cyclinD1和ki67蛋白表达及其与HPV感染的关系

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)在外阴HPV相关疾病—尖锐湿疣(CA)、外阴上皮内瘤变(VIN)和外阴鳞状细胞癌(VSCC)中的感染情况及与p53,cyclinD1,ki67蛋白表达的关系。方法 在110例外阴HPV相关疾病中应用核酸分子快速导流杂交基因分型技术检测HPV16/18,HPV6/11的表达,同时用免疫组化SP法检测p53,cyclinD1,ki67蛋白的表达,并与10例正常组织进行对照。结果 HPV16/18在CA组,VIN组及VSCC组的阳性表达率均高于正常对照组,而且其阳性表达率随外阴上皮恶性程度增加而增加;HPV6/11在CA组及VINⅠ组的阳性表达率均高于VINⅡ组及VINⅢ组和正常对照组;以上差异均有统计学意义(P均<0.05)。HPV6/11在VSCC组无阳性表达,HPV16/18感染与p53,ki67表达呈正相关,与cyclinD1表达无相关性。HPV6/11感染与p53,cyclinD1,ki67表达无相关性。结论 HPV16/18感染与重度外阴上皮内瘤变及外阴鳞状细胞癌密切相关;HPV6/11感染是尖锐湿疣及轻度外阴上皮内瘤变的重要病因。HPV16/18感染与p53,ki67蛋白表达呈正相关,它们在外阴鳞状上皮恶变过程中有着协同的作用。