缺氧对过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响

目的 研究不同程度缺氧条件下，肺癌A549细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达状况，及反义封闭HIF-1α后，对PPARα受体的影响，以了解PPARα和HIF-1α的相关性。方法 首先将A549细胞分为4组：正常对照组（A组）、缺氧24小时组（B组）、缺氧48小时组（C组）、缺氧72小时组（D组）。观察不同缺氧时间对PPARα及 HIF-1α蛋白和mRNA表达水平的影响。为观察HIF-1α对PPARα表达状况的影响，再设计4组：对照组2（E组），HIF-1α反义寡核苷酸组（F组），HIF-1α正义寡核苷酸组（G组），HIF-1α错义寡核苷酸组（H组）。结果 正常对照组，PPARα和HIF-1α蛋白及mRNA均有少量表达；随着缺氧时间的延长，两的表达水平逐渐升高。在缺氧24小时，两mRNA和蛋白开始较高，48小时明显增高，至72小时达到高峰。反义封闭HIF-1α后，PPARα蛋白及mRNA的表达水平明显下降。结论 PPARα及HIF—1α的表达水平随肿瘤缺氧信号的加强而增加，且PPARα受HIF-1α的调控。     

过氧化物酶体增殖激活受体α在肝脏疾病中的作用及机制

过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)是核受体超家族成员,在脂质代谢中起着中心调控作用,近年来发现PPARα激动剂在非酒精性脂肪性肝病的预防和治疗中起着关键作用,在其他肝脏疾病中也有相关报道。综述了PPARα在非酒精性脂肪性肝病、酒精性肝病、病毒性肝炎、胆汁淤积性肝病、药物性肝损伤、肝癌中的作用及机制,为PPARα相关的老药新用方面的研究提供参考。     

高饱和脂肪酸和高糖饮食对大鼠肝脏过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的影响

将30只雄性Wistar大鼠分为三组各10只，对照组（NC组）基础饮食饲养，高饱和脂肪酸组（HSF组）高饱和脂肪酸饲养，高糖组（HS组）高糖饲养。喂养24周后，观察三组体重（BW），血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA），肝脏过氧化氢酶（CAT）、脂酰CoA氧化酶、过氧化物酶体脂肪酸β-氧化活性变化。结果 HSF组、HS组BW、TG、TC、FFA及肝脏过氧化氢酶、过氧化物酶体脂肪酸β-氧化、脂酰CoA氧化酶活性较NC组明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。提示长期高饱和脂肪酸、高糖饮食可导致大鼠脂质代谢紊乱，肝脏中的CAT、脂酰CoA氧化酶和过氧化物酶体脂肪酸β-氧化的活性升高。     

过氧化物酶体增殖物激活受体α在中枢神经系统作用的研究进展

正过氧化物酶体是体内一种亚细胞结构,其功能主要包括清除分子氧和过氧化物,并参与体内3大物质代谢。一些天然或人工合成的脂肪酸类化学物质可以使过氧化物酶体增殖,称为过氧化物酶体增殖物。Issetram等发现一种甾体激素受体,能被过氧化物酶体增殖物激活,命名为过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor,PPAR),它是一种新型的类固醇受体,该受体被其配体     

CS207对衰老内皮细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α生物活性的影响

目的观察CS207对衰老内皮细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)生物活性的影响,为防治老年血管基础性疾病提供重要的实验依据。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞,将其分为青年组和衰老组,分别应用半定量RT-PCR及电泳迁移率变动分析方法检测两组内皮细胞经不同浓度CS207处理前后PPARα mRNA表达水平及其DNA结合活性。结果与青年组比较,衰老组内皮细胞PPARα mRNA表达及DNA结合活性均显著降低;CS207能显著增强衰老组内皮细胞PPARα mRNA表达水平及其DNA结合活性,此效应呈现浓度依赖性。结论PPARα特异性活化剂CS207能够有效逆转人脐静脉内皮细胞衰老时PPARα生物活性的降低。     

过氧化物酶体增殖物激活受体α、γ调控长链酰基辅酶A合成酶1对肝纤维化进程的影响

在肝纤维化的发生发展进程中,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α、γ具有调控脂代谢、脂肪酸代谢和抗肝纤维化等生物学功能,并与调控脂肪代谢的相关酶类关系密切。长链酰基辅酶A合成酶1(ACSL1)作为脂肪代谢的关键酶之一,在肝脏中参与脂质的合成与分解代谢,可引起肝脏内脂质沉积、炎症反应,并在肝脏中直接或间接促进肝纤维化进程。回顾了PPARα、γ和ACSL1各自的生物学功能与作用;简述了PPARα、γ对ACSL1的转录调控机制;从肝脏脂代谢和肝星状细胞活化等两个方面分析了PPARα、γ对ACSL1的调控作用,进而影响肝纤维化进程。从而指出在肝脏中PPARα、γ通过调控ACSL1直接或间接参与肝纤维化进程。     

过氧化物酶体增殖物激活受体α、γ调控长链酰基辅酶A合成酶1对肝纤维化进程的影响

在肝纤维化的发生发展进程中,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α、γ具有调控脂代谢、脂肪酸代谢和抗肝纤维化等生物学功能,并与调控脂肪代谢的相关酶类关系密切。长链酰基辅酶A合成酶1(ACSL1)作为脂肪代谢的关键酶之一,在肝脏中参与脂质的合成与分解代谢,可引起肝脏内脂质沉积、炎症反应,并在肝脏中直接或间接促进肝纤维化进程。回顾了PPARα、γ和ACSL1各自的生物学功能与作用;简述了PPARα、γ对ACSL1的转录调控机制;从肝脏脂代谢和肝星状细胞活化等两个方面分析了PPARα、γ对ACSL1的调控作用,进而影响肝纤维化进程。从而指出在肝脏中PPARα、γ通过调控ACSL1直接或间接参与肝纤维化进程。     

TO901317对海马神经元β-分泌酶表达及β-淀粉样肽生成的影响

目的研究肝X受体(LXR)配体TO901317对海马神经元淀粉样前体蛋白(APP)、α-分泌酶(ADAM10)和β-分泌酶(BACE1)mRNA表达的影响及与β-淀粉样肽(Aβ)生成的关系。方法大鼠海马神经元培养至第7天,在饲养液中加入2.0μmol/LTO901317,继续培养48h。应用RT-PCR方法研究海马神经元APP、ADAM10和BACE1等基因的mRNA的表达,放免法检测培养液Aβ含量的变化。结果TO901317降低海马神经元APP和BACE1 mRNA表达(P<0.01),减少培养液Aβ含量(P<0.01),但不影响ADAM10 mRNA表达(P>0.05)。结论TO901317激活LXR,能通过降低APP和BACE1的表达来减少海马神经元Aβ分泌。     

过氧化物酶体增殖物激活受体α与非酒精性脂肪性肝炎

过氧化物酶体增殖物激活受体α（peroxisome proliferator-activated receptor alph,PPARα）是调节机体能量代谢和脂肪酸氧化的关键因子,在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的发生发展中起重要作用,此文就PPARα在NASH发病机制中的作用作一综述.     

桑叶总黄酮对2型糖尿病大鼠肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体α和腺苷酸活化蛋白激酶α2蛋白表达的影响

目的探讨桑叶总黄酮对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)α2蛋白表达的影响及机制。方法建立高脂饲料喂养且用链脲佐菌素诱导T2DM雄性Wistar大鼠模型,将模型大鼠随机分为5组:模型组、二甲双胍组(100 mg/kg灌胃)、桑叶总黄酮组(200,100,50 mg/kg灌胃),同时设立正常对照组。4 w后检测大鼠空腹血糖(FPG)、血清胰岛素(FINS)水平,Western印迹检测肝脏PPARα和AMPKα2蛋白表达。结果桑叶总黄酮能降低T2DM大鼠的FPG、FINS水平,Western印迹显示模型组大鼠肝脏PPARα和AMPKα2蛋白表达较正常对照组均明显下降(P<0.01)。经桑叶总黄酮干预治疗后,AMPKα2蛋白表达较模型组显著增加(P<0.01),PPARα蛋白水平改变不明显(P>0.05)。结论桑叶总黄酮对T2DM大鼠有一定的治疗作用,可能与其增加大鼠肝脏AMPKα2蛋白表达有关。     

虾青素对大鼠海马神经元细胞的保护作用

目的探讨虾青素对大鼠海马神经元细胞的保护机制。方法取SD大鼠10只,采用0.125%的胰酶分离其海马神经元细胞并进行原代培养。对照组在海马神经元细胞中加入5 mmol/Lβ样淀粉蛋白(Aβ)25-35诱导24h,建立AD模型;治疗组在海马神经元细胞中分别加入虾青素5、10、20μg/μL,然后均加入5 mmol/L的Aβ25-35诱导24 h。采用噻唑蓝比色法检测各组海马神经元细胞的存活情况,RT-PCR、Western blot法分别检测细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶、γ-分泌酶的基因及蛋白表达,半自动生化仪检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)及脂质过氧化物(MDA)。结果随着虾青素浓度升高,海马神经元细胞的存活率、SOD活性明显升高(P<0.05或<0.01),MDA降低(P<0.05),HIF-1α、APP、β-分泌酶、γ-分泌酶mRNA表达及蛋白表达明显降低(P<0.01或<0.05)。结论虾青素通过抑制大鼠海马神经元细胞HIF-1α、β-分泌酶、γ-分泌酶、APP表达,减少Aβ合成,从而对其细胞起到保护作用。     

Aβ1～42寡聚体与纤维体的制备及鉴定

目的 探讨Aβ1～42寡聚体和纤维体的制备及其鉴定方法,进而比较两者的细胞毒性.方法 设定不同的环境条件将Aβ1～42单体分别聚集成寡聚体和纤维体两种状态,利用原子力显微镜观察Aβ1 ～42的不同聚集状态.CCK-8法比较Aβ1～42寡聚体与纤维体对BV-2细胞存活率的影响.结果 原子力显微镜下观察Aβ1～42寡聚体呈球状或椭圆球状颗粒,高度为5 nm左右,Aβ1～42纤维体在镜下呈现长条纤维状聚集,高度约为3 nm左右,长度＞1 000 nm.CCK-8法显示Aβ1～42寡聚体和纤维体均对BV-2细胞具有损伤作用,并成剂量-效应关系.在同一浓度水平条件下,Aβ1～42寡聚体组的BV-2细胞存活率显著低于纤维体组(P值＜0.05).结论 原子力显微镜可直观地观察到Aβ1-42的不同聚集状态,Aβ1～42寡聚体比纤维体更具细胞毒性.     

Aβ25～35诱导阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元HSP70的表达

目的利用β-淀粉样蛋白(Aβ25～35)毒性作用诱导大鼠阿尔茨海默病(AD)模型,研究热休克蛋白70(HSP70)在海马神经元损伤中的表达.方法将大鼠随机分为2组:AD模型组、溶媒体组,在双侧海马分别注射2 μl(10 μg)Aβ25～35 、2 μl生理盐水;于海马注射第1,7,14,21天采用免疫组织化学、积分光密度分析等手段对各组大鼠脑HSP70的表达进行观察.结果 AD模型组手术第7天大鼠记忆明显减退(P<0.05),且HSP70在海马神经元内表达第1天时最高,第1～21天呈递减趋势,其中第14天锐减.结论 Aβ25～35通过氧化应激和损伤海马神经元等过程使HSP70的表达明显降低,HSP70表达是AD大鼠脑内神经元存活的重要标志.     

高饱和脂肪饮食对老年大鼠学习记忆和脑Aβ生成的影响及机制

目的观察高饱和脂肪饮食对老年大鼠学习记忆和脑β-淀粉样蛋白(Aβ)生成的影响及机制。方法 26只雄性老年大鼠随机分为对照组和高饱和脂肪组各13只,对照组大鼠给予正常饲料,高饱和脂肪组大鼠给予含15%牛油饲料,喂养3个月。用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定海马Aβ含量,用免疫组织化学染色检测脑内β-淀粉样前体蛋白(APP)表达,用黄嘌呤氧化酶法测定血清及脑组织总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与对照组相比,高饱和脂肪组大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P<0.05),穿越原平台所在位置次数显著减少(P<0.01),脑皮质和海马区APP蛋白表达明显增多(P<0.01,P<0.05),海马Aβ含量显著升高(P<0.01),血清及脑组织总SOD水平均显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论高饱和脂肪饮食降低学习记忆能力、增加APP和Aβ水平,其机制可能与降低脑抗氧化能力有关。     

过氧化物酶体增殖物激活受体β在老龄脓毒血症大鼠肺部炎症中的作用

目的探讨激活过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-β对老龄脓毒血症大鼠模型肺部炎症、炎症指标及死亡率的影响。方法选用24月龄雄性SD大鼠,通过盲肠结扎穿孔(CLP)手术建立脓毒血症模型,予GW501516 0.25、0.75 mg/kg为低、高剂量组。分别液体复苏CLP术后大鼠,与空白对照组、单纯CLP手术组比较24、48 h死亡率,运用HE染色、免疫组化染色及RT-PCR等方法了解肺组织中PPAR-β及Akt-1、核转录因子(NF)-κB、白细胞介素(IL)-6的表达。结果 (1)24 h死亡率:单纯手术组42.1%,低剂量组10%,高剂量组20%;48 h死亡率:单纯手术组27.3%,低剂量组16.7%,高剂量组50%。(2)RT-PCR:CLP术后24 h PPAR-β表达下调,使用GW501516后上调PPAR-β表达。CLP手术打击可上调IL-6、NF-κB炎症因子表达量,使用GW501516后IL-6、NF-κB表达量下调,Akt-1表达量上调。(3)HE染色:CLP手术打击后肺组织中大量炎性细胞浸润、肺间质水肿充血,GW501516处理组肺部炎性细胞浸润、间质水肿减轻。(4)免疫组化:使用GW501516后肺组织中PPAR-β阳性细胞增多。结论低剂量GW501516(0.25 mg/kg)可降低脓毒血症老龄大鼠早期死亡率,其机制与激活Akt-1、下调NF-κB有关。     

激活星形胶质细胞α7乙酰胆碱能受体抑制β-淀粉样蛋白的聚集

目的研究在星形胶质细胞内加入尼古丁后能否激活细胞内α7尼古丁乙酰胆碱能受体(n AChR)以及激活的α7n AChR对β-淀粉样蛋白(Aβ)的降解作用。方法分离新生乳鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并纯化、传代,使用细胞免疫荧光法鉴定细胞的纯度。凝胶银染方法鉴定寡聚体聚集情况。试验分为正常对照组、激动剂组、拮抗剂组以及Aβ组激动剂+Aβ组、拮抗剂+Aβ组,用蛋白印迹法检测α7n AChR蛋白表达情况以及激活细胞内受体后对Aβ的降解作用。结果经过传代培养细胞得以纯化。体外制备好的Aβ1~42除了含少量的未聚集的单体(4 k D)外,主要以二聚体、三聚体、九聚体等不同聚集形式的寡聚体存在。尼古丁组与对照组相比α7n AChR表达明显升高(P0.01),尼古丁组与拮抗剂组相比α7n AChR表达升高(P0.05);收集的蛋白与上清液,尼古丁组与Aβ组相比Aβ的表达均明显降低(P0.01),激动剂+Aβ组与拮抗剂+Aβ组相比Aβ的表达均明显降低(P0.01)。结论尼古丁可以激活星形胶质细胞内的α7n AChR,激活的α7n AChR对Aβ具有明显的降解作用,能够为预防和治疗阿尔茨海默氏病(AD)提供一个可能的方向。     

非诺贝特对过氧化物酶体增殖物激活受体α和单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的观察非诺贝特对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、单核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARα)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法体外培养HUVEC株,第3~5代用于实验。实验分3组:1空白对照组;2ox-LDL组(100 mg/L);3非诺贝特组:先将非诺贝特10、50、100μmol/L分别作用于内皮细胞24 h,然后加ox-LDL(100 mg/L)作用于细胞24 h。采用细胞酶联免疫吸附法分析检测细胞培养上清液PPARα、MCP-1含量;采用四唑盐比色法检测各孔的吸收度(OD),以评价增殖效果。结果与空白对照组比较,100 mg/L ox-LDL促进内皮细胞增殖(PO.01),非诺贝特呈剂量依赖性地抑制ox-LDL诱导的内皮细胞增殖(P0.01)。100 mg/L ox-LDL促进MCP-1分泌。10、50、100μmol/L非诺贝特能明显促进ox-LDL诱导的HUVEC分泌PPARα(P0.01),促进效应呈浓度依赖性。10、50、100μmol/L非诺贝特能明显抑制ox-LDL诱导的HUVEC分泌MCP-1(P0.01),抑制效应呈浓度依赖性。结论非诺贝特呈剂量依赖性促进ox-LDL诱导的人HUVEC分泌PPARα,抑制人HUVEC分泌MCP-1,抑制内皮细胞增殖,保护内皮功能,从而发挥贝特类调脂外抗动脉粥样硬化作用。     

线粒体乙醛脱氢酶2对β淀粉样蛋白所致神经元损伤的作用及机制

目的探讨线粒体乙醛脱氢酶(ALDH)2对β淀粉样蛋白(Aβ)所致神经元损伤的作用及机制。方法应用HT-22小鼠海马神经元细胞系,MTT法检测明确Aβ25~35负载浓度制成Aβ神经元损伤模型;ALDH2激活剂Alda-1、ALDH2抑制剂Daidzin干预后,Western印迹检测ALDH2蛋白表达水平;并采用ELISA检测4-HNE含量、以荧光素酶法检测细胞内的ATP含量。结果 HT22细胞负载Aβ25~35(浓度50μmol/L)时细胞生存率有显著降低;ALDH2激活剂Alda-1、ALDH2抑制剂Daidzin干预后,ALDH2蛋白表达水平并未发生变化,也并未导致细胞生存率改变;加入Alad-1后负载Aβ25~35的HT22细胞4-HNE含量显著减少,细胞内ATP含量明显提高,与Aβ组相比较有显著差异(P0.05)。结论 ALDH2激活后能有效减轻Aβ导致的神经元损伤,可能通过减少细胞内4-HNE含量、增加ATP含量实现其细胞保护的作用。     

缺血预处理对大鼠心肌中过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响

目的:探讨缺血预处理(IPC)对实验性大鼠缺血再灌注(IR)心肌梗死(MI)面积及过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)表达的影响。方法:Wistar大鼠70只随机分为3组:对照组(24只),IR组(24只),IPC组(22只)。采用鼠心冠状动脉左前降支结扎法制作体内IR模型,观察MI范围,运用半定量RT-PCR方法对心肌PPARαmRNA的表达情况进行分析,运用Western-blotting方法检测PPARα蛋白表达情况。结果:IPC组梗死面积显著减少(P<0·05),并且心肌PPARαmRNA及蛋白表达水平显著上调(P<0·05)。结论:IPC可显著减少实验性大鼠IR MI面积及并使心肌中PPARα显著上调。     

PNU上调大鼠皮质星形胶质细胞内源性Cryab抑制Aβ聚集

目的探讨PNU激活星形胶质细胞α7胆碱能受体(α7 n AChRs)上调内源性B-晶状体蛋白(Cryab)并抑制β淀粉样蛋白(Aβ)集聚的现象及其机制。方法分离24 h内新生乳鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并鉴定;体外制备Aβ_(1~42)寡聚体;将细胞分为对照组、PNU组、PNU+α7 n AChRs阻断剂(MLA)组、Aβ_(1~42)组、PNU+Aβ_(1~42)组、PI3K信号通路阻断剂LY294002+PNU+Aβ_(1~42)组。用蛋白印迹法检测细胞内Cryab、P-Akt(ser473)、Aβ寡聚体的表达水平。结果 (1)PNU可以显著上调星形胶质细胞内源性Cryab蛋白(P0.05);应用MLA阻断α7 n AChRs后,PNU上调内源性Cryab蛋白的作用被显著抑制(P0.05);使用LY294002阻断PI3K信号通路后,PNU上调内源性Cryab蛋白的作用被显著抑制(P0.01);(2)PNU能够显著上调磷酸化Akt蛋白水平(P0.05);应用MLA阻断α7 n AChRs后,PNU上调磷酸化Akt蛋白的作用被显著抑制(P0.01);使用LY294002阻断PI3K信号通路后,PNU上调磷酸化Akt蛋白的作用被显著抑制(P0.01);(3)在细胞裂解液及培养基中,PNU显著增强星形胶质细胞对Aβ聚集的抑制作用(P0.01);使用LY294002阻断PI3K信号通路后,PNU增强星形胶质细胞抑制Aβ聚集的功能显著减弱(P0.01)。结论PNU通过激活星形胶质细胞α7 n AChRs上调内源性Cryab从而抑制Aβ集聚;PI3K/Akt信号通路可能参与PNU激活星形胶质细胞α7 n AChRs上调内源性Cryab蛋白抑制Aβ集聚的过程。