热疗联合 IL-2逆转人肺腺癌细胞 A549/CDDP 的作用及其可能机制

目的：观察热疗联合白介素-2（IL-2）对人肺腺癌细胞株 A549/ CDDP 的耐药逆转作用,并探讨其可能作用机制。方法采用细胞培养技术,分别培养人肺腺癌细胞株 A549及其耐药细胞株 A549/ CDDP。42℃热疗,联合或不联合200 u·mL -1的 IL-2,同时在2μg·mL -1的 CDDP 作用下,分别干预敏感细胞株和耐药细胞株2 h 后,采用 MTT 法检测2种不同细胞对 CDDP 的敏感性,流式细胞仪间接免疫荧光法检测热疗、IL-2等不同条件作用下细胞中 P -糖蛋白（P-gp）、多药耐药蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）的表达差异,以及细胞内荧光药物 CDDP 的聚集量的变化。结果分别联用热疗、IL-2时,较单用 CDDP,A549/ CDDP细胞的抑制率得到提高,A549/ CDDP 细胞 P-gp、MRP 表达下降,细胞内荧光强度增强,差异均有统计学意义（P 均﹤0.05）。热疗联合 IL-2合用 CDDP 时,A549/ CDDP 细胞的抑制率进一步提高,A549/ CDDP 细胞P-gp、MRP 表达明显下降,细胞内荧光强度显著增强,差异均有统计学意义（P 均﹤0.05）,但 LRP 的表达差异无统计学意义（P ﹥0.05）。结论热疗、IL-2分别能部分逆转 A549/ CDDP 细胞对 CDDP 的耐药性;热疗联合 IL-2可进一步增强其耐药逆转效应。其逆转耐药机制,推测可能与抑制 P-gp、MRP 表达,增加细胞内药物 CDDP 的积聚有关。     

不同温度热疗逆转人肺癌细胞A549/CDDP耐药性的研究

目的 探讨不同温度的热疗对人肺腺癌细胞A549/CDDP耐药逆转作用及可能机制.方法 采用体外细胞培养技术,培养人肺腺癌细胞系A549及其耐药株A549/CDDP.设计不同温度(37、40、41、42、43℃)热疗2 h,联合2μg/mL CDDP处理A549/CDDP细胞,检测其对化疗药物CDDP的敏感性,流式细胞仪间接免疫荧光法检测CDDP、热疗处理前后细胞中P-糖蛋白(P-gp)的表达及细胞内荧光药物CDDP的聚集量.结果 A549/CDDP细胞抑制率在39-42℃范围内随热疗的温度升高而升高,42℃时最高(P<0.05).热疗合用顺铂时,A549/CDDP细胞P-gP表达下降,胞浆内CDDP荧光强度增强.结论 热疗能部分逆转人肺腺癌细胞A549/CDDP的耐药效应,其机制可能与抑制P-gP表达,增加细胞内化疗药物积聚有关.     

双氢青蒿素逆转人肺腺癌细胞多药耐药作用研究

目的观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549及A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素抗肺癌和逆转耐药效果。方法采用细胞计数法绘制亲代A549细胞和A549/CDDP细胞生长曲线,细胞增殖及增殖抑制实验采用MTT检测法:A549/CDDP细胞分为顺铂单药作用组,联合作用组(100nM双氢青蒿素加顺铂,320nM双氢青蒿素加顺铂),序贯治疗组(100nM双氢青蒿素预处理),用MTT检测法分析计算IC50值进行比较。结果顺铂对人肺腺癌A549细胞和A549/CDDP细胞IC50值分别为0.270μg/ml和5.703μg/ml,耐药倍数为21.12。对A549/CDDP细胞,联合治疗100nM双氢青蒿素组顺铂IC50值为2.225μg/ml(逆转倍数2.56),320nM双氢青蒿素组顺铂IC50值0.464μg/ml(逆转倍数12.29)。对A549/CDDP细胞,序贯治疗组顺铂IC50为2.523μg/ml(逆转倍数2.26)。结论联合用药和序贯治疗均可逆转A549/CDDP细胞对顺铂的耐药。     

榄香烯乳剂对肺癌A549/DDP细胞株耐药逆转作用及其机制

目的:探讨榄香烯乳（elemene,ELE）逆转人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药性及其机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与顺铂（cisplatin,DDP）合用时耐药逆转作用;采用流式细胞术检测榄香烯乳对A549/DDP细胞内罗丹明-123（rhodamine-123,Rh123）蓄积的影响;采用Western blot检测榄香烯乳对耐药细胞A549/DDP细胞膜上P-gp蛋白表达的影响。结果:不同浓度榄香烯对A549/DDP细胞均有一定的抑制作用,呈时间-剂量依赖性效应。单用DDP的IC50为15.46μg/ml,合用20μg/ml榄香烯24h,IC50为4.15μg/ml,逆转耐药倍数为3.63。同时,榄香烯增加A549/DDP细胞内Rh123的蓄集,降低细胞膜上P-gp的表达,且呈剂量依赖性,表明榄香烯能减少A549/DDP细胞对药物的外排和抑制P-gp蛋白的表达。结论:榄香烯在体外逆转肿瘤细胞耐药性可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP 细胞凋亡

目的:观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法:A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果:对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著(P<0.01),逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著(P<0.01)。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论:A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

双氢青蒿素和顺铂诱导人肺腺癌A549/CDDP细胞凋亡

目的：观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素逆转耐药效果,从诱导细胞凋亡角度分析可能的作用机理。方法：A549/CDDP细胞分为双氢青蒿素作用组和顺铂对照组,顺铂对细胞增殖抑制实验采用MTT检测法,用annexin-V和PI双标记进行流式细胞检测分析细胞凋亡率。双氢青蒿素对细胞Bcl-2,Bax等蛋白的影响采用免疫组织化学法结合图像分析。结果：对人肺腺癌A549/CDDP细胞双氢青蒿素作用组和顺铂对照组IC50值分别为1.30μg/ml和5.58μg/ml,两组比较差异显著（P〈0.01）,逆转倍数4.29。对A549/CDDP细胞,双氢青蒿素作用组和对照组凋亡率分别为17.6%和1.6%两组比较差异显著（P〈0.01）。双氢青蒿素作用于A549/CDDP细胞后,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上升。结论：A549/CDDP细胞耐药作用与凋亡耐受有关,双氢青蒿素可使A549/CDDP细胞恢复对顺铂的敏感性,通过解除凋亡抑制从而逆转耐药。     

干扰素和环孢霉素A 协同逆转K562/ ADM细胞对阿霉素的耐药性

  目的 观察干扰素(α-Interleron，α-IFN)和环孢霉素A(Cyclosporine A,CsA)对白血病K562/ADM细胞耐药性的协同逆转效应。方法 以多药耐药基因／P-糖蛋白(Muhidrug resistance gene／P-glycoprotein，mdrl／P-gp)超表达的K562／ADM细胞为靶细胞，MTT比色法检测药物的细胞毒效应；流式细胞仪检测细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)表达水平；激光共聚焦显微镜观察细胞内阿霉素含量变化。结果 K562／ADM细胞对阿霉素呈高度耐药性，并与柔红霉素和鬼臼乙叉甙交叉耐药，但与CsA无交叉耐药。CsA和α-IFN单独或联合应用均对K562／ADM细胞的耐药性有较强的抑制效应。流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析发现α-IFN和CsA单独或联合均不能下调细胞mdrl/P-gp的表达，反而应激性地刺激耐药细胞P-gp的合成增加，但可抑制P-gp的功能、增加K562／ADM细胞内阿霉素的积聚。结论 α-IFN和CsA联合可协同逆转耐药白血病细胞的耐药性，其作用机制为抑制P-gp的功能而非下调mdrl／P-gp的表达水平。     

RNA干扰GRP75表达改善人肺腺癌细胞对顺铂耐药性

背景与目的 GRP75(glucose regulated protein75)属于热休克蛋白(hot shock protein,HSP)家族,是一种主要位于线粒体的分子伴侣,在某些耐药的肿瘤细胞中高表达。本研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默GRP75基因的表达,观察下调GRP75的表达对肿瘤细胞耐药性的影响并探讨GRP75在肿瘤细胞耐药机制中的作用。方法以顺铂为诱导药物,人肺腺癌细胞系A549为诱导对象,采用逐步增加剂量与大剂量冲击相结合的方法,诱导建立耐顺铂细胞株A549/CDDP。分别将包裹GRP75-shRNA和不含干扰序列的慢病毒转染A549和A549/CDDP细胞,在荧光显微镜下观察各组细胞转染率,应用M比色法检测干扰前后各组细胞对顺铂的敏感性,应用Western blot检测干扰前后各组细胞GRP75、p53、bcl-2的表达。结果各组细胞感染效率均在90%以上,转染后A549/CDDP和A549细胞中GRP75的表达均明显下调(P<0.05)。转染前后A549/CDDP细胞对顺铂的耐药指数分别为21.52和4.14。转染后A549/CDDP细胞内p53的表达上调(P<0.05),bcl-2表达下调(P<0.05)。结论 GRP75是A549细胞对顺铂耐药机制的相关蛋白之一,其在耐药机制中的作用与其对p53和bcl-2的调控有关。     

重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白(rhTRAIL) 逆转人肺腺癌细胞A549/ CDDP耐顺铂效应的初步研究

 目的 探讨重组人可溶性肿瘤坏死因子相关诱导配体蛋白(rhTRAIL)对人肺腺癌细胞A549／CDDP耐顺铂的逆转效应。方法 以顺铂(CDDP)联合不同浓度的rhTRAIL处理A549／CDDP，以四氮唑噻蓝盐(MTT)比色法检测顺铂的半效抑制浓度IC50并计算耐药逆转倍数RI。结果 rhTRAIL体外可明显降低A549／CDDP对CDDP的IC50提高耐药逆转倍数。结论 rhTRAIL体外可较大程度逆转A549／CDDP细胞对CDDP的耐药性，有望成为抗耐药性肺癌的一种新的生物制剂。     

β-榄香烯乳联合照射对DNA—PKcs基因表达及凋亡的影响

目的探讨β-榄香烯乳影响肺腺癌A549细胞凋亡及DNA—PKcs基因表达的放射增敏机制。方法实验分为对照组、单纯照射组（4Gy照射）、单纯药物组（10μg/ml、20μg／mlβ-榄香烯乳）、药物＋照射组（10μg/ml、20μg/mlβ-榄香烯乳＋4Gy照射）。采用四氮唑蓝比色分析法（MTF法）检测β-榄香烯乳对肺腺癌A549细胞的半数抑制浓度（IC50）;克隆形成实验计算细胞存活率;采用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡率;逆转录实时荧光定量PCR技术（RT—PCR）检测细胞DNA—PKcs基因mRNA表达量。结果MTF法测得β-榄香烯乳对A549细胞的IC50值为120μg/ml;克隆形成实验证明β-榄香烯乳对A549细胞有放射增敏作用;药物＋照射组细胞G2／M期比率及凋亡率明显高于单纯照射组及单纯用药组（P〈0．05）;药物＋照射组DNA—PKcs基因mRNA表达量与单纯照射及单纯用药组相比明显下降（P〈0．05）。结论β-榄香烯乳可通过促进A549细胞凋亡及抑制DNA—PKcs基因mRNA表达实现对A549细胞放射增敏作用。     

康莱特注射液对吉非替尼诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡影响的实验研究

目的 探讨康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响。 方法 应用MTT法计算康莱特注射液作用于人肺腺癌A549细胞株48 h的半数抑制浓度（IC50）,检测康莱特注射液（5、10、20、40、80、100、160 μl／ml）、吉非替尼（0.1、0.5、1.0、5、10、20、40 μmol／L）以及康莱特注射液（80 μl／ml）联合吉非替尼（0.1、0.5、1、5、10、20、40 μmol／L）作用于人肺腺癌A549细胞株24、48、72 h的增殖抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI 双标法检测康莱特注射液、吉非替尼及两药联合作用于A549细胞48 h后的凋亡率;免疫细胞化学法检测各药物处理组作用于A549细胞48 h后FAS、AKT2蛋白表达;RT-PCR技术检测各组FAS mRNA、AKT2 mRNA的表达水平。均设未加药的A549细胞为空白对照组。结果 康莱特注射液作用于人肺腺癌A549细胞株48 h的IC50为80 μl／ml。康莱特注射液联合吉非替尼作用于A549细胞的增殖抑制率高于两单药组和空白对照组,且呈时间和浓度依赖性（P＜0.05）。两者的联合作用在一定浓度范围内呈现出协同的抗瘤效果。流式细胞术检测显示,两药联合组的细胞凋亡率显著高于两单药组和空白对照组（P＜0.05）。免疫细胞化学和RT-PCR检测显示,与空白对照组比较,康莱特组和两药联合组FAS蛋白和mRNA的表达水平均升高（P＜0.05）,AKT2蛋白和mRNA表达水平均下调（P＜0.05）。结论 康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株有明显的促凋亡作用,康莱特注射液可能增加人肺腺癌A549细胞对于吉非替尼的敏感性。     

丹参酮ⅡA对人肺癌细胞株A549/CDDP细胞增殖和凋亡的影响

目的研究丹参酮ⅡA（TanⅡA）对人耐药非小细胞肺癌细胞株（A549/CDDP）增殖与凋亡的影响。方法体外培养A549/CDDP,以不同剂量组TanⅡA干预A549/CDDP,在48、72、96小时后用四氮唑盐（MTT）法检测活细胞OD值;采用Heochst33258荧光染色观察TanⅡA干预后细胞凋亡的形态学变化;半定量RT-PCR检测用药后A549/CDDP survivin和Bax基因表达;流式细胞术检测TanⅡA干预后细胞周期分布。结果在0.6-5.0 mg/L浓度范围内,TanⅡA对A549/CDDP均有增殖抑制作用,并呈剂量依赖趋势,在96小时各组增殖抑制率达高峰;5.0mg/L 72小时组,形态学观察细胞凋亡明显;2.5、5.0 mg/L 72小时组,survivin DNA条带强度较对照组减弱,BaxDNA条带强度较对照组明显增强;流式细胞术检测显示TanⅡA明显抑制A549/CDDP进入增殖周期,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 TanⅡA可诱导凋亡抑制A549/CDDP增殖并影响细胞周期,其分子机制可能与survivin下调,Bax上调有关。     

顺铂联合米托蒽醌调节脑胶质瘤U87细胞Sonic Hedgehog信号通路的研究

目的：观察米托蒽醌（Mitoxantrone,MXT）联合顺铂（Cisplatin,CDDP）对脑胶质瘤U87细胞杀伤活性及对Sonic Hedgehog信号通路的影响。方法：应用MTT法检测不同浓度米托蒽醌、顺铂以及两药物联合对U87细胞成活率的影响。显微镜观察细胞的形态变化DiOC6荧光染料对细胞线粒体染色检测其膜电位变化来反映细胞凋亡。RT-PCR法检测顺铂、米托蒽醌及两药联合对U87细胞Gli1和Ptch基因表达的影响。结果：MTT结果显示顺铂、米托蒽醌均可以有效抑制U87细胞的增殖,当米托蒽醌和顺铂浓度≤0.625μg/ml时,两药联合对U87细胞增殖具有协同抑制作用;细胞形态变化及线粒体膜电位结果显示,单药处理可促进U87细胞凋亡,而联合用药可以协同促进U87细胞的凋亡;RT-PCR法检测显示顺铂对Gli1基因的表达有上调作用,而米托蒽醌、米托蒽醌联合顺铂能下调Ptch和Gli1基因的表达。结论：胶质瘤U87细胞在化疗药物米托蒽醌以及两药物联合作用下可影响Sonic Hedgehog信号通路,协同发挥其促凋亡作用,进而增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

乙酰胆碱联合长春新碱对人类肺腺癌细胞株A549生长及凋亡的影响

 目的　探讨乙酰胆碱联合长春新碱（VCR）对肺腺癌细胞生长及化疗的影响,检测其是否通过影响bcl-2及p53发挥作用。方法　将乙酰胆碱单独或与VCR（浓度为IC50）联合作用于肺腺癌细胞株A549,测定其对A549细胞的抑制率。用免疫组织化学法及Western blot法测定乙酰胆碱联合VCR对bcl-2及p53蛋白表达的影响。结果　0.1、1、10 μmol／L的乙酰胆碱对A549细胞的抑制率分别为（0.050±0.032） %、（0.101±0.021） %、（0.169±0.015） %;0.1、1、10 μmol／L的乙酰胆碱分别与0.2 μg／ml VCR联合,对肿瘤细胞的抑制率分别为（0.529±0.023） %、（0.545±0.011） %、（0.589±0.015） %,与VCR组比较差异均有统计学意义（q'值分别为1.09、1.37、1.83,均P＜0.05）,0.1～10 μmol／L的乙酰胆碱单独作用于A549细胞表现出浓度依赖性的抑制作用,与VCR联合后显著提高A549对VCR的敏感性（P＜0.05）; 此外,联合用药后各组bcl-2及p53蛋白表达均降低（P＜0.05）。结论　乙酰胆碱单独及联合VCR均能抑制A549细胞的生长,其机制可能是乙酰胆碱与VCR协同或相加作用影响了bcl-2及p53蛋白的表达。     

和厚朴酚对人急性白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响

 目的 探讨和厚朴酚在体外对人急性白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测和厚朴酚对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase 8 和 Caspase 9基因的表达。结果 5 μg/ml的和厚朴酚作用48 h对U937细胞增殖即可表现抑制作用,10 μg/ml的和厚朴酚作用48 h对细胞的增殖抑制率高达50%以上,作用120 h可完全抑制细胞增殖。经10 μg/ml和厚朴酚处理的U937细胞凋亡率达到26.8% (P＜0.01)。10 μg/ml的和厚朴酚处理U937细胞后48 h,Bcl-2基因表达降低（对照组：0.33±0.02,实验组：0.14±0.01,P＜0.01）,Bax基因表达升高（对照组：0.1±0.01,实验组：0.87±0.08,P＜0.01）。Caspase 3（对照组：0.48±0.01,实验组：0.87±0.06,P＜0.01）、Caspase 8（对照组：0.23±0.02,实验组：0.41±0.07,P＜0.01）和Caspase 9（对照组：0.44±0.05,实验组：0.76±0.06,P＜0.01）基因表达均升高。Caspase 3活性为0.325±0.089,较对照组有显著地升高(P＜0.01.结论 和厚朴酚能明显抑制人急性白血病细胞株U937细胞增殖并引起细胞凋亡。其机制在于上调凋亡促进基因Bax的表达,下调凋亡抑制基因Bcl 2的表达,并且内源性和外源性途径均参与了凋亡过程。     

榄香烯联合热疗对人肺腺癌A549细胞增殖及p-Akt表达的影响

目的探讨榄香烯（ELE）联合热疗（HTM）对人肺腺癌A549细胞形态、增殖、细胞周期及p Akt蛋白表达的影响。方法 采用倒置光学显微镜观察ELE（40μg/ml）与HTM单独或联合对人肺腺癌A549细胞形态学的影响;MTT法检测ELE（20、40、80、160μg/ml）与HTM单独或联合对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测ELE（40μg/ml）与HTM单独或联合对人肺腺癌A549细胞周期的影响;Western blotting检测ELE（40μg/ml）与HTM单独或联合作用于人肺腺癌A549细胞24h后p Akt蛋白的表达。结果倒置光学显微镜结果显示,HTM组、ELE组和ELE联合HTM组的细胞数均明显减少,部分细胞变圆、体积变小、核固缩,但ELE联合HTM组变化最明显,活细胞数最少。与HTM组和ELE组比较,ELE联合HTM对A549细胞增殖的抑制作用显著增强（P＜0.05）,呈时间和剂量依赖性;ELE联合HTM作用于人肺腺癌A549细胞24、48和72h的IC50分别为88、65和37μg／ml,低于单独ELE的103、81和59μg／ml。ELE联合HTM组作用24h后肺腺癌A549细胞S期的比例为（52.07±3.10）％,显著高于HTM组的（33.40±0.87）％和ELE组的（41.58±3.21）％（P＜0.05）。ELE联合HTM组p-Akt蛋白的相对表达量为00.52±0.01,显著低于HTM组的0.99±0.04和ELE组的0.69±0.03（P＜0.05）。结论ELE联合HTM能增强对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用,下调p-Akt蛋白表达可能是其作用机制之一。