CD137-CD137L信号通路通过活化TNF受体相关因子6促进小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生#br#

目的　探讨CD137-CD137L信号通路是否通过活化TNF受体相关因子6（TRAF6）促进粥样硬化斑块内血管新生。方法　将小鼠内皮细胞（bEnd.3）和小鼠主动脉环分别分为对照组（培养基中加入10 μg/L TNF-α）、IgG同型对照组（培养基中加入10 μg/L TNF-α+5 mg/L IgG2b）和CD137刺激组（培养基中加入10 μg/L TNF-α+5 mg/L CD137抗体）。利用转染小干扰RNA（siRNA）技术抑制内皮细胞和主动脉环TRAF6基因表达,将内皮细胞和主动脉环分别分为对照siRNA组（转染对照siRNA）和TRAF6 siRNA组（转染TRAF6 siRNA）。分别采用Western blot和实时荧光定量PCR（qPCR）检测内皮细胞和主动脉环TRAF6、血管内皮生长因子（VEGF）、Smad1/5蛋白和mRNA的表达;采用Transwell迁移实验检测内皮细胞的迁移能力;内皮细胞管腔形成实验检测内皮细胞的管腔形成能力;主动脉环血管新生实验检测主动脉环新生微血管形成能力。结果　CD137刺激组内皮细胞和主动脉环TRAF6、VEGF蛋白和mRNA表达水平均高于对照组和IgG同型对照组（均P＜0.05）。与对照siRNA组比较,TRAF6 siRNA组内皮细胞和主动脉环TRAF6、Smad1/5蛋白和mRNA表达水平明显降低,内皮细胞迁移数量减少,内皮细胞小管长度和分支数量降低,主动脉环新生微血管数量减少（均P＜0.05）。结论　CD137-CD137L信号通路可能通过TRAF6促进小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生。     

藻酸双酯钠对血管内皮细胞的生长及其与中性粒细胞黏附功能的影响

目的 探讨藻酸双酯钠（polysaccharide sulfate，PSS）对体外培养血管内皮细胞生长以及对血管内皮细胞与中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMN）黏附功能的影响。方法 体外培养人类脐静脉血管内皮细胞（细胞株ECV-304），分别经50，100，150，200，250μg·mL^-1不同终浓度处理或不经处理后，采用MTT法观察各组ECV-304生长情况。建立血管内皮细胞缺氧／复氧（Hypoxia／Reoxygenation，H／R）模型，检测经或不经H／R及PSS处理条件下培养的ECV-304与脑梗死病人外周血PMN的黏附率。结果 PSS浓度≤200μg·mL^-1各组ECV-304活力高于未经PSS处理的对照组，差异有统计学意义（P〈0．01），其中PSS浓度为100μg·mL^-1组最明显。PMN与非H／R处理的体外培养的ECV-304的黏附率在脑梗死组较健康组明显增高；ECV-304经H／R处理后与脑梗死病人PMN黏附率增高。体外培养的ECV-304无论是否经H／R处理，培养液中加入PSS（PSS终浓度100μg·mL^-1）组与不加PSS组比较，ECV-304与脑梗死病人PMN的黏附率明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 适当浓度的PSS能促进体外培养正常血管内皮细胞的生长，降低H／R血管内皮细胞与中性粒细胞的黏附能力。     

重组腺病毒rAdCDglyES治疗宫颈癌的体外实验研究

目的:构建含CDglyES融合基因的重组腺病毒,并观察其在体外对宫颈癌细胞的直接抑瘤作用和对血管内皮细胞的抑制作用。方法:用PCR方法扩增CD基因和glyES基因片段,构建成腺病毒穿梭质粒pAdCDglyES。用细菌内同源重组方法与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1重组构建出重组腺病毒质粒prAdCDglyES。经脂质体介导转染293细胞,进而扩增获取重组腺病毒rAdCDglyES。用MTT法检测rAdCDglyES/5-FC系统对宫颈癌细胞株HeLa细胞的生长抑制率及其表达产物对脐静脉血管内皮细胞ECV-304增殖的影响。结果:纯化的rAdCDglyES滴度为1×1013.3TCID50/L,对HeLa细胞的生长抑制率达(84.1±7.3)%,高于对照rAd-LacZ/5-FC系统的(23.1±14.1)%,差异有统计学意义(P<0.01)。浓缩的转染了rAdCDglyES的细胞培养上清液对ECV-304细胞增殖的抑制率为(77.7±1.8)%,高于同样浓缩的转染rAd-CD细胞培养上清液抑制率的(22.9±9.7)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:rAdCDglyES在体外对宫颈癌具有直接和间接抑瘤作用。     

siRNA 靶向沉默 Lipocalin-2基因下调 MMP-9表达对降低人肺癌 A549细胞的侵袭、迁移能力的影响

目的：利用针对 Lipocalin-2的小干扰 RNA（siRNA）,观察 Lipocalin-2基因沉默对人肺癌 A549细胞MMP-9表达及侵袭、迁移能力的影响。方法采用 Real-time PCR 和 Western blot 检测 Lipocalin-2在3种肺癌细胞株（A549、NCI-H661、NCI-H446）及正常人支气管上皮细胞（HBE）的表达情况。设计并构建靶向 Lipocalin-2的 siRNA 转染 A549细胞,采用 Real-time PCR 和 Western blot 检测转染效率及 Lipocalin-2基因沉默对 MMP-9 mRNA 和蛋白表达的影响。Transwell 小室检测细胞侵袭能力。细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 Lipocalin-2 mRNA 和蛋白在肺癌A549、NCI-H661、NCI-H446细胞株中的表达水平均显著高于 HBE 细胞,差异有统计学意义（ P ＜0.05）。siRNA-Li-pocalin-2转染组 Lipocalin-2 mRNA 和蛋白表达水平与阴性对照组和空载体对照组比较,差异有统计学意义（ P ＜0.05）;siRNA-Lipocalin-2转染组 MMP-9 mRNA 和蛋白表达水平与阴性对照组和空载体对照组比较,差异有统计学意义（ P ＜0.05）;siRNA-Lipocalin-2转染组穿膜细胞数、平均迁移距离与阴性对照组和空载体对照组比较,差异有统计学意义（ P ＜0.05）。结论 Lipocalin-2基因沉默通过下调 MMP-9表达降低了人肺癌 A549细胞的侵袭和迁移能力。     

Apoptin基因活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡

为研究肿瘤细胞凋亡基因（apoptingene）诱导人黑素瘤细胞系A375凋亡时是否通过活化easpase-3发挥作用，用含有apoptin基因的真核表达载体短时转染体外培养的人黑素瘤细胞A375；采用RT-PER、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测A375细胞的凋亡；以比色法检测easpase-3的相对活性。结果表明，apoptin基因短时转染的A375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带；流式细胞术显示实验组细胞凋亡率明显高于其它各组（P〈0．01）；转染后24h实验组caspase-3的活性开始升高，72h达高峰，明显高于其它各组（P〈0．01）。结论：apoptin基因可活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡。     

体外转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响

目的 探讨转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响,筛选出有意义的肿瘤治疗的生物学靶标.方法 在人黑色素瘤细胞A375中转染Kiss-1基因,经G418筛选,建立稳定高表达Kiss-1蛋白的细胞系.Western blot方法 检测Kiss-1蛋白以证实转染成功.流式细胞术检测Kiss-1基因对A375生长增殖的影响.结果 稳定转染Kiss-1基因的A375细胞中不仅Kiss-1蛋白稳定表达（1.20±0.21）高于对照组（0.60±0.41）,Kiss-1基因转染A375细胞48 h后对其具有凋亡的作用（凋亡率为28.42%）高于对照组（2.12%）.结论 外源性Kiss-1基因导入A375细胞后,可诱导A375细胞其凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖.     

人脐静脉内皮细胞水通道蛋白9磷酸化与砷耐受性的关系

目的探讨人脐静脉内皮细胞株ECV-304和抗砷性ECV-304(AsRE)细胞株中水通道蛋白AQP9的表达及其磷酸化水平以及其对亚砷酸钠(NaAsO2)耐受性之间的关系。方法 采用CCK8法测定NaAsO22.5～40μmo.l L-1作用24 h对ECV-304和AsRE细胞株的毒性。NaAsO22.5～20μmol.L-1处理ECV-304和AsRE细胞株2 h,实时定量PCR法测定AQP9 mRNA表达水平,Western印迹法检测AQP9和p38蛋白表达水平;免疫印迹法检测AQP9蛋白磷酸化水平;电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)法测定细胞内砷含量。结果 NaAsO2在AsRE和ECV-304细胞的IC50分别为12.59和4.06μmol.L-1。在NaAsO2同浓度下,AsRE细胞内砷摄入量均低于ECV-304细胞(P<0.05)。NaAsO2处理ECV-304和AsRE细胞后,AQP9 mRNA表达水平均有所下调,但在AsRE细胞中的下调幅度显著高于ECV-304细胞(P<0.05);AQP9蛋白水平在AsRE细胞呈浓度增加而下降,而ECV-304细胞中则无明显变化;ECV-304细胞中AQP9磷酸化水平随浓度有所上升,AsRE细胞中AQP9磷酸化水平则一直维持在更高的表达水平。NaAsO2处理后,p38蛋白及其磷酸化水平在两个细胞株间无明显变化。结论 AsRE细胞中AQP9的磷酸化水平与砷耐受性有明显相关性,其可能机制是AQP9通过影响细胞对砷的摄入影响砷的耐受性。     

DLL4/Notch信号途径对A549细胞VEGF表达的影响

目的：研究Delta-like ligand 4（DLL4）与血管内皮生长因子（VEGF）在人肺腺癌A549细胞中的表达,以及DLL4对VEGF表达的影响。方法（1）用免疫组化检测DLL4与VEGF在A549细胞中的表达;（2）设计和化学合成靶向DLL4基因的小干扰RNA（siRNA）序列,用lipofectamineTM2000介导DLL4 siRNA转染人A549细胞;（3）提取细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增检测DLL4、VEGF mRNA;（4）用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测A549细胞培养上清液中VEGF质量浓度。结果（1）DLL4、VEGF表达于A549细胞的细胞质内;（2）DLL4 siRNA可使DLL4沉默,同时,明显上调VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C mRNA表达,差异有统计学意义（P＆lt;0.05）;（3）DLL4转染后,细胞培养上清液中VEGF质量浓度明显增加,差异有统计学意义（P＆lt;0.01）。结论阻断A549细胞中Notch通路可刺激VEGF过表达。     

肿瘤特异性凋亡基因对人黑色素瘤细胞A375凋亡诱导作用

为观察肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)对人黑色素瘤细胞A375的凋亡诱导作用，用含有凋亡基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375，采用台盼蓝染色法、RT—PCR及DNA凝胶电泳等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果表明，凋亡基因瞬间转染的人黑色素瘤细胞A375可出现明显的细胞凋亡；而且滴亡细胞的数量与转染时间有关。结论：凋亡基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用。     

桦树皮有效部位抑制肿瘤血管生成研究

目的探讨桦树皮抗肿瘤有效部位（HSP）对肿瘤新生血管生成的抑制作用,以及其对JAK—STAT通路中磷酸化信号传导与转录激活因子-3（p-STAT3）表达的影响。方法MTT法测定HSP对人脐静脉血管内皮细胞（ECV-304）细胞的增殖抑制率;体外琼脂法检测内皮细胞的迁移能力,并用光镜观察内皮细胞形态变化;MTT法测定肿瘤细胞HepG2培养液对EVC-304增殖活性的影响;WesternBlot法动态检测HSP作用前后肝癌细胞p-STAT3的表达情况。结果经不同浓度（75pg／mL、150ug／mL）HSP诱导的EVC-304的凋亡率分别是（67．1&#177;11．4）％（p〈0．05）、（84．3&#177;5．6）％（p〈0．01）。EVC-304迁移抑制率分别为（81．15&#177;12．36）％（p〈0．001）、（94．2&#177;9．15）％（p〈0．001）。肿瘤细胞培养液对EVC-304增殖有促进作用,HSP作用后肿瘤细胞培养液对EVC-304的增殖促进作用减弱,而且随着药物浓度的增加,肿瘤细胞培养液促进EVC-304增殖的作用下降。WesternBlot显示,HSP作用前后,p-STAT3在肝癌细胞HepG2中的蛋白表达量明显降低,p-STAT3在HepG2中的表达量与给药浓度呈负相关。结论HSP对肿瘤新生血管的生成通过血管内皮细胞的增殖迁移方面发挥药效作用,作用显著。HSP可能是通过阻断肿瘤细胞内STAT3高度磷酸化,抑制肿瘤血管生成。HSP阻断STAT3信号转导通路可能是其发挥抗肿瘤药效的重要机制。     

淫羊藿苷对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

探讨淫羊藿苷对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导损伤人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）的影响。培养内皮细胞，淫羊藿苷作用24h后，采用AngII诱导制备内皮细胞损伤模型，测定细胞存活率（MTT法）、培养液中乳酸脱氢酶（LDH）释放量、NO值、清除超氧阴离子自由基（O2^-）和羟自由基（·OH）的能力，测定胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、T-NOS、iNOS以及eNOS的含量。与AngⅡ单独处理组相比，淫羊藿苷能明显提高细胞存活率，提高SOD、T-NOS和cNOS活力，提高NO含量，增强清除O2^-和·OH的能力，降低LDH和iNOS的量。结果表明淫羊藿苷对AngⅡ损伤的内皮细胞有一定的保护作用。     

转化生长因子β1对人脐静脉血管内皮细胞活性的影响

目的观察转化生长因子β1（TGF—β1）刺激增生性瘢痕成纤维细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖和趋化能力的影响。方法以增生性瘢痕成纤维细胞为实验组,正常皮肤为对照组,添加TGF—β1（10μg/L）为TGF—β1组,向TGF—β1组内添加丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（Akt）阻断剂Tricirlbine（5Ixmol／L）为Akt阻断剂组,二者皆未添加的瘢痕成纤维细胞为非干扰组,利用各组细胞上清液（条件培养基）培养HUVEC,使用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察各条件培养基对HUVEC增殖的影响,并利用细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验对HUVEC的趋化情况进行评估。结果对照组吸光度值为0．91±0．34,非干扰组1．75±0．15,TGF—B,组3．26±0．58,Akt阻断剂组1．14±0．81。非干扰组吸光度值与对照组和TGF-β1组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;而Akt阻断剂组成纤维细胞增殖吸光度值明显低于TGF—β1组（P〈0．01）。细胞划痕24h后,TGF—β1组促使HUVEC划痕的闭合率较非干扰组高（P〈0．01）;而Akt阻断剂组则明显减弱HUVEC划痕闭合的速度（P〈0．01）。Transwell细胞迁移实验中,TGF—β1组迁移的细胞较非干扰组多[TGF—β1组细胞迁移数目：（1718±15）个,非干扰组：（829±2）个,P〈0．01];而Akt阻断剂组阳性细胞迁移率又明显降低[Akt阻断剂组：（935±11）个,P〈0．01]。对照组血管内皮生长因子（VEGF）（65．2±0．3）ng／L,非干扰组（87．0±0．5）ng／L,TGF—β1组（132．7±0．4）ng／L,Akt阻断剂组（70．5±0．6）ng／L。非干扰组与对照组、TGF-β1组与非干扰组、Akt阻断剂组与TGF—β1组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论TGF—β1可以通过刺激增生性瘢痕成纤维细胞旁分泌VEGF等细胞因子对血管内皮细胞增殖、趋化等能力产生影响。     

Astilbin inhibits the adhesion of T lymphocytes via decreasing TNF-alpha and its associated MMP-9 activity and CD44 expression

Our previous study has revealed that astilbin, a flavonoid isolated from the rhizome of Smilax glabra, improves an immunological liver injury and its mechanism includes an inhibition of the lymphocyte adhesion. The present study further examined the anti-adhesive activity in various assays by using human leukemia T cell line Jurkat cells. We found that astilbin inhibited the adhesion of Con A or PMA-activated Jurkat cells to fibronectin, type IV collagen, hyaluronic acid, and [corrected] ECV-304 cells. Astilbin inhibited the adhesion of Jurkat cells to PMA-activated but not non-activated ECV-304 cells without any influence on the survival of the ECV-304 cells and Jurkat cells. Astilbin also inhibited the CD44 expression and TNF-alpha production in Jurkat cells. In the co-culture assay between Jurkat cells and ECV-304 cells, the MMP-9 secretion from Jurkat cells was inhibited after astilbin-treatment, while the exogenous TNF-alpha increased the MMP-9 secretion in a dose-dependent manner. These findings suggest that the inhibition of T lymphocyte adhesion by astilbin may be related to the reduction of the CD44 expression and TNF-alpha production in the cells, which may further cause a decreased MMP-9 secretion.     

肿瘤干细胞来源的DC-CIK 对同源肿瘤细胞的杀伤作用

【摘要】目的 观察干细胞负载树突细胞诱导的杀伤细胞（CSC-DC-CIK）作为效应细胞对同源肿瘤细胞的杀伤作用,探讨CSC 抗原参与肿瘤杀伤作用的可行性。方法 培养肾癌细胞株A498 和肺癌细胞株A549,用流式分选术分离纯化CD133+细胞,分别作为肾癌干细胞（KSC）和肺癌干细胞（LSC）,冻融法制备抗原。提取健康产妇脐带血的单个核细胞,体外扩增诱导生成DC 和CIK 细胞。分别用上述CSC 抗原负载DC,与CIK 共培养（CSC-DC-CIK）,流式细胞术分析DC 和CIK 细胞免疫表型,ELISA 法检测细胞因子分泌水平,用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测CSCDC- CIK 对同源肿瘤细胞的杀伤效率。结果CSC-DC 的DC 免疫表型CD40+、CD80+、CD86+及HLA-DR+的表达均高于单纯DC 的相应免疫表型的表达（P < 0.01）;DC、CSC-DC 与CIK 共培养后的DC 免疫表型CD40+、CD80+、CD86+ 及HLA-DR+的表达均高于共培养前（P < 0.01）;CSC-DC 与CIK 共培养后的DC 免疫表型CD40+、CD80+、CD86+及 HLA-DR+的表达高于DC 与CIK 共培养后的相应免疫表型（P < 0.01）;DC、CSC-DC 与CIK 共培养后的CIK 免疫表型CD3+、CD8+、CD56+的表达高于共培养前（P < 0.01）;CSC-DC 与CIK 共培养后的CIK 免疫表型CD3+、CD8+、CD56+ 的表达高于DC 与CIK 共培养后的CIK 相应免疫表型（P < 0.01）;DC、CSC-DC 与CIK 共培养后的IFN-γ、TNF-α和 IL-2 分泌水平高于共培养前（P < 0.01）;CSC-DC 与CIK 共培养后的IFN-γ、TNF-α和IL-2 分泌水平高于DC 与CIK 共培养后的相应细胞因子表达（P < 0.01）;KSC-DC-CIK 组和LSC-DC-CIK 组对靶细胞的杀伤率为（50.21±4.24）% 和（49.32±3.89）%,明显高于DC-CIK 组的（30.25±3.11）%（F=89.157,P < 0.01）。结论 CSC 抗原负载DC 活化CIK （CSC-DC-CIK）对同源肿瘤细胞有更好的杀伤作用,对其作用机制和临床应用的可能性尚需深入研究。     

Survivin-siRNA在体外诱导Panc-1细胞凋亡的实验研究

目的:探讨RNA干扰技术抑制Survivin对人胰癌细胞株Panc-1细胞凋亡的影响。方法:体外设计、合成针对sur-vivin基因的小分子干扰RNA(survivin-siRNA),应用脂质体介导survivin-siRNA转染Panc-1细胞后,MTT试验测定转染细胞的增殖抑制率,RT-PCR检测细胞survivin mRNA表达,琼脂糖凝胶电泳分析其对Panc-1细胞凋亡诱导作用。结果:转染survivin-siR-NA的Panc-1细胞增殖明显受抑制,与对照进行比较,具有显著性差异(P<0.01);经琼脂糖凝胶电泳,转染survivin-siRNA的Panc-1细胞可见到DNA梯形条带,而对照细胞未见到。结论:survivin-siRNA能够显著诱导Panc-1细胞凋亡。     

槲皮素对过氧化氢诱导的血管内皮细胞周期及NO水平的影响

目的研究槲皮素对人脐静脉血管内皮细胞增殖周期及细胞内一氧化氮产生的影响。方法用过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤,采用ＭＴＴ比色法、流式细胞仪观察槲皮素对血管内皮细胞作用及周期的影响;用硝酸还原酶法测定细胞培养液中ＮＯ水平。结果过氧化氢对血管内皮细胞具有损伤作用,槲皮素剂量依赖性促进过氧化氢诱导血管内皮细胞的增殖,而且主要是Ｓ期和Ｇ２Ｍ期细胞比率增加;槲皮素可减少过氧化氢诱导的血管内皮细胞释放乳酸脱氢酶及促进过氧化氢诱导血管内皮细胞内ＮＯ水平的增加。结论槲皮素可保护过氧化氢诱导血管内皮细胞的损伤及修复,其作用可能与ＮＯ的水平有关。     

抗人CD147单克隆抗体对人肝癌细胞MHCC97-H裸鼠肝脏原位移植瘤生长抑制的实验研究

目的：研究抗人CD147单克隆抗体（mAb）对荷人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用。方法：建立BALB/c裸鼠肝脏原位移植MHCC97-H人高转移肝癌模型,随机分为4组,每组8只,于裸鼠尾静脉注射给药。抗CD147mAb组：给药量每千克体重10 mg,每日1次,连续给药8日。AMD组：每千克体重20 mg,每日1次,第1、8日。抗CD147mAb＋AMD组：抗CD147mAb每千克体重10 mg,每日1次,连续给药8日;AMD每千克体重20 mg,第1日给药。对照组：给予0.2 mL 0.9%的氯化钠注射液,连续给药8日,每日1次。第30日处死裸鼠,测量原位移植瘤体积;做常规病理切片观察、免疫组织化学染色以及凋亡指数检测。结果：CD147mAb组对肝脏原位荷瘤生长具有抑制作用,抑瘤率达34.1%。对照组与CD147mAb组（P=0.001 1）、AMD组（P〈0.000 1）、CD147mAb＋AMD（P〈0.000 1）间存在明显差异。CD147mAb组癌细胞凋亡指数与对照组相比有显著性差异（P=0.004 2,P〈0.01）。CD147mAb组、AMD组及CD147mAb＋AMD组的PCNA阳性细胞数及反应强度均较对照组减弱。结论：抗人CD147 mAb对肝癌生长的抑制可能是通过诱导肝癌细胞凋亡、抑制癌细胞增殖实现的。     

高迁移率族蛋白A2在肿瘤发生和血管形成中的双重作用

目的:探讨高迁移率族蛋白A2(HMGA2)在肿瘤发生和血管形成中的作用。方法:采用Clontech公司软件设计靶向人HMGA2基因的5条小干扰RNA(siRNA)序列,常规培养肿瘤细胞系和血管内皮细胞系,利用脂质体2000将HM-GA2 siRNA导入细胞,通过MTT方法和Tran-swell模型检测细胞的增殖和迁移能力,采用小管形成实验检测血管内皮细胞的小管形成能力,荧光定量PCR方法检测细胞内的HMGA2 mRNA的变化。结果:5条siRNA中,HMGA2 siR-NA1、3、5不但能抑制肿瘤细胞的增殖,还可抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和小管形成,尤其以HMGA2 siRNA5最为明显,处理组细胞的相对增长率分别为:Hela 63.2%±6.5%(P<0.01);人肺腺癌SPC-A1,86.8%±3.5%(P<0.01);人脐静脉内皮细胞(ECV-304),58.5%±6.3%(P<0.01);人膀胱上皮细胞株(HUVEC),60.3%±7.3%(P<0.01)。HMGA2 siRNA5抑制两种血管内皮细胞的迁移(P<0.01),并降低HM-GA2基因的表达(P<0.01)。结论:HMGA2除了在肿瘤发生过程中起作用之外,在血管形成中同样具有重要作用。     

小干扰RNA 抑制Pokemon表达对肺癌细胞A549和食管癌细胞EC109 增殖的影响

目的：探讨Pokemon特异性小干扰RNA对肺癌细胞A549和食管癌细胞EC109 增殖的影响.方法：瞬时转染Pokemon特异性小干扰RNA至肺癌细胞A549和食管癌细胞EC109,RT-PCR、Western Blot技术检测转染后细胞中Pokemon的mRNA和蛋白表达水平,检测细胞的增殖及细胞周期变化.结果：与空白组和阴性对照组相比,瞬时转染Pokemon小干扰RNA后,肺癌细胞A549和食管癌细胞EC109中Pokemon的mRNA水平均下降至25%～35%,蛋白水平亦明显下降.细胞增殖能力在培养24,48,72 h均显著降低（P＜0.05）.细胞周期分析显示转染Pokemon小干扰RNA后S期的比例显著高于siRNA阴性对照组（A549细胞：55.7%±2.5% vs 42.7%±0.6%,P＜0.01;EC109细胞：67.7%±2.5% vs 52.0%±2.0%,P＜0.01）.G1期的比例显著低于siRNA阴性对照组（A549细胞：33.0%±2.0% vs 45.3%±1.5%,P＜0.01;EC109细胞：30.7%±1.2% vs 44.0%±1.7%,P＜0.01）.两种细胞均阻滞于S期.结论：Pokemon小干扰RNA可抑制肺癌细胞A549和食管癌细胞EC109 的增殖.     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞体外抗肺癌的实验研究

目的探讨树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）在体内外能否有效的抗肺癌。方法正常人外周血单个核细胞经不同细胞因子作用后培养成DC和CIK细胞,单个核细胞经贴附塑料平皿获得单核细胞,加入GM—CSF,IL-4及TNF—a诱导获得DC,悬浮细胞加入IFN—g,24h后IL-1a,IL-2及CD3McAb诱导获得CIK,将A549制备成肿瘤细胞冻融物．作为肿瘤抗原刺激DC,并将DC与CIK细胞联合培养（DC＋CIK,负载抗原的DC＋CIK）,以CIK细胞单独培养作为对照。CytotoxicityTOX96体外杀伤实验测定体外细胞毒活性。结果在培养的第15d．与负载抗原的DC共同培养的CIK与CIK细胞单独培养细胞相比,增殖速率明显提高[（23．4±2．3）倍vs（16．7±2．7）倍,P〈0．05],CD3＋CD56＋细胞表达水平也明显提高,[（64．3±3．6）％vs（43．9±2．1）％,P〈0．05],同时负载抗原的DC的CIK对A549细胞的体外下细胞毒活性增强。结论DC与CIK细胞共培养后可提高CIK细胞的增殖速率,提高CIK细胞表型的表达水平,增强CIK抗肺癌的活性．将来可作为一种临床有效的过继免疫治疗策略。