雌激素对MPP诱导的PC12细胞损伤后Bcl-2蛋白含量的影响

目的：观察雌激素在1-甲基-4-苯基-1，2，3．6-四氢吡啶（1-Methyl-4-phenyl-1，2，3,6-tetrahydropyridine，MPP^＋）引起PC12细胞损伤的过程中对凋亡抑制蛋白Bcl-2的影响，从而阐明雌激素对帕金森病的保护作用。 方法：实验于2004—03在华中科技大学同济医学院神经科实验室完成。①细胞分组：对照组；雌激素组；雌激素＋MPP^＋组；MPP^＋组。②帕金森病细胞模型的建立：用250μmol／L的MPP^＋处理细胞，造成细胞凋亡的帕金森模型。（3）应用SABC法检测PC12细胞内的Bcl-2蛋白表达，反转录-聚合酶链反虚检测Bcl-2基因表达产物的mRNA的水平，Westem blot检测Bcl-2蛋白的水平。 结果：①雌激素组Bcl-2阳性PC12细胞平均吸光度（0.438&;#177;0.065）明显高于空白对照组（0．216&;#177;0.067），雌激素＋MPP^＋组（0.283&;#177;0.036），MPP^＋组（0．112&;#177;0．034），SABC显色明显增强（P〈0．05）。②雌激素组Bcl-2基因表达产物的mRNA的水平（1.30&;#177;0．19）明显高于空白对照组（0．70&;#177;0．15），雌激素＋MPP^＋组（0.66&;#177;0.26）。MPP^＋组（0．29&;#177;0.08）（P〈0．05）。③雌激素组Bcl-2蛋白的水平（129&;#177;19）明显高于空白对照组（81&;#177;23），雌激素＋MPP^＋组（72&;#177;12），MPP^＋组（48&;#177;11）；雌激素＋MPP^＋组与空白对照组相比差异无显著性（P〉0．05）。 结论：在MPP^＋对PC12细胞损伤的过程中，雌激素通过促进凋亡抑制蛋白Bcl-2的增高，对神经细胞起保护作用。     

促红细胞生成素对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病细胞模型的保护作用。方法:使用MPP+处理PC12细胞,建立多巴胺能细胞损伤模型,使用不同浓度的EPO预处理细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光酶标仪检测细胞内活性氧物质水平,比较各组间的差异。结果:MPP+处理后PC12细胞活力下降,250μmol/LMPP+处理24h后,细胞活性下降为对照组的39.64%,而EPO预处理组随着EPO浓度的增加,细胞活力逐渐上升,40U/mlEPO为促进细胞活力的最佳浓度。EPO预处理组细胞凋亡率明显低于单独MPP+组(P<0.01),且EPO预处理组的细胞内活性氧物质水平明显低于单独MPP+组(P<0.01)。结论:EPO对MPP+诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,这种保护作用可能与其抗氧化应激作用有关。     

miRNA-9过表达对Aβ损伤的PC12细胞的保护作用

目的:探讨micro RNA-9(mi R-9)过表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤的PC12细胞及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法:PC12细胞分为mi R-9过表达组(E组)、空转染对照组(NC组)、不转染的损伤细胞模型组(NT组),采用CCK-8法检测细胞增殖;采用Annexin-V-PE检测细胞凋亡;采用RT-q PCR检测Bcl-2、Bax m RNA的表达,Western-Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与NC组及NT组比较,E组的PC12细胞转染48 h后增殖增加,凋亡率降低,Bcl-2表达增加,Bax表达下降(P0.05)。结论:mi R-9过表达可保护Aβ损伤的PC12细胞。     

褪黑激素影响帕金森病模型大鼠前脑纹状体细胞的凋亡

目的:观察褪黑激素对帕金森病模型大鼠行为学和前脑纹状体细胞凋亡的影响。方法:实验于2005-02/2006-05在江苏大学医学院基础医学中心实验室进行。①选取爬杆实验正常(0分)的SD大鼠90只,随机分为空白对照组、生理盐水组和褪黑激素1,5,10mg/kg组5组,每组18只。②除空白对照组外,其他4组大鼠连续7d腹腔注射MPTP(30mg/kg)建立帕金森病大鼠模型,造模成功后,于每日20时进行治疗,生理盐水组腹腔注射1mL生理盐水,褪黑激素1,5,10mg/kg组腹腔注射褪黑激素1,5,10mg/kg。③于用药7,14,21d采用爬杆法(0～2分,评分越高运动能力越差)和迷宫试验评价大鼠行为学和智力改变;3个时间点测试后各组分别取6只大鼠处死取脑,应用SP法Bax/Bcl-2免疫组织化学染色和Tunel法细胞凋亡染色检测前脑纹状体凋亡细胞。结果:90只大鼠进入结果分析。①爬杆实验得分:造模各组均高于空白对照组(P<0.01);治疗14,21d时褪黑激素1,5,10mg/kg组低于生理盐水组(P<0.05,0.01)。②迷宫试验错误次数:褪黑激素1,5,10mg/kg组在治疗7,14d时多于空白对照组,但少于生理盐水组(P<0.05),至治疗21d时与空白对照组比差异不显著[(1.9±0.6),(1.9±0.6),(1.8±0.5),(1.6±0.4)次,P>0.05],生理盐水组仍高于空白对照组[(3.1±0.6)次]。③Bax蛋白表达于生理盐水组最高,褪黑激素组次之,空白对照组最低;Bcl-2蛋白于褪黑激素组呈高表达,空白对照组次之,生理盐水组表达最低;Tunel阳性细胞以生理盐水组最高,褪黑激素组次之,空白对照组最低。结论:褪黑激素能激活Bax/Bcl-2系统,调节前脑黑质纹状体通路多巴胺神经活性,抑制细胞凋亡,从而改善帕金森病症状。     

反义阻断α-Synuclein表达对PC12细胞凋亡的作用

目的:观察α-Synuclein表达对6-羟基多巴诱导的多巴胺能细胞凋亡的影响及分析其在帕金森病发病机制中所起的作用。方法:实验于2001-12/2004-10于中山大学第一附属医院神经科实验室完成。用100μmol/L的6-羟基多巴诱导PC12细胞凋亡。采用多组样本的完全随机设计方法,将1×105个细胞接种于4块四孔培养板中,共16个孔,随机分为4组:反义、正义、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组。前3组分别加入相应的寡核苷酸5μmol/L治疗24h,空白对照组不加。反义寡核苷酸阻断PC12细胞α-Synuclein表达,用原位杂交和定量Westernplot检测其基因和蛋白表达;凋亡原位末端标记检测试剂盒检测6-羟基多巴诱导的PC12细胞凋亡。全自动图象分析系统测量有关平均积分吸光度。用SPSS10.0软件进行统计学分析。结果:①反义阻断后α-SynucleinmRNA表达:反义寡核苷酸治疗组较空白对照组明显减少(P<0.01),正义寡核苷酸治疗组和无义寡核苷酸治疗组与空白对照组比较无差异(P>0.05)。②α-Synuclein蛋白表达:反义寡核苷酸治疗组明显减少,较空白对照组减少约53.93%(P<0.05)。正义寡核苷酸治疗组、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组之间差异不显著(P>0.05)。③6-羟基多巴治疗后的反义寡核苷酸治疗组、正义寡核苷酸治疗组、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组随机计数的200个细胞中,凋亡细胞数量间相互比较无显著统计学意义(P>0.05)。结论:α-Synuclein表达减少对6-羟基多巴诱导的PC12细胞凋亡无影响。推测在帕金森病的多巴胺神经元凋亡的发生机制中,α-Synuclein在神经元内的异常聚集较其表达量的多少更重要。     

下调STC2基因表达对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨抑制斯钙素-2(stanniocalcin-2,STC2)基因表达对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法通过Lipofectamine TM2000脂质体介导法将siRNA阴性对照组和STC2-siRNA组转染人前列腺癌PC-3细胞,未转染的细胞作为空白对照组,48 h后收集细胞,Western bloting检测各组细胞中STC2的蛋白表达;CCK8及流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况;Western bloting检测增殖相关蛋白ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(pAKT)的蛋白表达。结果 STC2-siRNA转染PC-3细胞后STC2的蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05);阴性对照组细胞OD值及细胞凋亡率与空白对照组差异无统计学意义(P0.05),而STC2-siRNA组细胞OD值显著低于空白对照组,凋亡率显著高于空白对照组(P0.05);阴性对照组ki67、Bcl-2、Bax、PI3K和p-AKT蛋白表达与空白对照组差异无统计学意义(P0.05),STC2-siRNA组ki67、Bcl-2、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著低于空白对照组,Bax蛋白表达显著高于空白对照组(P0.05)。结论 STC2基因表达的抑制可降低前列腺癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制与调节ki67、Bcl-2、Bax及PI3K/AKT信号通路表达有关。     

小干扰RNA沉默DEK基因对肝癌HepG_2细胞凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默DEK基因表达对肝癌细胞株HepG_2凋亡的影响及其相关分子机制。方法常规培养人肝癌细胞株HepG_2,分为空白对照组、对照siRNA组和DEK siRNA组。对照siRNA组和DEK siRNA组在Lipofectamine~(TM) 2000脂质体介导下进行对照siRNA表达载体和DEK siRNA表达载体的转染;空白对照组正常培养,不做任何处理。采用实时PCR法检测3组细胞DEK mRNA表达情况,采用Western blot法检测3组细胞DEK蛋白、caspase-3、B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2protein,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)表达情况,采用流式细胞术观察3组细胞周期和细胞凋亡率。结果转染48h后,DEK siRNA组DEK mRNA(0.420±0.050)和蛋白表达水平(0.311±0.038)及S期细胞比率[(20.713±1.529)%]、G_2/M期细胞比率[(20.030±4.833)%]、Bcl-2蛋白表达水平(0.342±0.061)明显低于空白对照组[0.826±0.052、0.691±0.073、(25.553±2.109)%、(26.560±4.766)%、0.599±0.075]和对照siRNA组[0.776±0.051、0.726±0.061、(24.210±2.463)%、(29.365±4.891)%、0.686±0.079](P0.05),G0/G1期细胞比率[(59.257±4.767)%]、细胞凋亡率[(10.325±0.791)%]、Bax(0.610±0.038)和caspase-3蛋白表达水平(0.716±0.054)高于空白对照组[(47.887±3.753)%、(5.697±0.508)%、0.280±0.059、0.373±0.044]和对照siRNA组[(46.425±3.354)%、(6.547±0.674)%、0.340±0.045、0.321±0.049](P0.05);空白对照组与对照siRNA组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论特异性DEK siRNA可针对性下调HepG_2细胞中DEK基因表达,促进HepG_2细胞凋亡,可能与下调Bcl-2表达、上调caspase-3和Bax表达有关。     

Bcl-2反义寡核苷酸增强K562细胞对依托泊苷化疗敏感性的研究

目的探讨Bcl-2反义寡核苷酸能否增强K562细胞对依托泊苷的化疗敏感性。方法采用人工方法合成Bcl-2寡核苷酸,通过脂质体将Bcl-2不同寡核苷酸导入K562细胞中(正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组、反义寡核苷酸组),另设未经转染空白对照组,检测Bcl-2蛋白的表达和细胞凋亡率。采用不同浓度的依托泊苷作用于4组细胞,用MTT法测定细胞存活分数。结果空白对照组和正义、无义寡核苷酸组的K562细胞Bcl-2蛋白与Bcl-2蛋白条带相符,反义寡核苷酸组在相应位置未见蛋白条带,且凋亡率显著高于其他3组(P<0.01)。细胞与依托泊苷作用后,反义寡核苷酸组细胞在各个浓度的存活分数均低于其他3组(P<0.05)。结论 Bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭Bcl-2基因表达,增加K562细胞的凋亡,增强依托泊苷的敏感性。     

辅酶Q10对多巴胺损伤的PC12细胞凋亡的影响

目的:观察辅酶Q10在以PC12细胞建立的多巴胺神经元凋亡细胞模型中的作用。方法:实验于2003-04/2004-04在锦州医学院科技试验中心进行。取体外培养的PC12细胞分为3组:①辅酶Q10组:加450μmol/L辅酶Q10和0.3mmol/L多巴胺。②多巴胺组:加0.3mmol/L多巴胺。③空白对照组:只加等量RPMI1640。24h后进行流式细胞仪测试DNA含量,检测细胞凋亡率。结果:多巴胺组细胞凋亡率明显高于空白对照组[(30.66±1.90)%,(0.82±0.07)%,P<0.01],辅酶Q10组细胞凋亡率[(16.05±2.16)%]明显低于多巴胺组(P<0.01)。结论:辅酶Q10能显著降低多巴胺引起的PC12细胞凋亡,提示辅酶Q10作为神经保护性药物对保护多巴胺能神经元,防治帕金森病可能有实际应用价值。     

促红细胞生成素对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的拮抗作用

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对氯化钴(CoCl2)诱导的PC12细胞缺氧损伤凋亡的影响并探讨其作用机制.方法 将PC12细胞分为四组:空白对照组、CoCl2处理组、重组人促红细胞生成素(rhEPO)处理组、rhEPO+CoCl2处理组.应用MTT,乳酸脱氢酶(LDH),流式细胞术(FCM)及Hoechst33258染色法检测rhEPO对氯化钴诱导的细胞活性下降及凋亡的影响.通过逆转录PCR(RT-PCR)法检测Survivin表达情况.结果 MTT结果显示rhEPO预处理能够提高PC12细胞活力,0.6 mmol/L CoCl2单独处理组细胞存活率仅为(43.07±5.9)%,rhEPO处理24 h后细胞存活率上升明显至(77.89±3.4)%(P<0.01).LDH检测,FCM及Hoechst33258结果表明CoCl2处理能诱导PC12细胞损伤及凋亡,而预先采用2 U rhEPO处理PC12细胞可抑制CoCl2的细胞毒性作用,减少细胞缺氧性损伤及凋亡.RT-PCR显示rhEPO处理组PC12细胞Survivin表达较CoCl2处理组明显升高.结论 EPO处理能抑制CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,其细胞保护作用的机制可能与上调PC12细胞的Survivin表达有关.     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

护士选择性应用静脉留置针现状分析

[目的]了解护士选择性应用留置针的现状以及主要影响因素,为指导临床留置针合理应用提供理论依据。[方法]采用自设问卷对138名护士留置针选择性使用情况及其影响因素进行调查。[结果]约1／4的护士并不知道应选择性使用留置针,近60％的护士在实际工作中选择留置针的意识较差;护士选择性应用留置针的决策受多因素影响;不同科室、职称及是否具有带教资格选择性应用留置针的影响因素不尽相同;绝大部分护士希望参加选择性应用留置针相关内容的培训。[结论]临床护士操作前考虑留置针选择的意识有待加强。建议实施有针对性的培训以提高护士选择性应用留置针的能力。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。