血管内皮生长因子体外对人急性白血病细胞株HL-60细胞凋亡及相关基因表达影响的实验研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在体外对人急性白血病细胞株HL-60的凋亡及相关基因B细胞白血病-2(Bcl-2)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)和热休克蛋白90(Hsp90)表达的影响。方法采用彗星电泳法和流式细胞术等检测经VEGF处理后HL-60细胞株的细胞凋亡率,并观察VEGF对抗细胞凋亡诱导剂鬼臼乙叉(VP16)的效应。采用RT-PCR方法从mRNA水平分别检测该细胞株的Bcl-2、Mcl-1和Hsp90等基因的表达水平。结果三种浓度VEGF(2ug/L、20ug/L、100ug/L)处理的HL-60细胞株的凋亡明显受到抑制,并且VEGF可以对抗VP16诱导的细胞凋亡效应。2ug/L的VEGF处理HL-60细胞株18h后其细胞内的凋亡相关基因Bcl-2、Mcl-1和Hsp90的mRNA表达明显增加。结论VEGF可能通过提高Bcl-2、Mcl-l和Hsp90的基因表达增加而抑制急性白血病细胞株HL-60的凋亡;VECF可以抑制人急性白血病细胞的凋亡可能是白血病的发病机制之一。     

血管内皮生长因子对人急性白血病细胞凋亡影响及相关基因表达的临床与实验研究

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)对人急性白血病细胞株HL-60凋亡及相关基因Bcl-2和Mcl-1表达的影响,并从临床水平验证VEGF对人急性白血病细胞凋亡的影响。方法：采用单细胞凝胶电泳、流式细胞术检测VEGF处理后的HL-60细胞凋亡率;采用RT-PCR方法和免疫细胞化学法分别检测VEGF处理的HL-60细胞的Bcl-2和Mcl-1的表达水平。采用免疫细胞化学方法分别检测8例初发和复发、14例完全缓解的急性白血病患儿及5例正常儿童骨髓细胞的VEGF和Mcl-1蛋白表达。结果：VEGF可以明显抑制人急性白血病细胞株HL-60的凋亡,并且可以对抗VP16诱导的细胞凋亡效应。VEGF孵育HL-60细胞株18h后,其细胞内的Bcl-2和Mcl-1的mRNA和蛋白表达水平明显增加。初发和复发组白血病患儿骨髓细胞的VEGF和Mcl-1蛋白表达水平高于完全缓解组。结论：VEGF可能通过同时提高Bcl-2和Mcl-1的mRNA和蛋白表达,抑制急性白血病细胞株HL-60的凋亡,可能是白血病的发病机制之一。VEGF,Bcl-2和Mcl-1表达的增加可能对人急性白血病细胞的发生发展及预后产生影响,有可能成为临床白血病预后的参考指标之一。     

三氧化二砷对白血病细胞系K562和HL-60血管内皮生长因子表达的影响

目的研究三氧化二砷对白血病细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养白血病细胞株K562、HL-60,加入不同浓度的As2O3干预,用Westem bloting和荧光定量RT-PCR测定VEGF的蛋白和mRNA表达。结果K562和HL-60细胞经As2O3作用后,VEGF的蛋白表达明显减少,但VEGFmRNA拷贝数无差异。结论As2O3在蛋白水平抑制白血病细胞VEGF的表达,从而抑制骨髓血管生成,抑制白血病细胞的生长。     

人参皂甙对人白血病-60细胞凋亡的影响

目的：探讨人参皂甙对白血病细胞的致凋亡作用及其相关作用机制。方法：采用MTT细胞毒实验检测不同浓度（100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625 μmol/L）人参皂甙对人白血病-60（HL-60）细胞的生长抑制活性;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测不同浓度（0、5、10、20 μmol/L）人参皂甙诱导HL-60细胞凋亡情况;提取各种浓度人参皂甙处理的细胞总蛋白,Western blot检测caspase-8、caspase-9和caspase-3裂解情况;Western blot检测10 μmol/L人参皂甙处理HL-60细胞后caspase-8和caspase-9 抑制剂对caspase-3 裂解情况的影响。结果：人参皂甙对白血病HL-60细胞具有高效的细胞毒作用,IC50值为7.3±1.2 μmol/L;0、5、10、20 μmol/L 人参皂甙处理HL-60细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞的凋亡率呈剂量依赖性,各处理组之间差异有统计学意义（F=12.67,P<0.01）;Western blot检测细胞中caspase-9和caspase-3出现裂解带,而caspase-8未出现裂解带;10 μmol/L人参皂甙诱导caspase-3裂解可以被caspase-9的特异性抑制剂Z-LEHD-FMK所抑制,而caspase-8的特异性抑制剂Z-IETD-FMK却没有这一作用。结论：人参皂甙对人白血病HL-60细胞具有高效的致凋亡作用,激活线粒体凋亡途径可能是其致凋亡的主要作用机制。     

邻苯二甲酸正丁酯对HL-60细胞凋亡影响及其作用机制

目的探讨邻苯二甲酸正丁酯(DBP)对急性早幼粒细胞性白血病细胞系HL-60细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法用细胞形态学观察、DNA断裂百分率及DNA片段凝胶电泳法观察DBP对HL-60细胞增殖与凋亡的影响,用Fu-ra-2AM方法检测对HL-60细胞内游离钙离子浓度的影响,用免疫组织化学方法检测对细胞c-myc和bcl-2蛋白表达的影响。结果DBP可剂量和时间依赖性地抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡;引起HL-60细胞内钙重新分布,促进细胞外钙离子内流,升高细胞内游离钙([Ca2 ]i);下调白血病细胞c-myc和bcl-2蛋白表达。结论DBP可能通过提升HL-60白血病细胞内钙离子水平启动凋亡,且下调c-myc和bcl-2蛋白表达促进细胞凋亡,从而发挥其净化HL-60细胞的作用。     

bcl-2及fas基因表达的变化对细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的观察bcl-2、fas基因表达的变化对细胞色素C诱导急性早幼粒白血病细胞株(HL-60细胞)凋亡的影响,探讨细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的机制。方法将体外培养的HL-60细胞分成六组,细胞色素C终浓度分别为0(对照组)、9.375mg/L、18.75mg/L、37.5mg/L、75mg/L、150mg/L,用流式细胞仪检测细胞色素C对HL-60细胞的凋亡效应,用RT-PCR、westernblotting检测以凋亡为主的HL-60细胞中bcl-2、fas的表达水平。结果流式细胞仪检测表明细胞色素C终浓度分别为0、9.38mg/L、18.75mg/L、37.50mg/L时HL-60细胞是以凋亡效应为主,bcl-2基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而降低,fas基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而增高,当细胞色素C浓度为75mg/L、150mg/L时HL-60细胞是以坏死效应为主。结论细胞色素C能够下调bcl-2 mRNA及其蛋白的表达,上调fas mRNA及其蛋白的表达,从而可以诱导HL-60细胞的凋亡。     

PUVA诱导HL-60、NB4细胞凋亡时对Fas、FasL表达的影响

目的 探讨补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病细胞HL-60、NB4凋亡时对Fas、FasL表达的影响。方法 以HL-60、NB4细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察中药补骨脂中提取的PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果 PSO、UVA照射及PUVA均可诱导HL-60、NB4细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。 电镜下观察经PUVA处理后的HL-60、NB4细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60、NB4细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者。结论 PUVA可诱导白血病细胞HL-60、NB4发生凋亡,作用强于PSO及UVA照射。PUVA诱导HL-60、NB4凋亡的途径之一为上调细胞Fas基因表达水平,下调FasL基因表达水平。     

rhTNF-α对HL-60细胞凋亡及其bcl-2基因表达的影响

目的 探讨重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)对白血病细胞的作用及其机制,寻求白血病免疫疗法的理论依据.方法 以早幼粒白血病细胞株HL-60细胞为研究对象,利用苏木素染色及免疫细胞化学的方法 ,观察rhTNF-α对HL-60细胞凋亡及其bcl-2基因表达的影响.结果 10 U/ml、100U/ml和500U/ml rhTNF-α与HL-60细胞共同培养2～24 h,除10 U/ml培养2 h组外余各组凋亡细胞数均明显高于空白对照组(P＜0.05),bcl-2基因阳性表达细胞数均明显低于空白对照组(P＜0.05),二者呈明显负相关.随rhTNF-α浓度增高,其作用增强,8 h为作用的高峰时间.结论 rhTNF-α能促进HL-60细胞的凋亡;抑制凋亡调控基因bcl-2的表达可能是TNF-α促进HL-60细胞凋亡的机制之一.     

槲皮素诱导和增加HL-60白血病细胞对阿霉素的反应性

目的槲皮素(Quercetin),磷脂酰肌醇3激酶(P13K)和酪氨酸激酶(TPK)抑制剂。本研究为探索槲皮素对HL-60白血病细胞的生长抑制和增加阿霉素的细胞毒作用。方法采用MTT法分别测定不同浓度槲皮素,阿霉素以及槲皮素诱导下阿霉素对HL-60白血病细胞的生长抑制作用,比较其半数有效抑制浓度(IC50)。结果阿霉素利槲皮素均呈浓度依赖的抑制HL-60细胞的存活,其IC50分别为(0.152±0.035)mg/L和(31.881±5.742μmol/L;槲皮素(IC10,10μmol/L)的诱导作用显著增加了阿霉素对HL-60细胞的细胞毒作用,其IC50为(0.033±0.007)mg/L,较单一阿霉素增加了4.57倍(P<0.01)。结论槲皮素能明显抑制HL-60白血病细胞的生长,且可诱导HD-60白血病细胞对阿霉素的敏感性和细胞毒作用。槲皮素可作为一个增加白血病细胞对蒽环类化疗药物反应性的诱导剂。     

富铁对HL-60细胞增生及化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响

探讨铁对HL-60细胞增生及化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响,采用HL-60细胞与不同浓度的三氯化铁、三氯化铁加阿糖胞苷、三氯化铁加足叶乙甙、阿糖胞苷、足叶乙甙共同体外培养6h、12h、24h、48h,用细胞生长、活力测定、形态学观察、流式细胞学检测分析和DNA电泳,免疫组化方法检测bcl-2基因等细胞凋亡指标观察三氯化铁的作用.结果显示,100μmol/L三氯化铁促HL-60细胞增生最明显,凋亡率最低,bcl-2阳性表达率最高,100μmol/L三氯化铁分别加用阿糖胞苷、足叶乙甙与HL-60细胞共同培养时凋亡率比单用阿糖胞苷、足叶乙甙低(P＜0.05).可以认为一定量的铁有促进HL-60细胞增生、抑制HL-60细胞凋亡的作用,对于白血病患者,不适当的铁剂补充可能带来不利的影响.     

Range of Motion of the Joints of the Lower Extremities of Newborns

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早产儿视网膜病的危险因素分析及随访调查

研究早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)的发生率、高危因素、治疗与随访情况。方法对2005年7月-2007年12月温州医学院附属第一医院NICU收治的符合ROP筛查标准的早产儿,于生后2周开始由资深眼科医师开始行间接眼底镜检查眼底,并进行随访。结果434例早产儿中ROP的发生率为5.5%(24/434例),24例ROP中Ⅰ期19例,Ⅱ期3例,Ⅲ期2例。Ⅲ期阈值病变者行激光光凝治疗,全部患儿均恢复正常。对434例早产儿行单因素分析得出,胎龄、出生体重、住院时间、吸氧、吸氧浓度、吸氧时间、呼吸暂停、新生儿肺透明膜病(RDS)、肺表面活性剂(PS)的应用、机械通气、输血、光疗时间、感染与ROP的发生有相关性(P<0.05)。Logistic回归分析显示胎龄、出生体重、胎数、吸氧时间、光疗时间、代谢性酸中毒、母亲妊高症、颅内出血是影响ROP发生的主要因素。结论早产是ROP的根本原因,防治各种并发症、合理的氧疗是预防ROP的关键。建立完善有效的ROP筛查制度,早期发现、早期治疗ROP,可改善ROP的预后。