蒙药鹅绒藤HPLC指纹图谱研究

目的：建立蒙药鹅绒藤的高效液相色谱指纹图谱,为鹅绒藤药材鉴定以及质量标准的建立积累资料。方法：采用HPLC法,Agilent C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,甲醇-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长345nm,流速为0.8 mL/min,分析10批鹅绒藤药材的HPLC指纹图谱。结果：在选定的色谱条件下,通过相似度分析软件确定了由11个色谱峰构成的鹅绒藤的高效液相指纹图谱。结论：该分析方法稳定可靠,为蒙药鹅绒藤的质量评价与控制提供了理论依据。     

鹅绒藤总生物碱体外抗肿瘤作用的实验研究

目的研究鹅绒藤总生物碱（CCTA）对体外培养的肿瘤细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法以人宫颈癌细胞Hela、人结肠癌细胞SW480为研究对象,用不同浓度的CCTA分别对上述细胞作用24、48、72、96h后用MTr法测其抑制率,流式细胞仪测其细胞周期及凋亡率。结果CCTA对Hela细胞和SW480细胞均有不同程度的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性;可使Hela细胞位于S期的细胞明显增多,而SW480细胞位于G0／G1期的细胞明显增多;CCTA作用后,Hela细胞和SW480细胞凋亡率均显著增加。结论CCTA可通过阻断细胞周期、诱导细胞凋亡来抑制体外培养Hda细胞和SW480细胞的生长。     

鹅绒藤总生物碱体外抗肿瘤作用的实验研究

目的研究鹅绒藤总生物碱(CCTA)对体外培养的肿瘤细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法以人宫颈癌细胞Hela、人结肠癌细胞SW480为研究对象,用不同浓度的CCTA分别对上述细胞作用24、48、72、96h后用MTT法测其抑制率,流式细胞仪测其细胞周期及凋亡率。结果 CCTA对Hela细胞和SW480细胞均有不同程度的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性;可使Hela细胞位于S期的细胞明显增多,而SW480细胞位于G0/G1期的细胞明显增多;CCTA作用后,Hela细胞和SW480细胞凋亡率均显著增加。结论 CCTA可通过阻断细胞周期、诱导细胞凋亡来抑制体外培养Hela细胞和SW480细胞的生长。     

鹅绒藤对小鼠抗惊厥作用的观察

目的：观察鹅绒藤全草水提物和氯仿提取物的抗惊厥作用。方法：采用小鼠超强电休克惊厥（MES）和戊四氮惊厥（MET）法研究提取物对实验性惊厥的影响;自主活动仪法观察提取物对小鼠自主活动的影响;转轮法测定提取物对小鼠的最小中枢神经系统毒性;采用协同阈下剂量戊巴比妥钠催眠实验,观察提取物对镇静催眠药物的协同作用。结果：鹅绒藤水提物可以对抗戊四氮惊厥（ED50=2.34g／kg）,鹅绒藤氯仿提取物在试验剂量范围内无作用。鹅绒藤氯仿提取物可以对抗最大电休克（ED50=1.34g／kg）,而水提物无对抗最大电休克的作用。两种提取物对阈下剂量戊巴比妥钠（30ms／ks,ip）的催眠效应有协同作用,水提物作用的ED50为2.36g／kg,氯仿提取物作用的ED50为0.75g/kg。两种提取物对实验小鼠自主活动有剂量依赖性抑制作用。在本实验条件下,两种提取物未呈现出中枢神经系统毒性。结论：鹅绒藤全草水提物和氯仿提取物可以对抗不同的小鼠实验性癫痫模型,鹅绒藤抗癫痫作用广泛,同时具有中枢抑制作用。     

鹅绒藤对离体豚鼠心房收缩力及频率的影响

鹅绒藤水溶性浸膏（ＡＥＣＣ）及正丁醇提取物（ＢＩＣＣ）对离体豚鼠左心房均表现出依剂量性负性肌力作用，半效抑制浓度（ＩＣ_５０）ＡＥＣＣ为４．５ｍｇ／ｍｌ．ＢＩＣＣ为１．３ｍｇ／ｍｌ，二者高浓度时对离体豚鼠右心房频率有明显抑制作用。经测定二者对小鼠半数致死量（Ｌｄ５０）分别为（ＡＥＣＣ、ｉｐ、ＬＤ５０）３．８±０．４ｇ／ｋｇ、（ＢＩＣＣ、ｉｖ、ＬＤ_５０）０．６０±０．０７ｇ／ｋｇ（９５％可信限）。     

鹅绒藤的正性肌力作用与毒性

鹅绒藤茎部乳汁水溶性冻干粉（ＦＤＰＣＣ）１～４ｍｇ／ｍｌ，对离体蛙心具有洋地黄样正性肌力作用，大剂量时（６ｍｇ／ｍｌ）致中毒并使心跳停止于收缩期。对离体豚鼠左、右心房可产生依剂量性正性肌力作用，半数有效浓度（ＥＣ＿（５０））分别为１．７×１０￣（－２）与４．０×１０￣（－２）ｍｇ／ｍｌ，对心率影响则不明显。鹅绒藤乳汁冻干粉小鼠静脉注射（ｉｖ）的半数致死量（ＬＤ＿（５０））为０．２１±０．０２ｇ／ｋｇ。     

鹅绒藤中的黄酮苷类诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的观察不同浓度的鹅绒藤中黄酮苷类单体化合物山奈酚-7-O-α-L-鼠李糖苷（Monomer Compounds-Ⅴ,MC-Ⅴ）诱导肿瘤细胞凋亡的形态学变化及其凋亡率的检出。方法用浓度50、100和200μg·mL-1的MC-Ⅴ作用人宫颈癌Hela细胞、人胃癌MGC-803细胞和小鼠淋巴瘤YAC-1细胞48h和72h后,采用细胞凋亡荧光Hoechst33342/PI双染方法,在荧光显微镜下观察肿瘤细胞在加MC-Ⅴ后的形态变化过程,并计算三种肿瘤细胞的凋亡率。结果镜下可见正常对照组细胞质染色均匀,形态规则,呈均匀微弱蓝光;所有MC-Ⅴ作用的肿瘤细胞核固缩,染色质凝集,随着浓度的增加和作用时间的延长,细胞膜损坏加剧;在MC-Ⅴ作用的三种肿瘤细胞中,作用于Hela细胞,染色质边集化,部分染色质裂断;作用于MGC-803细胞,染色质部分高度凝集,核碎裂、边集化严重,呈现不均一的荧光显色结构;作用于YAC-1细胞,细胞核固缩凝集成小团块状结构。三种肿瘤细胞的凋亡率均随MC-Ⅴ浓度的增高及作用时间的延长而增大。结论MC-Ⅴ可以诱导不同的肿瘤细胞显示不同的凋亡形态,并呈时间和剂量依赖性,提示其作用于肿瘤细胞的作用机制不同。     

鹅绒藤总生物碱对小鼠体液免疫功能的影响

目的 研究鹅绒藤总生物碱(Cynanehan Chinense Total Alkaloid,CCTA)对正常小鼠体液免疫的影响.方法 给正常小鼠腹腔注射高(12.96mg/kg)、中(6.48mg/kg)、低(3.24mg/kg)3个剂量的CCTA,每天1次,连续7d,于末次给药后12h,眼球取血并取脾脏,定量溶血分光光度试验进行小鼠脾脏抗体形成细胞检测,对小鼠血清溶血素进行测定.结果 CCTA高、中剂量组抗体形成细胞OD值及血清溶血素HC50明显高于免疫小鼠对照组(P＜0.05,P＜0.01);与CCFA低剂量组比较,CCTA高、中剂量组抗体形成细胞OD值升高(P＜0.05),血清溶血素HC50升高(P＜0.01).结论 CCTA有提高正常小鼠体液免疫的作用.     

鹅绒藤对小鼠免疫功能的影响和体外抗菌活性的研究

研究鹅泽小鼠免疫功能的影响和体外抗菌活性。方法用鹅绒藤浸主共正丁醇提取物给实验小鼠灌胃后测定细胞免疫及体液免疫指标。用Ｋ－Ｂ法做了ＡＥＣＣ的药敏试验。结论ＢＥＣＣ能增强小鼠细胞免疫功能，ＡＥＣＣ在体外无抗菌活性。     

补骨脂中补骨脂素的提取及纯化

目的从中药材补骨脂中提取补骨脂素。方法补骨脂经粉碎后用50％乙醇浸渍提取，浸提液进行浓缩沉淀，得到膏状物，膏状物用甲醇溶解，活性碳脱杂质，再除去溶剂，放置过夜析出晶体。甲醇洗去稠状物得黄色片状晶体，甲醇重结晶后得针状白色晶体。薄层分析、高效液相色谱分析其纯度。紫外吸收光谱、HI-NMR谱鉴定其结构。结果与结论晶体物得率0．147％．是一个单体，经过波谱分析确定其为补骨脂素。用本方法获取纯品补骨脂素比较简便的方法。     

补骨脂中补骨脂素的提取及纯化

目的 从中药材补骨脂中提取补骨脂素。方法 补骨脂经粉碎后用50%乙醇浸渍提取,浸提液进行浓缩沉淀,得到膏状物,膏状物用甲醇溶解,活性碳脱杂质,再除去溶剂,放置过夜析出晶体。甲醇洗去稠状物得黄色片状晶体,甲醇重结晶后得针状白色晶体。薄层分析、高效液相色谱分析其纯度。紫外吸收光谱、H1-NMR谱鉴定其结构。结果与结论晶体物得率0.147%,是一个单体,经过波谱分析确定其为补骨脂素。用本方法获取纯品补骨脂素比较简便的方法。     

白毛藤多糖的分离、纯化和鉴定

目的分离、纯化和鉴定白毛藤S olanum ly ra tum中的多糖的成分。方法经脱脂、沸水抽提、乙醇沉淀、酶-Sevag法脱蛋白得到的粗多糖,再经DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换和Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱色谱分离得到纯化的白毛藤多糖(SLPS),用红外光谱和紫外光谱分析鉴定该多糖,凝胶渗透色谱(GPC)法测定其相对分子质量,运用薄板色谱(TLC)和纸色谱(PC)法初步测其结构组成。结果红外光谱分析具有典型的多糖特征吸收峰,紫外光谱分析未见蛋白质(280 nm)与核酸(260 nm)的特征吸收峰。结论本实验所提取的白毛藤多糖为单一组分的多糖。     

人胎盘中Ⅴ型胶原的提取与纯化

V型胶原蛋白广泛地分布于血管壁、基底膜及神经内膜等部位,具有促进神经再生及抗凝血等重要生理功能。据国外文献报道,从人胎盘中提取的V型胶原有两种形式,即AB_2和ABC。国内由于缺乏V型胶原纯品,对其研究受到了限制。本实验参照Miller等人介绍的文献,从人胎盘中提取了V型胶原蛋白(AB_2)。     

当归多糖的分离、纯化及分析鉴定

目的　从新鲜中国当归 [Angelica sinensis(Oliv)Diels]中分离纯化出多个多糖组分 ,并对其理化性质进行分析鉴定 .方法　采用水煮—乙醇沉淀法从新鲜当归中提取当归总多糖 AP- 0 ;AP- 0用 80 g· kg- 1十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)沉淀得到当归多糖亚组分 AP- 1;CTAB处理后的上清用 10 g· kg- 1 H3BO3,2 mol· L- 1 Na OH处理得到当归多糖亚组分 AP- 2 ;所剩上清 ,用乙酸处理后 ,再用乙醇沉淀 ,得到当归多糖亚组分 AP- 3.总糖含量测定采用改良苯酚 -硫酸法 ;蛋白质含量测定采用 Serva Blue- G染料结合法 ;糖醛酸含量测定采用间羟基连苯法 .采用新华中速滤纸纸色谱和硅胶G薄层色谱分析多糖各组分的单糖组成 .高效凝胶过滤色谱和高效离子交换色谱分析多糖各组分的 Mr分布和电荷性质 .红外光谱法分析多糖各组分的糖苷键构成 .结果　 AP- 0总糖 970 g· kg- 1 ,其中糖醛酸 2 10 g· kg- 1 ,蛋白质 30g·kg- 1 ;AP- 1总糖 970 g· kg- 1 ,其中糖醛酸 172 g· kg- 1 ,蛋白质 30 g· kg- 1 ;AP- 2总糖 830 g· kg- 1 ,其中糖醛酸 2 5 7g·kg- 1 ,蛋白质 170 g· kg- 1 ;AP- 3总糖 970 g· kg- 1 ,其中糖醛酸 86 g· kg- 1 ,蛋白质 30 g· kg- 1 .AP- 0 ,AP- 1,AP- 2和 AP- 3主要由葡萄糖 ,阿拉伯糖和少量糖醛酸     

南蛇藤中扁蒴藤素提取分离工艺研究

目的对南蛇藤中扁蒴藤素提取纯化工艺进行研究。方法南蛇藤根粉经丙酮冷浸提取后,采用聚酰胺柱层析及硅胶柱层析进行分离纯化;以HPLC法测定产品中扁蒴藤素的含量,并以其为指标对分离纯化的主要工艺参数进行优化。结果将待分离的南蛇藤丙酮浸膏和聚酰胺（60～100目）按物料比0．02（质量比）装入层析柱中,常压下用体积分数75％的甲醇洗脱至洗脱液近无色,收集流分,浓缩后得到粗品,经硅胶柱层析进一步纯化,再经重结晶后纯度提高到98．0％以上。结论该工艺简单、成本较低,适于工业化。     

蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质

目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质.方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法.结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%.EDNase的相对分子质量约为63 000.Mg2+,Mn2+和ca2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性.在pH 4.4～5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其最适pH值为4.8.该酶的最适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性.EDNase的等电点为6.20.在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52 g/L,Vmax为4.89 mg/(mL·min).该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用.结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶.     

海螵蛸多糖的提取分离及活性组分CPS-1的纯化

目的:从海洋中草药海螵蛸(乌贼骨)中提取分离得到多糖活性物质.对粗多糖中主要的活性组分CPS-1进行纯化,得到成分相对均一的天然活性多糖.方法:用热水抽提法提取海螵蛸多糖粗品,并对提取工艺进行正交设计,优化提取方法.对粗品组分进行总糖量测定.用DEAE-Sepharose F.F柱及Sepharose CL-6B柱对海螵蛸多糖粗品进行分离.通过活性检测实验确定活性部分.最后使用Sephacryl S-300柱进一步纯化.用HPLC来检测精品多糖的纯度.标准曲线法测定相对分子质量.结果:成功得到海螵蛸粗多糖.经过离子交换柱DEAE-Sepharose Fast Flow和Sepharose CL-6B柱及分子筛Sephacryl S-300柱的进一步分离纯化和活性跟踪,最后得到相对均一的活性精品多糖CPS-1,其含糖量达93.6%,相对分子质量为1×106.结论:不同的提取条件影响海螵蛸多糖的得率.不同性质的分离材料能够将相对分子质量及电荷有差异的多糖分离,达到分离的目的.精品多糖CPS-1是从海洋中草药海螵蛸中得到的均一多糖组分.     

大孔树脂对龙须藤中4种多甲氧基黄酮类化合物的纯化研究

目的 优选分离纯化龙须藤中4种多甲氧基黄酮的大孔吸附树脂及相应的工艺条件.方法 采用HPLC法测定5,6,7,5'-四甲氧基-3',4'-亚甲二氧基黄酮(PMF1)、5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黄酮(PMF2)、5,6,7,3',4'-五甲氧基黄酮(PMF3)和5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮(PMF4)的质量分数,考察树脂类型、上样吸附速率、乙醇体积分数、洗脱剂用量等参数,优选出最佳的大孔吸附树脂纯化工艺.结果 NKA型大孔树脂用于分离纯化龙须藤中4种多甲氧基黄酮的效果较好,其最佳纯化工艺参数为:上样液生药浓度0.66 g/mL,吸附速率为2 BV/h,以5 BV蒸馏水和8 BV的35%乙醇洗脱杂质,然后用75%乙醇10 BV洗脱.收集75%乙醇洗脱液,烘干,所得固体样品中4种多甲氧基黄酮的总质量分数为35.98%.结论 NKA型大孔树脂可用于龙须藤中多甲氧基黄酮的富集,优选得到的纯化工艺稳定可行.     

人心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及鉴定研究

目的 :探究一种简便易行的人心肌肌钙蛋白T(cTnT)的提纯方法并进行鉴定。　方法 :采用匀浆、离心、70℃加热、冰浴、饱和硫酸铵盐析、透析、DEAE 纤维素层析等方法提纯cTnT ,并进行鉴定和免疫活性检测。　结果 :1 0 0g心肌组织中获得cTnT 2 1 .35 6mg ,纯度最高达 91 .7%。　结论 :建立的方法能成功提取纯度较高 ,且具有免疫活性的人心肌cTnT ,为建立适用于临床的cTnT检测方法奠定基础     

龙须藤中黄酮类化合物提取条件的研究

目的探讨龙须藤中以芦丁为指标的总黄酮最佳提取条件。方法正交试验法对龙须藤中黄酮类化合物的提取工艺进行优选,以提取时间、乙醇浓度、提取次数、料液比为因素,以总黄酮得率为指标进行试验。结果最佳提取工艺条件:60%(体积分数)乙醇溶液,提取时间3 h,提取次数3次,乙醇用量10倍,提取率为7.426%。结论本实验结果可靠,方法简便,适合于该药材的批量提取。