IL—1,IL—6和活化枯否细胞培养上清液对约氏疟原虫红外期？…

目的：研究ＩＬ－１、ＩＬ－６和活化枯否细胞（Ｋｃ）产物对氏疟原虫红外期（ＥＥＦ）发育的影响。方法：大鼠腹腔注射ＩＬ－１、ＩＬ－６或合用，３ｈ后接子孢子（Ｓｐ）；４２ｈ后观察ＥＥＦ发育情况；建立大鼠肝细胞－约氏疟原虫体外培养模型，Ｓｐ接种后２ｈ加ＩＬ－１、ＩＬ－６及激活后Ｋｃ培养上清，观察对ＥＥＦ发育的影响。结果：ＩＬ－１组、合用组Ｓｐ发育率明显降低，ＩＬ－６组无明显下降；ＩＬ－１、ＩＬ－６明显抑制     

毫菊氯仿提取物对约氏疟原虫红外期的效应

从Wistar株大白鼠尾静脉注射子孢子后2h及16h，腹腔内注射毫菊氯仿提取物70mg／kg两次，42h时肝内红外期疟原虫数量明显减少，其形态大小、成熟度均受到影响，结果提示是菊氯仿提取物对肝内红外期疟原虫发育有明显抑制作用。     

大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究

目的探讨大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化的相互关系.方法将雌大劣按蚊成蚊分为吸糖水组、正常小白鼠血组和约氏疟原虫感染血组,以挤压法收集各组的血淋巴,解剖中肠并利用超声波提取其蛋白,继而对血淋巴和中肠蛋白进行SDS-PAGE分离,Western blot检测丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶的表达差异,并利用免疫组织化学进行血细胞丝氨酸蛋白酶与前酚氧化酶的定位检测.结果 SDS-PAGE显示吸糖水大劣按蚊有34条蛋白带,而吸正常小鼠血和吸感染血蚊血淋巴有35条蛋白带,而且在分子量约160×103和66×103的蛋白差异带显著,吸正常血及感染血后表达增强.吸糖水和吸正常小白鼠血组血淋巴丝氨酸蛋白酶呈现2条带,分子量分别约160×103和150×103,3组蚊血淋巴前酚氧化酶呈现1条带,分子量约66×103,吸正常小鼠血和吸感染血组蚊1 d后血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达均显著上调,尤其疟原虫感染后表达最强.感染1 d后中肠前酚氧化酶带型明显增宽.免疫酶化学显示,丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶在血细胞内均呈颗粒状分布,血细胞外血淋巴液内有少许散在颗粒分布.结论约氏疟原虫卵囊黑化期间,大劣按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达增强,提示二者可能参与了卵囊黑化包裹反应.     

约氏疟原虫感染早期小鼠免疫应答的实验研究

目的:探讨约氏疟原虫感染早期小鼠免疫应答的差异性.方法:约氏疟原虫腹腔感染DBA/2、BALB/c和C57BL/6小鼠,制备薄血膜,姬姆萨染色,计数红细胞感染率;通过ELISA和Griess实验分别检测脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和一氧化氮(NO)水平.结果:感染第3 d之后,DBA/2小鼠的虫体血症水平显著低于BALB/c和C57BL/6小鼠;将疟原虫寄生的红细胞(PRBC)和脂多糖(LPS)或IFN-γ分别与3种感染第3 d小鼠脾细胞共同培养后,DBA/2小鼠脾细胞培养上清中的IFN-γ和NO水平明显高于BALB/c和C57BL/6小鼠.结论:约氏疟原虫感染早期,不同遗传背景小鼠在Th1型细胞免疫应答的建立和巨噬细胞活化方面存在显著差异.     

感染约氏疟原虫的中华按蚊基因差异表达分析

全世界按蚊有５００余种,不同蚊种的传疟效能差异很大。阐明蚊媒传疟效能差异的调控机制,探索控制疟疾传播的新策略,是当前疟疾防治研究的新课题。本研究试图通过基因表达系列分析［１］,从感染疟原虫的蚊媒体内分离特异表达的ｃＤＮＡ片段,并进一步论证其与感染的相...     

硝喹对鼠约氏疟原虫红内期超微结构的影响

感染约氏疟原虫的小鼠,灌服单剂量的硝喹(1mg/kg)后30min到24h,用光镜和透射电镜动态观察了红内期疟原虫的形态变化。结果发现,在光镜下,有些晚期滋养体核大而不能分裂,有些原虫胞浆中有散在的圆形红色颗粒,这些红色颗粒可能是电镜中观察到的自噬泡或膜性残体。在电镜下,最早观察到的是原虫线粒体肿胀,基质空化,粗面内质网扩张和排列紊乱,核糖体脱落和解聚。随后原虫膜性结构增生,在胞浆中形成多层螺纹膜或髓鞘样结构,核膜肿胀,增生,核周间隙增宽。药物作用晚期,原虫结构瓦解,形成大量自噬泡。结果表明,硝喹干扰了疟原虫的膜系统,胞浆系统和细胞核的结构和功能,从多个环节发挥其抗疟效应。     

γ—干扰素对大鼠体内约氏疟原虫子孢子入侵及红外期发育的影响

用葡萄球菌肠毒素Ａ刺激体外培养的大鼠脾细胞所获得的γ－干扰素（ＩＦＮ－γ），于接种约氏疟原虫子孢子前５ｈ静注于Ｗｉｓｔａｒ大鼠体内，子孢子接种４２ｈ后肝内红外期（ＥＥＦ）数量显著减少，其子孢子发育率仅为对照组的７％～２０％，但ＥＥＦ的大小及成熟度均未受影响。大鼠接种子孢子后２ｈ给ＩＦＮ－γ共孵４０ｍｉｎ，然后超速离心洗脱ＩＦＮ－γ后再接种于大鼠，则红外期的密度、大小、成熟度也均类似于对照组。结果提     

约氏疟原虫动力素蛋白(PyDyn)的基因克隆及其结构域的免疫特性

目的 分离、克隆约氏疟原虫动力素蛋白(Plasmodium yoelii dynamin-like proteon,PyDyn)基因,并用其在原核表达的蛋白结构域产物做候选疫苗,研究其免疫保护性。方法 应用约氏疟原虫基因组数据库,设计特异引物,用RT—PCR法从约氏疟原虫红内期mRNA扩增PyDyn基因编码区;分析其序列特性;原核表达约氏疟原虫动力素结构域蛋白、IPA分析其免疫原性。结果 从鼠约氏疟原虫mRNA扩增的PyDyn基因编码区是一个全长为2433bp的cDNA克隆,编码811个氨基酸的蛋白肤链,具有典型的动力素蛋白家族的结构特性。该基因GeneBank登录号为AF458071。IFA表明该虫源性结构蛋白(PyDyn)的第1、3、5结构域的抗血清可以识别约氏疟原虫感染的红细胞。结论 经分离、克隆和表达的新PyDyn有望成为疟疾疫苗的候选抗原分子。     

应用Feulgen染色及显微分光光度计探讨乙胺嘧啶对约氏疟原虫卵囊的作用机理

本实验应用 Feulgen 组化染色研究乙胺嘧啶作用后约氏疟原虫卵囊内核酸含量的变化,并在显微分光光度计下进行 DNA 含量测定。结果显示,对照组早、中期卵囊内含有丰富的 DNA 颗粒,晚期卵囊内形成大量成熟的子孢子。而用药组卵囊发育迟缓,胞浆内来见清晰的 DNA 团块,仅见色素堆积,部分卵囊形成黑孢子。用药组卵囊的 DNA 平约含量亦明显低于对照组。初步说明,乙胺嘧啶可抑制疟原虫卵囊的 DNA 合成,从而阻止了蚊体内疟原虫的继续发育成熟.     

硝喹对大白鼠体内约氏疟原虫红细胞外期发育的影响

大白静脉内接种子孢子(SP)后24小时(h),灌服硝喹醋酸盐(1mg/kg)单次剂量,在不同时间活检或活杀动物,检查红外期原虫,其中部分动物并作血检,观察原虫血症。结果。①接种SP后48h,给药组动物肝组织内原虫密度较低,退变原虫发生率高;54、65和72h红外期原虫核大小不等,与原虫体积不相称,核团块大小不一,数量增多;并可见到白细胞浸润的变性原虫;在接种SP后72h内,均未发现成熟红外期原虫。②给药组8只动物中仅一只血检阳性。但密度低,虫现前斯长。实验结果表明硝喹对约氏疟原虫具有病因性预防效果,并提示硝喹可能通过抑制核分裂而影响红外期原虫的发育。     

鬼形红细胞中约氏疟原虫的形态

目的动态观察鬼形红细胞中约氏疟原虫各期的形态特征.方法用皂化和低渗技术,使约氏疟原虫感染的红细胞溶血变成鬼形细胞,在扫描和透射电镜下观察不同生活史阶段的红内期疟原虫形态结构.结果鬼形红细胞内的疟原虫形态结构完整,呈现红内期各期疟原虫的特征性结构,如红细胞膜源性纳虫空泡,指环样早期滋养体,"褡裢"(brassiere)样早期裂殖体,裂殖体表面新生芽体和葡萄串样晚期裂殖体的外形;早期滋养体的胞口、食物泡和结晶样的疟色素颗粒,晚期滋养体的核质与核膜的增生,及其增生核膜的衍化;裂体增殖过程中先行的团块样核分裂及其随后的芽体等头端结构的形成.结论鬼形细胞技术有可能成为红内期疟原虫形态生物学及其免疫学和疫苗学研究的新手段.     

腹腔单核细胞对约氏疟原虫感染红细胞的免疫作用

目的检测腹腔单核细胞对约氏疟原虫感染红细胞(靶细胞)的免疫作用.方法用皂化约氏疟原虫感染的鬼形红细胞(SPRBC)腹腔注射免疫小鼠2次.3周后,用感染红细胞(PRBC)作为靶细胞注入腹腔,90 min后洗取腹腔细胞,用扫描电镜观察腹腔单核细胞的变化和对靶细胞的作用效应.结果腹腔细胞在靶细胞注入90 min后呈现各种激活状态:(1)腹腔单核细胞大小不均一,细胞表面绒毛变的细长浓密且有细胞间联接;(2)部分腹腔单核细胞胞浆摊展(呈"煎蛋"样)或呈"细胞炸弹"样;(3)延展或片状的绒毛和摊展的胞浆可粘附包卷靶细胞,并可使其因密集穿孔而受损.结论小鼠经约氏疟原虫感染的鬼形红细胞免疫后,其腹腔单核细胞对红内期疟原虫具有免疫保护作用.     

约氏疟原虫尼日利亚亚种的卵囊与附属囊的形态观察

应用1um切片标本油镜观察方法及透射电镜对约氏疟原虫尼日利亚亚种在斯氏按蚊体内的卵囊发育过程及时属囊的形态结构作了观察描述。该种疟原虫卵囊为成孢子细胞的形成开始于卵囊披膜下出现许多液泡,随着液泡延伸到卵囊胞质中,使胞质再分裂,并与已分裂的核形成成孢子细胞。子孢子芽从成孢子细胞体表面长出,逐渐发育为子孢子。一般附属囊发育正常,但与所附着的卵囊发育不同步,多数发育较慢,少数较快,并可见形成晚期成孢子细胞,而其子孢子芽数量较少,可能与附属囊较小,营养不足有关。     

IL-12在约氏疟原虫感染中作用的初步实验研究

目的:探讨IL-12在约氏疟原虫感染中的作用.方法:尾静脉注射法感染IL-12基因敲除小鼠和B6小鼠约氏疟原虫(17XNL),于感染后的第0、2或4、6天取小鼠尾静脉血,检测血清中的细胞因子;从感染后的第2天起,隔日检测小鼠虫体血症水平.结果:与B6小鼠相比,IL-12基因敲除小鼠在感染后虫体血症水平增长迅速且水平高;清除感染需时较长,但仍能完全清除虫体而存活.在感染后的第0、2、6天血清中无IL-12、IFN-γ,而B6小鼠IL-12、IFN-γ(D4)水平均较高.两者在TNF-α水平上无差别.结论:尽管IL-12对小鼠感染约氏疟原虫后的存活很重要,但无IL-12的小鼠感染约氏疟原虫后仍能存活.     

感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异表达蛋白分析

目的获得并分析感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异表达蛋白.方法利用二维电泳方法分别分离感染约氏疟原虫前后的大劣按蚊血淋巴蛋白,进行考马斯亮蓝染色,并利用PDQuest 2D Elite软件分析和比较凝胶结果;对感染约氏疟原虫前后的差异表达蛋白进行质谱分析,获得肽质量指纹图谱;利用Mascot软件系统,在Swiss-Prot等数据库中检索和分析所获得的肽质量指纹图谱.预测差异表达蛋白的生物学特性和在卵囊黑化中的功能.结果获得了分辨率和重复性均较好的二维电泳图,感染组凝胶可见120个蛋白点,正常组凝胶可见95个蛋白点,二者比较分析后发现有37个差异蛋白点;质谱分析获得3个肽质量指纹图谱,于蛋白数据库检索后未发现匹配分值很高的相关蛋白,其中差异蛋白点1与冈比亚按蚊一蛋白具有较高的同源性.结论获得了感染约氏疟原虫前后大劣按蚊血淋巴的差异蛋白和部分差异蛋白的相关信息,这为从蛋白水平认识蚊媒和疟原虫的相互关系和更深入地利用大劣按蚊-约氏疟原虫模型开展卵囊黑化的相关研究奠定了基础.     

抗生素对重组约氏疟原虫BY265株感染斯氏按蚊的影响

目的 探讨抗生素对斯氏按蚊感染重组约氏疟原虫BY265-GFP株的影响.方法 在疟原虫感染斯氏按蚊前后分别饲含抗生素的糖水,分别于7 d、16 d观察蚊胃卵囊和唾液腺子孢子情况.结果 饲加入抗生素糖水组蚊胃感染度和感染率、唾液腺子孢子数量明显高于对照组.结论 抗生素可提高重组约氏疟原虫对斯氏按蚊的感染能力.     

同种抗鼠疟iRNA对感染约氏疟小鼠体内细胞免疫状态的影响

作者用感染约氏疟阴转的小鼠提取同种抗鼠疟iRNA,以3H-亮氨酸标记的白细胞粘附抑制试验和~3H-TdR掺入的淋巴细胞增殖试验为指标,观察了iRNA对感染约氏疟小鼠体内细胞免疫状态的影响.结果表明,小鼠感染疟疾后仅在第1日脾细胞的粘附抑制指数增高,iRNA可使该作用持续到第10日;此外,iRNA在小鼠感染后第3日脾细胞对Con A的增殖反应增强,在第5日脾细胞对PHA的增殖反应增强.本实验提示,iRNA能延缓机体感染疟疾后的免疫抑制现象.     

蒿甲醚对约氏疟原虫在斯氏按蚊体内发育影响

目的 研究蒿甲醚对约氏疟原虫在大劣按蚊体内发育的影响及其机制.方法 本课题利用已经建立的斯氏按蚊-约氏疟原虫模型,通过吸饲蒿甲醚糖水的方法,观察蒿甲醚是否影响约氏疟原虫在斯氏按蚊体内的发育.通过RT-PCR方法,分析NOS、TEP1和PPO三个斯氏按蚊重要的免疫反应相关基因的表达变化,以了解青蒿素类药物蒿甲醚影响疟原虫...