一种体内溶栓活性优于总蚯蚓纤溶酶的组分

目的筛选高效低毒的蚯蚓纤溶酶单一组分。方法通过亲和色谱从赤子爱胜蚓获得含多组分的总蚯蚓纤溶酶(EFE)，经离子交换分离得到3个主要溶栓组分EfP-0-2，EfP-I-1和EfP-I-2，与EFE比较体内外溶栓效果和毒副作用。结果与其他组分比较，EfP-I-1的体外溶栓作用较强；当静脉注射4.5 mg·kg^-1时，各组分对纤维蛋白原的影响均不明显，只有EfP-I-1能显著溶解动静脉旁路血栓；当静脉注射达6 mg·kg^-1时，只有该组分对延长出血时间的影响不明显；急性毒性实验表明，该组分的LD₅₀是EFE的2.17倍。结论EfP-I-1有较高的体内外溶栓活性和较低的毒副作用。由于该组分在总EFE中所占比例较高，并易于分离纯化，故适于作为单一组分的溶栓药物进行开发。     

药用蚯蚓纤溶酶的制备及其性质的研究

从爱胜蚓中制备药用纤溶酶，经工厂中试，收率为２．５２－２．７４％，纤溶活性为２４３３３－２６５６０ｍｍ＾２／ｍｇ；水解酪蛋白活性为５９８－６４０ｍＵ／ｍｇ。制备工艺重复性好，操作简易可行另报道了该酶的一些生化特性和稳定性的研究结果。     

地龙溶栓酶经导管溶栓实验研究

20只家兔分为实验、对照两组,分别经导管动脉内灌注地龙溶栓酶及生理盐水,结果表明地龙溶栓酶对急性血栓具有明显溶解作用。     

硫酸二甲酯的致突变性研究

硫酸二甲酯是良好的甲基化剂,广泛用于制药、染料和香料等工业中。本文报道了国产硫酸二甲酯对大鼠骨髓嗜多染红细胞微核率、骨髓细胞畸变及对鼠伤寒沙门氏菌微粒体酶系统的诱变作用的研究结果。 材料和方法 硫酸二甲酯由天津市化学一厂提供,纯     

一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶酶学性质的研究

目的研究蚯蚓组织中1种新型脱氧核糖核酸酶(EWD1)的主要酶学性质。方法用SDS-PAGE凝胶电泳、质谱分析、毛细管等点聚焦电泳法和酶活性测定等方法。结果EWD1的相对分子质量约为157000。Mn2+、Ca2+是该酶的抑制剂,Mg2+对酶的活性基本上没有影响。该酶的最适温度为37℃,最适pH值为5.2,等电点为6.12。以小牛胸腺DNA为底物,测得Km为1.58 mg/mL,Vmax为5.36 mg/(mL.min)。结论蚯蚓组织中发现的此种脱氧核糖核酸酶EWD1具有特殊的酶学性质,明显区别于已知的脱氧核糖核酸酶类。     

蚯蚓纤溶酶化学修饰的研究

以三聚氰氯为活化剂，采用活化聚乙二醇(PEG)对环毛蚯蚓纤溶酶进行化学修饰，优化了修饰条件，得到了PEG-EFE的加合物(修饰酶)，并研究了PEG-EFE的部分酶学性质。修饰酶的活力为天然酶的85％，结果表明酶的活性中心基本保持不变。对修饰酶的残留氨基测定表明，70％的可滴定氨基参加了反应，且EFE的活性改变较小，可以推测PEG是连接在蛋白质表面上的。     

两种蚯蚓及其不同部位的酶谱研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａ ｆｏｅｔｉｄａ）和秉代环毛蚓（Ｐｈｅｒｅｔｉｍａ ｃａｒｎｏｓａ）不同部位的纤溶酶、酯酶及乳酸脱氢酶酶谱。纤溶酶主要存在于蝗蚓的体腔内。不同蝗蚓的纤溶酶酶谱不同。酯酶酶谱在两种蝗蚓及不同部位差异很大。蚯蚓及的乳酸脱氢酶较弱。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化研究

目的从赤子爱胜蚓(Eisenia Foelide)中分离纯化出一种相对分子质量(Mr)较小的纤维蛋白溶解组分———蚯蚓纤溶酶(EFE),为其注射剂的研制开发打下基础。方法采用盐析、透析、凝胶过滤色谱、离子交换色谱等方法分离纯化EFE,用SDS-PAGE对纯化的活性组分进行Mr测定,用酶谱分析方法初步探讨蚯蚓中存在的其它纤溶酶活性组分。结果分离纯化得到了EFE单一组分,经SDS-PAGE EFE呈单一条带,Mr约为25 000。经酶谱分析发现纤溶酶活性组分Mr分布在25 000~50 000之间。结论反复使用色谱技术可分离纯化EFE,并得到单一组分。     

朱砂莲的致突变作用研究

本文通过沙门氏菌回复突变试验，小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形式试验的检测，探讨朱沙莲的有无致突变潜在毒性。结果表明在本试验剂量范围内未观测到朱砂莲对体细胞及生殖细胞在致突变作用。     

爱宁的致突变作用研究

目的检测爱宁的致突变性,以提供有关致突变的遗传毒性安全评价数据。方法设1.6,8,40,200和1000μg/皿5个剂量组,进行Am es试验;设0.3,1,3和9μg.mL-14个剂量组,进行仓鼠肺成纤维细胞染色体畸变试验;设15,100和250 mg.kg-13个剂量组,观察其对小鼠骨髓细胞微核的影响。结果Am es试验表明,爱宁在加和不加S9的条件下,对TA97,TA98,TA100和TA102菌株回复突变菌落结果为阴性。仓鼠肺成纤维细胞染色体畸变试验表明,爱宁对中国仓鼠肺成纤维细胞体外培养染色体无畸变作用。小鼠骨髓细胞微核试验表明,爱宁三个剂量组的微核出现率与阴性对照组比较无显著性差异。结论在本实验条件下,爱宁无致突变性。     

蚯蚓纤溶酶的药用淀粉化学修饰

用活化的药用淀粉对蚯蚓纤溶酶进行化学修饰 ,并筛选优化了化学修饰条件。其中以 1mg/ml的淀粉二醛对相同体积的酶液 (酶的比活力为 390U/mg蛋白质 ;底物为酪蛋白 )进行修饰 ,于4℃反应 2h ,制备的修饰酶效果最佳。实验结果表明 ,修饰酶的Kmapp(底物为碱性氨基酸的酯 )为 8.6 9× 10 5mg/ml,较原酶降低了近 2倍 ,修饰酶的反应最适 pH值为 8.6 ,原酶为 7.2 ;原酶和修饰酶的反应最适温度均为5 5℃。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及其部分酶学性质的研究

以野生环毛蚓(Pheretima)为材料，经匀浆抽提、热变性、硫酸铵分步沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤和DEAE—纤维素离子交换柱层析等纯化步骤，得到纯度较高的蚯蚓纤溶酶(EFE)，具有强烈的溶解血纤维蛋白的作用。同时对酪蛋白和BAEE也具有较强的水解作用，但对ATEE无水解活性。实验表明蚯蚓纤溶酶能被苯甲磺酰氟强烈抑制，说明该酶是丝氨酸蛋白酶、属胰蛋白酶类。金属离子Na^ 、K^ 、Mg^2 对此酶有一定的抑制作用，Hg^2 对EFE有强烈抑制作用，而Ca^2 可提高此酶活力。     

蚯蚓纤溶酶同工酶的分析

对4种蚯蚓(赤子爱胜蚓、栉盲环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓)进行粗提，将所得样品作活性印迹试验，观察同工酶谱以及经还原后谱带的变化情况，并对这4种蚯蚓活力大小进行比较，发现威廉环毛蚓总活力最高，其经过PAGE电泳后同工酶FE2活力最高。     

蚯蚓纤溶酶的抗肿瘤作用

目的　观察蚯蚓纤溶酶 (EFE)对体外人癌细胞株及体内人癌裸鼠移植性肿瘤生长的影响 ,对该药进行临床前抗肿瘤药效学评价。方法　采用MTT法观察蚯蚓纤溶酶对体外人癌细胞的生长抑制作用 ;用人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤模型对蚯蚓纤溶酶进行体内抗肿瘤药效学观察。结果　蚯蚓纤溶酶在体外对人癌细胞的生长无抑制作用 ;灌胃给予蚯蚓纤溶酶 2 0 0～ 10 0 0mg·kg-1,可明显抑制人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤的生长。结论　蚯蚓纤溶酶具有抗肿瘤作用。     

豆豉溶栓酶的分离纯化及其体外溶栓作用

目的：从豆鼓中分离具有纤溶活性的酶,并对其体外溶栓作用作初步研究。方法：采用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００和 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０柱层析法纯化该酶,以纤维蛋白平板法测定该酶的纤溶活性;两点法测定该酶对发色底物Ｈ２２５１的水解活性;体外试管法测定该酶对天然人血凝块的溶解作用。结果：经过两次柱层析得到在ＰＡＧＥ中呈单一区带的纤溶酶。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ初步测定其分子量为 ３６ ０００。该酶在平板中可直接溶解纤维蛋白,对Ｓ－２２５１的水解活力与牛纤溶酶相当,并能溶解天然人血凝块。结论：豆鼓中存在一种具有较强纤溶活性的溶栓酶,值得进一步深入研究。     

红子的毒性及致突变性研究

红子又名赤阳子,为蔷薇科火棘(Pyracantha Faluneana Maxim hi)植物之果实,广泛分布于贵州、云南、广西、湖北、湖南、江西、浙江、陕西等地。据《滇南本草》~(2)和《中草药大辞典》~(3)记载,有健脾消积,活血止血、明日等功用,民间亦常当野生水果食之,饥年曾作辅粮,因此又名救军粮。     

氯化钡的致畸性和致突变性研究

本文对氯化钡的致畸性和致突变性进行了探讨。氯化钡具有降低孕鼠母体体重、增加死胎、吸收胎数和影响活胎的正常发育水平,但未表现出致畸作用。Ames试验、微核试验和染色体畸变分析均为阴性结果。显性致死性试验的高剂量组(36.8mg/kg)有一周次的受孕率与阴性对照组比显著降低(P<0.05)。结果提示,氯化钡可能主要具有一般毒性和胚胎毒性作用,没有致畸性,但是否具有致突变作用有待进一步研究证明。     

枯草杆菌溶栓酶的分离纯化研究

目的 :以枯草杆菌HL 986发酵液为原料 ,对枯草杆菌溶栓酶的分离纯化技术进行研究。方法 :采用磷酸钙吸附沉淀除去部分色素和杂蛋白 ,经超滤脱盐、CM 5 2离子交换分离、丙酮沉淀和SephadexG 75凝胶过滤处理 ,得到具有溶栓活性的酶。结果 :得到的溶栓酶在SDS PAGE上为单一谱带 ,其分子量约为 2 7kD ,比活为980 0U/mg,活性得率为 6 3.8%。结论 :以较高的得率获得了高纯度的枯草杆菌溶栓酶。