细胞舍生

细胞舍生山西医学院（０３０００１）何泽涌，杨美林在未成熟的神经细胞，细胞质的Ｃａ２＋浓度较低，它的免于舍生，主要依赖ＮＴＦ的作用。随神经细胞的成熟，随了向心性输入的增多，细胞质Ｃａ２＋浓度增高，对ＮＴＦ的依赖性逐渐降低［４７］。但若细胞质Ｃａ２２＋过...     

HEK293细胞—— 一种研究受体Ca~(2+)调控功能的理想模型

目的了解ＨＥＫ２９３细胞Ｃａ２＋代谢的生物学特性。方法用Ｆｕｒａ－２荧光探针双波长测定细胞胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）方法，观察多种能改变细胞内Ｃａ２＋代谢的药物对天然的和转染了α１Ｂ肾上腺素受体ｃＤＮＡ的ＨＥＫ２９３细胞［Ｃａ２＋］ｉ的影响。结果在含１．５ｍｍｏｌＬ－１ＣａＣｌ２的缓冲液中，ＫＣｌ５０ｍｍｏｌＬ－１和ＢａｙＫ８６４４１０μｍｏｌＬ－１不影响ＨＥＫ２９３细胞的［Ｃａ２＋］ｉ；ｃｙｃｌｏｐｉａｚｏｎｉｃａｃｉｄ（ＣＰＡ０．０１，０．１，１０μｍｏｌＬ－１）能浓度依赖性地引起ＨＥＫ２９３细胞的［Ｃａ２＋］ｉ呈双相升高，其中的Ｃａ２＋内流相不受ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ（１０μｍｏｌＬ－１）的影响；但可被１ｍｍｏｌＬ－１ＮｉＳＯ４完全抑制。在无Ｃａ２＋的缓冲液中，咖啡因２０ｍｍｏｌＬ－１和ｒｙａｎｏｄｉｎｅ１μｍｏｌＬ－１均不影响ＨＥＫ２９３细胞的［Ｃａ２＋］ｉ。先用ＣＰＡ（３０μｍｏｌＬ－１）耗竭ＨＥＫα１Ｂ细胞内Ｃａ２＋贮存池后，肾上腺素１０μｍｏｌＬ－１能进一步升高［Ｃａ２＋］ｉ。在有Ｃａ２＋或无Ｃａ２＋的缓冲液中，肾上腺素均可引起ＨＥＫα１Ｂ细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高。结论ＨＥＫ２９３细胞?     

平滑肌细胞膜的钙激活Cl~-通道

在多种平滑肌上都已发现Ｃａ２＋激活Ｃｌ－通道。胞内游离钙升高是钙激活氯通道的必要条件。多种刺激剂诱导胞内钙库释放钙而同时激活钾通道［ＩＫ（Ｃａ）］和氯通道［ＩＣｌ（Ｃａ）］。平滑肌细胞上激活ＩＣｌ（Ｃａ）的［Ｃａ２＋］ｉ阈值因动物种属和组织差异而不同。用荧光指示剂直接测定大鼠门静脉平滑肌细胞上的［Ｃａ２＋］ｉ得出激活ＩＫ（Ｃａ）的最小［Ｃａ２＋］ｉ应大于７０～８０μｍｏｌ·Ｌ－１,比激活ＩＣｌ（Ｃａ）的最低浓度１８０μｍｏｌ·Ｌ－１要小,因此认为ＩＫ（Ｃａ）要比ＩＣｌ（Ｃａ）对［Ｃａ２＋］ｉ更敏感。胞外钙通过电压依赖性钙通道进入胞内,［Ｃａ２＋］ｉ升高也能激活氯通道。Ｇ蛋白与某些受体偶联激活胞内第二信使ＩＰ３而激活氯通道。钙激活氯通道的电导很小,从全细胞电流分析应小于１０ｐＳ。平滑肌细胞上的氯平衡电位（ＥＣｌ）正于静息膜电位,因此Ｃｌ－通道开放Ｃｌ－外流驱动膜电位向ＥＣｌ方向靠近,形成膜的去极化。Ｃａ２＋激活Ｃｌ－通道开放使细胞膜去极化并引起细胞的兴奋,这种通道在由激素或神经递质引起平滑肌细胞的兴奋过程中起重要作用。     

平滑肌细胞膜的钙激活Cl^1通道

在多种平滑肌上都已发现Ｃａ＾２＋激活Ｃｌ＾－通道。胞内游离钙升高是钙激活氯通道的必要条件。多种刺激剂诱导胞内钙库释放钙而同时激活钾通道〖ＩＫ（Ｃａ）〗和氯通道〖ＩＣｌ（Ｃａ）〗。平滑肌细胞上激活ＩＣｌ（Ｃａ）的〖Ｃａ＾２＋〗ｉ阈值因动物种属和组织差异而不同。用荧光指示剂直接测定大鼠门静脉平滑肌细胞上的〖Ｃａ＾２＋〗ｉ得出激活Ｉｋ（Ｃａ）的最小〖Ｃａ＾２＋〗ｉ应大于７０～８０μｍｏｌ．Ｌ＾－１,比激     

钙拮抗剂TMB-8抑制BHQ,NE和KCl引起的培养乳牛基底动脉单个平滑肌细胞内游离钙的升高

用ＡＲＣＭＭＩＣ阳离子测定系统，测量单个细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ），研究８（Ｎ，Ｎ二乙胺）ｎ辛基３，４，５三甲氧基苯甲酸酯（ＴＭＢ８）对培养乳牛基底动脉平滑肌［Ｃａ２＋］ｉ的作用。在细胞外钙浓度为１３ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，ＴＭＢ８（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）可明显抑制ＢＨＱ，ＮＥ及ＫＣｌ引起［Ｃａ２＋］ｉ的升高。在细胞外钙为零＋ＥＧＴＡ０１ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，ＴＭＢ８（１０，３０及１００μｍｏｌ·Ｌ－１）可浓度依赖性地降低静息［Ｃａ２＋］ｉ，ＴＭＢ８（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）可几乎完全阻断ＢＨＱ及ＮＥ引起［Ｃａ２＋］ｉ的增加。研究表明ＴＭＢ８降低培养乳牛基底动脉平滑肌［Ｃａ２＋］ｉ的机制，主要是抑制肌浆网Ｃａ２＋的释放，或增加肌浆网对Ｃａ２＋的摄入，并由此间接地抑制细胞外钙的内流。     

钙拮抗剂药理学和临床应用

钙拮抗剂药理学和临床应用关永源，刘侃，徐叔云（广州中山医科大学药理教研组，广州５１００８９）Ｃａ２＋作为胞内第二信使参与细胞的反应。当细胞受刺激时，主要表现为胞浆内游离ｃａ２＋浓度的升高。胞内ｃａ２＋释放可使胞内Ｃａ２＋浓度短暂升高。胞内Ｃａ２＋浓度...     

Cyclopaizonic acid增加SHR和WKY血管平滑肌细胞Ca^2＋依赖性…

采用全细胞及细胞贴附式斑片钳技术记录自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和Ｗｉｓｔａｒ－Ｋｙｏｔｏ对照鼠（ＷＫＹ）培养主动脉平滑肌细胞的Ｃａ＾２＋ －依赖性外向Ｋ＾＋电流［Ｉｋ（Ｃａ）］，测定肌浆网Ｃａ＾２＋泵抑制ＣＰＡ对其影响。ＣＰＡ能增加Ｉｋ（ｃａ）幅度，这些作用与Ｃａ＾２＋相关并可被Ｋ＾＋通道阻断药ｇｌｙｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ阻断。ＣＰＡ作用在ＳＨＲ和ＷＫＹ之间无明显差异。结果提示高血压状态下血管平滑肌     

牛磺酸抗脂质过氧化作用与调节Ca~（2＋）作用

在培养心肌细胞缺氧－再给氧模型上，发现牛磺酸（２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，终浓度）能显著降低细胞内脂质过氧化物（ＬＰＯ）荧光强度；剂量依赖性地提高心肌细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性；以荧光比率法（荧光探针为Ｉｎｄｏ－１－ＡＭ）在粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）上测定细胞内游离Ｃａ２＋荧光比率，结果显示缺氧及再给氧后细胞内Ｃａ２＋荧光比率明显升高，２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１牛磺酸能显著减少Ｃａ２＋荧光比率；分别以２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１、０．４ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｃａ２＋及０．１ｍｍｏｌ·Ｌ－１维拉帕米处理细胞，牛磺酸能降低高Ｃａ２＋引起的细胞搏动加快；而提高低Ｃａ２＋及维拉帕米处理后的细胞搏动。提示牛磺酸对培养心肌细胞再给氧损伤有保护作用，其机理与其提高心肌细胞ＳＯＤ活性、降低细胞内游离Ｃａ２＋浓度及对细胞Ｃａ２＋双向调节作用有关。     

峰毒肽Mastoparan诱导大鼠小脑颗粒神经元死亡的机制

目的研究峰毒肽ｍａｓｔｏｐａｒａｎ（ＭＰ）通过改变细胞内钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）诱导大鼠小脑颗粒神经元死亡的机制。方法测定原代培养神经元的存活率；用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光比值成像技术测定［Ｃａ２＋］ｉ。结果ＭＰ剂量依赖性地诱导小脑颗粒神经元死亡，并触发［Ｃａ２＋］ｉ升高。移去细胞外钙，或使用电压依赖性Ｃａ２＋通道阻滞剂尼莫地平不能阻断其作用。用ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ预先耗竭１，４，５三磷酸肌醇敏感的胞内Ｃａ２＋库；或用特异性的磷酯酶Ｃ抑制剂Ｕ７３１２２预处理细胞，能显著地抑制ＭＰ的作用。结论ＭＰ可能通过激活ＰＬＣ／ＩＰ３信号传导途径，触发胞内钙库释放Ｃａ２＋而导致小脑颗粒神经元死亡     

缺氧缺糖条件下大鼠脑皮质神经元内游离钙浓度的变化及神经生长因子的作用

以Ｆｕｒａ２／ＡＭ为细胞内钙离子的荧光指示剂，用双波长荧光分光光度计测定了缺氧缺糖时体外培养的大鼠胎鼠神经细胞内游离钙（［Ｃａ２＋］ｉ）的变化，并观察了神经生长因子（ＮＧＦ）的影响。结果表明，脑皮质细胞缺氧缺糖培养１６～２４ｈ时，细胞大量死亡。ＮＧＦ剂量依赖地减少神经元缺氧缺糖培养２４ｈ时乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的释放，提高细胞生存力。细胞缺氧缺糖早期引起［Ｃａ２＋］ｉ减少，而后期引起［Ｃａ２＋］ｉ显著升高，导致细胞损害。ＮＧＦ５０μｇ·Ｌ－１在缺氧缺糖早期提高［Ｃａ２＋］ｉ到正常水平，降低后期［Ｃａ２＋］ｉ的升高。提示，ＮＧＦ通过稳定［Ｃａ２＋］ｉ或降低后期的胞内钙升高保护了脑皮质神经元免受缺氧缺糖的损害。     

小檗碱对神经递质引起的新生大鼠脑细胞内游离钙升高的影响

以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为荧光指示剂，利用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子系统测定小檗碱（Ｂｅｒ）对新生大鼠脑细胞静息Ｃａ２＋和神经递质引起的脑细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）变化的影响．Ｂｅｒ１，１０，３０μｍｏｌ·Ｌ－１对脑静息［Ｃａ２＋］ｉ无明显影响．Ｂｅｒ１～１００μｍｏｌ·Ｌ－１剂量依赖的抑制谷氨酸引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高．Ｂｅｒ１０μｍｏｌ·Ｌ－１能降低Ｈａｎｋｓ液有Ｃａ２＋和无Ｃａ２＋时去甲肾上腺素引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高，且能降低５－羟色胺引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高（在细胞外液有Ｃａ２＋时）．结果提示Ｂｅｒ可降低谷氨酸，去甲肾上腺素和５－羟色胺引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高，这可能是其抗脑缺血机理之一．     

氯丙烯对神经细胞内Ca~(2 ),游离钙调蛋白,环腺苷酸含量和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的影响

用培养的鸡胚脑神经细胞研究了１．０２和２．０４ｍｍｏｌ·Ｌ－１氯丙烯作用２４ｈ后细胞内Ｃａ２＋，游离钙调蛋白（ＣａＭ）和环腺苷酸（ｃＡＭＰ）含量及钙／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ｃａ２＋／ＣａＭ－ＰＫⅡ）活性的改变．结果显示，随着氯丙烯浓度的增加，细胞内Ｃａ２＋分别增加了４．２和６．２倍，ｃＡＭＰ含量增加了２２％和３９％，Ｃａ２＋／ＣａＭ－ＰＫⅡ活性增加了２．８和５．０倍（Ｐ＜０．０１）；而游离ＣａＭ含量则分别减少了５５％和６９％（Ｐ＜０．０１）．结果提示氯丙烯引起病理性神经轴浆内微管和神经微丝堆积与细胞内Ｃａ２＋增加有关．这可能由于细胞内Ｃａ２＋增加，激活ＣａＭ，继而激活Ｃａ２＋／ＣａＭ－ＰＫⅡ，催化微管相关蛋白２和ｔａｕ－蛋白磷酸化，抑制微管组装，使解聚的微管堆积在轴浆内．     

Effects of dexamethasone on intracellular Ca 2 in its sensitive cells from neonatal mouse hippocampus and cultured cortical neurogliocytes

目的：研究地塞米松（Ｄｅｘ）对神经元和胶质细胞内钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的影响．方法：Ｆｕｒａ２ＡＭ负载小鼠海马细胞（ＮＭＨＣ）和培养的胶质细胞（ＣＣＮ）．单细胞内［Ｃａ２＋］ｉ由ＡＲＣＭＭＩＣ检测系统测定．结果：Ｄｅｘ使多数ＮＭＨＣ［Ｃａ２＋］ｉ浓度依赖地迅速升高,９６个ＮＭＨＣ中仅１０％出现［Ｃａ２＋］ｉ降低．［Ｃａ２＋］ｉ升高被无镁细胞外液阻滞、被氯化镧逆转,但不受氯化锂影响．无钙Ｈａｎｋｓ液悬浮、米非司酮（Ｍｉｆ）或河毒素均可阻断Ｄｅｘ４０－９０μｍｏｌ·Ｌ－１的升［Ｃａ２＋］ｉ效应,而Ｄｅｘ２００μｍｏｌ·Ｌ－１的效应仍被保持．４０个ＣＣＮ中５０％对Ｄｅｘ产生浓度依赖的［Ｃａ２＋］ｉ升高,并被无钙或无镁的细胞外液和Ｍｉｆ预处理抑制．结论：Ｄｅｘ快速改变海马神经元和胶质细胞内［Ｃａ２＋］ｉ．［Ｃａ２＋］ｉ的这种改变是由Ｍｇ２＋和受体相关的外钙内流及高浓度Ｄｅｘ诱发的内钙释放介导的．     

地塞米松对新生小鼠海马和培养的皮层神经胶质中敏感细胞内钙浓度的影响

目的：研究地塞米松（Ｄｅｘ）对神经元和胶质细胞内钙浓度（Ｃａ＾２＋）ｉ的影响,方法：Ｆｕｒａ２－ＡＭ负载小鼠海马细胞（ＮＭＨＣ）和培养的胶质细胞（ＣＣＮ）,单细胞内（Ｃａ＾２＋）ｉ由ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ检测系统测定。结果：Ｄｅｘ使多数ＮＭＨＣ（Ｃａ＾２＋）ｉ浓度依赖地迅速升高,９６个ＮＭＨＣ中公１０％出现（Ｃａ＾２＋）ｉ降低,（Ｃａ＾２＋）ｉ,升高被无镁细胞外液阻滞,被氯化镧逆转,但不受氯化锂影响,     

大黄素对血小板胞浆内游离钙浓度的影响

负载Ｆｕｒａ－２的血小板细胞在静息状态下胞浆内游离钙离子［（Ｃａ２＋）ｉ］为２１８．４０±５６．３６ｎｍｏｌ（ｎ＝１３）。当依次加入ＣａＣｌ２（ｌｍｍｏｌ／Ｌ）、ＫＣｌ（１２０ｍｍｏｌ／Ｌ）ｔ和凝血酶（０．５ｕ／ｍｌ）后，［Ｃａ２＋］ｉ分别为２９７．２５±７５．０３ｎｍｏｌ（ｎ＝１３）、３１８．００±８６．２５ｎｍｏｌ（ｎ＝１２）和６４０．５９±１６２．４９ｎｍｏｌ（ｎ＝１２）。大黄素与血小板作用２０ｍｉｎ，血小板细胞在静息状态及依次加上述剂量的ＣａＣｌ２，ＫＣｌ和凝血酶后，［Ｃａ２＋］ｉ水平均较对照组升高，说明大黄素对血小板细胞外钙内流和内钙释放均有明显的促进作用。     

小檗碱对培养的新生大鼠心肌细胞内游离钙含量的影响

采用Ｃａ２＋指示剂Ｆｕｒａ－２作为细胞内钙离子的荧光探针，利用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统。检测了培养新生大鼠心肌细胞内游离钙的浓度，并观察了小檗碱对去甲肾上腺素，Ｈ２Ｏ２，高Ｃａ２＋及高Ｋ＋引起细胞内钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）变化的影响。小檗碱对心肌细胞静息［Ｃａ２＋］ｉ无明显影响，能浓度依赖地抑制去甲肾上腺素和Ｈ２Ｏ２引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高。小檗碱５０μｍｏｌ·Ｌ－１能抑制高Ｋ＋引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高，而小剂量（１－１０μｍｏｌ·Ｌ－１）则无作用。对搏动细胞，小檗碱能抑制其［Ｃａ２＋］ｉ瞬间变化的最大值，对最小值则无作用。     

血管平滑肌和内皮细胞Ca2+内流机制及其与Cl-通道的关系

血管平滑肌和内皮细胞的Ｃａ２＋内流机制不同,前者是兴奋性细胞,Ｃａ２＋内流通过电压依赖性（ＶＤＣ）和非电压依赖性Ｃａ２＋通道;后者是非兴奋性细胞,Ｃａ２＋内流主要通过非ＶＤＣ途径。Ｃｌ－通道参与了这两种细胞的Ｃａ２＋调控,平滑肌细胞Ｃｌ－通道开放导致细胞膜去极化,促进ＶＤＣ开放,Ｃａ２＋内流增加;而内皮细胞Ｃｌ－通道开放导致细胞膜超极化,使Ｃａ２＋进入细胞内的电化学趋势增加,胞外Ｃａ２＋经非ＶＤＣ途径内流增加。目前对血管平滑肌和内皮细胞Ｃｌ－通道的分型、特性和功能还不清楚。     

蛋白激酶C与血管平滑肌α_1肾上腺素受体触发Ca~（2＋）内流的关系

在酶新鲜分离的犬肠系膜上动脉平滑肌细胞，蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的激活剂佛波二丁酯（ＰＤＢ）引起的胞内Ｃａ２＋增高作用可被ＰＫＣ抑制剂１－（５－异喹啉磺酰）－２－甲基哌嗪（Ｈ７）所阻断，而哌唑嗪和普萘洛尔则不能阻断ＰＤＢ的这一作用；１０μｍｏｌ·Ｌ－１苯福林引起的胞内Ｃａ２＋增高作用可被１０和２０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ７部分阻断；在无Ｃａ２＋液，Ｈ７可部分抑制苯福林引起的内Ｃａ２＋释放和外Ｃａ２＋内流，两者分别被抑制了３３±３％和５８±６％；ＫＣｌ（２０－１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１）可浓度依赖性地引起胞内钙升高，这一作用可被１０和２０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｈ７不同程度地阻断；ＰＤＢ引起的胞内Ｃａ２＋增高也可分别被１．２５和２．５μｍｏｌ·Ｌ－１维拉帕米部分和全部阻断。上述结果提示ＰＫＣ参与苯福林引起的部分内Ｃａ２＋释放和外Ｃａ２＋内流，但以参与外Ｃａ２＋内流为主；这一作用可能与ＰＫＣ激活，引起电压依赖性Ｃａ２＋通道开放有关。     

氯丙烯对神经细胞内 Ca~(2 ),游离钙调素,环腺苷酸含量和钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的影响

氯丙烯对神经细胞内Ｃａ２＋，游离钙调素，环腺苷酸含量和钙／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的影响孙克任谢克勤高树君张磊（山东医科大学毒理学研究室，济南２５００１２）用鸡胚脑神经细胞研究了氯丙烯作用下细胞内Ｃａ２＋，游离钙调素（ＣａＭ）和环腺苷酸（ｃＡＭＰ）...     

缺锌胸腺T细胞增殖周期与钙调素的变化

探讨胸腺Ｔ细胞内锌浓度（Ｚｎ＾２＋」ｉ与Ｔ细胞增殖周期Ｇ０／Ｇ１期比例、（Ｓ＋Ｇ２＋Ｍ）期比例、细胞内Ｃａ＾２＋浓度（「Ｃａ＾２＋」ｉ）、活性钙调素水平等指标之间的关系。方法采用大鼠缺锌模型,以流式细胞仪测定细胞增殖周期;以原子吸收分光光度计火争法测定「Ｚｎ＾２＋」;采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光法测定「Ｃａ＾２＋」ｉ和以依赖Ｃａ＾２＋的磷酸二酯酶法测定ＣａＭ水平,结果：缺锌组胸腺Ｔ细胞「Ｚｎ＾２＋」