大鼠树突状细胞疫苗治疗脑胶质瘤的实验研究

目的研究树突状细胞疫苗对C6荷瘤大鼠的免疫治疗效应,并比较免疫治疗策略的异同。方法将成年健康SD大鼠40只平均分为4组,分别经RN A致敏和C6冻融抗原致敏的DC免疫以及对照组经未致敏D C和R PM I1640免疫,采用LD H试剂盒检测CTL的体外杀伤活性。建立大鼠C6脑胶质瘤颅内肿瘤模型,观察其生存期,并进行病理学检查。结果肿瘤RN A致敏的D C疫苗活性最强,与C6冻融抗原致敏的DC疫苗相比,CTL杀伤活性差异不显著(P>0.05),但与对照组相比,差异非常显著(P<0.01)。治疗组荷瘤大鼠生存时间与对照组相比,差异非常显著(P<0.01);两治疗组之间差异不显著(P>0.05)。治疗组肿瘤生长明显抑制。结论C6冻融抗原和肿瘤细胞R NA致敏的树突状细胞疫苗均是有效的免疫治疗方法。     

树突状细胞疫苗治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究

近年来随着对树突状细胞（dendriticcells，DCs）研究的不断深入，其在肿瘤抗原提呈和肿瘤免疫中重要作用逐渐被揭示，开拓了肿瘤免疫治疗的又一新领域。DCs是目前已知的抗原加工与提呈功能最强的专职抗原提呈细胞（antigen presenting cells，APCs），也是唯一能刺激纯真T细胞的抗原提呈细胞，而T细胞介导的免疫应答在机体抗肿瘤免疫中起重要的主导作用田。据此，本实验采用细胞因子诱导骨髓细胞分化为DC，以C6细胞裂解物致敏DC制备疫苗，再以该疫苗经颈内动脉、尾静脉、皮下三种不同注射途径回输荷C6脑胶质瘤大鼠，探讨其对荷瘤大鼠的免疫治疗效应，并试图从多种入药方式中寻找一种最为简便有效的方式，以便今后应用于临床工作。     

脑胶质瘤树突状细胞疫苗的研究现状及进展

脑胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发肿瘤,约占颅内肿瘤的40%.尽管目前手术切除、放疗、化疗等治疗方法已有很大进展,但是胶质瘤病人预后仍然很差,特别是恶性胶质瘤,其平均生存期不足1年.     

树突状细胞和脑胶质瘤自体免疫治疗的实验和临床研究

一、材料与方法研究胶质瘤抗原树突状细胞(DC)疫苗的制备,并探讨其临床应用。从胶质瘤患者外周血中提取单个核细胞,用含10%自体血清的RPMI-1640加入GM-CSF和IL-4培养,获得DC。进行流式细胞学检测及光镜和电镜观察。分别用冻融法和紫外线照射法制备胶质瘤可溶性和凋亡抗原。检测不同DC疫苗诱导CTL体外杀伤活性的差别。选取2000年1月至2003年4月病理证实胶质瘤手术患者56例。其中II级25例、III级20例、IV级11例。将病人分为3组,均经同一手术组成员手术治疗,基本上为术中肉眼全切肿瘤,术后均接受常规剂量的放疗,均未接受化疗。实验…     

肿瘤干细胞致敏的树突状细胞对脑胶质瘤细胞免疫的影响

目的 研究肿瘤干细胞(BTSCs)致敏的树突状细胞(DCs)疫苗对颅内荷瘤小鼠的治疗作用.方法 无血清培养基中加入表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子,将C6胶质瘤细胞诱导成胶质瘤干细胞,以此致敏大鼠骨髓来源的树突状细胞制备疫苗;立体定向建立大鼠颅内C6胶质瘤模型,分为A、B、C、D四组.每组分别经尾静脉注射1×107BTSCs致敏的DCs(DCs-BTSCs)、1×107 C6胶质瘤细胞致敏的DCs(DCs-C6)、1×107DCs及PBS,Kaplan-Meier法对大鼠生存情况进行分析,大鼠脑组织标本行HE染色及免疫组化分析.结果 胶质瘤干细胞CD133+及nestin染色阳性;DCs具有典型的树突状结构,特异性标志OX62+表达阳性;生存时间A组较其他组明显延长,Log-rank检验差异有统计学意义(P＜0.05);A组HE染色炎性细胞浸润最多,免疫组化可见较多的CD8+T淋巴细胞.结论 肿瘤干细胞致敏的树突状细胞疫苗能明显提高机体对胶质瘤的免疫力,其作用优于胶质瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗,为树突状细胞疫苗的临床应用提供了新的依据.

Abstract：

Objective To investigate the effect of dendritic cells pulsed with brain tumor stem cells which are used to treat on intracranial glioma.MethodWe obtained murine brain tumor stem cells by growing C6 cells in epidermal growth factor/basic fibroblast growth factor without serum.Dendritic cells isolated from rat bone marrow were pulsed with BTSCs.Rat brain glioma models were established by stereotactic technique.107 DCs pulsed with BTSCs and C6 were injected through tail vein in group A and group B respectively.The same number of DCs and the same volume PBS were applied to group C and group D.The survival time of rats was analyzed by Log- rank survival analysis.Tumor samples were examinedwithHE staining and immunohistochemistry.Methods BTSCs expressedCD133 + and nestin.DCs appeared typical long dentrite in morphology and expressed OX62+ markers.The survival analysis showed group A was statistically significant in constrast to the other goups (P<0.05).The tumors in group A have the most inflammation and CD8 + T lymphocytes.Concluion DCs loading with BTSCs lysates can provide a higher level of immunity protect against gliomas than those loading with C6 cells,which provide a new method in the immuntherapy of brain glioma.     

树突状细胞制备脑胶质瘤疫苗的体外研究

目的　通过体外实验探讨应用树突状细胞制备的肿瘤疫苗抗脑胶质瘤的作用机制。方法　培养大鼠树突状细胞,冻融法制备胶质瘤抗原,以肿瘤抗原致敏树突状细胞而制备胶质瘤疫苗。将实验动物分为4组,分别将胶质瘤疫苗、树突状细胞、生理盐水注入正常大鼠体内,到达预定时间取出大鼠脾脏,MTT法检测大鼠淋巴细胞活性。结果　1次输入胶质瘤疫苗的正常大鼠的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性明显低于3次输入胶质瘤疫苗的正常大鼠;比较输入培养8d的树突状细胞和输入生理盐水的大鼠,其淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性无统计学差异。结论　应用树突状细胞制备胶质瘤疫苗可明显激活体内抗肿瘤免疫反应。     

树突状细胞疫苗治疗G422胶质母细胞瘤的实验研究

目的研究G422肿瘤细胞RNA体外冲击致敏的树突状细胞(DC)回输诱导体内产生保护性免疫反应及对颅内荷瘤小鼠的免疫治疗效应,探讨以树突状细胞为基础的疫苗对脑胶质瘤治疗的可行性.方法提取G422胶质母细胞瘤RNA或肿瘤提取物冲击致敏DC制成疫苗,分别进行免疫保护和免疫治疗的体内实验,以及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外诱导及活性检测,并与PBS、未经致敏的DC、G422肿瘤细胞RNA组进行对照.疫苗能诱导产生针对G422肿瘤抗原特异性CTL,差异具有非常显著性(P＜0.01),接种疫苗后的小鼠能抵抗G422的再次攻击(P＜0.01),荷瘤小鼠接种疫苗后生存期较对照组延长(P＜0.05).结果疫苗能诱导产生针对G422肿瘤抗原特异性CTL,差异具有非常显著性(P＜0.01),接种疫苗后的小鼠能抵抗G422的再次攻击(P＜0.01),荷瘤小鼠接种疫苗后生存期较对照组延长(P＜0.05).结论肿瘤RNA或肿瘤提取物冲击致敏DC能诱导小鼠产生抗原特异性CTL,激活抗肿瘤T细胞,具有免疫保护和免疫治疗作用.该实验为DC疫苗免疫治疗胶质瘤提供了实验基础.     

白细胞介素-18与C6细胞裂解物修饰的树突状细胞疫苗对脑胶质瘤的免疫治疗作用

目的观察经白细胞介素-18(IL-18)和C6细胞裂解物修饰的树突状细胞(DC)疫苗对大鼠脑胶质瘤的免疫治疗作用.方法用立体定向方法制作大鼠脑胶质瘤模型.通过白细胞介素-18和大鼠脑胶质瘤细胞(C6)裂解物修饰大鼠树突状细胞,制成DC疫苗.在大鼠皮下接种DC疫苗,检测大鼠体内特异性杀伤T细胞(CTL)活性,检测各组血清中细胞因子IL-18、干扰素(IFN-γ)的浓度,并研究了其对大鼠脑胶质瘤的免疫治疗作用.结果DC-IL18-C6组中IL-18与IFN-γ的浓度与其余各组比较有统计学意义(P＜0 01),与注射DC组比较有统计学意义(P＜0 01).DC-IL18-C6组接种C6细胞后56 d均未见移植肿瘤形成,与其余各组比较有统计学意义(P＜0.01).对C6胶质瘤细胞的细胞毒作用以DC-IL18-C6组最强,DC-C6裂解物组次之,DC-Ⅱ-18组较弱,其余两组则缺乏(P＜0.01).DC-IL18-C6组的荷瘤鼠生存期比其他各组明显延长,且肿瘤的大小比其他各组明显缩小.结论白细胞介素-18与C6细胞裂解物修饰的树突状细胞疫苗对大鼠脑胶质瘤有明显的免疫治疗作用.     

树突状细胞与反义TGF-β1基因修饰的胶质瘤细胞融合瘤苗治疗脑胶质瘤的实验研究

目的研究脑胶质瘤的免疫治疗。方法采用骨髓来源的干细胞经IL-4与GM-CSF 培养的树突状细胞与反义TGF-β1基因修饰的C6胶质瘤细胞进行融合,后鼠脑内注射进行动物实验。实验分为四组:Ⅰ组:阳性对照组:C6细胞(每只动物注射细胞数1×106);Ⅱ组:转染反义 TGF-β1的C6细胞与树突状细胞相融合的融合细胞(每只动物注射1×105 C6细胞与1×106个树突状细胞的融合细胞)和C6细胞(1×106);Ⅲ组:阴性对照组,注射相同体积IMDM培养液。观察动物的组织学、生存期及图像分析肿瘤的肿瘤坏死面积及肿瘤面积。结果Ⅰ组:所有动物20d内全部死亡;Ⅱ组:动物存活59d无死亡;Ⅲ组:所有动物实验过程中均存活。Ⅰ组:图像分析仪下肿瘤面积为100％;Ⅱ组:仅见有少量的肿瘤细胞,肿瘤周围神经元减少、胶质增生,其肿瘤面积与Ⅰ组相比占整个视野的5．01％-6．20％,少见肿瘤坏死。统计学处理:Ⅱ组与其他各组比较P<0．01。结论树突状细胞与反义TGF-β1基因修饰的胶质瘤细胞融合瘤苗能够延长动物的存活期,为将来采用基因修饰的脑胶质瘤融合瘤苗治疗脑胶质瘤提供帮助．     

树突状细胞治疗脑胶质细胞瘤实验研究

目的研究树突状细胞疫苗瘤内注射对胶质瘤的治疗作用.方法建立大鼠C6脑胶质瘤皮下和颅内肿瘤模型,通过第一组为瘤内注射树突状细胞(DC)、第二组为腹部皮下注射DC、第三组为对照组,观察肿瘤生长情况和大鼠生存时间,比较细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活性,并进行病理学检查.结果治疗组大鼠表现为肿瘤生长部分抑制,生存时间明显延长,与对照组比较,有极显著差异(P<0.01),瘤内注射DC和腹部皮下注射C6冻融抗原致敏DC,两治疗组间无显著性差异(P＝0.60);CTL杀伤活性增强,和对照组比较有显著性差异(P<0.05).双侧皮下种植的肿瘤治疗一侧后,生长均受到抑制,并逐渐缩小.结论瘤内注射DC治疗脑胶质瘤是一种新的、有效的免疫治疗策略.     

对负载人胶质瘤冻融抗原的树突状细胞功能的实验研究

目的 建立从人外周血诱导扩增树突状细胞(DC)的方法，并探讨冻融抗原制备的DC疫苗在CTL对胶质瘤细胞杀伤效应中的作用与效率。方法 将从人外周血分离出单核细胞(PBMC)进行培养，用GM—CSF和IL—4培养7一14d后，进行鉴定；在DC培养的第7d，加入自体胶质瘤细胞的冻融抗原以致敏DC，用MTT、乳酸脱氢酶法检测DC刺激T细胞的增殖作用和负载冻融抗原后的DC疫苗对自体CTL杀伤活性的诱导作用。结果 PBMC在培养7-14d后可获得大量的DC，该DC能够强烈的激发自体T淋巴细胞增殖，负载冻融抗原后的DC疫苗能有效地诱导自体CTL的杀伤活性。结论 用该方法可以获得大量较纯的DC而满足临床应用的需要；用冻融抗原制备的DC疫苗有很强的免疫活性，具有较高的临床应用价值。     

p38MAK基因诱导胶质瘤细胞凋亡机制的初步研究

目的 初步探讨p38MAPK基因诱导大鼠胶质瘤细胞C6发生凋亡的机制。方法 利用脂质体介导法将p38MAPK基因导入C6细胞中,用夹心法ELISA检测细胞培养液中sTNF-α水平的变化,用流式细胞仪检测膜TNF-α和膜TNFRI水平的变化。结果 转染pCMV5-p38MAPK后,细胞培养液中sTNF-α水平明显升高,膜TNF-α水平无明显变化,膜TNFRI表达升高。结论 p38MAPK可能通过上调sTNF-α和膜TNFRI水平而诱导C6细胞凋亡。     

Exosomes from Dendritic Cells Loaded with Chaperone-Rich Cell Lysates Elicit a Potent T Cell Immune Response Against Intracranial Glioma in Mice

Journal of Molecular Neuroscience - Chaperone-rich cell lysates (CRCLs) may play an important role in the development of anti-tumor vaccines. Tumor-derived CRCLs have been reported to activate...     

树突状细胞及相关细胞因子在重症肌无力患者胸腺中的变化

目的探讨胸腺树突状细胞及相关细胞因子在重症肌无力(MG)发病中的作用。方法采用免疫荧光双标法对11例胸腺瘤伴MG患者、6例单纯胸腺瘤、5例正常胸腺组织中S100(+)、HLADR(+)的树突状细胞进行检测,同时用组织匀浆、ELISA法检测胸腺组织中IL2、IL12含量。结果(1)树突状细胞主要分布在胸腺皮质、皮髓交界处,在胸腺瘤伴MG患者胸腺髓质也有一定分布。(2)S100(+)、HLADR(+)树突状细胞数量在胸腺瘤伴MG患者与单纯胸腺瘤患者间、单纯胸腺瘤患者与正常胸腺之间差异有显著性(P<005)。(3)IL2、IL12含量在胸腺瘤伴MG患者与正常胸腺之间差异有显著性(P<005);IL12含量在胸腺瘤伴MG患者与单纯胸腺瘤患者间亦有显著性差异(P<005)。结论胸腺树突状细胞以多种形式参与MG发病。     

逆转录病毒介导人肿瘤坏死因子基因治疗胶质瘤的实验研究

运用小鼠白血病病毒MoMLV为载体,将TNFa基因转导致人胶质瘤细胞SHG-44,14dG418筛选出细胞克隆.检测TNFa的表达.观察细胞生长.结果:转基因细胞培养上清液中有高浓度TNFa表达分别为(5 198.7±3 757.4)pg/ml和(3 217.4±1 180.6)pg/ml(P<0.05),生物活性达320.0U/ml.“RT-PCR”检测转基因细胞有特异mRNA表达,转基因细胞生长减慢.转染TNFa基因可诱导胶质瘤细胞的生长抑制.     

Langerhans Islet Implants in Diabetic Patients. Preliminary Results

Expression of sialic acid is altered in Diabetes mellitus. This modification has also been involved with both vascular and neurologic diseases, and with the increase of no enzymatic glycosylation of proteins. In our opinion, the lectins were very useful with specificity for sialic acids in order to determine the level of sialic acid expression on cerebral microcirculation in a diabetic Wistar rat model with streptozotocin. In this model, the glycine (1%) and taurine (0.5%) aminoacids were placed in drinking-water by six months. At the end of this time, the animals were sacrificed, their brains surgically removed and frozen in liquid nitrogen, and the specimens cut in serial sections. Immediately, the sections were incubated with different biotin-labelled lectins specific to sialic acid using peroxidase-labelled avidin as second ligand and H₂O₂ chromogen. The results showed greater O-acetyl sialic acid expression in cerebral capillaries of untreated diabetic rats than in glycine-, taurine-treated diabetic rats or than in control animals. The minor sialic acid expression may be an indicator of degenerative diseases such as Alzheimer's or the vascular disease of diabetic patients and probably is related to cellular protective properties of the glycine and taurine aminoacids. These first protective characteristics that have been observed in both ischemia with cellular ATP depletion models, suggest the utilization of aminoacids glycine or taurine in diabetic patient in order to avoid the development of microinfarcts.     

脑胶质瘤特异性肿瘤疫苗的制备

目的 探讨运用树突状细胞和肿瘤组织匀浆制成的特异性肿瘤疫苗(DC肿瘤疫苗)治疗脑胶质瘤的新途径。方 法抽取脑胶质瘤患外周血50ml，体外培养扩增树突状细胞，再利用患术中取出的肿瘤细胞裂解物体外致敏树突状细胞制成DC肿瘤疫苗，静脉回输病人体内。结果 经临床41例120次的DC疫苗治疗，无一例发生不良反应和其他副作用，安全系数大。结论 运用DC和肿瘤组织匀浆制备肿瘤疫苗安全有效，具有临床应用前景。．