Cajal间质细胞与胆石症关系的研究进展

自1893年西班牙神经解剖学家应用甲基蓝和镀银染色在豚鼠和家兔小肠中发现Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)以来,学者们对胃肠道ICCs的形态、超微结构、起源及生理功能等进行了一系列研究,明确了ICCs是一种特殊的间质细胞.它是胃肠慢波的起搏细胞及神经兴奋传导细胞,对胃肠平滑肌节律运动具有重要调控作用.近年来研究表明,在胃肠道以外的其他自主节律性的器官或组织存在Cajal样间质细胞,如膀胱、胰腺、子宫等[1].与胃肠平滑肌相似,胆道平滑肌也存在自发节律性运动.     

不同pH盐酸胃内灌流对大鼠胃电的影响

从胃肠道平滑肌上可记录到两种类型的电活动,其一为缓慢的、自发的、节律性的去极化波,称为基本电节律(Basic electrical rhythm,BER)或称起步点电位和电控制活动,其二为动作电位或称     

豚鼠心室肌细胞的分离及其基本电生理特性的观察

目的 分离豚鼠单个心室肌细胞,并观察其基本电生理特性.方法 Langendorff灌流,胶原酶法分离心室肌细胞;应用膜片钳全细胞模式记录心室肌细胞的动作电位和L型钙通道电流.结果 酶法分离得到存活杆状细胞达50%以上.全细胞电流钳模式下记录,细胞静息电位为(-69.9±3.4)mV,复位到95%时的动作电位时程(APD95)为(313.1±38.9)ms.全细胞电压钳模式下记录到典型L型钙通道电流.结论 该方法能够简单有效地获得性能稳定的心室肌细胞,尤其适用于膜片钳心电生理学的研究.     

胃肠道起搏细胞Cajal间质细胞的电生理学研究现状

<正>1893年,西班牙神经解剖学家Cajal用甲基蓝及嗜银染色法在胃肠道神经系统(entericnervoussystemENS)中观察到一类特殊的间质细胞,命名为Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal,ICC).ICC是ENS的一种非神经但与神经有关的特殊间质细胞.胃肠道运动的形式在很大程度上取决于ICC的内在活动.众多研究结果表明,大多数胃肠道平滑肌细胞的静息电位不稳定,表现为缓慢的起伏波动,即周期性去极化和复极化,形成慢波,也称基本电节律.它决定着平滑肌的收缩节律,调控胃肠道运动发生的时间、地点、频率及方向.近年来的单细胞记录     

HCN4基因修饰大鼠MSCs体外诱导获得的心脏起搏样细胞动作电位检测

目的 探讨超极化激活及环化核苷酸调控的阳离子通道亚型4(hyperpolarization-activated cyclic nucleotidegated cation channel 4,HCN4)基因修饰大鼠MSCs体外诱导分化的心脏起搏样细胞的动作电位特性.方法 以HCN4基因修饰大鼠MSCs体外诱导获得的具有自发搏动的心脏起搏样细胞为实验组,同期培养的原代乳鼠窦房结细胞为对照组,采用全细胞膜片钳技术对两组细胞的动作电位进行检测.结果 心脏起搏样细胞及原代培养乳鼠窦房结细胞均可记录到具有舒张期自动去极化的动作电位,心脏起搏样细胞的动作电位特性与原代培养的乳鼠窦房结细胞相比,其静息电位、动作电位幅度及动作电位周期均无显著性差异(P＞0.05),但阈电位较原代培养的乳窦鼠房结细胞显著降低(P＜0.01).结论 从电生理角度证实,心脏起搏样细胞的特性与原代培养的乳鼠窦房结细胞相似.     

大鼠内侧膝状体腹侧部神经元形态和电生理特征研究

目的研究内侧膝状体腹侧部(ventral medial geniculate body,MGBv)单个神经元的形态结构和基本电生理特性.方法采用脑片膜片钳全细胞记录技术,观察腹侧部神经元的基本电生理特征和不同膜电位水平时动作电位,并结合组化染色观察腹侧部神经元的形态结构.结果尼氏及Biocytin染色显示MGBv神经元胞体呈卵圆型,树突分支呈蓬丛样.经电流钳测得MGBv神经元静息电位(-54.92±10.85)mY,膜电容(5.37±1.98)pF,膜电阻(945.67±507.80)MΩ,时间常数(2 109.87士2 496.01)μs.通过注入不同的电流改变膜电位可记录到脉冲式或持续性等多样性的动作电位.在电压钳和电流钳下可记录到自发放电活动.结论MGBv神经元树突分支较浓密,呈蓬丛状,神经元动作电位形状呈多样性.在电流钳下记录到的自发性电活动的波形与动作电位相似,可能为膜电位超过阈值后的自发动作电位.     

兔离体十二指肠平滑肌细胞电活动与肌收缩活动关系

本工作采用玻璃微电极记录兔离休十二指肠平滑肌细胞内电变化，并同步记录兔离休平滑肌条的收缩，从而分析慢波，前电位和动作电位与肌收缩的关系。结果表明：（１）慢波能引起兔十二指肠近端平滑肌收缩，并呈１：１的关系；（２）在慢波引起肌收缩的基础上，前电位可使肌收缩进一步加强；（３）兔十二指肠近端的平滑肌自发放电产生的动作电位，其幅度为５２．１±８．５ｍｖ（ｎ＝３０），在形式上有的呈单一放电，有的呈簇状放电，前者放电频率为１～４次／秒，后者为６次／秒；（４）三种电活动引起肌条收缩的幅度以动作电位最大，前电位次之，慢波最小。上述资料表明，兴奋性高的兔十二指肠近端的平滑肌细胞内不同的电活动可引起不同的收缩。     

槐果碱抗心律失常的电生理机制研究

目的探讨槐果碱对心肌细胞动作电位(action potentials,AP)及离子电流的电生理效应。方法将豚鼠心脏快速取出后通过心电图记录心脏对槐果碱的应答;采用常规微电极技术对豚鼠乳头状肌或兔窦房结细胞快反应及慢反应动作电位进行记录,研究槐果碱的相关效应;获取新生大鼠心室心肌细胞进行原代培养,采用膜片钳技术记录全细胞及单通道电流;采用穿孔膜片钳技术进行全细胞钙流记录。结果在异丙肾上腺素诱导后出现心动过速,而槐果碱(300μmol)加入后,心动过速或室颤现象消失,心电图提示出现正常心跳。对于豚鼠心室心肌细胞的快反应动作电位,槐果碱作用后,APD及动作电位的有效不应期延长,APA下降。对于窦房结的慢反应动作电位,槐果碱处理后,APA及Vmax均出现下降,且APD90也能够延长。结果显示槐果碱通过阻断I_(kr)而非I_(ks)实现对APD的延长。新生大鼠心室细胞的细胞电流实验结果显示10μmol/L槐果碱能够导致I_(Na)下降约18%。且槐果碱能够在全体细胞水平上降低慢内向电流,尾部电流(外向K+电流)也出现消失,相比于对照组,I_(CaL)在20 m V指令电位时,平均减少(33.2±11.7)%。结论槐果碱能够逆转异丙肾上腺素引起的心律失常,其作用机制为抑制Na离子、钙离子及钾离子电流。     

脾虚大鼠结肠电及动力基本功能单位病理改变研究

目的研究长期应用大黄对结肠肌电皮动力基本功能单位的影响,探讨Cajal间质细胞(ICC)在脾虚大鼠结肠电中的作用.方法50只大鼠随机分为正常对照组、大黄组,3个月后测定结肠慢波频率及振幅,用碘化锌-锇酸法(ZIO)观察肌间神经丛及ICC变化,透射电镜观察结肠动力基本功能单位即壁内神经-Cajal间质细胞-平滑肌细胞(ENS-ICC-SMC)的病理改变.结果长期服用大黄所致脾虚大鼠,结肠慢波频率及振幅明显下降;结肠电节律失常;慢波频率变异系数(CV)及异常节律指数(ARI)显著增加;肌间丛神经纤维分布不均匀,突起连接杂乱,视野ICC稀少;电镜下见肌间神经轴突空化,ICC细胞样变性.结论长期服用大黄导致脾虚大鼠结肠慢波频率减慢,其机制可能为结肠动力基本功能单位的病理改变.     

异丙肾上腺素对乳鼠窦房结细胞自动节律和钠钙交换电流的影响

目的研究异丙肾上腺素(ISO)对乳鼠窦房结细胞自动节律和钠钙交换电流(INCX)的作用。方法选12只新生24h内Wistar大鼠乳鼠分离培养窦房结细胞,运用全细胞膜片钳技术记录动作电位(AP)和INCX电流。结果于细胞外加入ISO 1.0μmol/L后,AP的发生频率明显增加,从(147.9±9.9)min-1增加至(278±11.2)min-1。ISO可使+80mV起始时外向INCX密度从(0.52±0.03)pA/pF增加至(0.72±0.04)pA/pF(n=10,P<0.05),平均增加约36.7%;而-120mV时内向电流从(-3.26±0.02)pA/pF增加至(-7.81±0.06)pA/pF(n=10,P<0.01)。此效应呈现电压依赖性和浓度依赖性特征。结论乳鼠窦房结细胞INCX参与窦房结自动去极化,ISO可使其作用增加。     

Cajal间质细胞和缝隙连接蛋白43在先天性巨结肠中的表达

目的本研究通过观察Cajal间质细胞（ICCs）和缝隙连接蛋白43（connexin43）在先天性巨结肠（HD）肠管中的分布情况，探讨HD的发病机制。方法采用兔抗人多克隆c-kit抗体和connexin 43抗体，通过SABC双标免疫组化染色方法观察35例HD患儿肠管c-kit^＋ICCs和connexin 43的分布情况。结果ICCs分布在环肌内和肌间神经丛周围，ICCs彼此及与平滑肌细胞形成缝隙连接。在HD病变肠管ICCs数目明显减少甚至消失，与HD正常肠管相比，差异十分显著（P〈0．01）。在HD病变肠管connexin 43表达明显减弱。结论ICCs和connexin 43分布异常导致了HD病变肠管慢波节律和兴奋传导异常，从而引起或加重HD发病。     

先天性小肠闭锁Cajal间质细胞和突触素的分布

目的探讨Cajal间质细胞(ICCs)及突触素(SY)在先天性小肠闭锁(IA)发病中的作用。方法应用免疫组化PV法对5例对照者和16例IA患儿肠标本进行ICCs、SY检测。结果在对照组,ICCs大量分布在肌层内及肌间神经丛周围,并形成网络结构,肌间神经丛、纵肌层、环肌层、黏膜肌层均可见大量SY免疫反应阳性产物。在IA组,ICCs和SY在盲端近、远端的分布与正常对照组相比显著减少,ICCs网络被破坏。结论CajalICCs、SY分布异常是IA病理改变之一,可能是该病重要的发病机制,参与肠运动障碍的发生。     

肿瘤相关成纤维细胞对胆囊癌细胞生长和侵袭的影响

目的研究人胆囊癌相关成纤维细胞（CAFs）的培养方法及其对胆囊癌细胞生物学行为的影响,探讨CAFs在胆囊癌发生
发展中的作用。方法采用酶消化法及组织块法进行人胆囊癌CAFs的原代培养,采用差速贴壁法进行纯化,免疫细胞化学及细
胞免疫荧光进行鉴定;噻唑蓝（MTT）法检测CAFs对胆囊癌细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测CAFs对癌细胞侵袭能
力的影响。结果酶消化法及组织块法均可获得人胆囊癌CAFs,以酶消化法更为简便、高效;MTT及Transwell侵袭实验证实
CAFs可促进胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力（P<0.05）,差距具有统计学意义。结论通过酶消化法可较为简便地获得人胆囊癌
CAFs,CAFs可显著增强胆囊癌细胞增殖、侵袭能力,表明其在胆囊癌发生、发展中起重要作用。
     

Pro-and anti-nucleation activity of biliary proteins in gallbladder bile with and without gallstones

The proteins of pro-and anti-nucleation activity in gallbladder bile were isolated by chromatography on Bio Gel P-100 and Con A Sepharose. The authors for the first time showed the evidence of presence of pro-and anti-nucleation activity proteins co-existing in gallbladder bile of patients with and without cholesterol gallstones. The result of further study showed that Transferrin, one of the glycoproteins in gallbladder bile, had the effect of promoting nucleation activity on rapid formation of cholesterol crystal in artificial supersaturated bile. The difference in pro-and anti-nucleation proteins of gallbladder bile between patients with and those without cholesterol gallstones were also shown in this paper.     

人胎胰岛样细胞团体外增殖条件的研究

目的　探讨人脐血清(UCS)、生长激素(GH)、烟酰胺(Nic)以及肝细胞生长因子(HGF)等多种因子对人胎胰岛样细胞团(ICCs)体外增殖的作用,为临床胰岛细胞移植提供数据。方法　取8例水囊引产的胎儿胰腺,胶原酶消化法制备胰岛样细胞团,分别加入UCS、GH、Nic、HGF及小牛血清等多因子组合培养,进行形态学观察,同时放射免疫法测定胰岛素分泌量。结果　8例胎儿胰腺组织体外培养均见到ICCs的生长和繁殖,培养6d后,UCS + (GH +Nic +HGF)组ICCs获得量显著高于另外三个培养组。二硫腙染色示UCS + (GH +Nic +HGF)组ICCs均为B细胞,其纯度达80 %～90 %。结论　UCS、GH、Nic以及HGF共同作用于人胎胰岛细胞的体外培养时具有交互作用,能明显促进B细胞的增殖,显著提高胰岛样细胞团的获得率和胰岛素的分泌量。     

电针足三里穴对不全性肠梗阻模型大鼠小肠Cajal间质细胞数目和网络结构的影响

目的 观察电针足三里穴对不全性肠梗阻模型大鼠小肠Cajal间质细胞(ICCs)数目和网络结构的影响,为进一步研究电针足三里穴对ICCs表型变化的影响奠定基础.方法 采用末端回肠套环法建立大鼠不全性肠梗阻模型,将大鼠随机分为:正常对照组、假手术组、未电针组、电针足三里穴(ST36)组(简称足三里组)、电针阴陵泉穴(GB34)组(简称阴陵泉组).造模成功后,足三里组和阴陵泉组给予电针干预治疗7d后,冰冻切片和全层铺片免疫细胞化学染色观察各组大鼠结肠ICCs的数目及分布变化情况.结果 未电针组与正常对照组和假手术组比较,小肠梗阻前端和梗阻处ICCs呈现不连续分布,网络结构被破坏,数目显著减少(P＜0.05).足三里组较未电针组,ICCs分布呈连续性,网络结构有所修复且数目显著增加(P＜0.05);而阴陵泉组与未电针组比较,变化不显著(P＞0.05).结论 采用末端回肠套环法能有效建立大鼠不全性肠梗阻模型,电针足三里穴能在一定程度上刺激ICCs再生和恢复成正常的细胞网络结构,从而促进回肠功能恢复.     

牵张负荷对大鼠膀胱ICCs细胞数量及c-kit表达的影响

目的 探讨牵张负荷条件对膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)数量及c-kit蛋白表达变化的影响,阐明牵张负荷对膀胱ICCs细胞兴奋性的调控作用.方法 构建大鼠不稳定逼尿肌模型,以光镜计数及免疫组化法检测牵张负荷下逼尿肌稳定组和逼尿肌不稳定组与正常对照组膀胱ICCs细胞数量及酪氨酸激酶受体(c-kjt)在蛋白水平表达的差异.结果 逼尿肌稳定组和逼尿肌不稳定组ICCs细胞数量与c-kit表达量较正常对照组均有增高(P＜0.01),逼尿肌不稳定组较稳定组升高显著(P＜0.01).结论 牵张负荷对ICCs细胞有调控作用;ICCs细胞数量及c-kit表达增多可能是其机制之一.     

牵张负荷对大鼠膀胱Cajal间质细胞超微形态及c-kit基因表达影响

目的 通过研究膀胱Cajal间质细胞(Interstitial cells of cajal,ICCs)超微形态及c-kit基因水平变化,阐明牵张负荷对膀胱Cajal细胞兴奋性的调控作用.方法 结扎膀胱颈,构建大鼠膀胱出口部分梗阻致逼尿肌过度活动模型,通过扫描电镜方法观察牵张负荷条件下逼尿肌过度活动组与正常对照组膀胱ICCs细胞超微形态变化,观察牵张负荷条件下逼尿肌稳定组和逼尿肌过度活动组与正常对照组膀胱ICCs细胞酪氨酸激酶受体(c-kit)在基因水平表达差异.结果 逼尿肌过度活动组ICCs细胞形态和c-kit基因水平表达最较正常对照组有明显改变(P＜0.01).结论 牵张负荷对ICCs细胞有调控作用,可能的作用机制在于改变ICCs细胞形态及上调c-kit表达.     

足三针对术后结肠胱硫醚γ裂解酶和髓过氧化物酶的影响

【目的】观察针刺对结肠组织胱硫醚γ裂解酶(CSE)和髓过氧化物酶(MPO)的影响,探讨针刺促进结肠吻合术后胃肠起搏细胞Cajal间质细胞(ICCs)修复的机制。【方法】选用30只SD大鼠随机分为正常组、模型组(结肠吻合术)和针刺组。针刺组术后给予针刺双侧足三针(足三里、三阴交、太冲)。观察各组小肠推进率,采用免疫组织化学法检测术后大鼠结肠组织中酪氨酸激酶(c-kit)阳性ICCs的变化,以酶联免疫吸附(ELISA)法检测CSE的活性,生化法检测MPO的活性。【结果】与正常组比较,模型组小肠推进率显著下降,结肠组织c-kit阳性ICCs显著减少,结肠组织CSE和MPO活性显著升高(均P0.05)。针刺组较模型组小肠推进率显著加快,结肠组织c-kit阳性ICCs显著增加,CSE和MPO活性显著降低(均P0.05)。【结论】针刺能促进胃肠功能的恢复,其作用机制可能与调整术后结肠组织CSE和MPO活性以促进受损部位c-kit阳性ICCs修复有关。     

Reliability and accuracy of biomechanical measurements of the lower extremities

The reliability of biomechanical measurements of the lower extremities, as they are commonly used in podiatric practice, was quantified by means of intraclass correlation coefficients (ICCs). This was done not only to evaluate interrater and intrarater reliability but also to provide an estimate for the accuracy of the measurements. The measurement protocol involved 30 asymptomatic subjects and five raters of varying experience. Each subject was measured twice by the same rater, with the retest immediately following the test. The study demonstrated that the interrater ICCs were quite low (< or =0.51), except for the measurements of relaxed calcaneal stance position and forefoot varus (both 0.61 and 0.62 for left and right, respectively). However, the intrarater ICCs were relatively high (>0.8) for most raters and measurement variables. Measurement accuracy was moderate between raters.