Ghrelin对大鼠离体胰腺胰岛素分泌及Glut-2蛋白表达的影响

目的探讨Ghrelin对大鼠离体胰腺组织胰岛素分泌及葡萄糖转运蛋白-2（Glut-2）表达的影响。方法将25只Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组）、高糖组（HCG组）、高糖＋高浓度Ghrelin（10-8mol/L）组（HCG＋HCGh组）、高糖＋中浓度Ghrelin（10-9mol/L）组（HCG＋MCGh组）及高糖＋低浓度Ghrelin（10-10mol/L）组（HCG＋LCGh组）,每组5只。建立大鼠离体胰腺灌注模型,经腹主动脉远端相应灌注低糖（5.5 mmol/L）、单纯高糖（33.3 mmol/L）溶液或加入上述不同浓度Ghrelin的高糖（33.3 mmol/L）溶液。采用ELISA法测定门静脉流出液的胰岛素水平,采用免疫组化染色方法半定量测定Glut-2蛋白在离体胰腺组织中的表达水平,采用透射电镜观察胰岛β细胞的超微结构改变。结果 5组大鼠的空腹血浆葡萄糖（FBG）、空腹血浆胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及胰岛素分泌指数（HOMA-β）比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。用低糖溶液灌注时,5组大鼠门静脉流出液的胰岛素水平比较差异无统计学意义（P〉0.05）;而用高糖溶液灌注后,胰岛素的分泌在3 min和10～12 min时出现了2个高峰（以HCG＋HCGh组最高）。NC组大鼠胰岛β细胞Glut-2蛋白的平均光密度值高于其余4组（P〈0.05）。透射电镜观察结果显示,高糖各组大鼠离体胰腺的凋亡征象较NC组严重,但HCG＋HCGh组的细胞器损害程度较HCG＋MCGh组及HCG＋LCGh组轻。结论在大鼠离体胰腺中,Ghrelin可促进高浓度葡萄糖诱导的胰岛素分泌,对胰岛β细胞起保护作用。     

子鼠胰腺干细胞与胰岛联合移植治疗糖尿病

目的 探讨利用子鼠胰腺干细胞与胰岛联合移植保护移植胰岛,提高糖尿病移植疗效的可行性.方法 分离纯化孕16 d SD大鼠子鼠:胰腺干细胞培养传代,行Nestin免疫组织化学及流式细胞术鉴定;分离纯化SD大鼠胰岛,分联合移植组(10只)、单独移植组(10只)及正常对照组(10只),分别将2×105个子鼠:胰腺干细胞与800个胰岛和单纯800个胰岛移植至糖尿病大鼠模型左肾包膜下,定期监测各组大鼠血糖情况及留取血浆ELISA测胰岛素含量,观察胰岛存活时间.结果 子鼠:胰腺干细胞培养传代3代后细胞涂片免疫组织化学示存在Nestin阳性细胞,流式细胞术测定nestin阳性细胞含量占74.1%.联合移植组大鼠均于术后第3天起血糖开始下降,血浆胰岛素水平逐渐升高,术后5 d内血糖可降至正常[(5.4±0.6)mmol/L],血浆胰岛素达到正常水平[(509.8±16.6)ng/L],胰岛存活时间(18.2±2.4)d;单独移植组大鼠血糖可于术后1周内降至正常[(6.1±0.9)mmol/L],胰岛存活时间(14.4±2.1)d;两组胰岛存活时间差别有统计学意义(P《0.05).结论 子鼠胰腺干细胞与胰岛联合移植可保护胰岛功能,延长胰岛体内存活时间,提高移植疗效.     

内毒素血症大鼠胰岛β-细胞功能损害的研究

目的：探讨内毒素对大鼠胰岛β-细胞胰岛纱分泌功能的作用机理。方法：以腹腔注射脂多糖（LPS.2mg/kg体重）制成大鼠内毒素血症模型，观察其血浆葡萄糖、胰岛素及胰腺组织胰岛素含量的动态变化和胰岛细胞诱生型-氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达情况，分析外源性NO对胰岛β-细胞胰岛素合成和分泌的影响。结果：注射LPS后12h，大鼠血中葡萄糖浓度明显升高，1d达峰值并持续到3d后。血中胰岛素水平6h明显升高并持续3d后，而胰腺组织中的胰岛素水平变化不明显。胰岛β-细胞iNOSmRNA表达亦于注射LPS6h后明显增强，并出现DNA损伤的慧星尾。外源性NO严重抑制葡萄糖刺激胰岛β-细胞合成与分泌胰岛素。结论：内毒素通过刺激存在于胰岛的炎症细胞和非炎症细胞（β-细胞）iNOS的表达，诱导NO的产生，选择性造成胰岛β-细胞的损伤和抑制胰岛素的合成与分泌；同时内毒素血症还可以通过另外的途径促进胰岛素分泌引起高胰岛素血症，最终导致胰岛β-细胞功能紊乱(衰竭)和胰岛素抵抗。     

损伤胰腺组织提取液诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化的实验研究

目的：探讨胰岛损伤的胰腺组织提取液诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素样细胞分化的作用.方法：通过大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立1型糖尿病模型,6 d后剥离胰腺提取胰腺组织提取液,与SD大鼠骨髓间充质干细胞共同培养18 d,体外诱导骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化,RT-PCR法检测诱导分化后细胞的胰岛细胞相关基因的表达,葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测诱导后细胞在高糖作用下分泌胰岛素的功能.结果：经损伤胰腺组织提取液诱导后,间充质干细胞在形态上由梭形变成多边、不规则形,且逐渐聚集成岛状.免疫荧光检测诱导细胞的胰岛素表达呈阳性,RT-PCR检测诱导细胞表达胰岛素1（Ins1）、胰岛素2（Ins2）、葡萄糖转运子2（Glut-2）、神经源素3（Ngn3）、胰腺十二指肠同源盒1（Pdx1）、同源框蛋白（Isl-1）及脑神经源性分化因子（NeuroD）等胰岛相关基因,且具备高糖诱导促进胰岛素分泌的功能.结论：在损伤胰腺组织提取液诱导下,骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞,并且具有表达胰岛相关基因和胰岛素分泌功能.     

抗人足细胞蛋白抗体制备新型被动型大鼠膜性肾病模型

目的 探讨兔抗人足细胞蛋白抗体诱导新型被动型大鼠肾炎模型的方法及病理特点。 方法 制备兔抗人足细胞蛋白抗血清,一次性静脉注入大鼠体内建立新型被动型肾炎模型。雄性SD大鼠36只随机被分为6组,每组6只,分别为正常对照组、注射抗血清第7天组、第14天组、第21天组、第28天组和正常兔血清注射组。观察各组大鼠24 h尿蛋白量、内生肌酐清除率、血清白蛋白、血肌酐、三酰甘油、胆固醇、尿素氮的变化,并通过光镜、免疫荧光、透射电镜观察大鼠肾脏病理变化。 结果 注射兔抗人足细胞蛋白抗血清后,24 h尿蛋白量逐渐升高,第28天组大鼠尿蛋白量(mg)显著高于正常对照组及正常兔血清注射组（48.56±13.80比5.34±2.77、11.32±4.90,均P < 0.01）;内生肌酐清除率（ml/min）和血肌酐（μmol/L）在注射抗血清第28天组（0.90±0.47,33.48±9.94）与正常对照组（1.68±0.54,26.03±2.67）差异均有统计学意义（均P < 0.01）,但与正常兔血清注射组（1.34±0.87,27.40±4.73）差异无统计学意义;血清白蛋白（g/L）在兔抗血清注射组（28.20±0.87,27.80±1.97,27.42±1.66,27.77±1.95）均低于正常对照组（29.98±0.76）（均P < 0.05）,但与正常血清注射组（28.68±1.18）差异无统计学意义;三酰甘油、胆固醇、尿素氮在各组之间差异均无统计学意义（P > 0.05）。大鼠肾脏病理显示,正常对照组及正常兔血清注射组未见明显变化;光镜示注射抗血清第28天组可见少量钉突形成;免疫荧光示注射抗血清后肾小球基底膜上兔IgG沉积强度逐渐减弱,而鼠IgG沉积强度逐渐增强,大鼠C3沉积的强度在第21天时最强;电镜显示注射抗血清后第14天大鼠肾脏逐渐出现免疫复合物的形成,足突融合。 结论 兔抗人足细胞蛋白抗体诱导的新型膜性肾病大鼠模型制备成功。     

同种异体胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植治疗糖尿病

目的 观察同种异体大鼠胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植在糖尿病治疗中的作用.方法 分离胰腺组织获得胰岛及胰腺导管上皮细胞,将具有干细胞潜能的胰腺导管上皮细胞在体外培养27d.将新鲜分离的胰岛(200±50)个及诱导分化2周的胰腺干细胞来源的胰岛样结构(2×106)个序贯移植到糖尿病大鼠的肾被膜下观察大鼠的血糖及生存情况.结果 将胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植到同一糖尿病大鼠3周后血糖仍在5 mmol/L水平,对照组血糖无明显下降.结论 胰腺干细胞可诱导分化为分泌胰岛素的胰岛样结构,胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植对大鼠糖尿病有治疗作用.     

区域动脉灌注5-FU诱导大鼠急性胰腺炎腺泡细胞凋亡及Caspase-3表达

目的 探讨区域动脉灌注（regional arterial infusion,RAI）5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）对大鼠急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）胰腺腺泡细胞凋亡的影响及其对急性胰腺炎的治疗作用。方法 18只健康成年SD大鼠随机分成3组：对照组（C组）、急性胰腺炎组（AP组）和5-FU治疗组（5-FU组）。各组均行胃左动脉置管,AP组和5-FU组以大剂量雨蛙素（每小时腹腔注射50 μg/kg,连续6 h）诱导建立大鼠急性胰腺炎模型,对照组注射同等剂量的生理盐水。5-FU组在第一次腹腔注射雨蛙素1 h后立即区域动脉灌注5-FU（40 mg/kg）治疗,C组和AP组区域动脉灌注等量的生理盐水。建模成功后3 h取标本并处死大鼠,检测血淀粉酶浓度,RT-PCR法检测胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平,胰腺标本送病理学检查,Western blotting法检测胰腺组cleaved Caspase-3的蛋白表达,同时TUNEL法检测大鼠胰腺腺泡细胞凋亡情况。结果 与AP组比较,5-FU组血淀粉酶浓度明显降低（P＜0.05）;胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6  mRNA表达水平下降（P＜0.05）;胰腺组织病理学改变减轻;胰腺组织cleaved Caspase-3的蛋白表达增加;胰腺腺泡细胞凋亡增加（P＜0.05）。结论 区域动脉灌注5-FU对大鼠急性胰腺炎有改善作用,其作用机制可能与诱导胰腺腺泡细胞凋亡有关。     

胃转流术对2型糖尿病大鼠的降糖作用及对糖耐量和胰岛素抵抗的影响

目的 观察胃转流术(CBP)对2型糖尿病大鼠的降糖效果及对糖耐量和胰岛素抵抗的影响.方法 将健康雄性SD大鼠随机分为正常组(NO组,n=10)和造模组(n=32).成模大鼠随机分为糖尿病手术组(DO组)、假手术组(DS组)和对照组(DC组),每组8只.检测手术前后各组空腹血糖、胰岛素、口服葡萄糖30min后的血糖及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).检测DO组术前与术后第4周口服葡萄糖耐量实验后0、10、30、60、120、180 min血糖,计算糖耐量曲线下面积.结果DO组GBP术后第8周空腹血糖由术前的(17.80±2.26)mmol/L下降到(6.18±0.53)mmol/L(P<0.05),NO组手术前后空腹血糖无明显变化.口服葡萄糖30 min后血糖DO组下降更为明显,由术前的(29.20±1.46)mmol/L至术后第8周下降到(13.55±0.86)mmol/L(P<0.05).术后4周DO组各时间点OGTT曲线下面积(AUC)下降约40.1%.DO组术后8周HOMA-IR明显下降,由术前的9.36±0.90下降至4.03±0.34(P<0.05).结论 胃转流术能明显降低2型糖尿病大鼠的血糖水平,且能明显改善糖耐量和胰岛素抵抗,并对正常血糖值无影响.     

局部应用胰岛素对大鼠烫伤创面基底膜形成的影响

目的观察胰岛素对大鼠深Ⅱ度烫伤再上皮化创面基底膜(BM)形成的影响。方法将96只SD大鼠背部造成45cm2深Ⅱ度烫伤,根据创面皮下注射药物的不同分为对照组(创面皮下浸润注射2ml等渗盐水,48只)和胰岛素组(创面皮下浸润注射0.1U长效混悬锌胰岛素 等渗盐水2ml,48只)。两组大鼠均在伤后第1天开始注射,1次/2d,直至创面完全上皮化。于伤后2、3、4、5、6、10、14d及创面完全再上皮化时,每组每时相点处死6只大鼠,取创缘1cm宽皮肤,利用网状纤维染色及透射电镜观察创面BM形态,用蛋白印迹法测定角质形成细胞(KC)层粘连蛋白(LN)5mRNA表达水平和LN含量。结果胰岛素大鼠组再上皮化创面BM结构清晰完整。伤后10、14d胰岛素组LN-5mRNA表达水平高于对照组(P<0.05或0.01)。创面完全再上皮化时两组大鼠LN-5mRNA表达水平均减弱。伤后14d及创面完全再上皮化时胰岛素组LN的蛋白表达量各为56±8、101±13,显著高于对照组39±5、73±16(P<0·05).结论烫伤创面皮下浸润注射0.1U胰岛素可以加速创面再上皮化,改善再上皮化创面质量。     

咪唑和丹参对环孢素A所致胰岛B细胞毒性防护作用的实验研究

本实验用咪唑和丹参注射液作为胰岛Ｂ细胞的防护剂，以观察其对环孢素Ａ（ＣｓＡ）处理后的大鼠胰岛Ｂ细胞的防护作用。实验结果提示：口服治疗剂量的ＣｓＡ可引起雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠胰岛Ｂ细胞的损害，表现为葡萄糖耐量减低，葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平降低和胰岛Ｂ细胞空泡变性、脱颗粒、胰岛体积缩小等形态学改变。腹腔注射咪唑或丹参，对用ＣｓＡ的大鼠胰岛Ｂ细胞具有保护作用。     

小肠旷置术对2型糖尿病大鼠糖耐量的影响

目的 观察不同肠段小肠旷置术对2型糖尿病大鼠血糖和糖耐量的影响.方法 将40只Goto-Kakizaki(GK)大鼠随机分为旷置十二指肠组(A组)、旷置十二指肠和近端空肠组(B组)、旷置十二指肠和全部空肠组(C组)、旷置次全小肠组(D组)和假手术组(SO组)5组,每组8只.测定各组大鼠术前及术后1、3、6、12、24周空腹血糖;用葡萄糖3 g/kg灌胃,测定各组大鼠术前及术后1、24周口服葡萄糖后0、30、60、120和180 min耐糖血糖值,描制血糖值随时间变化曲线,计算糖耐量曲线下面积.结果 与术前比较,各旷置组术后各时间点空腹血糖、糖耐量血糖峰值和糖耐量曲线下面积均明显减少(B组术前和术后1周空腹血糖分别为(9.0±2.4)mmoL/L和(4.4±1.0)mmol/L、糖耐最血糖峰值和糖耐量曲线下面积分别为(20.8±3.1)mmol/L和(10.3±2.0)mmol/L、(2658±417)mmol·min/L和(1324±317)mmol·min/L,P＜0.05或P＜0.01);SO组空腹血糖在术后1、3、6周未发生明显变化(P＞0.05),术后12周(9.1±2.4)mmol/L、24周(10.0±2.3)mmol/L显著高于术前(8.1±1.9)mmol/L,P＜0.01);与术前比较,SO组糖耐量血糖峰值和糖耐量曲线下面积在术后1周未发现明显变化(P＞0.05),术后24周糖耐量血糖峰时后移、峰值增高(25.6±2.0)mmol/L比(21.4±2.7)mmol/L,糖耐量曲线下面积明显增加(3422±360)mmol·min/L比(2667±377)mmol·min/L,P＜0.01.与SO组比较,各旷置组术后各时间点空腹血糖、糖耐最血糖峰值和糖耐量曲线下面积均较SO组显著下降(P＜0.05或P＜0.01).各旷置组之间比较,B组术后各时间点空腹血糖、糖耐最血糖峰值和糖耐量曲线下面积均显著低于A组[术后24周B组和A组空腹血糖分别为(4.6±1.2)mmol/L和(6.2±1.5)mmoL/L、糖耐量血糖峰值分别为(9.7±2.2)mmol/L和(12.4±1.7)mmoL/L、糖耐量曲线下面积分别为(1230±293)mmol·min/L和(1599±264)mmol·min/L,P＜0.05或P＜0.01],对血糖控制和糖耐量改善效果优于A组,但与C组和D组相比差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 小肠旷置术可控制2型糖尿病大鼠的血糖并改善糖耐量,其中旷置十二指肠和近端空肠是临床可行的术式.     

胃转流术对非肥胖性2型糖尿病患者葡萄糖负荷后血糖和胰高血糖素样肽1水平的影响

目的 观察胃转流术对非肥胖性2型糖尿病的疗效及其对胰高血糖素样肽1(GLP-1)的影响.方法 前瞻性入选行胃转流术的32例胃溃疡合并非肥胖性2型糖尿病患者,检测术前及术后1周、1、3、6个月体质量指数(BMI)、口服葡萄糖耐量试验后0、30、60、120、180 min血糖和GLP-1水平,分析术后并发症和6个月时糖尿病转归情况.结果 术前卒腹血糖为(9.5±1.0)mmol/L,术后分别降至1周时(7.4±1.0)mmol/L、1个月时(6.5±1.2)mmol/L、3个月时(8.0±1.6)mmol/L及6个月时(5.8±1.0)mmol/L,P＜0.01;术前口服葡萄糖耐量试验血糖峰值为(17.5±2.0)mmol/L,术后分别降至(12.6±1.7)mmol/L、(11.0±1.7)mmol/L、(12.4±1.7)mmol/L和(10.8±1.7)mmol/L,P＜0.01;术前口服葡萄糖耐量试验血糖曲线下面积为(2455±281)mmol·min/L,术后分别降至(1842±237)mmol·min/L、(1638±261)mmol·min/L、(1828±239)mmol·min/L和(1541±253)mmol·min/L,P＜0.01.术前口服葡萄糖耐量试验过程中GLP-1峰值为(20±3)pmol/L,术后分别升至(83±15)pmol/L、(86±20)pmol/L、(87±22)pmol/L和(92±20)pmol/L,P＜0.01;术前口服葡萄糖耐量试验过程中GLP-1曲线下面积为(2457±395)pmol·min/L,术后分别升至(6499±1227)pmol·min/L、(7275±1475)pmol·min/L、(7307±1575)pmol·min/L和(7974±1594)pmol·min/L,P＜0.01,术后各时间点BMI较术前无显著变化(P＞0.05).术后出现切口感染1例,顽固性呃逆1例,术后6个月糖尿病总控制率均值为78%.结论 胃转流术可显著降低非肥胖性2型糖尿病患者血糖,改善口服葡萄糖耐量试验,胃转流术控制血糖可能与增加GLP-1释放进而促进胰岛素分泌有关,其对血糖的控制不依赖于体草的降低.     

胃旁路术对糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究胃旁路手术对非肥胖2型糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的影响及其机制.方法 将72只8周龄的GK大鼠随机分为手术组(O组,18只)、假手术组(S组,18只)、饮食控制组(F组,18只)和对照组(C组,18只),术前和术后1、2、4、8周检测比较空腹、餐后血糖、胰岛素和胰高血糖素样肽-1(GLP-1)水平.术后2、4、8周取血测餐后血糖后,分批随机处死大鼠,每批每组处死6只,大鼠处死后分离胰腺并取出待用.原位末端标记法检测胰岛β细胞凋亡;免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 O组术后第4周空腹血糖由术前的(16.2 ±0.8)mmol/L下降到(9.2±0.6)mmol/L,术后第8周血糖为(9.7±0.7)mmoL/L;术后第4周餐后血糖由术前的(31.1±1.1)mmoi/L降至(13.1±0.7)mmol/L,术后第8周为(12.3 ±0.7)mmol/L;术后第4周空腹血清胰岛素水平由术前的(28.0±1.2)mU/L升至(62.8±1.9)mU/L,术后第8周为(61.7±1.4)mU/L,术后第4、8周餐后血清胰岛素水平分别为(77.4±1.1)mU/L、(77.1±1.0)mU/L;术后第2周空腹GLP-1由术前的(10.7±1.0)pmol/L升至(13.5±0.8)pmol/L,至术后第4、8周分别为(26.1±0.9)pmol/L、(25.3±1.2)pmol/L;O组各测量值术后各时相点与术前比较差异均有统计学意义(P＜0.05),与其他组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05).O组大鼠胰岛细胞凋亡率术后4周下降至(5.9 ±0.7)%,术后8周凋亡率为(6.3±1.1)%,差异有统计学意义(P＜0.05).O组Bcl-2蛋白表达术后2、4、8周表达量分别为31.3±1.5、35.7±1.0和35.8 ±0.8,明显高于同时间点的其他3组,差异有统计学意义(P＜0.05);Bax蛋白术后2、4、8周表达量分别为13.3±0.9、10.8 ±0.9和10.9±1.1,明显低于相同时间点的其他3组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胃旁路手术可显著降低糖尿病大鼠血糖,促进GLP-1分泌,从而调节Bcl-2通路,显著抑制胰岛β细胞凋亡,保护胰岛B细胞.     

三种不同部位移植胰岛细胞治疗糖尿病

目的 对比通过肝脏、静脉、胰腺三种途径移植胰岛细胞对糖尿病大鼠的治疗作用.方法 24只糖尿病大鼠模型随机分为A、B、C组,A组在肝脏被膜下多点移植1000个胰岛细胞,B组通过尾静脉移植1000个胰岛细胞,C组在胰腺被膜下移植1000个胰岛细胞,于不同时间点测定大鼠随机血糖,对比大鼠血糖变化趋势及维持正常的时间.结果 A组大鼠血精于术后3 d内开始下降,血糖可降至正常水平(7.98±2.28)mmol/L,血糖维持正常水平(3.71±0.95)d,B组移植后24 h 血糖降至正常水平(7.35±1.40)mmol/L,可维持(7.85±1.46)d,C组移植后24 h血糖降至正常水平(7.06±2.11)mmol/L,可维持(24.90±2.60)d,不同部位移植对大鼠血糖水平变化的影响不同,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在胰腺被膜下移植胰岛细胞血糖维持正常时间最长,是一个较理想的移植部位.

Abstract：

Objective To study the curative effectiveness of pancreatic islets transplantation through the liver, tail vein and pancreas. Methods Twenty-four diabetic rats were randomly divided into groups 1,2, 3. The rats in group Ⅰ were transplanted with 1000 pancreatic islets beneath the liver capsule,those in group 2 with 1000 pancreatic islets through tail vein, and those in group 3 with 1000 pancreatic islets beneath the pancreas capsule. Plasma glucose levels at different time points were determined and compared. Results In group 1, plasma glucose levels were reduced at the 3rd day post-transplantation,reached the normal level (7.98 ±2. 28) mmol/L and maintain (3.71 ±0. 95) days. Group 2 start to activate after 24 h. Plasma glucose level reach to (7.35 ± 1.40) mmol/L and maintain (7.85 ± 1.46) days.Group 3 start to activate after 24 h. Plasma glucose level reach to ( 7.06 ± 2. 11 ) mmol/L and maintain (24. 90 ± 2. 60 ) days. There is statistical significance in plasma glucose level and maintain normal time after transplantation pancreatic islet in different sites ( P ＜ 0. 05 ). Conclusion Transplantation pancreatic islets beneath the pancreas capsule maintain plasma glucose for the longest time. The pancreas is a ideal transplantation site.     

Ghrelin对离体大鼠胰岛分泌胰岛素的影响及其机制

目的 观察外源性Ghrelin对胰岛素分泌和胰岛内向整流钾通道(Kir6.2)表达的影响.方法 Wistar大鼠按10 nmoL/kg的剂量予Ghrelin腹腔注射2周后,分离胰岛进行胰岛素释放实验,分离β细胞检测静息膜电位;检测胰岛Kir6.2 mRNA和蛋白表达变化.结果 在11.1、16.7mmol/L葡萄糖刺激下,对照组的胰岛素释放分别为22.5、43.5 uIU/胰岛/h,Ghrelin组为15.2、30.1uIU/胰岛/h,较对照组显著降低(P＜0.05).对照组β细胞的静息膜电位为(-73.2±24.8)mV,Ghrelin组为(-95.4±33.7)mV,较对照组显著降低(P＜0.05).而Ghrelin组Kir6.2表达显著高于对照组(P＜0.05).结论 Ghrelin与其受体结合后抑制胰岛素分泌,其机制可能与上调Kir6.2表达,使β细胞兴奋性降低有关.

Abstract：

Objective To investigate the influence of ghrelin administration on the insulin secretion, and the expression of Kir6. 2 channels in islets. Methods Ghrelin was intraperitoneally administrated in Wistar rats at the doses 10 nmol/kg every day for 2 weeks. Islets were isolated for insulin release experiments. Single β cells were isolated for electrophysiological experiments. Meanwhile, the expression levels of Kir6. 2 mRNA and protein in islets were detected. Results At 11. 1 and 16. 7 mmol/L glucose,the levels of insulin release in control group were 22. 5 and 43.5 uIU/islet per h, and those in ghrelin-treated group were 15. 2 and 30. 1 uIU/islet per h (P ＜0. 05 ). In control group, the resting membrane potential reached ( - 73.2 ± 24. 8 ) mV, but in ghrelin-treated group, it was hyperpolarized to ( - 95.4 ± 33.7 )mV ( P ＜ 0. 05 ). The Kir6. 2 expression levels were significantly up-regulated by ghrelin ( P ＜ 0. 05 ).Conclusion Ghrelin via pancreatic GHSR up-regulates the Kir6. 2 expression in islets, hyperpolarizing the resting membrane potential, and resulting in the inhibition of insulin release.     

胰腺导管上皮细胞来源的胰岛样细胞移植治疗1型糖尿病

目的 观察小鼠胰腺导管上皮细胞向胰岛样细胞转分化及其在治疗糖尿病小鼠中的作用.方法 分离培养昆明小鼠胰腺导管上皮细胞,经体外扩增及诱导培养后,进行体外和体内功能评价.结果 小鼠胰腺导管上皮细胞经体外扩增和诱导分化后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)显示培养1周和2周后胰岛素mRNA的IA值为(1.892±0.119比3.135±0.092,P＜0.05),胰高血糖素为(1.564±0.087比2.271±0.042,P＜0.05),表达明显上调;胰岛样细胞对高糖刺激(15.0 mmol/L)的胰岛素释放较低糖(5.6 mmol/L)时增加了1.7倍[(52.3±10.5)mmol/L比(30.2±9.7)mmol/L,P＜0.05];DTZ染色阳性;将其移植入糖尿病小鼠体内后,移植组小鼠较对照组血糖下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 昆明小鼠胰腺导管上皮细胞在体外培养条件可转分化胰岛素分泌细胞,该细胞团可在体内环境下发挥生物学功能.

Abstract：

Objective To investigate the differentiation of stem cells deived from mouse pancreatic ductal epithelial cells toward insulin secreting cells and the potential application for diabetes therapy.Methods Pancreatic ductal epithelial cells were separated and differentiated into islet-like cells. Study was performed to determine whether these islet-like clusters could secrete insulin in response to glucose both in vivo and in vitro. Results Pancreatic ductal epithelial cells were separated and cultured in vitro.The expression of insulin mRNA in the stem cells was significantly up-regulated ( 1. 892 ±0. 119 vs 3. 135± 0. 092,P ＜ 0. 05 ), and also in glucagon ( 1. 564 ± 0. 087 vs 2. 271 ± 0. 042, P ＜ 0. 05 ). Immunofluoresence staining indicated that there were a lot of insulin positive cells. Insulin released from cells in response to glucose stimulation in vitro was increased [ ( 52. 3 ± 10. 5 ) mmol/L vs ( 30. 2± 9. 7 ) mmol/L, P ＜0. 05 ]. Hyperglycemia in diabetic animals was alleviated after cell transplantation. Conclusion Islet-like cell clusters generated in vitro from Kunming mice pancreatic ductal epithelial cells could secrete insulin and have some effects on reversing the diabetes in diabetic mice.     

Influence of tacrolimus on glucose metabolism before and after renal transplantation: a prospective study

Most studies concerning the influence of tacrolimus on glucose metabolism have been performed either in animals or after organ transplantation. These clinical studies have largely been transversal with patients who were using steroids. Therefore, this prospective, longitudinal study investigated the influence of tacrolimus on glucose metabolism before and after transplantation. Eighteen Caucasian dialysis patients underwent an intravenous glucose tolerance test before and 5 d after the start of tacrolimus. Insulin sensitivity index (k(G)), insulin resistance (insulin/glucose ratio and homeostasis model assessment), and C-peptide and insulin secretion were calculated. Trough levels of tacrolimus were measured. After transplantation, the occurrence of posttransplantation diabetes mellitus (PTDM) was prospectively monitored. Statistical analysis was performed using the Wilcoxon signed ranks test and Spearman's rho for correlation. Before tacrolimus, k(G) was indeterminate in three patients. During tacrolimus, k(G) decreased in 16 of 18 patients, from a median of 1.74 mmol/L per min to 1.08 mmol/L per min (P<0.0001). The correlation between C-peptide and insulin data was excellent. Insulin secretion decreased from 851.0 mU x min/L to 558.0 mU x min/L (P = 0.014), whereas insulin resistance did not change. Insulin sensitivity correlated negatively with tacrolimus trough level. After transplantation, three patients developed PTDM; before tacrolimus, two had an indeterminate and one a low normal k(G). During tacrolimus administration, k(G) decreased in almost all patients as a result of a diminished insulin secretion response to a glucose load, whereas insulin resistance did not change. Patients with an abnormal or indeterminate k(G) seem to be at risk of developing PTDM while on tacrolimus.     

高糖和胰岛素对肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白4表达及易位的影响

目的 观察高糖和胰岛素对体外培养的肾小球系膜细胞（GMC）葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）的影响以及胰岛素引起GLUT4易位的情况，探讨GLUT4在糖尿病肾病(DN)发生发展机制中的作用。 方法 将体外培养的鼠1097系膜细胞分为8组：对照组、生理浓度胰岛素组（10^-9 mol/L）、低浓度胰岛素组（10^-8 mol/L）、高浓度胰岛素组（10^-6 mol/L）、高糖组（30 mmol/L）、甘露醇组、高糖加高浓度胰岛素组和高糖加生理浓度胰岛素组。RT-PCR检测GLUT4 mRNA表达；共聚焦显微镜观察各组GLUT4蛋白表达，以及胰岛素引起GMC GLUT4易位的剂量-时间效应。 结果 胰岛素可增加GLUT4的表达，高糖使GLUT4表达明显下降。胰岛素可引起系膜细胞GLUT4易位。低浓度胰岛素组、高浓度胰岛素组细胞GLUT4均在加入胰岛素15 min后达到最大易位，且以后的45 min胞膜上的GLUT4的荧光强度与15 min时差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 不同浓度的胰岛素均可刺激系膜细胞GLUT4易位，且过程是相似的。高糖明显抑制GLUT4在系膜细胞上的表达。胰岛素可部分拮抗高糖导致的GLUT4下调，且呈剂量依赖性。     

骨髓间充质细胞和单个核细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响

目的 比较骨髓间充质细胞移植和单个核细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能影响的差异.方法 建立糖尿病小鼠模型并分成3组:对照组(n=14)通过尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS);单个核细胞组(n=14)通过尾静脉移植骨髓单个核细胞;间充质细胞组(n=14)通过尾静脉移植骨髓间充质细胞.观察移植后1周(n=6)和移植后6周(n=8),各组小鼠血糖的变化、胰岛数量、胰腺组织形态学特征及相关标记物的表达.结果 移植后1周,间充质细胞组小鼠血糖出现显著下降(16.6±1.6)mmol/L,与对照组(26.3±0.5)mmol/L和单个核细胞移植组(24.4±1.3)mmol/L比较差异有统计学意义(P＜0.05),并一直维持到移植后第6周,血糖下降到(16.5±1.5)mmol/L,与对照组(27.7±0.1)mmol/L比较差异有统计学意义(P＜0.05);移植后1周,间充质细胞组小鼠胰岛数目(21.2±1. 1)和胰岛β细胞数目(415.9±25.4)显著增加,与对照组(11.2±1.3)/(65.9±7.1)和单个核细胞组(12.2±1.3)/(64.1±6.5)比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).单个核细胞组和间充质细胞组小鼠胰岛中均发现BrdU(+)Insulin(+)细胞和BrdU(+)Insulin(-)细胞.结论 骨髓间充质细胞移植改善糖尿病小鼠胰岛功能的效果优于骨髓单个核细胞移植.移植后胰岛的再生既来源于胰岛β细胞的增殖,也可能来源于胰岛干细胞的分化.

Abstract：

Objective To compare the different effects of bone marrow mononuclear cells vs mesenchymal cells transplantation on islets function of diabetic mice. Methods Mouse diabetic models were created by multiply peritoneal injection of low-dose streptozotocin (STZ) and divided into three groups:control group ( n = 14) , bone marrow mononuclear cells group ( n = 14) , and bone marrow mesenchymal cells group (n = 14). Blood glucose was measured weekly after transplantation by glucometer. Histochem istry and immunofluorescence were performed to characterize pancreatic histology, morphology and markers expressed in receipt pancreas. Results Compared with control group and bone marrow mesenchymal cells group, blood glucose levels in bone marrow mesenchymal cells group were significantly reduced at first week after transplantation[( 16. 6 ± 1.6 ) vs ( 26. 3 ± 0. 5 ) / ( 24. 4 ± 1.3 ) mmol/L, P ＜ 0. 05]and sustained to reduce at 6th week after transplantation[( 16. 5 ± 1.5 ) vs ( 27.7 ± 0. 1 ) mmol/L in control group,P＜0. 05]. One week after transplantation, the islets number in bone marrow mesenchymal cells group was larger than in control group ( 21.2 ± 1. 1vs 11.2 ± 1.3, P ＜ 0. 05 ) and bone marrow mononuclear cells group ( 21.2 ± 1. 1vs 12. 2 ± 1.3 ,P ＜0. 05 ). One weeks after transplantation, the beta cell number in bone marrow mesenchymal cells group was larger than in control group (415.9 ± 25.4 vs 65.9 ±7. 1,P＜0.05) and bone marrow mononuclear cells group (415.9 ±25.4 vs 64. 1 ±6.5,P＜0.05). In bone marrow mononuclear cells and bone marrow mesenchymal cells groups, there were several BrdU ( + )Insulin( - ) cells and BrdU( + )Insulin( - ) cells in the islets. Conclusion The effect of bone marrow mesenchymal cells transplantation to improve diabetic islet function is more satisfactory than bone marrow mononuclear cells transplantation. Bone marrow mesenchymal cells transplantation can initiate pancreatic islets β cells regeneration by both proliferation of β cells and differentiation of pancreatic stem cells.