C6胶质瘤细胞诱导神经干细胞分化的初步研究

为了探讨C6胶质瘤细胞分泌的因子对神经干细胞分化的作用及机制。本研究从Wistar孕鼠(E17～E18)纹状体组织中分离、培养神经干细胞,将其分离纯化后进行nestin免疫荧光染色鉴定后分为两组进行诱导分化实验。对照组:RPMI1640培养液+基础培养基(1∶1配制);处理组:C6胶质瘤细胞培养上清+基础培养基(1∶1配制)。采用免疫印迹法分析胶质瘤细胞条件培养液作用于神经干细胞后的不同时相(1、3、5d)MAP-2蛋白的表达情况;通过RT-PCR检测不同时相(1、3、5d)MAP-2的表达及调控神经干细胞向神经元分化的多种转录因子如:neurogenin3(Ngn3)、neuroD和neuroD2的mRNA的表达情况。结果显示:处理组MAP-2在蛋白和mRNA水平的表达量均明显高于对照组(P<0.01),并且处理组的Ngn3、neuroD和neuroD2的mRNA水平比对照组也有明显升高。上述结果提示,C6胶质瘤细胞条件培养液能够促进神经干细胞向神经元分化,此作用可能与Ngn3、neuroD和neuroD2等转录调控因子表达水平的提高有关。     

鼠神经干细胞对胶质瘤C6细胞侵袭能力的影响

目的探讨鼠神经干细胞对鼠胶质瘤C6细胞侵袭能力的影响及机制。方法取新生1～2天SD大鼠大脑皮层组织,于无血清培养基中分离培养神经干细胞并进行NES免疫细胞化学染色,并将神经干细胞和鼠胶质瘤C6细胞于体外共培养,利用2D、3D生长实验和Transwell实验分别检测与鼠神经干细胞共培养鼠胶质瘤C6细胞(实验组)和单独培养鼠胶质瘤C6细胞(对照组)的侵袭能力。结果 2D实验中C6细胞的对照组和实验组的平均直径分别为(18.53±1.32)μm和(13.44±1.45)μm,差异有统计学意义(P<0.01)。3D实验中C6细胞的对照组和实验组的平均直径分别为(20.34±1.25)μm和(15.52±1.43)μm,差异有统计学意义(P<0.01)。Transwell侵袭实验发现胶质瘤C6细胞组中对照组和实验组平均视野侵袭细胞为(36.45±1.36)个和(22.73±1.66)个,差异有统计学意义(P<0.01)。结论与神经干细胞共同培养后C6细胞的侵袭能力明显降低。     

胶质瘤干细胞研究进展

随着对肿瘤干细胞（tumor stem cells）理论的深入认识和分离、培养肿瘤干细胞实验技术的不断进步,胶质瘤内肿瘤干细胞的存在已经有较多的证据和研究。这方面的研究不仅有助于深化人们对胶质瘤发生、复发和侵袭机制的认识,更重要的是可能改变以往胶质瘤的治疗策略,影响十分深远。新近,有学者将来自胶质瘤的肿瘤干细胞或具有干细胞特性的胶质瘤细胞称为“胶质瘤干细胞（glioma stem cells,GSC）”,较好地反映了这类细胞的特性。     

颈内动脉移植骨髓间充质干细胞向C6胶质瘤的趋化迁移

目的探讨经颈内动脉移植的骨髓间充质干细胞(BMSC)向C6胶质瘤的趋化迁移能力及小剂量S缓激肽对其影响。方法密度梯度离心法分离BMSCs,体外培养、传代纯化。利用Transwell侵袭小室建立体外趋化迁移模型。立体定向方法建立大鼠C6胶质瘤模型。用BrdU标记BMSCs,经荷瘤侧颈内动脉灌注,观察其向C6胶质瘤组织的趋化能力以及在使用小剂量缓激肽后对其的影响。结果通过密度梯度离心法传至第3代获得了纯化的MSCs。体外模型中BMSCs可通过聚碳酸酯膜向下室内的C6细胞迁移。经颈内动脉灌注后BMSCs可以存活,并表现出了向脑胶质瘤趋化迁移的特性。分布区域主要位于肿瘤内部,在肿瘤与正常脑组织的交界位置亦有分布。使用小剂量缓激肽可以明显增加BMSCs通过血肿瘤屏障的数量。结论BMSCs具有通过血肿瘤屏障向C6胶质瘤趋化迁移的能力,经颈内动脉灌注是其有效的移植途径,小剂量缓激肽选择性开放血肿瘤屏障有助于BMSCs趋化迁移进入C6胶质瘤组织。     

干细胞与神经元、神经胶质细胞的分化

神经细胞与神经胶质细胞的分化是发育神经生物学中颇具挑战性问题，目前仍有许多问题有待探索与解决。对这一领域的研究作一回顾与总结，有助该课题的深入研究。     

神经干细胞向多巴胺能神经元诱导分化研究进展

在帕金森病的细胞移植治疗研究中 ,如何在体外获得足够的多巴胺能神经元一直是一个难以解决的问题。干细胞的研究让人们看到了希望的曙光 ,利用干细胞不仅能在体外大量得到相关的神经元 ,而且也可能解决胎脑移植引发的伦理问题。本文就神经干细胞向多巴胺能神经元诱导分化及相关因素的研究进展作一综述。     

星形胶质细胞的神经干细胞特性

胶质细胞是脑内数量最多的细胞,它与神经元之间的相互联系是在发育期就精确建立的。不同神经元的功能已有较深入的研究,与之相比,胶质细胞仍是非常神秘的细胞,特别是星形胶质细胞,除了对神经元提供重要的结构、代谢、营养支持外,它与神经元之间复杂的相互联系仍不清楚。本文将对星形胶质细胞作为神经干细胞／祖细胞这一最新发现作一综述。     

神经生长因子诱导神经干细胞向胆碱能神经元的分化

为了探讨神经生长因子(NGF)是否具有诱导神经干细胞(NSCs)向胆碱能神经元分化的能力,利用无血清培养技术从胎鼠脑内获得神经干细胞,传代纯化后利用免疫细胞化学技术,观察不同剂量NGF作用后神经干细胞向胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性细胞分化的情况。结果发现:50、100、200ng/ml NGF组ChAT阳性细胞数明显比对照组增加,且以100ng/ml组最为明显;各NGF组,分化的细胞状态较好,且突起明显比对照组增粗增长,以200ng/ml组最为明显。此结果证明NGF具有诱导NSCs向胆碱能神经元分化的趋势,且能促进分化细胞突起的生长。     

人参皂苷Rgl诱导大鼠海马神经干细胞分化的实验研究

为探讨人参皂苷Rgl诱导新生大鼠海马神经干细胞(NSCs)分化的作用,本实验采用无血清和单克隆培养方法进行细胞培养,应用免疫荧光染色法观察NSCs的形态及其分化而来的神经元、胶质细胞的形态,并经图像扫描分析仪分析海马NSCs分化的细胞数量.实验分4组:5%胎牛血清组、5%胎牛血清+30 ms/kg人参皂苷Rgl组、5%胎牛血清+15 ms/kg人参皂苷Rgl组和5%胎牛血清+10mg/kg人参皂苷Rgl组.结果显示:海马NSCs在无血清培养下,可形成巢蛋白(nestin)和5-溴脱氧尿苷(BrdU)阳性细胞球;在诱导分化后,免疫荧光染色可见B-Ⅲ型微管蛋白(Tuj-1)与波形蛋白(vimentin)阳性细胞;图像扫描分析结果显示15 mg/kg人参皂苷Rgl干预组海马NSCs向神经元的分化比例最高.此结果提示在一定浓度人参皂苷Rgl的作用下,海马NSCs向神经元分化的数量增多,为进一步研究人参皂苷Rgl对NSCs分化的影响提供了实验依据.     

神经胶质瘤治疗法的突破

据美国BIOCOMPARE科技新闻网（2006／8／18）报道，神经胶质瘤（glioma）细胞有许多类似干细胞（stem cell）的特征，其中之一就是它们都能助长血管新生（angiogenesis）。杜克大学（Duke University）脑癌中心的助理教授Rich，在神经胶质瘤细胞中发现有一小群与癌细胞生长有关的生长因子（growth factor）被高量表达，他们相信此发现有助于对抗神经胶质瘤的治疗。此研究发表于8月15目的《癌症研究》（Cancer Research）期刊。     

地塞米松对C6胶质瘤细胞细胞周期的影响

目的:研究地塞米松(Dex)对C6胶质瘤细胞细胞周期和增殖的影响。方法:在培养的C6胶质瘤细胞中加入不同浓度(0 mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L和10-3mol/L)的Dex,作用不同的时间(6、12和24 h)后取材,运用细胞计数和流式细胞仪检测C6胶质瘤细胞的增殖情况、细胞周期及凋亡。结果:10-3mol/L的Dex诱发了C6胶质瘤细胞的凋亡。24 h时,4个组的C6胶质瘤细胞凋亡率依次为0.37、0.52、0.39和8.24;4个组的C6胶质瘤细胞个数依次为4.37×106、4.29×106、3.57×106和3.44×106,后3组与第1组有明显的差异;4个组的C6胶质瘤细胞增殖指数依次为17.58、6.79、6.29和22.48,前3组随浓度增加而增加,第4组例外。结论:Dex对C6胶质瘤细胞的细胞周期进程有明显的抑制作用。10-4mol/L以下的浓度抑制其由G1期向S期的转换,10-3mol/L剂量的Dex可能抑制C6胶质瘤细胞由G2期向M期的转换或阻滞细胞在S期。大剂量的Dex(10-3mol/L)可引起C6胶质瘤细胞凋亡。     

氯化三乙基锡对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨氯化三乙基锡(triethyltin chloride,TETC)对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用MTT法检测0.5、1.0和2.0μmol/L TETC对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞作用24h和48h后细胞增殖的影响、采用细胞形态学观察及流式细胞术(FCM)方法检测0.5、1.0和2.0μmol/L TETC对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞作用48h后细胞增殖和细胞周期的影响。结果MTT法及细胞形态学观察均检测到0.5、1.0和2.0μmol/L TETC在体外均可抑制C6细胞增殖,C6细胞增殖率存在着剂量依赖性和时间依赖性降低趋势;TETC可将C6细胞阻滞在G0/G1期。结论TETC可抑制体外培养大鼠C6胶质瘤细胞增殖,其机制可能与C6细胞周期阻滞在G0/G1期有关。     

体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化：两种方法的比较

背景：目前骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞的方法较多,而采用不同诱导方法时间充质干细胞在体外分化成神经细胞的比例是不一样的。适宜的诱导条件是实现间充质干细胞定向诱导分化的必要条件。 目的：比较两种常见的化学诱导法与共培养法诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的差异,以寻找一种诱导效果高、实用的骨髓间充质干细胞体外诱导方法。 方法：采用密度梯度法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,分别用化学诱导法和共培养法诱导分化比较两种方法所获得的神经细胞数目、细胞形态和特异性抗体阳性率。 结果与结论：培养7 d后两组均可见大量贴壁细胞形成突起,呈放射状生长,神经元特异性烯醇化酶染色均为阳性。共培养法第5天可见典型神经细胞结构,突起数量较多,神经元特异性烯醇化酶染色阳性率(50.82±2.46)%,化学诱导法培养第7天可见神经样细胞形成,并有突起,神经元特异性烯醇化酶染色阳性率(43.56±1.74)%。说明骨髓间充质干细胞经共培养法诱导分化后的神经样突起数量多并较早互相形成连接,且共培养法神经元特异性烯醇化酶染色阳性率高于化学诱导法。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

海人酸对神经干细胞增殖及分化的影响

背景：神经干细胞对脑组织的修复作用非常有限,约80%新增殖的内源性神经干细胞在6周内死亡,仅0.2%的细胞继续增殖、分化,参与修复。 目的：分析不同剂量海人酸在对神经干细胞增殖及分化的影响。 方法：体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,将神经干细胞分为空白对照组和加入不同浓度梯度的海人酸组,通过免疫组化法和免疫荧光法进行鉴定,MTT比色法测定海人酸对神经干细胞分化的影响,计算分化后神经元和星形胶质细胞比例。 结果与结论：海人酸组贴壁的神经球分化速度较空白对照组快,在同一时间点进行观察,神经细胞的迁移距离较未处理组远。分化5 d后,海人酸组所分化的细胞中,星状细胞较空白对照组多,而神经元样细胞相对较少,培养的细胞具有自我更新和向神经元﹑少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能。兴奋性氨基酸海人酸可使部分神经干细胞死亡,但可促进幸存的神经干细胞增殖及分化,并诱导其向星形胶质细胞分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

神经干细胞克隆在不同细胞外基质上的生长特性

目的：观察不同细胞外基质对培养神经干细胞生长特性的影响。方法：经体外扩增和传代,神经干细胞克隆被接种于多聚赖氨酸、多聚鸟氨酸和鼠尾胶原形成的细胞外基质上,观察其增殖和迁移特性。结果：未经包被的塑料培养板作为基质时,体积较大的神经干细胞克隆才能贴壁,贴壁后的克隆仍呈球形,在其底部有细胞呈放射状迁出,数量逐渐增多,以梭形为主,细胞排列稀疏;多聚鸟氨酸和多聚赖氨酸作为细胞外基质时,迁移细胞排列密集,形态多样;鼠尾胶原作为细胞外基质时,促贴壁迁移的作用最差。当多聚赖氨酸和鼠尾胶原形成界限时可明显观察到鼠尾胶原对细胞迁移的抑制作用。结论：在各种基质上,克隆体积均可继续增长,但在鼠尾胶原上增长较慢。     

Notch信号通路对胶质瘤干细胞的调控作用研究进展

胶质瘤干细胞(GSCs)是胶质瘤放化疗耐受和复发的重要原因.而Notch信号通路对GSCs形成、维持及胶质瘤患者放化疗耐受中起关键的调控作用.因此,深入研究GSCs中Notch信号通路调控机制对开发以该通路为靶向的治疗药物具有积极意义.     

小鼠胚胎干细胞来源的神经干细胞的稳定传代体系探索

目的探讨体外诱导、获取均一的神经干细胞群(NSCs)的有效方法,并建立神经干细胞体外稳定传代扩增体系。方法首先采用无血清的诱导培养基贴壁诱导mESCs形成神经上皮祖细胞(NPCs)。然后将经添加表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子-2(FGF2)的无血清培养基短暂悬浮培养后的NPCs再贴壁培养,诱导形成NSCs。通过细胞系46C监测NPCs的形成,同时对分化细胞进行定量PCR和免疫荧光染色,在不同水平检测细胞分化效果。结果 mESCs神经诱导5 d出现大量Sox1+的NPCs;NPCs悬浮培养后,进一步诱导可得到形态均一的NSCs。第2代和第6代NSCs的神经干细胞标志定量PCR检测结果为:Pax6、Nestin、Mash1、BLBP高表达。第8代NSCs免疫荧光染色显示90%以上的细胞均为Nestin、RC2和Pax6阳性。结论成功诱导mESC生成神经干细胞群,并且可以在体外连续稳定的传代。     

基质细胞衍生因子1对内源性神经干细胞的趋化迁移作用

背景：目前研究表明,基质细胞衍生因子1在参与趋化迁移内源性神经干细胞中起着非常重要的作用,但其具体迁移机制尚不明确。目的：观察外源性基质细胞衍生因子1 对大鼠内源性神经干细胞的趋化迁移作用及海马区神经干细胞的激活增殖情况。方法：通过向SD大鼠海马区上大脑皮质内注射外源性基质细胞衍生因子1(注射量为5 μL,质量浓度为500 μg/L)建立动物模型,于3,7,14,21 d后灌注取脑,通过石蜡切片免疫组织化学检测大鼠皮质内注射区及海马区nestin阳性细胞表达情况,并设实验对照组与空白对照组。结果与结论：石蜡切片免疫组织化学显示：实验组注射区周围及海马区nestin表达阳性细胞的数量随时间推移逐渐增多,3,7 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞少量表达,14 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞进一步增多,并向注射区形成明显的迁移趋势,21 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞更多。实验对照组及空白实验组未见上述表现。结果表明外源性基质细胞衍生因子1 可能诱导海马区神经干细胞的增殖分化,参与内源性神经干细胞的趋化迁移过程。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：