免疫活性细胞表达杀伤细胞抑制性受体与造血干细胞移植后移植物抗宿主病的关系

本研究的目的是探讨造血干细胞移植后杀伤细胞抑制性受体(KIR)CD158和CD94与GVHD发生的关系。用流式细胞术检测分析T淋巴细胞和NK细胞表达CD158a，CD158b和CD94表达状况，同时用PCR方法分析供受HLA—Cw配型，比较异基因外周血造血干细胞移植(allb-PBSCT)和脐血移植(UCBT)后该KIR分子变化和HLA—Cw相合或错配与GVHD发生的关系。结果表明：无论是PBSCT或是UCBT，移植后CD3^ CD158a^ 和CD3^ CD158b^ T细胞均增高并以CD8^ CD158b^ 细胞升高为主。发生急性与慢性GVHD组CD3^ CD158b^ 细胞均呈不同程度升高，在急性GVHD病例中升高最明显。急性GVHD期(即移植早期)KIR表达增高，慢性GVHD阶段(即移植后期)KIR呈减低趋势。CD94主要表达于CD3^ CD8^ T细胞，在UCBT或PBSCT后CD94在CD4^ T细胞和CD8^ T细胞均明显增高。5例HLA—Cw相合无1例发生重症GVHD；2例HLA—Cw不相合病例，有1例发生急重症GVHD，并死于间质性肺炎(IP)，另1例为AML(M5)，完全植入，无重度GVHD发生，但于53天后复发。4例相关相合移植中2例无急性GVHD，而无关相合4例均发生不同程度GVHD。结论：GVHD的发生与KIR表达有一定关系。CD158b分子可能是移植后早期T淋巴细胞活化的负调控分子。从T细胞表达KIR来理解GVHD发生机理，特别是与HLA-Cw特异性识别结合将有利于寻找一条新的特异性建立免疫耐受和减低GVHD的新策略。     

异基因造血干细胞移植中杀伤细胞抑制性受体(KIR)在GVHD和GVL 发生中的作用

杀伤细胞抑制性受体(KIR)属于免疫球蛋白超家族成员Ⅰ型跨膜蛋白分子，主要表达于人NK细胞和某些T淋巴细胞。它们的配体为HLA Ⅰ类分子。当KIR所识别的MHC配体缺失时，即表现为对靶细胞的杀伤作用(所谓丢失自我“missing-self”机制)。已证实，)NK细胞和T细胞的KIR分子与靶细胞的MHC分子特异性的识别机制参与移植物抗宿主病(GVHD)的发生并且影响移植物抗白血病(GVL)作用。KIR的存在可能是免疫活性细胞不攻击自身组织的主要机制。KIR基因家族及其配体HLA-C分子均具有基因多态性，因此在HLA相合和不全相合的异基因造血干细胞移植中，供受者KIR基因表达的差异在一定程度上影响移植效果。本文主要就KIR如何影响异基因造血干细胞移植后GVHD和GVL进行综述。     

非血缘关系HLA全相合造血干细胞移植中供者-受者NK细胞KIR的研究

目的研究自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）的生物学功能及供者抑制性KIR和受者HLA遗传背景在无关供者全相合造血干细胞移植（HSCT）中的作用。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（SSP—PCR）和序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应（SSOP—PCR）的方法，对中国造血干细胞捐献者资料库中提供的51对HLA全相合供、受者进行KIR及HLA分型，患者中急性淋巴细胞白血病ALL18例，慢性粒细胞白血病（CML）15例，急性髓系白血病（AML）10例及其他患者8例。结果51对供者一受者均存在2DL1、2DL2／L3、2DIA、3DL2和3DL3，基因频率均为1，96．7％的个体表达KIR3DL1。供-受者中21．57％KIR完全相同；78．43％KIR不完全相同，而KIR不相同又分为受者KIR基因型包含供者KIR为25．49％，供者KIR基因型包含受者KIR为27．45％。74.62％的供者KIR2DL1无受者C2配体，5．91％的供者KIR2DL2／L3无受者C1配体，19．74％的供者KIR3DLl无受者Bw4配体，54．91％的供者KIR3DL2无受者A3、A11配体。结论KIR独特型和HLA-Ⅰ类抗原是独立遗传的。供者KIR2DL1和KIR3DL2是主要引起NK细胞异源活性的受体，供、受者的KIR／HLA不匹配可能在全相合的无关供者异基因HSCT中起着十分重要的作用。KIR受体-配体模型可以更好地提示HSCT的预后。     

无关供者骨髓移植中HLA—Cw基因与急性GVHD相关性的初探

目的探讨无关供者骨髓，外周血造血干细胞移植（BMT／PBSCT）后的急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发生与供/受者HLA—Cw等位基因匹配程度的相关性。方法选择HLA—A、B、DRB1相同、并业已进行BMT/PBSCT的无关供／受者对，采用PCR—SSP方法对供受者进行HLA—Cw位点的高分辨基因定型，并收集移植后患者的临床资料，对HLA—Cw基因与aGVHD的相关性进行回顾性分析。结果观察4例HLA-A、B、DRBI相同的移植患者，即急淋（ALL）患者1例、慢性髓细胞白血病（CML）患者2例、急性髓细胞白血病（AML）患者1例，HLA—Cw等位基因完全相合、半相合和完全不相合的患者分别为1例、2例和1例．结果1例CML及1例AML患者中出现Ⅲ度aGVHD。结论无关供者骨髓/外周血造血干细胞移植中，供受者HLA—Cw等位基因匹配程度对急性GVHD具有重要影响，并建议对HLA—Cw基因进行常规检测．     

HLA相合亲缘供受者自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因的分析

本研究分析HLA相合亲缘关系供受者自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因分布情况并探讨其KIR相合的可能性。采用Luminex流式技术和测序方法检测HLA—A，-B，-Cw和-DRBl位点；利用序列特异性引物PCR法（PCR．SSP）检测KIR基因。结果表明：在HLA—A，-B，-Cw和-DRBl等8个位点相合的27对亲缘关系供受者样本中检出17个KIR基因，其中KIR3DL3、KIR3DPI、KIR2DL4和KIR3DL2基因存在于所有个体；检出20种KIR基因型和12种单倍体。常见基因型为2，2。频率为29．6％；最常见单倍体是2，频率为53、0％，样本以A型单倍体为主，频率为67．2％；12对（44、4％）供者KIR与受者KIR基因型和单倍体完全相同，13对（48、1％）供者KIR与受者KIR存在1个单倍体相同，2对（7．4％）供者KIR与受者KIR基因型和单倍体完全不同；1对供者KIR2DLl与受者HLA—Cw（Lys80）配基完全相合，17对供者KIR2DL2／2DL3与受者HLA—Cw（Asn80）配基完全相合，5对供者KIR3DLl与受者HLA—B（Bw4）配基完全相合。结论：HLA相合亲缘关系供受者KIR匹配的错配率比较高。     

CD158b基因转染的淋巴细胞对正常和HL-60细胞杀伤活性的实验研究

移植物抗宿主病 (GVHD)是异基因骨髓移植的严重并发症之一。杀伤细胞抑制性受体 (KIR)是目前发现表达于NK、T细胞膜上的一类受体 ,CD15 8分子是KIR家族重要成员 ,主要包括CD15 8a和CD15 8b。当它们与相应的HLA C分子结合后能传导抑制性信号 ,抑制NK、T细胞对靶细胞的杀伤作用[1] 。我们以 3对进行异基因骨髓移植的供、受者为对象 ,通过逆转录病毒的介导 ,将受者淋巴细胞的CD15 8b基因导入供者淋巴细胞 ,观察其对受者淋巴细胞及HL 6 0细胞的杀伤作用是否有影响 ,为解决GVHD提供理论和实验依据。对象和方法1　研究对象白血病患…     

HLA-Cw研究进展

HLA—Cw属于经典的HLA—Ⅰ类基因，HLA—Cw分子与HLA—A、B分子一样具有高度多态性，广泛分布于有核细胞表面，不仅呈递内源性多肽给CD8^ T细胞，诱发特异性细胞杀伤效应，还可作为NK细胞免疫球蛋白样受体(KIR)的配体参与免疫反应。因此，HLA—Cw与疾病相关性研究、在移植免疫、抗病毒、抗肿瘤免疫中的作用日益受到重视。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体对造血干细胞移植的影响

自然杀伤(NK)细胞表面的杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR),可通过与人类白细胞抗原(HLA)相互作用,影响NK细胞活性,进而影响异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的预后.在去T淋巴细胞allo-HSCT中,KIR/HLA错配的异源反应性NK细胞,在抗急性髓细胞白血病(AML)中发挥了重要作用;而未去T淋巴细胞allo-HSCT中,KIR/HLA错配对患者预后影响迥异.研究者提出,在自体造血干细胞移植(auto-HSCT)中也存在移植物抗白血病(GVL)效应,并且患者存在不同KIR对移植预后影响不同.笔者拟就KIR/HLA错配在造血干细胞移植中作用的研究进展进行综述.     

去甲基化处理对NK-92MI细胞杀伤活力的影响

为观察DNA去甲基化处理对NK细胞系NK-92M1细胞抑制性KIR表达及细胞杀伤活力的影响,探讨抑制性k打基因去甲基化与NK细胞功能之间的可能联系,采用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞,采用流式细胞术检测NK-92MI细胞表面KIR3DL1、KIR2DL2／KIR2DL3、KIR2DL1表达及细胞活力,并采用流式细胞仪将NK-92MI细胞分选为KIR3DL1阳性和KIR3DL1阴性细胞群,采用乳酸脱氢酶释放法检测NK-92MI细胞对白血病细胞系K562的杀伤活力。结果显示：应用终浓度为1．0、2．5和5μmol／L的5-氮胞苷作用72小时可以诱导NK-92MI细胞KIR3DL1、KIR2DL2／KIR2DL3、KIR2DL1表达增加,同时NK-92MI对K562细胞的杀伤活力降低,5-氮胞苷在1—5μmol／L范围内不影响NK-92MI的细胞活力,KIR3DL1阳性NK-92MI细胞的杀伤活力较KIR3DL1阴性细胞的杀伤活力低。结论：去甲基化处理通过诱导抑制性KIR表达增加抑制NK-92MI细胞的杀伤活力。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体与肿瘤相关性的研究进展

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)定位于19号染色体白细胞受体复合物(LRC)100～200 kb区域。在功能上KIR分为抑制性与活化性受体,主要表达在自然杀伤(NK)细胞表面。肿瘤细胞可通过下调细胞表面HLA分子的表达,躲避NK细胞的杀伤作用。KIR分子则通过与人类白细胞抗原(HLA)分子结合传导抑制性与活化性信号,调节NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。近年来KIR及其对肿瘤的免疫调节作用逐渐成为研究的热点。本文回顾了KIR与不同肿瘤的相关性,尤其是与我国两广地区高发肿瘤鼻咽癌(NPC)相关性的研究进展。     

FcγRIIIa基因多态性对利妥昔单克隆抗体介导的NK细胞杀伤Raji细胞作用的影响

由于FcγRIIIa的基因多态性可导致NK细胞上Fcγ受体(Fcgamma receptor,FcγR)与抗肿瘤单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)Fc段结合的亲和力不同,NK细胞以抗体依赖细胞介导的细胞毒性(antibody-depend-ent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)对肿瘤细胞的杀伤能力也不同。本研究通过CFSE-PI双荧光染色法检测不同FcγRIIIa基因型的NK细胞对Raji细胞的ADCC效应强度,确定不同FcγRIIIa基因型的NK细胞所介导的AD-CC效应差异。用nest-PCR测定FcγRIIIa表型,用CFSE-PI双荧光染色法染色靶细胞(Raji细胞),用流式细胞术检测NK细胞上CD3-CD56+及FcγRIIIa的表达以及Raji细胞上CD20的表达,计算细胞毒性。结果表明:FcγRIIIa-158V/V基因型的NK细胞ADCC细胞毒性指数为(69.05±2.38)%,FcγRIIIa-158V/F基因型的NK细胞ADCC细胞毒性指数为(39.63±3.86)%,与V/V基因型相比,V/F基因型的NK细胞对Raji细胞的ADCC效应明显较弱,差异具有统计学意义(t=12.950,p=0.000)。结论:FcγRIIIa基因多态性可影响利妥昔单克隆抗体介导的NK细胞对Raji细胞的体外ADCC效应,以FcγRIIIa-158V/V基因型的NK细胞ADCC效应较FcγRIIIa-158V/F基因型的NK细胞ADCC效应强。     

NKG2D在细胞因子诱导的杀伤性细胞（CIK）抗血液肿瘤细胞的作用

本研究探讨细胞因子诱导的杀伤性细胞（CIK）通过NKG2D受体和配体相互作用杀伤血液肿瘤细胞的机制。用含有rhIL-2,抗CD3抗体,IFN-1的培养液培养健康人的外周血单个核细胞（PBMNC）2周后,用流式细胞仪分析CIK细胞的细胞亚群以及细胞表面NK细胞受体,同时检测血液肿瘤细胞株表面NKG2D配体的表达水平。CAM标记靶细胞,用流式细胞仪检测CIK细胞对血液肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明,大部分CIK细胞为CD3＋细胞（97．85±1．95％）,CD3＋CD8＋细胞和CD3＋CD56＋细胞的比率较培养前明显升高（P〈0．001;P=0．033）;约86％的CIK细胞表达NKG2D受体,几乎不表达CDl58a,CDl58b和NCR受体;血液肿瘤细胞株U266、K562和Daudi均表达-定水平的NKG2D配体,CIK细胞对这3种血液肿瘤细胞株均具有较高的杀伤作用,这种杀伤作用可以被抗NKG2D抗体部分抑制（U26652．67±4．63％VS32．67±4．81％。P=0．008;K56271．67±4．91％VS50．33±4．91％,P=0．007;Daudi68．67±5．04I）S52．67±2．60％,P=0．024）。结论：大多数的cIK细胞表达NKG2D受体,NKG2D受体和配体的相互作用可能是CIK细胞杀伤血液肿瘤细胞的作用机制之-。     

几类恶性血液病病人杀伤免疫球蛋白样受体基因型的表达在高危及标危组的差异分析

本研究探讨几类高危和标危恶性血液病患者杀伤免疫球蛋白样受体（KIR）基因表达的异同。54例恶性血液病患者分为高危组（27例）和低危组（27例），其中急性髓系白血病14例、急性淋巴细胞白血病16例、慢性髓系白血病20例、骨髓增生异常综合征3例、急性混合白血病1例。用序列特异性引物PCR分型技术检测了6个激活性KIR基因（KIR2DS1-S5、3DS1）和6个抑制性KIR基因（KIR2DL1-2DL4、3DL1-3DL2）的表达，其中24例患者用流式细胞仪测定了NK细胞、T细胞表面CD158a（KIR2DL1、2DS1）、CD158b（KIR2DL2、2DL3、2DS2、2DS3）、CD158e（KIR3DL1、3DS1）的表达。结果显示，标危组病人激活性KIR基因的阳性率均高于高危组患者，2DS1（P=0.014）、2DS2（P=0.046）、3DS1（P=0．005）的差异有统计学意义；抑制性KIR基因的表达在两组患者之间的差异无统计学意义（P〉0.05）。在髓系恶性血液病病人中标危组病人KIR激活性基因表达率仍然高于高危组患者，其中2DS1（66.7％vs29.4％．P=0.022）、2DS2（57.6％vs17.6％，P=0.013）和2DS3（33.3％vs5.9％。p=0．039）。高危组患者同时表达两种以上激活性KIR基因的比例显著低于标危组（P=0.035）。高危和标危组患者NK细胞和T细胞表面CD158a、CD158b、CD158e的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：几类恶性血液病患者激活性KIR基因表达在高危和标危之间存在差异。     

Unlicensed NK cells target neuroblastoma following anti-GD2 antibody treatment

Survival outcomes for patients with high-risk neuroblastoma (NB) have significantly improved with anti-disialoganglioside GD2 mAb therapy, which promotes NK cell activation through antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity. NK cell activation requires an interaction between inhibitory killer cell immunoglobulin-like receptors (KIRs) and HLA class I ligands. NK cells lacking KIRs that are specific for self HLA are therefore "unlicensed" and hyporesponsive. mAb-treated NB patients lacking HLA class I ligands for their inhibitory KIRs have significantly higher survival rates, suggesting that NK cells expressing KIRs for non-self HLA are mediating tumor control in these individuals. We found that, in the presence of mAb, both licensed and unlicensed NK cells are highly activated in vitro. However, HLA class I expression on NB cell lines selectively inhibited licensed NK cell activity, permitting primarily unlicensed NK cells to mediate antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity. These results indicate that unlicensed NK cells play a key antitumor role in patients undergoing mAb therapy via antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, thus explaining the potent "missing KIR ligand" benefit in patients with NB.     

A human histocompatibility leukocyte antigen (HLA)-G-specific receptor expressed on all natural killer cells

Human natural killer (NK) cells express several killer cell immunoglobulin (Ig)-like receptors (KIRs) that inhibit their cytotoxicity upon recognition of human histocompatibility leukocyte antigen (HLA) class I molecules on target cells. Additional members of the KIR family, including some that deliver activation signals, have unknown ligand specificity and function. One such KIR, denoted KIR2DL4, is structurally divergent from other KIRs in the configuration of its two extracellular Ig domains and of its transmembrane and cytoplasmic domains. Here we show that recombinant soluble KIR2DL4 binds to cells expressing HLA-G but not to cells expressing other HLA class I molecules. Unlike other HLA class I-specific KIRs, which are clonally distributed on NK cells, KIR2DL4 is expressed at the surface of all NK cells. Furthermore, functional transfer of KIR2DL4 into the cell line NK-92 resulted in inhibition of lysis of target cells that express HLA-G, but not target cells that express other class I molecules including HLA-E. Therefore, given that HLA-G expression is restricted to fetal trophoblast cells, KIR2DL4 may provide important signals to maternal NK decidual cells that interact with trophoblast cells at the maternal-fetal interface during pregnancy.     

供受体KIR和HLA-Cw基因与无关供体造血干细胞移植后巨细胞病毒激活的相关性

目的 探讨移植物非去T细胞的无关供体造血干细胞移植(HSCT)后患者巨细胞病毒(CMV)激活与供受体杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)和HLA-Cw基因的相关性.方法 以2003年1月至2008年12月48例行无关供体HSCT患者为研究对象,采用PCR-SSP和PCR-SSOP方法 检测供受体KIR基因单体型和HLA-Cw位点,免疫组化监测这些患者移植后CMV感染情况.结果 供受体HLA-Cw相合33例,不合15例,CMV激活率分别为48.5%和66.7%,两组比较差异无统计学意义(χ~2=1.39,P=0.2375),供受体均属于HLA-C1组的有37例,均属于HLA-C2组11例,CMV激活率分别为64.9%和18.2%,两组比较差异有统计学意义(χ~2=18.13,P＜0.0001).供体为KIR单体型A的移植有26例,供体为KIR单体型B的移植有22例,CMV激活率分别为57.7%和50.0%,两者比较差异无统计学意义(χ~2=0.28,P=0.5941).供体激活性KIR基因小于、等于受体的激活性KIR基因的有34例,CMV激活率为70.6%,供体激活性KIR基因大于受体激活性KIR基因的有14例,CMV激活率为14.3%,两者比较差异有统计学意义(χ~2=12.44,P=0.0004).结论 在无关供体HSCT中受体和供体不同激活性KIR的数量和HLA-Cw位点差异可能与CMV激活存在相关性.     

人NK细胞表面KIR与HLA I类抗原

KIR受体与HLA相互作用在人类遗传、免疫应答及异基因造血干细胞移植等方面发挥着重要作用.KIR能识别HLA I类抗原;KIR与HLA各自能独立遗传,HLA配型不能准确推断KIR表型;KIR的表达主要与其基因型有关,HLA对KIR表达的调节作用微乎其微,KIR的基因型可以决定其表现型.供受者间KIR受体-HLA配体不相合有利于异基因造血干细胞移植,尤其是单倍体相合造血干细胞移植,KIR受体-配体模型可以更好地提示造血干细胞移植的预后.本文就KIR与HLA在造血干细胞移植中的相互作用、KIR与HLA的遗传学基础、NK细胞表面KIR表达与HLA的关系及KIR和HLA在免疫应答中的作用作一综述.     

同种异体NK细胞对AML细胞体外杀伤活性及初步机制

目的探讨同种异体自然杀伤细胞(NK细胞)对急性髓系白血病(AML)细胞株KG1a的杀伤活性及其分子机制。方法以NK敏感的K562细胞株为对照,免疫磁珠法分离5例健康志愿者NK细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定在不同效靶比时NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性,并用流式细胞仪检测KG1a细胞表面人类白细胞抗原I(HLA-I)类分子和NKG2D的配体主要组织相容性复合体(MIC)A/B、ULBP1-3的表达情况。结果效靶比1∶1、5∶1、10∶1、20∶1时NK细胞杀伤K562和KG1a细胞的活性不同,NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性较K562细胞明显减低(P<0.01);K562细胞低表达HLA-I类分子,高表达NKG2D配体MIC可溶性Ⅰ类分子相关蛋白A(MICA)、MICA有亲源性的蛋白(MICB)、ULBP1、ULBP2、ULBP3,而KG1a细胞高表达HLA-I类分子,低表达NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3。结论同种异体NK细胞对AML细胞株KG1a的杀伤率低于K562细胞;其杀伤率不同的分子基础与其分子表面配体表达差异和HLA-I分子表达率不同有关。     

体外不去T细胞单倍体造血干细胞移植后NK细胞免疫球蛋白样受体重建的影响因素

目的探讨造血干细胞移植（HSCT）后早期NK细胞免疫球蛋白样受体（KIR）恢复的影响因素。方法借助三色和四色荧光标记技术，用流式细胞术对24例行体外不去T细胞的HLA不相合HSCT的患者（移植前、＋30天、＋60天）及其供者外周血中NK细胞KIR的表达进行了测定，包括CD158a（KIR2DL1）、CD158b（KIR2DL2）和CD158e（KIR3DL1）；同时用流式细胞术对移植物中CD3、CD4、CD8、CD14、CD34的含量进行了测定。结果发生Ⅱ～Ⅳ度急性移植物抗宿主病（aGVHD）患者在＋30天NK细胞KIR的表达明显低于0～I度aGVHD患者，CD158b[分别为（19．27±9．40）％和（28．92±10．59）％，P=0．018]和CD158aCD158b[分别为（7．30±4．73）％和（14．26±9．71）％，P=0．016]尤为显著。多因素分析表明移植物中CD4^＋T细胞是引起aGVHD的危险因素。进一步的相关分析表明每千克体重输入的CD4^＋T细胞数与移植后早期NK细胞上CD158a、CD158aCD158b和CD158e的表达呈明显的负相关。结论体外不去T细胞的HLA不相合的HSCT中，不仅移植后aGVHD的发生或其相应的治疗措施抑制了移植后早期NK细胞上KIR的恢复；而且移植物中T细胞也直接或间接影响了移植后早期NK细胞上KIR的重建，进而影响了NK细胞功能的恢复。