PTD-OD-HA融合蛋白对bcr/abl阳性细胞凋亡的影响

目的:研究含有蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)、寡聚化结构域(oligomerization domain,OD)和HA标签的PTD-OD-HA融合蛋白对几种bcr/abl阳性细胞株细胞凋亡的影响.方法:将前期制备的PTD-OD-HA蛋白作用于几种bcr/abl阳性细胞后,应用FCM法、DNA 梯度电泳(DNA ladder)和透射电子显微镜检测细胞凋亡,RT-PCR和Western印迹法检测凋亡相关基因bax、bcl-2的mRNA和蛋白水平变化.结果:FCM法检测发现,PTD-OD-HA能促进bcr/abl阳性细胞发生凋亡;DNA ladder实验检测发现,PTD-OD-HA作用后BaF3-P210和K562细胞DNA电泳有梯状条带;透射电子显微镜观察发现,PTD-OD-HA作用后BaF3-P210细胞发生了凋亡;RT-PCR及Western印迹法检测显示,促凋亡基因bax的mRNA及蛋白水平增高,抗凋亡基因bcl-2的mRNA及蛋白水平降低.结论:PTD-OD-HA蛋白可以特异性诱发bcr/abl阳性细胞的凋亡.     

重组蛋白转导域-寡聚化域-血凝素融合蛋白抑制慢性粒细胞白血病BaF3-P210细胞小鼠致瘤能力

目的:探讨重组蛋白转导域-寡聚化域-血凝素(protein transduction domain-oligomerization domain-hemagglutinin,PTD-OD-HA)对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)BaF3-P210细胞小鼠致瘤能力的影响。方法:将BaF3-P210细胞和经40μmol/L PTD-OD-HA处理48h的BaF3-P210细胞分别经尾静脉注射入BALB/c小鼠体内,观察小鼠一般状况以及生存时间,计数外周血白细胞,外周血和骨髓涂片进行Wright-Giemsa染色,肝、脾和肺等各主要脏器组织进行HE染色,蛋白质印迹法检测小鼠骨髓细胞bcr/abl蛋白的表达。结果:BaF3-P210细胞组和经PTD-OD-HA处理的BaF3-P210细胞组小鼠CML发病率分别为90%(9/10)和80%(8/10),外周血白细胞计数分别为(44.3±4.8)×109/L和(20.6±3.2)×109/L(P<0.05),骨髓细胞中bcr/abl癌蛋白表达量分别为5.13±0.46和1.32±0.29(P<0.05),平均生存期分别为(101.3±6.2)d和(185.4±8.7)d(P<0.05)。Wright-Giemsa染色可见,经PTD-OD-HA处理的BaF3-P210细胞组小鼠骨髓、肝脏和脾脏中的白血病细胞浸润程度比BaF3-P210细胞组下降。结论:经PTD-OD-HA处理后的BaF3-P210细胞在BALB/c小鼠体内的致白血病潜能明显受到抑制。     

X射线诱导γH2AX焦点形成的定量分析及其致DNA双链断裂的动态变化

目的 比较DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs^+/+)和DNA-PKcs^-/-小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) X射线诱导γH2AX焦点形成的定量分析,并对鼻咽癌SUNE-1细胞进行X射线致DNA DSB动态变化。方法 采用蛋白印迹检测DNA-PKcs蛋白表达情况,细胞免疫荧光检测X射线5 Gy诱导的γH2AX焦点形成,通过ImageJ软件分析γH2AX焦点形成数量的差异。结果 DNA-PKcs在DNA-PKcs^-/-和DNA-PKcs^+/+ MEF细胞中分别表达缺失和正常。应用γH2AX焦点/细胞和γH2AX焦点/mm²分析方法动态分析X射线诱导的DNA-PKcs^+/+、DNA-PKcs^-/-MEF细胞和SUNE-1细胞DSB形成的总体趋势一致;照后 0.5~1.0 h大量γH2AX焦点形成,DNA-PKcs^+/+ MEF细胞于照后6.0 h完成修复,DNA-PKcs^-/-MEF和SUNE-1细胞X射线后于照后24.0 h完成修复。γH2AX焦点/细胞的峰值出现在照后1.0 h,γH2AX焦点/mm²的峰值则出现在照后0.5 h。对于DNA-PKcs^+/+和DNA-PKcs^-/-MEF细胞,γH2AX焦点/细胞在照后0.5、1.0、3.0、6.0、12.0 h的不同,而γH2AX焦点/mm²在照后3.0、6.0、12.0 h不同。结论 利用细胞免疫荧光动态检测照后致γH2AX焦点/细胞或γH2AX焦点/mm²的分析方法为动态定量研究DSB损伤及修复提供了新的思路。     

甲基硝基亚硝基胍诱导CHL细胞中γH2AX焦点的形成

背景与目的： 研究甲基硝基亚硝基胍(MNNG)是否可诱导中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)中γH2AX焦点的形成,以及是否有细胞系依赖性。 材料与方法： 应用MTT试验检测不同浓度MNNG对鼠CHL细胞的生存率的影响;应用免疫荧光实验检测细胞中γH2AX焦点的形成。 结果： MTT检测表明MNNG对CHL细胞的细胞毒性有明显的时间和剂量效应;免疫荧光实验发现1 mg/L MNNG处理2 h、8 h、24 h的CHL细胞中含有γH2AX焦点的细胞比例及焦点数均较对照组显著增加(P<0.05),含有超过30个γH2AX焦点的细胞比例分别达到56％,92％和91％。 结论： MNNG可以诱导CHL细胞中γH2AX焦点的形成,并且有明显的时间效应。     

组蛋白H2AX与DNA损伤的分子感应

DNA双链断裂是电离辐射对DNA的重要损伤类型,与细胞死亡、基因突变甚至细胞恶性转化有密切联系。DNA发生双链断裂后最早反应之一是位于断裂点附近的组蛋白H2AX的C末端丝氨酸残基发生磷酸化,形成γ-H2AX。磷酸化的γ-H2AX快速转导DNA损伤信号,导致下游分子磷酸化的激活,引发一系列的生物级联反应和和细胞学反应。γ-H2AX是迄今所研究的最重要的DNA损伤感应分子。     

组蛋白H2AX磷酸化与肿瘤放疗敏感性关系的研究进展

目的:总结国内外关于组蛋白H2AX磷酸化与肿瘤放疗敏感性关系的研究现状.方法:应用检索Medline及维普期刊全文数据库检索系统,以"组蛋白、H2AX、磷酸化、DNA修复、肿瘤、放疗和敏感性"等为关键词,检索2000-01～2007-08相关组蛋白H2AX与放疗敏感性方面的文献.资料选择:对资料进行初选,组蛋白H2AX的生物学功能与肿瘤放疗敏感性的关系等方面的文献.纳入标准: 1)关于组蛋白H2AX的生物学功能的研究.2)关于组蛋白H2AX磷酸化可以指示放疗敏感性的研究.3)关于组蛋白H2AX磷酸化与提高放疗敏感性的研究.资料提炼:粗选有百余篇关于组蛋白H2AX方面的文章,根据纳入标准,精选50篇文献,最后纳入分析24篇文献.结果:组蛋白H2AX在DNA发生双链断裂损伤时发生磷酸化,磷酸化的H2AX参与DNA损伤修复和维持基因组稳定性;由于γ-H2AX的数量与DNA损伤的数量存在一一对应的关系,因此,γ-H2AX可以作为低剂量电离辐射后衡量肿瘤放疗敏感性的指示器;通过抑制H2AX上游的激酶阻止H2AX被磷酸化,或直接抑制γ-H2AX在DNA修复进程中的功能,或应用潜在的电离辐射致敏荆,可以延长电离辐射后γ-H2AX的持续时间,增加未被修复的DNA损伤的数量.从而促进肿瘤放疗的有效性.结论:组蛋白H2AX可以作为肿瘤放疗敏感性潜在的靶分子,为提高肿瘤放射治疗疗效提供了新途径.     

丝裂霉素对体外胃癌细胞DNA损伤和增殖的影响

目的探讨丝裂霉素对体外胃癌细胞DNA损伤和增殖的影响。方法选用不同浓度丝裂霉素处理体外培养的胃癌细胞SGC-7901,利用免疫荧光和Western blot技术,分别检测γH2AX的焦点形成和蛋白水平变化;使用MTT法检测SGC-7901细胞的增殖情况。结果丝裂霉素的作用浓度和作用时间存在交互效应,除400 μg/ml外,平均γH2AX焦点数和焦点细胞率呈逐渐增加趋势（P<0.05）;400 μg/ml时,6 h组平均γH2AX焦点数和焦点细胞率低于4 h组,差异有统计学意义（P<0.05）。随丝裂霉素作用时间延长,γH2AX蛋白水平呈先升后降趋势,差异有统计学意义（P<0.05）。MTT结果显示,丝裂霉素对SGC-7901细胞的增殖有明显抑制作用（P<0.05）。结论γH2AX可敏感反应丝裂霉素对胃癌细胞DNA的损伤,丝裂霉素对体外胃癌细胞增殖抑制明显。     

DNA糖基化酶1对幽门螺杆菌致胃上皮细胞DNA损伤的保护作用

目的：探讨氧化性DNA损伤修复关键酶DNA糖基化酶1（OGG1）在幽门螺杆菌（HP）感染致胃上皮细胞（GES-1） DNA损伤中的作用。方法：实验分为对照组、HP感染组、OGG1干扰组、HP感染组+OGG1干扰组。采用RNA干扰技术沉默GES-1细胞OGG1表达,24 h后进行HP感染,于感染后24 h和48 h分别采用CCK-8试验和LDH释放试验检测细胞活力和细胞坏死情况;感染48 h后分别采用彗星试验和γH2AX焦点形成试验检测细胞DNA损伤;采用TUNEL试验和PARP表达检测细胞凋亡情况。结果：与对照组相比,HP感染组和单纯OGG1干扰组的细胞活力、LDH水平、DNA损伤情况、γH2AX焦点形成、TUNEL阳性细胞数目及活性PARP表达水平均无显著变化（P均 > 0.05）。而OGG1干扰+HP感染则引起胃上皮细胞活力下降、LDH释放增加、DNA损伤加重、γH2AX焦点形成增多、TUNEL阳性细胞增多及活性PARP表达升高,与对照组及HP感染组相比,差异均有统计学意义（P < 0.05或0.01）。结论：OGG1在HP感染致胃上皮细胞氧化性DNA损伤中发挥了保护作用,为防护HP感染相关的胃部疾病提供了新的策略和方向。     

基因组的监视器：组蛋白H2AX

组蛋白H2A变体H2AX在离其肽链C端4个氨基酸处存在一个高度保守的丝氨酸残基（Ser139），DNA双链断裂（DSB）一经产生，该残基便能迅速被磷酸化，形成γH2AX。γH2AX识别抗体是探测DSB存在的金标准；H2AX在细胞周期关卡中起重要作用，H2AX/细胞不能正确停止在G2期并进入有丝分裂期；H2AX的丧失不影响V(D)J重排，但有效的类型转换重组需要H2AX；H2AX还在细胞分裂中起重要作用。总之，H2AX是基因组的监视器，DNA损伤一旦发生，H2AX的磷酸化即会被启动，然后招募更多的修复因子共同修复DNA损伤；H2AX在抑制基因组不稳定和癌症放疗疗效预测方面具有一定的作用。     

EGFR酪氨酸激酶区域突变对NSCLC放疗敏感性影响的初步研究

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶区域突变能否影响放射治疗疗效。方法:选取野生型EGFR和突变型EGFR细胞株A549和H1975,分别进行不同剂量的X射线照射后,用克隆细胞计数的方法计算细胞生存分数(SF),并采用SPSS 13.0软件按线性二次模型拟合细胞存活曲线,计算α/β值。免疫荧光技术观察磷酸化H2AX(γH2AX)焦点数的变化,推测DNA双链断裂后修复动力学。结果:H1975及A549细胞SF2值分别为0.62和0.89,α/β分别为4.00和0.19。H1975细胞SF2较A549小,差异有统计学意义,P<0.05;但α/β值较大,差异有统计学意义,P<0.05。2种细胞株在照射4Gy后15min开始出现γH2AX焦点数增多,但是H1975细胞株较A549多,于3h时保持约70%,24h时仍有约25%,而A549细胞株在照射后3h消失接近90%。结论:NSCLCEGFR酪氨酸激酶区域突变能增加放射敏感性,可成为预测放射治疗疗效的一个指标。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。