致倦库蚊幼虫中枢神经系统的乙酰胆碱酯酶定位观察

目的：观察致倦库蚊幼虫中枢神经系统结构.方法：用硫代胆碱整体染色法定位乙酰胆碱酯酶.结果：致倦库蚊幼虫中枢神经系统是由脑和位于消化道腹面的腹神经索构成.脑较发达,包括前脑、中脑和后脑;腹神经索包括食道下神经节,3对胸神经节和8对腹神经节.结论：乙酰胆碱酯酶组化定位法可清楚显示致倦库蚊幼虫的神经系统结构.     

白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列测定与分析

目的：PCRI地扩增与测定白纹伊蚊和致倦库蚊的细胞内共生菌Wolbachia 16S rRNA序列，分析其种系发生关系及传播方式。方法：从单只雌蚊中提取DNA，PCR法扩增16S rRNA序列，扩增产物进行克隆及测序。结果：从白纹伊蚊和致倦库蚊分别扩增出Wolbachia 16S rRNA序列，并克隆入pGEM-T载体，测序证明两序列长度分别为897bp.结论：成功克隆了白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列，测序和同源性分析表明，它们之间的同源性为99．9％，提示Wolbachia在白纹伊蚊和致倦库蚊可能存在水平传播的方式。     

致倦库蚊与淡色库蚊的核型比较

本文采用气干法对致倦库蚊和淡色库蚊的核型进行了研究。结果表明,这两种库蚊的染色体数目均为2n=6,但染色体结构却存有一定的差别,显示出其种属的特异性。按染色体从小到大的次序将3对染色体分别编为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号。致倦库蚊第Ⅰ号染色体为正中着丝粒染色体(M),第1号为中着丝粒染色体(m),第Ⅲ号为正中着丝粒染色体(M);淡色库蚊第Ⅰ号染色体为亚中着丝粒染色体(sm),第Ⅱ号与第Ⅲ号均为正中着丝粒染色体(M)。     

白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列测定与分析

【目的】PCR法扩增与测定白纹伊蚊和致倦库蚊的细胞内共生菌 Wolbachia16SrRNA序列 ,分析其种系发生关系及传播方式。【方法】从单只雌蚊中提取DNA ,PCR法扩增 16SrRNA序列 ,扩增产物进行克隆及测序。【结果】从白纹伊蚊和致倦库蚊分别扩增出Wolbachia 16SrRNA序列 ,并克隆入 pGEM T载体 ,测序证明两序列长度分别为 897bp。【结论】成功克隆了白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16SrRNA序列。测序和同源性分析表明 ,它们之间的同源性为 99 9%,提示Wolbachia在白纹伊蚊和致倦库蚊可能存在水平传播的方式。     

致倦库蚊发育各期卵、幼虫及蛹匀浆中的游离氨基酸

目的：探讨致倦库蚊不同发育期虫体匀浆游离氨基酸的动态。方法：应用高效液相色谱仪对致倦库蚊的虫卵和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期幼虫及雌、雄蛹等虫体匀浆中的游离氨基酸进行检测。结果：1．虫卵随发育时间的不同,其氨基酸的种类发生明显变化,色氨酸在发育8h后才出现,谷氨酸逐渐减少,而蛋氨酸、赖氨酸等逐渐增多,但总量变化不显著。2．幼虫随着虫龄的增加,虫体氨基酸含量明显增多,Ⅳ期幼虫的氨基酸含量明显高于其他各期幼虫。蛋氨酸含量最高,鸟氨酸、天门冬氨酸等次之。天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和苏氨酸、精氨酸等在Ⅳ期幼虫体内的氨基酸含量达到最高峰。3．蛹体内的氨基酸总量与蚊蛹性别关系不明显,但在雌、雄蛹间天门冬氨酸、苯丙氨酸、鸟氨酸、组胺酸等氨基酸的含量却有显著性差异。结论：不同发育期致倦库蚊匀浆内游离氨基酸的种类及含量均有差异。     

长沙市2013年致倦库蚊抗药性测定报告

【目的】了解长沙市致倦库蚊对主要化学杀虫药剂的抗药性水平,以指导科学合理地使用杀虫剂。【方法】选择常用拟除虫菊酯类、敌敌畏等五种杀虫剂,按幼虫浸渍法测定受试致倦库蚊半数致死量（LC50）,并与2004年、2010年的测定结果进行比较。【结果】2013年致倦库蚊的抗药性与2010年相比,五种药物中四种有所降低,与2004年比有三种有所降低。【结论】长沙市在蚊虫防治中应减少溴氰菊酯的使用,加强整体规划,延缓蚊虫抗药性的发展。     

大链壶菌感染对致倦库蚊幼虫生长发育的影响

目的：研究大链壶菌感染对致倦库蚊幼虫生长发育的影响。方法：分别观察被感染后0,24,48h蚊幼虫的体重、身长、龄期和死亡率,与同时收集的对照组相比。结果：大链壶菌感染初期对蚊幼虫的体重、龄期、死亡率的影响不明显;而被感染24,48h后,蚊幼虫体重、身长明显低于对照组,龄期发育延滞,死亡率显著升高;受感染的Ⅳ龄蚊幼虫不能成蛹并最终全部死亡。结论：大链壶菌感染对蚊幼虫的生长发育有明显的影响。     

三带喙库蚊及致倦库蚊的实验室养殖观察

目的:在建立三带喙库蚊及致倦库蚊实验室种群的基础上,进一步对其进行养殖及生物学特性观察。方法:模拟自然环境,人工控制温湿度和光照,幼虫饲料为牛肝馒头粉,成蚊供血动物为小白鼠。结果:在室温24- 27℃,昼夜温差<2℃,相对湿度70％-80％及人工光照12-14小时的条件下。于2003年8月至2005年12月三带喙库蚊稳定繁殖了42个世代;2003年9月至2005年5月致倦库蚊稳定繁殖了30个世代。结论:稳定繁殖三带喙库蚊及致倦库蚊成功的经验主要在于人工模拟自然环境,以提高成活率、交配率和吸血率。     

致倦库蚊防御素基因的克隆与生物信息学分析

目的:获取致倦库蚊(贵阳株)防御素基因CxDefensin全长编码序列.方法:采用RT-PCR方法扩增致倦库蚊(贵阳株)CxDefensin开放阅读框(ORF)序列,并通过生物信息学方法分析其核苷酸和蛋白质序列.结果:CxDefensin ORF序列全长300 bp,编码99个氨基酸,包含1个内含子,蛋白质分子量是10.58 kDa,等电点为6.52.CxDefensi蛋白与其他昆虫的defensin蛋白具有同源性.结论:所获致倦库蚊(贵阳株)防御素基因CxDefensin归属昆虫防御素基因家族,为昆虫β型防御素.     

人hole基因的克隆和序列分析

目的 克隆人的hole基因,并进行生物信息学分析.方法 以胚胎心脏cDNA文库为模板,进行PCR扩增得到hole基因的ORF.并进行亚克隆入PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,用Xho1进行酶切和测序鉴定阳性克隆.利用Internet和GeneBank数据库对测序结果正确的hole基因进行生物信息学分析. 结果克隆了hole基因,测序结果正确;生物信息学分析表明, hole基因开放读码为960 bp,编码319个氨基酸;同源性分析表明,人的hole与鼠、鸡hole蛋白具有高度同源性.多种组织的半定量RT-PCR研究表明,该基因在心脏、肝脏、肺、脑、肾脏、脾脏、胰脏均有表达,其心脏表达最高. 结论成功克隆hole基因,对其功能进行了初步预测,为进一步的功能研究打下基础.     

爱泼斯坦-巴尔病毒潜伏期膜蛋白2A cDNA的克隆及序列分析

目的：克隆爱泼斯坦－巴尔病毒（EBV）潜伏期膜蛋白2A（LMP2A）基因，研究其基因工程疫苗，方法：用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）扩增出EBV B95．8株LMP2A全部编码蛋白的基因，并克隆至载体pGEM-T中，通过α－插入失活，PCR及EcoRⅠ、SmaⅠ限制性内切酶双酶切等鉴定重组质粒，采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸 序列。结果：克隆出LMP2A第1个外显子到第8个外显子的全部编码蛋白的cDNA，测序结果与EB病毒B95．8原型株LMP2AcDNA作同源比较，完全一致，结论：本实验克隆了LMP2A基因的全部编码蛋白的cDNA全长片段。     

恶性疟原虫子孢子表面蛋白2基因的克隆与序列分析

目的：克隆恶性疟原虫海南株(FCC1／HN)子孢子表面蛋白2(PfSSP2)基因，并进行序列分析。方法：根据PfSSP2基因已知序列设计合成一对引物，用PCR技术从FCC1／HN株基因组DNA中扩增出PfSSP2基因，并克隆入pMD-18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测序，用DNAstar软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。结果：PCR扩增得到特异的FCC1／HN株PfSSP2基因序列，酶切及PCR鉴定获得了正确的pT-PfSSP2重组质粒。测序表明，所克隆的PfSSP2基因大小为1680bp，编码559个氨基酸残基。序列分析表明，我国恶性疟原虫FCC1／HN株与国外的3D7、DD2、FCR3、HB3A、K1、Thai814、Thai838、Thai842、Thai947及7G8株PfSSP2的氨基酸序列在33个位点存在氨基酸替代，1处氨基酸序列增加；各株间PfSSP2的氨基酸序列同源性都在95.7％以上。结论：克隆了恶性疟原虫FCC1／HN株PfSSP2基因。序列测定及同源性分析表明，恶性疟原虫不同分离株间有高度的同源性。     

Echinococcus granulosus钙结合蛋白基因的克隆和序列分析

目的：获得细粒棘球蚴Calcium-binding protein(CaBPs)基因序列资料，进行序列分析，为包虫病免疫预防研究奠定基础。方法：从包囊内获取细粒棘球蚴原头蚴（protoscolices)，提取RNA，逆转录成cDNA，用特异引物扩增CaBPs基因；并将其克隆到T载体后进行序列测定和分析。然后登录Cene/Bank数据库。结果：以cDNA为模板获得3个核苷酸长度不同的基因，分别是CaBP1为914bp,CaBP2为1095bp,CaBP3为1039bp。同源性比较结果表明：来自新疆羊源CaBPs基因序列和巴西（Brazil)羊源基因CaBPs同源性为90％以上；从cDNA获得的3个CaBPs基因序列的比较分析说明钙结合蛋白可能存在一个家族，有不同的成员组成。结论：CaBPs在E.granulosus虫体发育过程中具有十分重要的功能，到目前为止其机理尚不完全明了，CaBPs基因的获得为进一步研究其结构和功能，以及对包虫病的防治具有重要作用。     

人T-bet基因的克隆及序列分析

目的：克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA，并进行豁定和测序分析，为从转录水平研究Th1／Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法：采用RT-PCR方法，从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA；连接至pGEM-Teasy载体，导入大肠杆菌DH5α并选择阳性克隆；应用M13F／R通用引物进行双向反应测序，以作序列鉴定。结果：扩增得到的T-bet基因cDNA全长1670 bp，包括编码区1607 bp，编码530个氨摹酸残基，与Genbank中发表的序列完全一致。结论：获得了人T-bet基网的克隆，为进一步研究其生物学功能构建了基础平台，为寻找多种免疫性疾病的有效治疗提供新思路。     

人幽门螺杆菌HspA亚单位的基因克隆及序列分析

目的:获取幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A( HspA)亚单位基因并进行核苷酸序列分析和同源性比较.方法:获取幽门螺杆菌的染色体DNA,PCR技术扩增获取HspA基因,将其定向插入pGEX-4T-1原核表达载体中进行核苷酸序列分析.结果:经酶切鉴定及基因序列证实Hp HspA基因克隆成功,DNA序列与Genbank 公布的序列比较有13个碱基存在差异,同源性为96%;由碱基序列推定编码的氨基酸残基序列没有发生变异,同源性为100%.结论:成功地将Hp HspA基因克隆到了pGEX 4T-1原核表达载体,为HspA的表达和研究奠定了实验基础.     

人CD4分子cDNA的克隆及序列分析

目的：克隆人的CD4基因，为进一步研究病毒感染CD4^ 细胞的分子机制奠定基础。方法：用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出SupT1细胞株的编码CD4蛋白分子全长的基因，克隆至质粒pAS2—1中，并转入大肠杆菌DF15α。通过Amp抗性筛选、PCR及限制性内切酶EcoRⅠ，BamH Ⅰ双酶切等鉴定重组质粒并测定其中编码CD4片段的核苷酸序列。结果：克隆出编码CD4蛋白分子全长的cDNA，测序结果与文献报道进行同源比较，序列基本一致。结论：本实验成功克隆了编码人CD4蛋白全长的cDNA片段。     

华支睾吸虫SPE16.9基因克隆和序列分析

目的 通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因,为进一步研究其功能及其应用奠定基础。方法 对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选,通过Blastn程序进行序列比对,识别华支睾吸虫新基因,并应用软件程序对其进行分析。结果 筛选到一个475bp的核酸序列,编码153aa,理论分子量为16．9kDa,理论等电点（pI）为6．19,疏水氨基酸（AILFWV）占36％,带电荷氨基酸（RKHYCDE）占30％,极性氨基酸（NCQSTY）占28％．酸性氨基酸（DE）和碱性氨基酸（KR）各占9％。经BLAST分析,该蛋白属于ML域（MD-2-related lipid-reeognition）家族．是一个新的分泌蛋白基因。结论 发现华支睾吸虫分泌蛋白基因,可能有作为诊断候选抗原的价值。     

中国长白山乌苏里蝮蛇降纤酶基因克隆和结构分析

目的 :克隆乌苏里蝮蛇 ( Gloydius ussuriensis)降纤酶 ( Difibrase)基因 ,为用基因工程方法生产降纤酶打下基础。方法 :从乌苏里蝮蛇毒腺制备总 RNA,经 RT- PCR扩增、克隆和顺序测定。结果 :降纤酶 c DNA开框读码序列全长 70 2个核苷酸 ,编码 2 34个氨基酸 ,推测其活性中心为His41、Asp86和 Ser180 ,含有 6对二硫键。结论 :确定乌苏里蝮蛇降纤酶 c DNA顺序 ,推导出其氨基酸顺序和活性中心结构。