靶向survivin的siRNA诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 采用RNA干扰技术（siRNA）阻断survivin基因的表达,观察其抑制胰腺癌细胞增殖及诱导胰腺癌细胞凋亡的作用。方法 构建靶向survivin的siRNA质粒表达载体,采用Lipofectamine^TM2000转染胰腺癌细胞PC-2,采用半定量RT-PCR、免疫组化技术检测转染前后PC-2细胞survivin基因表达的变化;采用MTT法检测对PC-2细胞增殖的抑制作用：采用流式细胞术检测其诱导PC-2细胞凋亡的作用。结果 靶向survivin的序列特异性的siRNA可以高效地抑制PC-2细胞survivin基因表达,在mRNA水平其表达抑制率为81．25％,在蛋白质水平其表达抑制率为74．24％。转染靶向survivin的siRNA质粒表达载体可以显著抑制PC-2细胞的增殖,细胞接种24、48h后其增殖抑制率分别为28．00％和33.38％：转染后24、48h可以诱导8．46％、7．53％的细胞凋亡。结论 所构建的靶向survivin的siRNA质粒表达载体可以有效地阻断PC-2细胞survivin基因表达。阻断survivin基因表达可以显著地抑制PC-2细胞的增殖并在一定程度上诱导其凋亡,靶向survivin的siRNA在胰腺癌的基因治疗中具有一定的价值。     

survivin 靶向siRNA 对膀胱癌细胞增殖和凋亡作用的体外研究

目的 观察靶向survivin的siRNA对膀胱癌细胞T-24增殖和凋亡的影响.方法 使用lipofectamineTM2000将靶向survivin的siRNA真核表达载体转染至膀胱癌细胞T-24,半定量RT-PCR检测T-24细胞survivin基因表达的变化;MTT法检测对T-24细胞增殖的影响;膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术检测诱导凋亡的影响.结果 靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效率抑制T-24细胞survivin基因在基因水平的表达,mRNA抑制率为61.73%;细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为32.42%和37.48%;转染24h后可以诱导细胞凋亡16.76%.结论 利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制T-24细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在膀胱癌的基因治疗中具有一定价值.     

靶向survivin基因siRNA对喉癌细胞增殖、凋亡的影响

目的观察靶向survivin基因的siRNA对喉癌细胞Hep-2增殖和凋亡的影响,为喉癌的基因治疗提供有效靶点及技术。方法使用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将靶向survivin基因的siRNA转染至喉癌细胞株Hep-2;MTT[3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测对喉癌细胞Hep-2增殖的影响;RT-PCR检测喉癌细胞Hep-2survivin基因mRNA表达的变化;Western Blot检测survivin基因蛋白表达;流式细胞技术检测喉癌细胞Hep-2凋亡情况。结果各浓度survivin-siRNA转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组（〈0.05）,survivinmRNA和蛋白表达有不同程度减弱,并且有明显的浓度依赖性,随着浓度的上升表达率下降。结论利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制喉癌细胞Hep-2细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,不同浓度survivin-siRNA转染能下调survivinmRNA和蛋白表达,靶向survivin基因的RNA干扰技术在喉癌的基因治疗中具有一定价值。     

抑制survivin表达对前列腺癌细胞pc-3凋亡的影响

[目的]研究survivin与前列腺癌的关系,探讨survivin对前列腺癌细胞pc-3凋亡的影响及其机制。 [方法]运用RNA干扰技术阻断survivin在前列腺癌细胞pc-3中的表达,采用流式细胞计数等方法检测survivin 被阻断后,对前列腺癌细胞pc-3凋亡的影响。[结果]阻断survivin在前列腺癌细胞pc-3中的表达后,能够引起 pc-3细胞的凋亡,其机制可能是由于活化了凋亡通路的caspase-3。[结论]Survivin可以做为治疗前列腺癌的一个潜在的基因靶点。     

靶向survivin的siRNA并氟尿嘧啶转染对HepG2增殖影响

目的研究靶向survivin的小分子干扰RNA(siRNA)和氟尿嘧啶(5-FU)联用对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用及对凋亡的影响。方法将HepG2细胞分为空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组、siRNA转染组及5-FU+siRNA转染组。转染采用脂质体法。采用RT-PCR法分别检测HepG2细胞survivin mRNA转录水平;MTT法分别检测靶向survivin的siRNA和5-FU对HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况。结果 siRNA转染组、5-FU+siRNA转染组survivin mRNA表达较空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组明显下降(F=326.78,q=5.78～7.12,P<0.05)。5-FU+siRNA转染组细胞增殖抑制率为51.58%±1.35%,与其他各组相比明显增高(F=1 293.24,q=15.31～82.26,P<0.01)。5-FU+siRNA转染组与其他各组相比细胞凋亡率明显增高(F=13 568.68,q=110.47～327.16,P<0.01)。结论将靶向survivin的siRNA和5-FU联合应用可以显著抑制肝癌细胞survivin基因表达,并协同抑制HepG2细胞增殖,共同发挥诱导细胞凋亡作用。     

靶向survivin基因的siRNA对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的 向大肠癌细胞Lovo中导入靶向survivin基因的siRNA,研究其对Lovo细胞生物学效应影响.方法 设计2条特异性靶向survivin基因的siRNA,体外转录法合成,通过脂质体导入Lovo细胞并检测转染后细胞内survivin基因表达水平及凋亡、增殖情况.结果 细胞内survivin mRNA表达水平降低,细胞凋亡率升高,增殖能力减弱.结论 所设计的靶向survivln基因的siRNA能有效降低目的 基因的mRNA表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞生长.为大肠癌基因治疗的可行性提供了有力的证据.     

抑制survivin基因表达对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究survivin基因与肺腺癌的关系,探讨survivin对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法合成抑制survivin基因的siRNA,通过脂质体转染到肺腺癌A549细胞中,荧光倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测各组细胞增殖和凋亡指数,Western blot检测survivin编码表达的蛋白,RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果抑制survivin在肺腺癌A549细胞中的表达后,能够抑制A549细胞增殖,诱导细胞的凋亡,survivin基因编码表达的蛋白明显减少。结论应用RNAi抑制survivin基因,可以抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。survivin能作为治疗肺腺癌的一个潜在的基因靶点。     

RNA干扰技术抑制EC-109细胞survivin基因表达及其促凋亡研究

目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对survivin基因的siRNA,抑制survivin基因的表达并诱导食管癌细胞系EC-109细胞的凋亡. 方法:构建针对survivin的siRNA表达质粒,转染至EC-109细胞,荧光显微镜判断转染效率,蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及基因转录水平的变化,并在不同时间点收集转染细胞,利用流式细胞术及基因组DNA凋亡检测试剂盒,观察siRNA抑制survivin基因表达后诱导细胞凋亡的情况. 结果:荧光显微镜结果表明,重组质粒转染效率达46.70%. 半定量RT-PCR检测到pSIREN/S质粒在EC-109细胞内对survivin基因的转录抑制率为74.04%;蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pSIREN/S的EC-109细胞survivin蛋白表达量仅为正常组的41.64%,而对照质粒pSIREN/CN对survivin基因的蛋白表达及转录均没有抑制作用. 经pSIREN/S转染的EC-109细胞基因组DNA出现明显的DNA ladder,流式细胞仪分析结果也显示凋亡细胞为60.78%. 结论:survivin特异性siRNA可明显抑制survivin基因的转录和表达,并能有效地诱导EC-109细胞的凋亡,为下一步在体内利用pSIREN/S重组质粒沉寂survivin基因,促肿瘤细胞的凋亡提供实验基础.     

siRNA干扰cerbB1对人脑膜瘤细胞基因表达及增殖抑制的影响

目的：探讨靶向cerbB1的siRNA对脑膜瘤细胞增殖以及EGFR和survivin表达的影响．方法：设计并合成针对cerbB1的siRNA-1,将其转染至培养的人脑膜瘤细胞,利用流式细胞仪和MTr法检测其对脑膜瘤细胞增殖和凋亡的影响,并采用Western Blot和RT-PCR法检测干扰后脑膜瘤细胞EG-FR和survivin mRNA和蛋白表达变化．结果：靶向cerbB1的siRNA-1显著抑制了培养脑膜瘤细胞增殖（P〈0．05）,增加了siRNA-1组早期、晚期凋亡细胞和坏死细胞（P〈0．01）．Western Blot和RT-PCR法结果显示,siRNA-1组脑膜瘤细胞EGFR和survivin mRNA和蛋白表达明显降低（P〈0．01）．结论：cerbB1特异性siRNA可明显下调脑膜瘤细胞cerbB1和survivin基因表达,并能有效抑制脑膜瘤细胞增殖,诱导其凋亡,为脑膜瘤的靶向治疗提供实验基础．     

凋亡抑制因子Survivin siRNA荧光表达载体的构建

目的构建靶向survivin siRNA真核表达质粒载体,通过RNA干扰技术阻断survivin基因的表达。方法针对目的基因survivin序列设计双链DNA（dsDNA）,采用DNA重组技术与载体连接,转化感受态细胞经诱导表达筛选阳性克隆子。结果重组质粒经酶切、测序鉴定,证实插入载体目的基因片段大小与插入方向正确,且转染至肿瘤细胞,可见其发出绿色荧光,转染率为70％-80％。结论靶向survivin—siRNA真核表达载体pGU6／GFP／Neo／survivin—siRNA可用于转染肿瘤细胞、阻断survivin基因表达并诱导细胞凋亡的RNAi实验研究,为肿瘤的基因治疗奠定一定的基础。     

Knockdown of Survivin Expression by siRNA Induces Apoptosis of Hepatocellular Carcinoma Cells

Survivin, a newly identified member of lAP family, is a powerful apoptosis-inhibiting factor. It is expressed in embryonic tissues as well as in the majority of human cancers, but not in most normal adult tissues. The cancer-specific expression of survivin makes it a potential target for cancer treatment. A survivin-specific small inhibitory RNA （siRNA） was introduced into hepatocellular carcinoma cells to investigate its effect on cancer cell apoptosis, growth and sensitivity to chemotherapeutic drugs. It was found that expressions of survivin protein and proliferation index （PI） in siRNA groups were significantly decreased, the apoptosis index （AI） of siRNA groups was significantly higher than those of others groups, and the growth inhibition rate （GIR） of chemotherapeutic drugs in siRNA groups were significantly higher than those of other groups. Our study suggests that the expression of survivin may be significantly decreased in hepG2 cell after siRNA transfection. siRNA targeting survivin could induce cell apoptosis, inhibit cell proliferation and sensitize hepatocarcinoma cells to chemotherapy. Our findings provide preliminary evidence for the therapeutic use of survivin-targeted RNA interference for human tumors that express high levels of this molecule.     

宫颈癌组织中survivin基因表达的临床意义

目的:探讨宫颈癌组织中survivin基因表达的特征及其临床意义.方法:应用RT-PCR及免疫组化方法检测survivin基因在64例宫颈癌组织、17例不典型增生(CIN)及14例正常宫颈组织中的表达,分析其与临床病理特征的相关性.结果:RT-PCR显示宫颈癌组织中survivin基因的mRNA水平显著高于正常宫颈组织,并且随宫颈癌的病理分级增高而增高(P＜0.05).SP法显示宫颈癌组织中survivin基因的表达较正常组织及CIN均明显升高(P＜0.05);且与宫颈癌的病理分级及临床分期有关.结论:survivin基因在宫颈癌中异常表达与宫颈癌的发生密切相关,可以作为反映宫颈癌恶性潜能的一项新指标.     

前列腺癌荷瘤小鼠药物去势后survivin基因表达的研究

目的：探讨药物去势方法对前列腺癌荷瘤小鼠生存素（survivin）基因表达的影响。方法：应用雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP和非依赖性细胞系PC3构建两种BALB／C鼠肿瘤模型。采用RT—PCR和Western blot方法检测动物药物去势前、后两种癌结节中survivin基因和蛋白的水平。TUNEL法检测细胞的凋亡。结果：两种癌结节细胞中均检测到survivin mRNA，在对照组人非癌前列腺组织中均无表达。药物去势前LNCaP组水平略高于PC3组，但差异不显著。药物去势前、后两种癌结节细胞的survivin mRNA水平未见明显改变。LNCaP组药物去势前Survivin蛋白含量相对值与PC3组比较差异不显著；药物去势后LNCaP组的Survivin蛋白水平显著下降（P〈0．01），PC3组无显著改变。LNCaP组呈现了较多的凋亡细胞，PC3组偶见凋亡细胞。结论：survivin基因转录后水平的调控差异可能是前列腺癌不同的激素依赖性的机制之一。     

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株中survivin和SMAC/DIABLO基因表达的影响

目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3中survivin、Smac/DIABLO表达的影响,探讨survivin、Smac/DIABLO在ASODN诱导卵巢癌细胞凋亡和细胞周期改变中的作用和分子机制.方法 用脂质体(LipofectamineTM 2000)介导survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数、细胞周期分布及survivin、Smac蛋白表达改变,逆转录酶链反应检测survivin、Smac/DIABLO基因表达改变.结果 同对照组比较,不同浓度ASODN作用后细胞生长明显减慢,转染后48 h IC50在600 nmol/1左右.用600 nmol/LASODN转染48h后,细胞凋亡指数(AI)明显增加,(t=6.3671,P＜0.05);更多的细胞停留在G0/G1期(t=10.3832,P＜0.01).Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.5031,P＜0.05,t=7.8146,P＜0.01),SmacmRNA和蛋白表达上调(t=2.8011,P＜0.05,t=11.3917,P＜0.01).结论 ASODN诱导细胞凋亡,使更多的细胞停留在G0/G1期,减少进入有丝分裂细胞数的作用,是通过下调survivin基因,上调Smac基因表达来共同完成的,survivin、Smac/DIABLO基因在调节SKOV3细胞周期、凋亡的功能上密切相关,二者的相互作用是卵巢癌发生、发展的重要分子机制之一.     

OPN及survivin在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的 检测前列腺癌组织中骨桥蛋白(OPN)及survivin的表达,以探讨OPN和survivin在肿瘤的浸润转移中的作用及二者之间的关系.方法 对前列腺癌、良性前列腺增生与正常前列腺组织标本应用半定量RT-PCR和免疫组织化学技术检测OPN及survivin的表达.结果 46例前列腺癌组织中OPN mRNA及survivin mRNA的表达阳性率分别为76.1%(35/46)和67.4%(31/46),OPN及survivin蛋白的表达阳性率分别为69.6%(32/46)和67.4%(31/46),两者表达呈正相关(P<0.05),并且两者在前列腺癌不同分期和分级之间差异有统计学意义(P<0.05).前列腺增生及正常前列腺组织中均未见阳性表达.结论 OPN和survivin与前列腺癌分化程度、分期呈正相关,可能在前列癌的进展中起协同作用     

Survivin基因siFNA表达载体的构建及其在食管癌EC109细胞中的表达

目的为研究survivin基因的功能及食管癌的基因治疗,构建针对survivin基因的siRNA的表达载体,转染细胞EC109后观察其对survivm基因表达的抑制作用.方法利用网站选择适当位点设计并合成针对survivin基因nRNA的寡核苷酸序列,插入质粒pBAsi-hU6中形成重组载体pBAsi-survlvin.重组载体经测序鉴定后转染食管癌细胞EC109,western blot检测转染前后survivin蛋白的表达情况.结果测序结果与所合成的寡核苷酸完全一致,证实成功构建了针对sLurvivin基因的siRNA表达载体.Westem blot检测显示转染食管癌细胞EC109后有效抑制了survivin基因的表达.结论针对surivivin基因的siRNA表达载体成功构建,并能有效抑制食管癌细胞EC109中survivin基因的表达.     

Survivin siRNA对人脐静脉内皮细胞的survivin基因及蛋白表达与凋亡的作用

[摘要] 目的 探讨Survivin siRNA对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的Survivin基因与蛋白表达与凋亡的影响。方法 合成Survivin siRNA转染混合物,以不同浓度转染HUVEC细胞, MTT法测定细胞生长抑制率, RT-PCR、Western blot检测HUVEC细胞Survivin mRNA及蛋白的表达变化,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果 HUVEC细胞转染荧光标记的FAM-siRNA后,细胞内有绿色荧光表达。分别以10,30,50nmol/L Survivin siRNA转染细胞后,细胞生长抑制率、Survivin mRNA表达、Survivin蛋白表达与对空白照组、阴性对照组、脂质体对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。细胞凋亡率与对照组比较明显下降(P<0.01)。随着Survivin siRNA浓度的增加,细胞抑制率与细胞凋亡率呈上升趋势,Survivin mRNA及Survivin 蛋白的表达呈逐渐降低趋势。结论 Survivin siRNA能抑制HUVEC的Survivin基因表达与并促进其凋亡。