实时荧光聚合酶链反应检测HBV基因型B～D方法的建立

目的建立实时荧光聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型B～D方法并验证其准确性。方法比较GenBank中已发表的明确分型的143株HBV全序列，设计特异的组合引物探针，应用实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法对兰州地区128例慢性乙型肝炎患血清标本进行基因型B、C、D检测，并随机对检测的基因型各3株标本进行S基因测序验证。结果128例标本中B型检出率为20.3％(26／128)，C型71．9％(92／128)，D型7．8％(10／128)：18株HBV克隆标本S基因测序结果与本分型法完全一致。结论实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法能够简便、灵敏、快速、准确地鉴定HBV基因型，适宜用于HBV基因型的大规模临床和流行病学调查。     

四川省自贡市159例慢性HBV感染者的HBV基因型分布及其与疾病进展关联研究

目的 了解四川省自贡市慢性HBV感染者的HBV基因型分布情况,并探讨其与慢性乙肝患者病情进展的关系。方法 收集2015年9月—2018年6月159例经本院确诊的慢性HBV感染者,且HBV-DNA水平含量在 10³ IU/mL以上,根据疾病诊断将慢性HBV感染者分为三组：慢性乙型肝炎组（CHB）、乙肝相关性肝硬化组（LC）、乙肝相关性肝癌组（HCC）。采用多通道实时荧光探针PCR法检测乙肝病毒的3种基因型（B、C、D型）,同时检测HBV-DNA及HBV的五项标记物。采用SPSS17.0软件对数据进行统计分析。结果 本文研究显示B基因型115例（72.3%）,C基因型43例（27.0%）,B/C混合型1例（0.6%）,D基因型0例;B基因型的HBV-DNA水平高于C基因型（P<0.05）;慢性HBV感染患者中,男、女组均以B基因型为主,B基因型和C基因型分布在年龄、性别、HBeAg阳性率方面比较差异无统计学意义（P>0.05）;乙肝相关性肝癌组（HCC）的C基因型比例明显高于CHB组和LC组（P<0.05）。结论 自贡市HBV主要流行B基因型,其次是C基因型;B基因型和C基因型的慢性HBV感染患者进展为肝硬化或肝癌可能存在一定的差异。     

荧光定量聚合酶链反应分型法检测乙型肝炎病毒B、C基因型的研究

目的探讨用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分型法检测乙型肝炎病毒(HBV)B、C基因型,了解不同类型HBV感染者中HBV基因型的分布特点。方法选取2010年9月至2012年10月在成都市第五人民医院就治的乙型肝炎患者135例作为研究对象,用荧光定量PCR分型法检测135例HBV感染者的HBV基因型。结果荧光定量PCR分型法成功分型131例(97.04%)样本,4例(2.96%)未检出,其中,B/C混合型28例(20.74%);C型17例(12.60%);B型86例(63.70%)。B基因型的病毒载量显著高于C基因型、B/C混合型(P<0.05)。B基因型在慢性乙型肝炎、慢性重型乙型肝炎和急性乙型肝炎患者中所占百分比显著高于C基因型与B/C混合型(P<0.05)。结论本地区的HBV基因型以B基因型为主,其次是C基因型、B/C混合型。     

慢性乙型肝炎患者HBV基因型及其临床意义

目的 了解广东地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型特点及其临床意义。方法 用特异性引物扩增乙型肝炎病毒S基因区,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因分型方法,对该地区55例慢性活动性乙型肝炎(CAH)患者感染的HBV进行基因分型,并与其临床生化结果、病毒定量和肝组织病理进行相关性分析。结果 B基因型28例(51.0%),C基因型18例(32.7%),D基因型4例(7.3%),B+C型4例(7.3%),未分型1例(1.8%)。其中年龄大于30岁的26例患者B和C基因型的丙氨酸转氨酶水平分别为(190.9±270.3)IU和(141.0±83.0)IU(t=0.532,P>0.05),肝脏病理炎症分级的平均秩次为10.4和11.8(Z=0.561,P>0.05),肝脏病理纤维化分期的平均秩次为10.5和11.7(Z=0.483,P>0.05),HBVDNA含量分别为106.8±1.4和108.5±1.1(t=2.989,P<0.05),HBeAg阳性数分别为2/12和8/9(Fisher’s精确概率P=0.002)。结论 广东地区HBV基因型主要为B型和C型;两种基因型感染者丙氨酸转氨酶水平、病毒复制水平、HBeAg表达水平以及肝脏病理炎症和纤维化程度无显著性差异;然而在年龄大于30岁的CAH患者中,感染C基因型的HBV病毒复制水平和HBeAg表达水平比感染B基因型者显著增高。     

海南乙肝患者HBV基因型分布及临床指标的相关性

目的 研究海南地区乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的基因型在乙肝携带者、肝硬化和肝癌患者中的分布状态,以及这些基因型与临床相关指标如肝功能转氨酶谱、腺苷脱氨酶（adenosine deaminase ,ADA）、α-L-岩藻糖苷酶（α-L-fucosidase, AFU）、甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP）之间的关系和临床意义。方法 利用巢式PCR方法对海南省第三人民医院163例就诊有HBV感染的携带者、肝硬化和肝癌临床患者的血清标本进行HBV DNA扩增,并用聚合酶链反应–限制性片段长度多态性法鉴定HBV基因型;同时收集患者的民族、临床资料和实验室检查结果等资料,利用SPSS统计软件进行t检验、卡方检验、Logistics回归分析等统计分析。结果 总共检测了207例乙型肝炎病毒感染患者的血清标本,其中44例未获得有效的基因型数据。在检测出具体基因型的163例HBV感染者中,HBV B基因型25例占15.3%,HBV C基因型132例占81.0%,HBV B/C混合型6例占3.7%。HBV基因型之间的患者年龄、性别、民族、疾病状态、乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性率、HBV DNA水平差异并无统计学意义。HBV C型感染者天冬氨酸转移酶（aspartic transferase,AST）水平高于HBV B型感染者。所有HBV C基因型患者中,肝硬化及肝癌患者占的比例最高。患者ADA数值与HBV基因型的状态有明显关联,ADA值升高的患者,感染HBV B型病毒的可能性增加（P=0.044）。结论 海南地区乙型肝炎患者HBV基因型以 C型为主,HBV C型感染者的肝脏功能更容易受损,ADA数值较低,临床上易向肝硬化及肝癌进展。     

荧光PCR法检测HBV感染者HBV基因型及其临床应用

目的:了解南通地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布情况及其临床特点.方法:选取本地区HBV感染者共125例,其中无症状携带者(ASC)31例,慢性乙型肝炎(CHB)46例,乙型肝炎肝硬化(LC)23例,原发性肝细胞癌(HCC)25例.应用实时PCR技术对患者进行血清HBV基因分型测定,FAM波长检测B型HBV,JOE或HEX波长检测C型HBV;部分结果进行基因测序验证;以3例非乙型肝炎患者为对照.结果:3例非乙型肝炎患者HBVM、HBV-DNA、HBV B、C基因均阴性.6例患者双份标本荧光PCR法、基因测序检测HBV基因型结果完全一致均为HBV C型.125例HBV感染者中HBV-DNA阳性的104例标本HBV基因型显示:B基因型25例(24.0%),C基因型74例(71.2%),B+C混合基因型5例(4.8%),未检出非B非C型;其中ASC组HBV-DNA定量阳性患者中以B型为主90%(9/10);而其余3组感染者中以C型基因居多:CHB患者中C型为80.43%(37/46),LC患者中C型为69.57%(16/23),HCC患者中C型为80%(20/25).结论:荧光PCR法可特异性检测HBV基因型;南通地区HBV基因型主要以C型为主,其次为B型和少量B+C混合基因型.HBV基因C型与B型各有显著的临床特点,可为临床诊断及指导临床抗病毒治疗药物选择提供依据.     

实时荧光PCR法分析浙江省乙型肝炎病毒基因型的分布

目的 研究浙江省各地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布状况.方法 采用实时荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)检测240例HBVDNA病毒含量＞105拷贝/毫升的浙江籍(杭州、湖州、金华、绍兴、台州、宁波各40例)HBV感染者的基因型.结果 240例HBV感染者中基因B型82例占34.17%,基因C型140例占58.33%,基因B,C混合型15例占6.25%,基因D型3例占1.25%,未捡出基因型A、E、F.结论 浙江地区HBV基因以B、C型为主,B、C混合型次之,D型基因偶见.各地区间基因型分布未见差异.     

拉萨地区乙型肝炎病毒携带者感染基因型的实验研究

【目的】研究拉萨地区乙型肝炎病毒携带者感染基因型的流行情况。【方法】采用聚合酶链反应(PCR)扩增乙型肝炎病毒S基因区,用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序,测序结果和Gen Bank中的标准基因型序列相比较。【结果】60例标本中有46例可直接测序分型(76.7%),其中包括B型14例(少数民族5例)、C型12例(少数民族5例)、D型20例(少数民族3例);14例标本未能直接分型,考虑为混合型。【结论】拉萨地区HBV DNA基因型为B型、C型、D型和混合型,以D型为主,未发现A、E型。     

乙型肝炎病毒耐药变异与基因型检测在临床上的应用

目的 建立直接测序法检测HBV P区耐药变异情况并分析基因型.探讨HBV基因型与临床病情的关系.方法 检测46例乙肝患者血清样本,采用特异的引物对待检标本HBV P区进行PCR扩增后作基因序列检测,利用Chromas2.23软件对测序结果 进行分析有无突变产生,测序结果 用软件clustalx1.81进行基因分型分析.结果 可通过一次测序反应完成对HBV.DNA P区的基因检测及基因型分析.检出YMDD变异株8例,其中YIDD 5例,YVDD 3例.在检测的46例标本中23例为B基因型,阳性率为50.0%;有21例为C基因型,其阳性率45.6;D基因型2例,阳性率4.4%.B基因型HBV感染者中HCC 2例,占8.7%;C基因型HBV感染者中HCC 8例,占38.1%.结论 直接测序法分析HBV常见耐药突变位点及基因型准确可行,B基因型乙肝患者预后优于C基因型患者.     

呼和浩特地区98例乙型肝炎病毒基因型分布特征分析

目的:了解呼市地区HBV基因型分布特征。方法:采用S基因片段测序的基因分型法,对98例HBVDNA阳性患者的HBV基因型进行测定。结果:可检出B型9例、C型45例、D型16例、C/D型28例、B/C型1例,分别占9.2%,45.9%,16.3%,28.6%,2.0%。结论:呼市地区HBV基因型B型、C型、D型、C/D型、B/C型,以C型为主,其次为C/D基因型。     

巢式PCR检测北京地区乙型肝炎病毒基因型的分布

目的了解北京地区乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV基因型分布情况。方法从前S1基因到S基因中的保守序列设计出10条内外引物,将其中8条内引物分成A、B组,分别扩增A、B、C、D、E、F型HBV,根据PCR产物片断判定HBV基因型。结果用此种方法检测HBV感染的不同转归类型患者血清728份,对HBV DNA阳性标本进行基因型分析。HBV DNA阳性者276例,其中自限性感染者阳性率为5.8%(14/243),慢性无症状HBV携带者血清HBV阳性率为42.6%(113/265),慢性肝炎患者HBV阳性率为67.7%(149/220)。慢性肝炎组HBV DNA检出率与其他2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。在276例HBV DNA阳性标本中,各基因型在不同组分布不同,但差异无统计学意义。HBV基因型总检出率以C型为主,占76.8%,B型占21·7%,同时检出B型和C型为1.5%,未检出A、D、E、F基因型。结论北京地区感染HBV基因型为B型和C型,以C型为主,感染结局不同组间基因型分布比较差异无统计学意义。     

多位点ARMS-PCR法进行HBVS区检测分型

目的：建立一种准确有效的PCR法HBV分型的实验方案。方法对80例包含了 HBV不同型别（B/C/D型）的血清样本进行了 HBV S区测序，通过分析国人 HBV B/C/D型S区碱基固有差异位点，设计得针对各种HBV 型别的高度特异性A RM S引物与探针，并用于另外120例HBV样本的PCR检测实验，同时进行测序进行检测准确度验证。结果多位点ARMS-PCR法与测序法的型别检出吻合率为99．5％，其中一例HBV B/C型混合感染由ARMS-PCR法检出并经追溯确认。结论经验证可见设计于S区型别固有差异位点之上的ARMS引物与探针于PCR检测中能以极高的特异性对 HBV 血清样本进分型，并能检出 HBV 混合型中的劣势病毒株。PCR法以其低成本、结果容易判定以及高灵敏度等优点，于临床HBV分型上是更为推荐的分子诊断学方法。     

检测HBV DNA基因型的方法学探讨

迄今发表的ＨＢＶＤＮＡ全序列已有６１株，根据其核苷酸序列的差异分为Ａ～Ｆ６个基因型。我们利用ＰＣＲ和限制性片段长度多态性分析技术，由慢性无症状ＨＢＶ携带者血清扩增病毒Ｓ基因区，建立了新的分型方法；用此方法对广州地区６１名慢性无症状携带者的ＨＢＶＤＮＡ进行分型，发现主要为Ｂ、Ｃ两种基因型。     

慢性乙型肝炎患者乙肝病毒B、C基因型和阿德福韦酯耐药基因的相关性

目的:研究本地区HBV基因型分布;探讨阿德福韦酯长期治疗的慢性乙型肝炎患者HBV基因型和阿德福韦酯耐药基因突变的关系。方法:选取320例阿德福韦酯治疗>3年,治疗前乙肝病毒载量>105拷贝/ml、无相关耐药基因的自然变异并符合其他入选标准慢性乙型肝炎患者进入此研究。PCR法检测HBV基因分型,305例单一B型或C型的患者中,36例可疑耐药的患者用基因芯片法检测乙型肝炎病毒阿德福韦酯相关耐药突变位点。结果:①慢性乙型肝炎患者中HBV基因型包括B型53.1%(170/320)、C型42.2%(135/320)、B和C混合型4.7%(15/320)、未检出其他型。②305例基因型为B型或C型的患者中36例发生病毒学突破,病毒学突破率为11.8%。③36例出现病毒学突破的患者中有35例检测出阿德福韦耐药突变基因型。B基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占54%(19/35),C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占46%(16/35),B、C两种基因型耐药基因突变率无差别(P=0.854)。④C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变主要为N236T及其混合突变型69%(11/16)。结论:皖南地区HBV基因型以B型为主;HBV基因型与阿德福韦酯耐药突变无关,但C基因型患者以N236T及其混合突变型为主;检测HBV基因型和相关耐药突变是评价慢性乙型肝炎临床治疗疗效的重要指标。     

江苏地区不同类型乙型肝炎患者HBV基因分型研究

目的:了解江苏地区乙型肝炎病毒基因型分布特征,探讨HBV各基因型与血清HBV DNA水平的关系.方法:采用荧光定量PCR结合Taqman MGB探针技术,对江苏地区176份乙型肝炎患者血清中的HBV DNA进行基因分型和定量检测.结果:176例血清中,C型117人(66.5%),B, C型40人(22.7%),B型9人(5.1%),D型1人(0.6%),A型1人(0.6%).C型与B, C混合型在HBV DNA水平上存在统计学差异(P＜0.05),B, C混合型的HBV DNA水平明显高于C型.C基因型在慢性乙型肝炎患者中的所占比例(71.4%)比在急性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中所占的比例较高,但差异无统计学意义.结论:江苏地区HBV基因型以C型为主, B, C混合型次之,B型较少,D型,A型极少;B, C混合型患者的HBV DNA数量水平高于C型.     

韶关地区乙型肝炎患者HBV亚基因型的分布

目的 探讨韶关地区乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况. 方法 应用PCR法结合琼脂糖电泳方法对378例乙型肝炎患者进行基因分型和检测,根据PCR产物大小直接判定HBV基因型,应用PCR扩增全S基因序列-DNA测序-生物信息学分析方法确定部分样品的亚基因型,并探讨前S区编码情况. 结果 在378例乙型肝炎患者中B基因型263例占69.6％,C基因型113例占29.9％,BC混合型2例占0.5％.B基因型中HBeAg阳性患者占66.5％,抗-HBe阳性占33.5％. 结论 广东韶关地区乙型肝炎患者HBV基因型以B型为主,C型次之,少量BC混合型,HBV复制强弱与病毒基因型无关.     

常州地区乙型肝炎病毒基因分型及HBV DNA定量的临床研究

目的了解常州地区乙型肝炎病毒基因型的分布,探讨定量检测HBVDNA的临床意义。方法应用基于膜显色结果判读的DNA芯片检测该地区147例不同HBV感染者HBV基因型,荧光定量PCR（FQ-PCR）法定量测定HBV DNA。结果B型63例（42．86％）,C型80例（54．42％）,B、C混合型1例（0．68％）、B、D混合型3例（2．04％）。69例慢性乙型肝炎中B型33例、C型34例,63例肝癌患者检出B型15例、C型46例,两组C基因型比率比较差异有统计学意义（P〈0．01）。肝癌患者组B、C型HBV DNA含量（分别为3．58±2．23log10copies／ml和4．82±1．98log10copies／ml）差异有统计学意义（P〈0．05）;慢性乙型肝炎患者组HBV DNA含量（分别为5．92±2．38log10copies／ml和6．13±1．49log10copies／ml）差异无统计学意义（P〉0．05）。结论常州地区HBV DNA基因型主要为B型和C型,肝癌患者中C基因型较多,降低病毒载量对治疗可能有积极作用。     

应用多重PCR法对广东地区HBV进行基因型(A-F)分型

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)基因型(A-F)多重PCR分型方法,并利用该方法对广东地区HBV PCR阳性血清进行分型。方法将GenBank中114例HBV 全序列进行比较分析,找出每种基因型相对于其他五种基因型的独特序列,并根据这些独特序列设计出六对分别针对A-F基因型的特异引物。利用这六对引物建立HBV的多重PCR分型法。结果多重PCR与以前用PCR-限制温度长度多态型分析法的分型结果一致。对广州周边地区HBV携带者的初步分型结果显示,主要为B型和C型,分别占45.00%和38.75%,另外还有16.25%的D型。结论用多重PCR分型法准确易行,灵敏性高,便于推广应用。