Suppression of endotoxin-induced renal tumor necrosis factor-alpha and interleukin-6 mRNA by renin-angiotensin system inhibitors

The present study was designed to clarify the role of angiotensin II (Ang II) in modulating renal tumor necrosis factor (TNF)-alpha and interleukin-6 (IL-6) production and to investigate the effect of one dose of Ang II inhibitor on cytokines production following lipopolysaccharide (LPS) to cause endotoxemia. Two studies were performed: 1) Ang II was infused intravenously at a rate of 0.2 microg/kg per minute for 4 h in rats and then kidneys were collected to assay TNF-alpha and IL-6 mRNA levels; 2) Four-week-old Wistar rats pre-treated with angiotensin-converting enzyme inhibitor, enalapril, or type I Ang II-receptor antagonist, TCV-116, were injected with LPS (0.1, 0.5, 1.0 mg, i.p.), and then 2 or 4 h later, kidneys were collected to assay TNF-alpha, IL-6, renin and angiotensinogen mRNA levels. After a 4-h intravenous infusion of Ang II, renal TNF-alpha or IL-6 mRNA level significantly increased 1.9-fold or 2.1-fold (each P<0.05) to the control level, respectively. LPS stimulated TNF-alpha, IL-6 and angiotensinogen mRNA levels in the kidney but in rats given enalapril or TCV-116, LPS-induced IL-6 and TNF-alpha mRNA levels were completely suppressed (each P<0.05). This suggests that a single dose of renin-angiotensin system inhibitor suppressed renal IL-6 and TNF-alpha production and may prevent cytokine-induced renal damage during endotoxemia.     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号转导和转录活化因子1表达的影响

目的探讨糖尿病大鼠肾小球细胞中信号转导和转录活化因子1磷酸化水平及其mRNA水平的改变以及血管紧张素受体1拮抗剂(AT1Ra)氯沙坦的影响。方法♂Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病组和氯沙坦治疗组,腹腔注射STZ诱发糖尿病大鼠模型,每日灌胃给予氯沙坦40mg·kg-1,共2wk。采用免疫组化和Western印迹检测肾小球细胞磷酸化STAT1(pSTAT1)蛋白的表达,RTPCR检测肾小球细胞STAT1mRNA的表达。结果糖尿病组肾小球p-STAT1表达明显高于对照组(P<001),约是对照组的3倍;氯沙坦治疗组大鼠肾小球pSTAT1的表达明显低于糖尿病组(P<005);RTPCR结果表明糖尿病组肾小球细胞STAT1mRNA表达明显上调,约为对照组的34倍;氯沙坦治疗组STAT1mRNA表达与糖尿病组相比无明显差异。结论STAT1信号途径可能参与了糖尿病早期肾脏的发病过程,氯沙坦的肾脏保护作用可能部分是通过影响STAT1的激活而实现。     

牛磺酸对烫伤大鼠血浆及心肌组织肿瘤坏死因子和血管紧张素Ⅱ含量的影响

目的 :观察牛磺酸对大鼠严重烧伤后心肌损害的影响。方法 :用健康Wistar大鼠 ,随机分为对照组、烧伤组 (造成 30 %TBSAⅢ度烫伤 )和治疗组 (烧伤后腹腔注射牛磺酸 ,剂量 4 0 0mg·kg-1体重 )。于伤后 1、3、6、12和 2 4h检测血浆TNF α、AngⅡ和TnT含量与心肌中TNF α、AngⅡ含量。结果 :烧伤大鼠烧伤后 3h血浆cTnT呈显著升高 ,12h达峰值 ,2 4h显著高于对照组 ;烫伤后 6h血浆和心肌组织TNF α含量显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,12h达峰值 ;伤后1h血浆AngⅡ含量呈显著升高 ,伤后 2 4h血浆及心肌中AngⅡ高于对照组 ;牛磺酸治疗组血浆cTnT、TNF α和AngⅡ水平较烧伤组均有显著性降低。血浆TNF α、AngⅡ含量与血浆cTnT变化密切相关。结论 :牛磺酸对严重烫伤后心肌损伤有较好的保护作用。     

羟乙葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤后TNF-α表达及NF-κB活性的影响

观察羟乙葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后TNF-α表达及NF-κB活性的影响。采用大鼠大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型，分别于缺血前30 min及再灌注即刻由尾静脉注射羟乙葛根素(10，20及40 mg·kg^-1)，缺血2 h再灌注24 h后取缺血侧脑组织，HE染色观察大鼠脑组织病理学变化并计数海马CA1区存活神经元数目，放射免疫分析测定脑组织匀浆中TNF-α含量，逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定脑组织中TNF-α mRNA表达情况，凝胶电泳迁移率实验(EMSA)观察NF-κB DNA结合活性改变，Western blotting检测观察IκBα蛋白表达情况。羟乙葛根素可明显改善大鼠海马CA1区损伤程度，升高锥体存活神经元数目，减少TNF-α蛋白及mRNA表达，抑制NF-κB DNA结合活性。羟乙葛根素可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤后炎症反应，这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

替米沙坦对血管内皮细胞衰老干预作用的实验研究

目的探讨替米沙坦对血管内皮细胞衰老是否存在有益的干预作用及可能的作用机制。方法健康大鼠分为成年组、老龄组、替米沙坦组,分析各组不同月龄大鼠主动脉衰老程度,gp^91phox蛋白和mRNA表达与主动脉衰老程度的关系及替米沙坦是否存在有益的干预作用。体外培养的人脐静脉内皮细胞株（ECV-304）给予AngⅡ刺激以诱导细胞衰老,观察替米沙坦处理后细胞的衰老程度,进一步检测各组细胞gp91^phox表达。结果老龄组大鼠主动脉呈现典型衰老改变,内皮细胞功能失调,伴有gp91^phox的mRNA及蛋白表达上调;替米沙坦处理组主动脉衰老程度减轻,内皮功能改善。替米沙坦干预可降低AngⅡ诱导的ECV-304细胞的衰老改变,伴随gp91^phox表达下调。结论替米沙坦可通过特异性拮抗AngⅡ的1型受体,改善增龄大鼠的主动脉内皮功能失调,延缓主动脉衰老改变。体外实验提示替米沙坦可抑制AngⅡ诱导的内皮细胞衰老,可能的途径是抑制了gp91^phox的表达。     

全反式维甲酸与苯那普利对肾硬化大鼠肾脏组织α-SMA表达的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)与苯那普利对肾硬化大鼠肾脏组织α-SMA表达的影响。方法80只Wistar♂大鼠随机分为假手术组、模型组、苯那普利组和ATRA组,每组均为20只。采用单侧肾切除加1wk后尾静脉注射阿霉素(5mg·kg-1)的方案建立大鼠肾小球硬化(GS)模型,造模后12wk末处死。HE染色观察肾脏病理改变,计算肾小球硬化指数(GSI)。RT-PCR结合免疫组织化学方法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。结果与模型组相比,ATRA组和苯那普利组GSI、α-SMA mRNA相对表达量和α-SMA阳性面积比均明显下降(P<0.05),但两组间各项指标比较无差异(P>0.05)。结论ATRA与苯那普利对大鼠肾硬化均有明显的延缓效应,且疗效一致。     

All-trans retinoic acid can regulate the expressions of gelatinases and apolipoprotein E in glomerulosclerosis rats

Apolipoprotein E (apoE) is an important plasma protein in cholesterol homeostasis and plays a key role in the pathogenesis of glomerulosclerosis (GS). Gelatinases include matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9). The abnormal expressions of gelatinases are implicated in the pathogenesis of extracellular matrix accumulation. All-trans retinoic acid (ATRA) is an import biological agent which can play a protective role against GS. We performed this investigation to explore whether ATRA could regulate the expressions of gelatinases and apoE in the glomerulus of GS rats. 120 Wistar rats were randomly divided into three groups: sham operation group (SHO), glomerulosclerosis model group without treatment (GS) and GS model group treated with ATRA (GA). The GS disease was established by uninephrectomy and adriamycin injection. At the end of 9 and 13weeks, the relevant samples were collected and determined. Compared with GS group at 9/13weeks, values of 24-hour urine total protein, 24-hour urine excretion for albumin, blood urea nitrogen, serum creatinine and glomerulosclerosis index, and protein expressions of apoE, transforming growth factor-βl (TGF-β1), α-smooth muscle actin, collagen-IV and fibronectin in glomerulus and mRNA expressions of apoE and TGF-β1 in renal tissue were significantly down-regulated by ATRA (each P<0.01). However, the expressions of MMP-2 and MMP-9 (mRNA, protein and activity) were enhanced in GA group than those in GS group. In conclusion, gelatinases are associated with apoE expression, and ATRA can increase the gelatinases expressions and reduce the accumulation of apoE in glomerulus of GS rats, but the detailed mechanism needs to be elucidated in the future.     

罗格列酮对血管平滑肌细胞血管紧张肽Ⅱ受体2表达的影响

目的:观察罗格列酮对血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)血管紧张肽Ⅱ受体2(AT_2R)mRNA和蛋白表达的影响及其机制。方法:1μmol·L~(-1) AngⅡ孵育体外培养大鼠VSMCs 6h,然后随机分成7组,另设空白对照组。其中3组分别加入终浓度为20、30、50μmol·L~(-1)罗格列酮干预12h;另3组加入30μmol·L~(-1)的罗格列酮分别再干预6、12、24h;余1组为AngⅡ模型组。采用RT- PCR和免疫组织化学方法检测VSMCs AT_2R mRNA及蛋白的表达水平。结果:空白对照组AT_2R mRNA和蛋白表达量为[(57±s5)％,1.094±0.012],AngⅡ可下调AT_2R mRNA及蛋白的表达[(41±4)％,0.91±0.05](P<0.01,P<0.05);与AngⅡ组相比,罗格列酮20、30、50μmol·L~(-1)干预12h或30μmol·L~(-1)罗格列酮再干预6、12、24h均能使AT_2R mRNA和蛋白的表达明显上调[(63±6)％,1.18±0.04;(94±10)％, 1.35±0.03;(110±12)％,1.58±0.03;(40±4)％,1.23±0.03;(57±6)％,1.372±0.023;(90±10)％,1.64±0.03](P<0.05,P<0.01)。结论:基础状态下,体外培养的大鼠VSMCs AT_2R少量表达, AngⅡ下调AT_2R mRNA及蛋白的表达;一定浓度范围内,罗格列酮可剂量、时间依赖性地上调AngⅡ诱导的大鼠VSMCs AT_2R mRNA和蛋白的表达。     

Systemic and local effects of angiotensin II blockade in experimental diabetic nephropathy.

INTRODUCTION: Our objective was to evaluate the effect of blocking the renin-angiotensin system (RAS) on the expression of transforming growth factor-beta 1 (TGF-beta1), platelet derived growth factor-B (PDGF-B), tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in diabetic kidney glomeruli. MATERIALS AND METHOD: 1) Uninephrectomised streptozotocin induced diabetic rats were treated during eight months with vehicle (CD) or irbesartan (ID). Uninephrectomised non-diabetic rats were used as control group (ND). Protein urinary excretion and morphological renal damage were analysed. Glomerular expression of TGF-beta1, PDGF-B, VEGF and TNF-alpha were evaluated by Western blot and Immunohistochemistry. 2) Isolated glomeruli of diabetic rats were incubated 24-hours in the presence of different doses of irbesartan. Glomerular expression of TGF-beta1, PDGF-B, TNF-alpha and VEGF were determined by Western blot. RESULTS: ND and ID presented lower renal injury and proteinuria than CD (p<0.05). Glomerular expression of TGF-beta1, PDGF-B, TNF-alpha and VEGF were similar in ND and ID, but lower than in CD (p<0.05). In addition, in isolated diabetic rat glomeruli, irbesartan reduced the content of all these factors. CONCLUSION: Systemic and local administration of irbesartan lowers glomerular expression of TGF-beta1, PDGF-B, VEGF and TNF-alpha. These data suggest that part of the effect of lowering the expression of these growth factors and cytokines is due to a direct blockade of glomerular RAS.     

硫辛酸对脑缺血再灌注损伤大鼠RAGE/LRP1通路及神经血管单元重塑的影响

目的 探究硫辛酸对脑缺血再灌注损伤大鼠神经血管单元重塑的作用及对晚期糖基化终产物受体（RAGE）/低密度脂蛋白受体相关蛋白1（LRP1）的影响。方法 108只雄性Wistar大鼠,除18只作为假手术组外,其余大鼠采用线栓法制备大脑中动脉短暂缺血再灌注（tMCAO）模型。模型成功大鼠根据神经评分分为模型组、FPS-ZM1 （RAGE抑制剂,1 mg·kg^-1）组和硫辛酸高、中、低剂量组（40、20、10 mg·kg^-1）,再灌注2 h后ip给药,假手术组和模型组注射等量生理盐水,每天1次,连续给药14 d。术后1、7、14 d对大鼠进行神经功能缺损程度评分（mNSS）和激光散斑成像仪监测脑血流量（CBF）。术后14 d,2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法检测大鼠脑梗死面积;伊文思蓝（EB）检测血脑屏障通透性;免疫荧光染色检测脑微血管密度并采用免疫组化法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、神经元核抗原（NeuN）表达;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测血管内皮生长因子（VEGF）、促血管生成素1（Ang-1）、促血管生成素2（Ang-2）的mRNA表达; Western blotting检测基质金属蛋白酶9（MMP9）、紧密连接相关蛋白5（claudin5）、RAGE、LRP1蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分、脑梗死百分比、EB含量、GFAP阳性细胞数、脑组织Ang-2 mRNA水平、MMP9和RAGE蛋白表达显著升高（P<0.05）,CBF、NeuN阳性细胞数、VEGF和Ang-1 mRNA水平、claudin5和LRP1蛋白表达显著降低（P<0.05）;与模型组比较,硫辛酸高、中剂量组大鼠mNSS评分、脑梗死百分比、EB含量、GFAP阳性细胞数、脑组织Ang-2 mRNA、MMP9和RAGE蛋白表达显著降低（P<0.05）,CBF、脑微血管密度、NeuN阳性细胞数、VEGF和Ang-1 mRNA、claudin5和LRP1蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论 硫辛酸可降低BBB的通透性,促进血管新生,对神经血管单元起着修复和保护作用;其作用机制可能与下调RAGE的表达,上调LRP1的表达有关。     

Aldosterone synthesis and cytokine production in human peripheral blood mononuclear cells

Previously, we reported that spironolactone reduced cytokine production in cultured human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) with angiotensin (Ang) II stimulation. To address the mechanisms underlying this effect, we examined the contribution of aldosterone to cytokine production in cultured human PBMCs with Ang II stimulation. PBMCs expressed the messenger RNA (mRNA) of Ang II type 1 receptor (AT1R) and mineralocorticoid receptor (MR) both spontaneously and after Ang II stimulation, but expressed Ang II type 2 receptor (AT2R) under neither condition. After 24 h of incubation, exogenous Ang II induced the expression of CYP11B2 (a key enzyme of aldosterone synthesis) mRNA and caused aldosterone synthesis. CV-11974 (an AT1R antagonist) reduced Ang II-induced aldosterone synthesis, whereas PD-123319 (an AT2R antagonist) had no effect. The concentration of aldosterone peaked earlier than those of monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha). After 48 h of incubation (under the influence of synthesized aldosterone), CV-11974 and spironolactone significantly reduced the Ang II-enhanced production of MCP-1 and TNF-alpha, whereas PD-123319 also had no effect. In conclusion, Ang II induces aldosterone synthesis through AT1R and enhances cytokine production through an AT1R-dependent mechanism and, at least partly, through a MR-dependent mechanism in human PBMCs.     

番茄红素对糖尿病模型大鼠肾损伤的治疗及血管紧张素转换酶的作用

目的观察番茄红素对糖尿病性肾病的治疗作用及其可能的作用机制。方法采用高糖高脂饮食加链脲佐菌素法制备2型糖尿病大鼠模型。2型糖尿病大鼠分别ig给予番茄红素5,10和20 mg.kg-1每天1次,连续8周。8周后取尾尖血用罗氏血糖仪测定空腹血糖(FBG)含量,腹主动脉采血后分离血清和血浆,用全自动生化分析仪测定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白(UP)含量,放免法检测血浆胰岛素(Ins)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和肾组织AngⅡ含量。HE染色观察肾组织病理形态的变化,RT-PCR法检测肾组织血管紧张素转换酶(ACE)和ACE2 mRNA的表达,Western印迹法检测肾组织ACE2蛋白的表达。结果与正常对照组相比,模型对照组FBG,Ins,Scr,BUN,AngⅡ和24 h UP含量均明显升高(P<0.05);与模型对照组相比,番茄红素10和20 mg.kg-1组Scr,BUN,AngⅡ和24 h UP含量均显著降低,Scr由(54.2±4.3)μmol.L-1分别降低到40.3±2.0和(34.4±3.8)μmol.L-1,BUN由(17.7±2.3)mmol.L-1分别降低到15.5±1.2和(13.1±0.5)mmol.L-1,血浆中AngⅡ由(858±56)ng.L-1分别降低到680±62和(623±64)ng.L-1,肾组织AngⅡ由(19.8±2.9)ng.g-1分别降低到16.7±2.6和(13.6±2.4)ng.g-1蛋白,24 h UP由(16.4±3.5)mg分别降低到13.7±1.9和(9.9±2.3)mg(P<0.05)。与正常对照组相比,模型对照组ACE2,ACE mRNA和ACE2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),与模型对照组相比,番茄红素5,10和20 mg.kg-1组ACE2 mRNA和蛋白表达水平则显著升高(P<0.05),其中番茄红素20 mg.kg-1组效果更为明显(P<0.01);ACE mRNA表达水平与模型对照组无明显差异。结论番茄红素能降低糖尿病模型大鼠蛋白尿,改善肾功能,减轻肾组织病理变化,增强肾组织ACE2 mRNA和蛋白的表达,提示番茄红素对糖尿病性肾病的治疗作用可能与抑制肾局部肾素-血管紧张素系统的途径有关。     

虫草菌丝对慢性肾功能衰竭大鼠微炎症反应的影响

目的考察慢性肾功能衰竭(CRF)模型大鼠肾脏组织NF-κB-p65与血清C反应蛋白(CRP)和白细胞介素6(IL-6)浓度的关系,并探讨虫草菌丝对NF-κB表达的抑制作用及其用于治疗微炎症反应的可能性。方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)阳性对照组、虫草菌丝3和6g·kg-1治疗组。建模前1d各组大鼠尾静脉抽血,并留取24h尿液,第2天假手术组行假手术,其余4组切除右肾上、下两极约70%肾脏;10d后假手术组再次进行"假手术",其余4组再经左腹壁切除左肾,制备5/6肾切除CRF大鼠模型。建模2周后,PDTC组隔日ip给予PDTC0.01g·kg-1,虫草菌丝治疗组分别ig给予虫草菌丝3和6g·kg-1,每天1次,共12周;假手术组和模型组ig给予等体积生理盐水;给药12周后各组留取血样和24h尿液,处死大鼠取肾。ELISA法检测血清CRP和IL-6浓度,全自动生化仪检测血清肌酐浓度,考马斯亮蓝法测定24h尿蛋白,实时荧光定量RT-PCR法和免疫组织化学法检测肾组织NF-κB-p65mRNA和蛋白表达。结果①建模前,各组大鼠24h尿蛋白和血清肌酐浓度无明显差异;建模14周后,模型组、PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组24h尿蛋白和血清肌酐浓度较建模前均明显升高(P<0.01),模型组较假手术组亦明显升高(P<0.01);模型组大鼠肾组织均出现肾小球球囊粘连、局灶节段性硬化及肾小管灶状萎缩和代偿性肥大等CRF病理改变;给药12周后,PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组大鼠肾组织病理变化与模型组比较无明显改善,虫草菌丝3和6g·kg-1组24h尿蛋白和血清肌酐浓度明显降低(P<0.01)。②给药12周后,模型组与假手术组比较,血清CRP和IL-6浓度及肾组织NF-κB-p65mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01),PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组与模型组比较均明显降低(P<0.01),虫草菌丝6g·kg-1组比3g·kg-1组降低更为明显(P<0.05)。③各组肾组织NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度进行直线相关分析结果表明,假手术组肾脏NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度之间无相关性,其余4组肾组织NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度明显正相关(P<0.05,P<0.01)。结论 CRF大鼠肾脏NF-κB-p65表达与血清CRP和IL-6浓度正相关;虫草菌丝可抑制CRF大鼠肾脏NF-κB-p65mRNA和蛋白表达,对CRF大鼠微炎症反应具有一定的治疗作用。     

丹参酮ⅡA对AngⅡ诱导的心肌肥大中c-fos、c-myc和c-jun mRNA表达的影响

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,观察丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡ,TSN)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡA,AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的影响。方法实验用新生大鼠,差数贴壁法体外分离培养大鼠心肌细胞。用血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大,丹参酮ⅡA和缬沙坦(valsartan)进行干预;采用相差显微镜测量细胞大小;测定心肌细胞3H-亮氨酸参入作为心肌细胞肥大的指标;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌细胞原癌基因c-fos、c-myc和c-junmR-NA的表达;MTT法检测细胞活力。结果用MTT法检测发现,培养的心肌细胞中加入TSN(5~80μmol·L-1),24h后会产生微弱的细胞毒性,但心肌细胞单层在TSN存在的情况下可以继续同步收缩。在AngⅡ持续作用7d后,血管紧张素Ⅱ组心肌细胞直径增大(28·5±3·8)μm,与对照组(19·8±1·9)μm相比差异有显著性(P<0·05);TSN抑制AngⅡ介导的心肌细胞直径增大(21·3±2·5)μm,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0·05),AngⅡ作用24h后,心肌细胞合成速率AngⅡ组(1900±100)cpm较对照组(1205±129)cpm明显增加(P<0·01),TSN和valsartan本身对心肌细胞蛋白质的合成没有影响,但均能抑制AngⅡ刺激的心肌细胞蛋白质合成速率的增加(P<0·01)。在培养液中加入AngⅡ作用30min后,c-fos、c-myc和c-junmRNA的表达明显增强(P<0·01),预先加入TSN或valsartan作用30min,可阻断AngⅡ的作用(P<0·01),而TSN和valsartan本身对原癌基因c-fos、c-myc和c-junmRNA的表达无影响。结论TSN可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,这可能与其抑制了原癌基因c-fos、c-myc和c-jun的表达有关。     

CD44在大鼠肾小球硬化模型中的表达

目的 探讨CD44在大鼠进行性肾小球硬化中的作用。方法 应用免疫组化、原位杂交及彩色病理图像分析系统观察柔红霉素所致的大鼠进行性肾小球硬化模型不同时相肾组织中CD44及其mRNA的表达，分析其与进行性肾小球硬化病理形态学改变的关系。结果 大鼠肾小球硬化过程中肾小球内CD44及其mRNA表达增高，主要位于内皮细胞、足细胞、肾小囊上皮细胞以及系膜细胞。肾小球内细胞平均CD44阳性面积和肾小球内CD44 mRNA阳性细胞百分率显著增高，且均与肾小球硬化指数正相关(r1=0．754，r2=0．744)。结论 CD44高表达可能在促进肾小球硬化中发挥重要的作用。     

高糖通过SGK_1通路促进人肾小球系膜细胞合成结缔组织生长因子

目的研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在高糖诱导人肾小球系膜细胞(HMC)产生结缔组织生长因子(CTGF)中的作用,探讨SGK1在糖尿病肾病(DN)肾小球硬化中的作用机制。方法HMC分为低糖组(5·5mmol·L-1D-葡萄糖)、高糖组(25mmol·L-1D-葡萄糖)和甘露醇对照组(19·5mmol·L-1甘露醇和5·5mmol·L-1D-葡萄糖),刺激24、72h后,采用RT-PCR方法和West-ernblot方法检测CTGFmRNA及蛋白的表达;将带有SGK1显性激活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-S422DhSGK1,SD)和带有SGK1显性失活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-K127NhSGK1,KN)分别瞬时转染HMC;同时,设空质粒(PIRES2-EGFP,FP)转染组和未转染组(NT)为对照。分别用低糖(LG,5·5mmol·L-1D-葡萄糖)和高糖(HG,25mmol·L-1D-葡萄糖)刺激24、72h后,采用RT-PCR方法和Western blot方法检测CT-GF的mRNA及蛋白的表达。结果与低糖组和甘露醇组相比较,在高糖刺激下,HMC中CTGF mRNA及蛋白的表达明显上调;低糖环境下,转染SD的HMC与转染FP、NT组比较,其CTGFmRNA和蛋白的表达明显增加。转染KN的HMC与转染FP、NT组比较,其CTGF mRNA和蛋白的表达差异无显著性;高糖环境下转染SD的HMC与转染KN、转染FP、NT组比较,其CTGF mRNA和蛋白的表达明显增加。转染KN的HMC与转染FP、NT组比较,其CTGF mRNA和蛋白的表达明显减少。结论在DN中,高糖能促进HMC的CTGF mRNA及蛋白的表达,并且可以通过SGK1介导的信号通路来诱导人肾小球系膜细胞增加合成CTGF,这种新发现的信号通路,表明SGK1可能通过促进CTGF的合成来参与糖尿病肾病肾小球纤维化的发生。     

AT1-R-JAK／STAT 信号通路对肥大心肌细胞表达内脂素的调节

目的：观察心肌细胞肥大过程中应用不同的信号通道阻断剂阻断AngⅡ作用后内脂素的表达情况,研究内脂素水平变化的意义。方法采用SD乳鼠（出生2～3 d）,利用差速贴壁法提取原代心肌细胞并进行培养,48 h后改为无血清的培养基继续培养,24 h后分组。分别应用不同的信号通道阻断剂阻断AngⅡ的干预作用。应用RT-PCR、Western-Blot技术检测心肌细胞中内脂素表达情况,应用Western-Blot技术检测心肌细胞脑氨钠素（ BNP）表达情况。结果心肌细胞活力（光密度值）和BNP表达水平在AngⅡ浓度为10－8、10－7、10－6 mol／L时逐渐升高,AngⅡ浓度为10－6 mol／L时达峰值,而AngⅡ浓度升高为10－5 mol／L时心肌细胞活力下降,BNP表达水平下降。内脂素和内脂素mRNA水平,在AngⅡ浓度为10－8、10－7、10－6 mol／L时呈逐渐升高趋势, AngⅡ浓度为10－5 mol／L时达峰值。在AngⅡ浓度为10－6 mo1／L时,心肌细胞活力、内脂素mRNA表达和内脂素蛋白表达与对照组比较,差异均有统计学意义（ P ＜0．05）。心肌细胞MTT产物（ OD值）、内脂素mRNA和蛋白表达、BNP蛋白表达水平,随时间延长而增加。PD123319预干预组和AngⅡ干预组内脂素mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组和替米沙坦预干预组（P＜0．05）。AngⅡ组内脂素mRNA和蛋白表达水平与对照组、AG490＋AngⅡ组、SP600125＋AngⅡ组和U0126＋AngⅡ组比较,差异有统计学意义（ P ＜0．05）,AG490＋AngⅡ组、SP600125＋AngⅡ组和U0126＋AngⅡ组明显高于对照组（P＜0．05）。结论在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大中内脂素表达的增加,由AT1-R-JAK／STAT信号通路所介导。     

活性维生素D3对肾小球上皮间质转化的影响研究

目的:观察活性维生素D₃（1,25-（OH）₂D₃）对糖尿病大鼠肾小球足细胞标志蛋白Nephrin,间质转化标志蛋白Snail及间质标志蛋白Desmin表达的影响,探讨1,25-（OH）₂D₃在上皮间质转化中的作用。方法:24只链脲菌素诱导的糖尿病大鼠随机分为糖尿病组（DM）和1,25-（OH）₂D₃治疗组（DD）,后者给与1,25-（OH）₂D₃按3 ng·100 g^-1·d^-1皮下注射。另以10只大鼠作为对照组（NC）。于6周检测血糖（BG）、24 h尿蛋白（24 h UP）、尿液足细胞（UPC）。处死大鼠,PT-PCR及Westernbolt分别测定肾小球Nephrin、Snail、Desmin mRNA和蛋白质的表达。结果:DM组BG、24 h UP较NC组显著升高,而UPC与NC组相比无显著差异。DM组肾小球Nephrin mRNA和蛋白质的表达水平较NC组显著降低,而Snail、Desmin mRNA和蛋白表达显著增加。DD组BG、UPC与DM组相比无显著差异,而24 h UP较DM组显著降低,肾小球Nephrin mRNA和蛋白质的表达较DM组升高,而Snail、Desmin mRNA和蛋白表达降低。结论:1,25（OH）₂D₃上调Nephrin的表达,并减少Snail、Desmin的表达,可抑制上皮间质转化,减轻肾损伤。     

曲尼司特对糖尿病大鼠心肌纤维化的作用

目的探讨曲尼司特对糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及其可能机制。方法健康♂SD大鼠一次性尾静脉注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组(DM组),曲尼司特低剂量组(Tra1)及高剂量组(Tra2),造模成功72 h后每天ig给予曲尼司特100 mg.kg-1.d-1及200 mg.kg-1.d-1,同时设立对照组(NC组)。饲养12周。测量血糖、心脏质量指数、血浆及心肌血管紧张素Ⅱ水平;Masson染色观察心脏形态学变化,免疫组化法和Western印迹法检测心肌组织CTGF、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达。结果①与NC组相比,DM组大鼠心脏质量指数、血浆及心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平明显升高(P<0.01),心肌间质纤维化明显,心肌CTGF蛋白、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达增加;②与DM组比较,Tra1、Tra2组大鼠心脏质量指数、血浆及心肌AngⅡ水平均明显下降(P<0.05),心肌间质纤维化减轻,心肌CTGF、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达减少。结论曲尼司特能降低糖尿病大鼠心肌AngⅡ水平,减少CTGF、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达,从而抑制糖尿病大鼠心肌纤维化。