婴幼儿血管瘤患者尿液中bFGF的检测及意义

目的探讨尿液中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)浓度,以鉴别婴幼儿血管瘤和血管畸形并对血管瘤进行分期。方法采用ELISA法检测29例增生期血管瘤、24例消退期血管瘤、12例血管畸形患儿和10例对照婴幼儿尿液中bFGF浓度。结果增生期血管瘤患儿尿液中bFGF浓度高于消退期血管瘤、血管畸形和对照组,差别有显著性意义(P<0.05),消退期血管瘤、血管畸形与对照组之间尿液中bFGF浓度的差别亦有显著性意义(P<0.05)。结论用ELISA法测定尿液中bFGF简便、易行、可靠,可为临床鉴别血管瘤和血管畸形,并为划分血管瘤分期及监测治疗效果提供客观的依据。     

凋亡相关基因C-myc,bcl-2,p53在小儿血管瘤中的作用研究

目的探讨凋亡相关基因C-myc,bcl-2,p53与血管瘤增生、消退的关系。方法采用免疫组化SP法检测31例增生期血管瘤、35例消退期血管瘤组织中Cmyc,bcl2和P53蛋白。结果Cmyc在增生期血管瘤中的阳性率为80.65%,而在消退期血管瘤组织中均呈阳性,两组之间差异显著(P<0.01)。bcl2在增生期血管瘤中的阳性率为83.87%,明显高于消退期血管瘤45.71%(P<0.01)。P53蛋白主要定位于血管瘤中的肥大细胞。增生期血管瘤中P53着色的肥大细胞数31.18±9.08/HPF明显高于消退期血管瘤14.05±6.42/HPF(P<0.01)。结论凋亡相关基因Cmyc,bcl2,p53与小儿血管瘤增生、消退密切相关,且在血管瘤增生、消退的不同时期作用不同。     

细胞周期蛋白D1,E,A在血管瘤及血管畸形中的表达及意义

目的研究细胞周期蛋白D1,E,A在小儿及成人血管瘤和血管畸形中的表达以及在血管瘤增生、消退中的作用。方法采用免疫组化SP法检测41例小儿血管瘤(增生期27例,消退期14例)、6例成人血管瘤、10例血管畸形中CyclinD1,CyclinE,CyclinA的表达。结果CyclinD1与CyclinA阳性细胞指数在婴幼儿血管瘤增生组与消退组、增生组与畸形组、增生组与成人组之间差异有显著性(P<0.05),而消退组、成人组与畸形组三者之间差异无显著性(P>0.05)。CyclinE在婴幼儿血管瘤增生组、消退组、畸形组、成人血管瘤阳性表达率分别为96%,57%,0%,0%,婴幼儿增生组与消退组、增生组与畸形组、增生组与成人组之间差异有显著性(P<0.05),而消退组、成人组与畸形组三者之间差异无显著性(P>0.05)。结论CyclinD1,CyclinE,CyclinA可能通过促进细胞分裂、增殖作用而在血管瘤的发生、发展及退化过程中起重要作用。     

口服普萘洛尔治疗婴幼儿增生期血管瘤疗效分析及血清血管内皮生长因子的变化

目的:探讨口服普萘洛尔治疗婴幼儿增生期血管瘤的作用机制及临床疗效。方法:对42例增生期血管瘤患儿,给予普萘洛尔0.5~1.5 mg/(kg·d)连续服用,服药3~8个月。采用ELISA法检测患儿治疗前、治疗4周、治疗8周时血清血管内皮生长因子(VEGF)的水平,并观察临床疗效及不良反应。结果:①42例增生期血管瘤患儿Ⅰ级疗效有1例,Ⅱ级疗效2例,Ⅲ级疗效23例,Ⅳ级疗效16例,有效率(优加好)为92.9%。②42例增生期血管瘤在普萘洛尔治疗4周、8周时血清VEGF水平呈下降趋势,且治疗4周时低于治疗前(P0.05),治疗8周时低于治疗4周时(P0.05);治疗4周后血清VGEF下降水平与疗效等级具有正相关性(rs=0.705,P0.05),治疗8周后血清VGEF下降水平与疗效等级亦具有正相关性(rs=0.821,P0.001)。结论:普萘洛尔治疗婴幼儿增生期血管瘤疗效显著,不良反应轻微,其机制可能与下调增生期血管瘤患儿血清VEGF水平相关。     

VEGF和DLL4在婴幼儿血管瘤组织中的表达及相关性

目的探讨VEGF及DLL4在婴幼儿血管瘤发生、发展过程中的作用机制。方法应用免疫组织化学SP法检测50例婴幼儿血管瘤(增生期26例,消退期24例)组织中VEGF,DLL4和FⅧRAg的表达水平。采用HPIAS-1000图文报告管理系统对VEGF和DLL4的表达进行定量分析。结果增生期组VEGF的表达明显高于消退期组和正常皮肤组(P0.05),而后两组比较差异无统计学意义(P0.05)。增生期组DLL4的表达明显高于消退期组和正常皮肤组(P0.05),而后两组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 VEGF和DLL4在增生期血管瘤组织中高表达,两者的表达具有明显的一致性,共同促进血管瘤内皮细胞的增殖,在血管瘤的发生、发展过程中起了重要的促进作用。     

Sox2和Oct4在婴幼儿皮肤血管瘤组织中的表达及临床意义

目的研究婴幼儿皮肤血管瘤组织中转录因子Sox2和八聚体结合转录因子(Oct4)表达水平,并探讨其表达意义。方法收集2017年2月-2018年2月本院45例婴幼儿皮肤血管瘤手术切取的新鲜血管瘤组织标本,其中增殖期组23例,消退期组22例;同时收集相应正常皮肤的血管组织为对照组。采用RT-PCR检测组织中Sox2、Oct4和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达水平,Western blot检测组织中Sox2、Oct4蛋白表达水平,免疫组织化学染色法检测组织中VEGF表达情况,分析血管瘤组织中Sox2、Oct4与VEGF的关系。结果增殖期血管瘤组织中Sox2、Oct4 mRNA和蛋白表达水平均高于消退期和对照组(P0.05);消退期血管瘤组织中Sox2、Oct4 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组,但差异无统计学意义(P0.05);增殖期血管瘤组织中VEGF mRNA表达水平高于消退期和对照组(P0.05),消退期和对照组中VEGF mRNA表达水平差异无统计学意义(P0.05);增殖期血管瘤组织、消退期血管瘤组织和对照组正常皮肤组织中VEGF阳性表达率分别为86.96%、54.55%、31.11%,增殖期VEGF阳性表达率高于消退期和对照组(P0.05),消退期和对照组VEGF阳性表达率差异无统计学意义(P0.05);血管瘤组织中Sox2、Oct4与VEGF分别呈正相关关系(r=0.743,0.655;P0.05)。结论 Sox2和Oct4在婴幼儿皮肤血管瘤组织中高表达,与血管瘤病程分期有关,可能通过促进VEGF分泌促进血管新生,在血管瘤发生发展中起积极作用。     

皮肤血管瘤患儿尿液中碱性成纤维细胞生长因子的检测

目的 检测尿液中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平在血管瘤病程中的变化,为临床监测血管瘤的发生发展提供客观依据.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测27例增生期皮肤血管瘤患儿浅层X线治疗前后尿液中bFGF水平的变化,同时选择30例健康婴幼儿尿液作为对照.结果 增生期血管瘤患儿治疗前尿液中bFGF水平高于治疗后3个月和对照组,差异有统计学意义(t=0.206,P＜0.05),治疗后3个月与对照组之间bFGF水平的差异无统计学意义(t=0.505,P＞0.05).结论 ELISA检测尿液中bFGF方法简便、可靠,可为临床监测血管瘤发生发展提供客观指标.

Abstract：

Objective To determine the changes of urine bFGF level in the progression of cutaneous hemangioma,and to provide an objective index for the monitoring of hemangioma occurrence and development.Methods Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to determine the bFGF level in urine samples from 27 infants and young children with proliferative cutaneous hemangioma before and after treatment with low-dose superficial X-ray,and from 30 normal control infants and young children.Results The urine bFGF level was significantly higher in the patients before treatment than in those 3 months after the treatment and normal controls(t = 3.793,0.206,both P ＜ 0.05),while no significant difference was observed in the urine bFGF level between the treated patients and controls (t = 0.505,P ＞ 0.05).Conclusions Measurement of urine bFGF level by ELISA is a convenient and reliable method ,which may provide an objective index for the monitoring of hemangioma occurrence and development.     

婴幼儿皮肤血管瘤发生发展与细胞增殖和凋亡的研究

目的　观察小儿皮肤血管瘤增生消退过程中细胞增生和凋亡状态 ,以探讨小儿血管瘤发生发展机理。方法　采用免疫组化S P法和TUNEL检测 5 8例不同阶段血管瘤组织中PCNA增殖指数 (PI)和凋亡指数 (AI)。结果　增生期血管瘤PI明显高于消退期 ,AI显著低于消退期 (P <0 .0 5 )。消退Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期PI逐渐降低 ,AI逐渐增高 ,除Ⅱ、Ⅲ期AI之间无显著性差异外 ,其余各组之间均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。AI/PI在消退期明显高于增生期 ,在消退Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期随着病变发展明显增高 (P <0 .0 1)。结论　小儿皮肤血管瘤发生发展与细胞增生、凋亡有关。凋亡指数增高可作为血管瘤自然消退的早期判断指标。     

婴幼儿血管瘤组织p53基因突变和c-Myc基因扩增分析

目的探讨p53基因第4～6外显子突变及c-Myc基因扩增在婴幼儿血管瘤发生及发展中的作用。方法选择婴幼儿血管瘤组织25例,用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)筛选可能有p53基因外显子4～6突变的标本进行测序;运用聚合酶链反应-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)银染色后条带成像分析法检测c-Myc基因扩增情况,并以10例成人血管瘤组织作对照。结果婴幼儿组14(56.00%)例有p53基因第4外显子错义突变,成人组有2 (20.00%)例,两组差异无显著性意义(P>0.05)。婴幼儿组1例第6外显子发现同义突变,第5外显子未发现突变。婴幼儿组16(64.00%)例有c-Myc基因扩增,成人组仅2(20.00%)例,差异有显著性意义(P<0.05)。p53基因第4外显子突变与c-Myc基因扩增呈正相关(γ_s'=0.43,P<0.05)。结论p53基因的突变可能参与了血管瘤组织的增生过程,c-Myc基因扩增可能参与了血管瘤组织增生和消退过程。在血管瘤发生、发展过程中,二者起协同作用,共同促进血管瘤组织的增生或诱导其凋亡。     

血管瘤及血管畸形中聚集素和Bcl-2的表达

目的:检测聚集素(clusterin)和B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)在血管瘤和血管畸形中的表达,探讨他们在血管瘤自发消退过程中的作用。方法:采用免疫组化SP法检测30例增殖期、22例消退期血管瘤、27例血管畸形及5例正常皮肤组织中clusterin和Bcl-2的表达;用TUNEL法测定内皮细胞凋亡率。结果:clusterin在血管瘤消退期的表达明显高于增殖期、血管畸形和正常皮肤(P<0.01);Bcl-2在血管畸形中表达高于正常,血管瘤消退期低于正常(P<0.01);内皮细胞凋亡率在血管瘤消退期明显高于增殖期、血管畸形和正常皮肤(P<0.01)。在血管瘤中,内皮细胞凋亡率与clusterin的阳性率呈正相关而与Bcl-2呈负相关。结论:clusterin在血管瘤中发挥促凋亡作用,血管瘤的自然消退与其有关;Bcl-2发挥抗凋亡作用。     

血管瘤组织总ERK1/2及磷酸化ERK1/2的免疫印迹检测

目的检测细胞外信号调节激酶1/2(总ERK1/2)及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)在血管瘤组织中的表达并探讨其意义。方法应用免疫印迹法检测10例增生期血管瘤组织和8例退化期血管瘤组织总ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达。结果增生期血管瘤组织总ERK1/2的蛋白表达(0.87±0.14)与退化期血管瘤组织总ERK1/2的蛋白表达(0.79±0.05)差异无统计学意义(P>0.05);增生期血管瘤组织p-ERK1/2的蛋白表达(0.44±0.04)明显高于与退化期血管瘤组织p-ERK1/2的蛋白表达(0.23±0.08),差异有统计学意义(P<0.01)。结论血管瘤增生与ERK活性增高及ERK通路激活有关。     

婴幼儿血管瘤中p53基因突变及其蛋白表达

目的检测婴幼儿血管瘤中P53蛋白表达和p53基因第4～6外显子突变,以探讨p53基因在婴幼儿血管瘤发生发展中的作用机制。方法应用免疫组化S-P法检测了66例婴幼儿血管瘤组织中P53蛋白表达情况,用PCR-SSCP技术分析筛选并经测序,检测了25例婴幼儿血管瘤中p53基因外显子4～6的变化情况。结果 P53蛋白着色部位在肥大细胞胞浆内。增生期血管瘤中着色的肥大细胞数为31.18±9.08/HPF,高于消退期血管瘤14.05±6.42/HPF,两组之间差异显著(P0.01)。p53基因第4外显子PCR产物电泳条带异常者16例,经测序后发现14例为错义突变。第5、6外显子PCR产物中电泳条带异常者4例,经测序后发现1例第6外显子为同义突变。第5外显子未发现突变。结论 p53基因突变和蛋白误位可能参与了婴幼儿血管瘤的发生和发展过程。     

磷酸化ERK,p38MAPK在婴幼儿血管瘤组织中的表达及意义

目的探讨磷酸化ERK和p38MAPK信号通路在小儿血管瘤增生、消退中的作用。方法应用免疫组化SP法检测47例血管瘤(增殖期26例、消退期21例)组织中磷酸化ERK和p38MAPK的表达情况。结果磷酸化ERK阳性定位于细胞核,其在增殖期和消退期的阳性细胞指数分别为(67.71±12.68)%和(21.54±6.85)%;磷酸化p38MAPK阳性定位于细胞核,其在增殖期和消退期的阳性细胞指数分别为(83.78±5.25)%和(57.79±7.63)%;增生期磷酸化ERK与p38MAPK阳性表达呈正相关,而消退期呈负相关。结论磷酸化ERK和p38MAPK参与血管瘤的增生、消退过程;ERK通路可介导内皮细胞的增生和存活,而p38MAPK可能主要在消退期传递内、外源性凋亡信号,诱导内皮细胞凋亡。     

Conventional ultrasonography and elastography for the diagnosis of congenital and infantile hemangiomas

Infantile and congenital hemangiomas are difficult to distinguish in infants. The aim of this study was to compare the conventional ultrasonographic (US) and elastographic features of infantile and congenital hemangiomas. The US findings in 118 patients with congenital hemangioma (58 non-involuting, 36 rapidly involuting, 24 partially involuting) and 111 with 120 infantile hemangioma were retrospectively evaluated. On US imaging, 31.7% of infantile hemangiomas were hyperechoic, 31.7% hypoechoic and 36.6% mixed-echoic with hyperechoic and hypoechoic areas; 57.6% of congenital hemangiomas were mixed-echoic with a hypoechoic area and many vessels visible, 39.0% hypoechoic and 3.4% were mixed-echoic with hyperechoic and hypoechoic area. Calcifications were present in 6.8% and visible vessels involving muscle in 24.6% of congenital hemangiomas. All infantile hemangiomas and 82.2% of congenital hemangiomas were well-defined. All congenital hemangiomas were subcutaneous whereas 17.5% of the infantile hemangiomas were superficial. The maximum diameter and vascular density were greater in congenital hemangiomas. Elastography demonstrated that the congenital hemangiomas were softer than the infantile hemangiomas. The maximum diameter (including of visible vessels), thickness, vascular density, venous blood flow velocity and elasticity scores were greater for rapidly and partially involuting congenital hemangiomas than for non-involuting ones. The density of visible vessels in congenital hemangiomas decreased in the order of non-involuting, partially involuting and rapidly involuting. In conclusion, congenital hemangiomas have distinctive US imaging characteristics, including a greater maximum diameter, vascular density, number of visible vessels, visible vessels involving muscle, calcifications and elasticity score.     

普萘洛尔及异丙肾上腺素对体外培养婴儿血管瘤内皮细胞增殖和血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的：探讨普萘洛尔及异丙肾上腺素在体外对婴儿血管瘤内皮细胞增殖及血管内皮细胞生长因子（VEGF、VEGF-2）、人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达的影响。方法将体外培养的2~3代增殖期婴儿血管瘤内皮细胞分为普萘洛尔组和异丙肾上腺素组,其中普萘洛尔组分别换浓度为10、15、20 mg/L 普萘洛尔工作液（10、15、20 mg/L 普萘洛尔组）、空白 EGM-2培养基（空白组）和含0.16% DMSO EGM-2培养基（DMSO组）培养,而异丙肾上腺素组分别换5、10、20 mg/L 异丙肾上腺素工作液（5、10、20 mg/L 异丙肾上腺素组）和空白EGM-2培养基（空白组）培养。采用 MTT 法测定24、48、72、96 h 时各组血管瘤内皮细胞的增殖情况,ELISA 法测定培养24、48 h 时各组细胞培养上清液中 VEGF、VEGF-2、bFGF 的浓度。结果培养24、48 h 时,10、15、20 mg/L 普萘洛尔组血管瘤内皮细胞增殖差异无统计学意义（H 值分别为1.152、2.643,均 P >0.05）;72、96 h 时,20 mg/L 普萘洛尔组血管瘤内皮细胞的增殖明显低于空白组（P <0.05）,而空白组、DMSO 组及10、15 mg/L 普萘洛尔组间差异均无统计学意义。各浓度普萘洛尔、异丙肾上腺素作用24 h 时均对 VEGF、VEGF-2、bFGF 水平有一定影响。48 h 时,15、20 mg/L 普萘洛尔组 VEGF 水平均较空白组显著下降,同时10、15、20 mg/L 普萘洛尔组VEGF-2、bFGF 水平也均较空白组显著下降（P <0.05）;而5、10、20 mg/L 异丙肾上腺素组 VEGF 水平均较空白组显著升高（P <0.05）,20 mg/L 异丙肾上腺素组 VEGF-2、bFGF 水平均显著高于空白组及5、10 mg/L 异丙肾上腺素组（P <0.05）。结论一定浓度普萘洛尔作用于增殖期婴儿血管瘤内皮细胞一定时间后能够抑制细胞生长,而异丙肾上腺素反之,两者对细胞因子表达的影响作用也相反,因此推断普萘洛尔治疗婴儿血管瘤的机制可能与β肾上腺素能受体及其下游信号转导影响相关细胞因子表达相关。