γ射线诱导癌细胞凋亡致敏树突状细胞后的免疫应答

目的 观察树突状细胞（DCs）从γ射线诱导的凋亡胆管癌细胞获取抗原后，抗肿瘤免疫应答及对胆管癌细胞的特异性免疫杀伤效果。方法 用粒－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）加白介素－4（IL－4）从人外周血分化、诱导DCs,γ射线在体外诱导培养的人胆管癌细胞凋亡，将DCs、T淋巴细胞和凋亡胆管癌细胞共培养，同时设计不同类型肿瘤细胞（坏死胆管癌细胞及培养胆管癌细胞）作对照，7d后，分离、富集DCs、T淋巴细胞进行免疫应答及肿瘤细胞杀伤试验。结果 与凋亡胆管癌细胞共培养之DCs可以有效提呈胆管癌细胞抗原，有强烈的免疫应答，刺激的细胞毒T淋巴细胞（CTLs)特异性地杀伤胆管癌细胞。结论 γ射线诱导癌细胞凋亡可以致敏rhGM-CSF加rhIL-4从人外周血单核细胞诱导、扩增出的DCs并产生显著的杀伤胆管癌细胞的免疫反应，可望成为特异性免疫治疗肿瘤的一条新途径。     

小鼠骨髓树突状细胞的体外诱导培养及生物学特性分析

目的探讨从小鼠骨髓中体外诱导培养树突状细胞（DC）的可行性并进行生物学特性分析与鉴定。方法用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞,倒置显微镜动态观察形态学变化,扫描电镜观察其表面形态特征,流式细胞术分析细胞表面分子,同时进行抗原吞噬功能和刺激初始型T淋巴细胞增殖能力的检测。结果经体外诱导培养可获得大量未成熟和成熟DC,出现典型树突状形态。未成熟DC的细胞表型为CD11c^high、MHCⅡ^low、CD86^low,具有极强的抗原吞噬能力;未成熟DC经LPS刺激培养后可转变为成熟DC,细胞表型为CD11c^high、MHCⅡ^low、CD86^low,可显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖。结论体外诱导培养可获得小鼠骨髓来源的未成熟和成熟DC。     

G-CSF对健康人骨髓和外周血CD34+细胞和T细胞亚群影响的动态观察

目的 :探讨G -CSF对健康人骨髓及外周血CD3 4 + 细胞和T细胞亚群的影响。方法 :对 12例健康人 ,以G -CSF15 0 μg/ 12h ,皮下注射 ,连用 6d。应用流式细胞仪测定CD3 4 + 和T细胞亚群。结果 :应用G -CSF4 8h后 ,骨髓CD3 4 + 细胞开始明显增加 ,72h后外周血CD3 4 + 细胞开始明显增加 ,96h后两者达峰值 ,均较应用前差异显著 (P <0 .0 1)。T淋巴细胞亚群变化不明显 (P>0 .0 5 )。结论 :健康人应用G -CSF后骨髓及外周血CD3 4 + 细胞逐渐增加并于 96h后达到高峰 ,T细胞亚群则无明显变化。     

T淋巴细胞活性对有氧运动的免疫应答与适应特征

通过PHA淋巴细胞转化试验 ,选取刺激指数 (SI)反映T淋巴细胞功能 ,观察有氧运动和训练过程中T淋巴细胞功能的应答与适应特点。 16名未经体育专业训练的普通女大学生进行 8周有氧训练 ,每天 30分钟。结果显示 :(1)作为对一次运动的应答 ,运动后即刻SI值均出现明显下降 ,但在训练的前两周 ,运动后 1小时后未见恢复且继续下降 ,从第 6周末起 ,运动后 1小时SI值已基本恢复 ,表现为一条“V”形曲线。 (2 )作为对长期有氧运动的适应 ,随时间推移 ,第 1周至第 4周末SI值均显著低于训练前水平 (P <0 .0 5 ) ,至第 6周末基本恢复到训练前水平 ,上述结果可能与神经系统的免疫调节作用、应激激素的免疫抑制作用、免疫系统的自身调节以及免疫系统对神经系统、内分泌系统的反调节作用有关。     

粒细胞集落刺激因子对急性辐射损伤小鼠胸腺细胞亚群及其近期输出功能的影响

目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对急性辐射损伤小鼠胸腺细胞亚群重建及近期输出功能的影响。方法 雌性BALB/c小鼠50只给于6 Gy ⁶⁰Co 1次性全身照射后随机均分为GCSF组和对照组。GCSF组小鼠给予重组人G-CSF 100 μg·kg^-1·d^-1皮下注射,连续14 d,对照组小鼠给予等体积磷酸盐缓冲液(PBS)皮下注射,连续14 d。照后7、14、21 和28 d颈部脱臼处死小鼠,取出胸腺制成单个核细胞悬液,使用流式细胞仪检测胸腺双阴性细胞发育4阶段(DN1~4)细胞比例的变化,以及CD4 +CD8 +、CD4 +CD8-、CD4-CD8 +细胞亚群的比例。使用荧光定量PCR的方法检测照后30 和60 d 10⁵个胸腺细胞中T细胞受体重排删除环(sjTREC)拷贝数,判断胸腺输出功能。结果 照后7 d,胸腺DN细胞大量增殖,DN1细胞比例下降,DN4细胞比例增高,GCSF组DN1细胞比例在此时间点明显高于对照组(t=9.59,P＜0.05)。照后21 d GCSF组DN3、 DN4细胞比例均分别高于对照组(t=16.37、 7.6, P＜0.05)。照后7 d CD4 +CD8 +细胞比例降至最低,14 d出现反弹,21 d再次下降,以后逐渐恢复,照后28 d GCSF组CD4 +CD8 +细胞比例恢复正常并明显高于对照组 (t=12.22, P<0.05)。G-CSF对胸腺CD4 +CD8-细胞比例影响不大。照后21 d GCSF组CD4-CD8 +细胞比例明显高于对照组(t=3.77, P<0.05)。荧光定量PCR结果提示照后30 d GCSF组胸腺细胞sjTREC拷贝数明显高于对照组(t=5.95,P＜0.01),但照后60 d 两组胸腺细胞sjTREC拷贝数差异无统计学意义。结论 G-CSF可促进急性辐射损伤小鼠胸腺双阴性及双阳性细胞的增殖、分化,提高胸腺输出功能,加快中枢免疫重建。     

雷公藤甲素对调节性树突细胞的免疫效应及其机制研究

目的 探讨雷公藤甲素(TPT)对分泌IL-10的树突细胞(D C)亚群CDllclowCD45RBhighDC功能的影响.方法 采用磁珠分选技术获得C57BL/6小鼠脾脏CD11clowCD45RBhighDC和CD4+T淋巴细胞.CD11clowCD45RBhighDC分别加入1、10、20ng/ml TPT后进行培养,以不加TPT的细胞作为对照,流式细胞仪检测细胞表面分子CD40、CD80、CD86、I-a/e的表达,ELISA法检测培养液中IL-10的含量.将CD4+T淋巴细胞分为正常对照组(未作任何处理)、未刺激组(与未经TPT处理的CD11clowCD45RBhighDC混合培养)、高浓度TPT刺激组(与经20ng/ml TPT处理后的CD11clowCD45RBhighDC混合培养)、高浓度TPT刺激+抗体1(抗IL-10抗体)组、高浓度TPT刺激+抗体2(IL-10的同型对照抗体)组,采用MTT法测定CD4+T淋巴细胞的增殖活性,流式细胞仪检测CD4+T淋巴细胞培养液中IL-4和IFN-γ的含量.结果 与对照组相比,TPT能显著降低CD11clowCD45RBhighDC表面分子CD40和I-a/e的表达,增强CD86的表达及IL-10的分泌,其中IL-10的分泌水平随TPT浓度的增加而增加.高浓度TPT刺激组和高浓度TPT刺激+抗体2组细胞增殖活性及IFN-γ分泌水平明显低于未刺激组,IL-4分泌水平明显高于未刺激组,而高浓度TPT刺激+抗体1组细胞增殖活性及IFN-γ分泌水平明显高于未刺激组,IL-4分泌水平明显低于未刺激组.结论 TPT可促进CD11clowCD45RBhighDCIL-10的分泌,诱导CD4+T淋巴细胞向Th2型分化,并可通过激活CD11clowCD45RBhighDC介导机体的免疫抑制活性.     

G-CSF受体及其mRNA在结直肠癌和其附近正常黏膜中的表达

目的研究粒细胞集落刺激因子受体(CrCSFR)在结直肠癌中的表达情况，了解G-CSF在结直肠癌发生、发展中的作用。方法应用免疫组化RT-PCR法分别检测42例结直肠癌及其附近正常黏膜组织中G-CSFR蛋白和其mRNA表达情况，并分析结直肠癌肿瘤细胞G-CSFR的表达及与临床病理因素的关系。结果免疫组化表明结直肠癌中有明显的G-CSFR蛋白的表达(31／42，73．81％)，并明显高于正常黏膜(20／42，47．62％，P＜0．001)，许多Cr-CSFR表达强阳性的结直肠癌，相应的正常黏膜G-CSFR阴性或弱阳性表达。G-CSFR的表达与肿瘤病理分期、分化程度相关(P=0．001、P＜0．001)，与病人性别、年龄、肿瘤大小无明显相关(P=O．346、P=0．686：P=O．459)。RT-PCR结果示42例肿瘤标本中21例呈G-CSFR mRNA阳性表达，而相应正常黏膜仅11例。结论C-CSFR在结直肠癌中的表达较正常黏膜明显上调，结直肠癌患者应用G-CSF时应考虑其对肿瘤细胞的影响。     

负载食管癌抗原肽树突状细胞诱导的T淋巴细胞对食管癌细胞的特异性杀伤活性

目的研究负载食管癌抗原肽树突状细胞（DC）诱导的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对人食管癌细胞株TE．1的杀伤效应。方法用弱酸洗涤法获得食管癌TE-1细胞的抗原肽，体外诱导扩增DC并负载酸洗食管癌抗原肽，用负载该抗原肽的DC制备特异性CTL，以^53 Cr释放法测定CTL对TE-1细胞的杀伤活性。结果负载酸洗食管癌抗原肽DC诱导的CTL对TE-1细胞的杀伤率[（81．12±2．93）％]较未负载食管癌抗原肽DC诱导的CTL对TE-1的杀伤率[（11．16±3．07）％]明显提高，差异有统计学意义（F=2437．09，P〈0．001）。负载食管癌抗原肽DC诱导的CTL对用干扰素（IFN）-1刺激后的TE-1细胞杀伤率[（89．15±3．62）％]比未经IFN-1刺激的TE-1细胞杀伤率[（61．19±5．17）％]高，对酸洗后TE-1的杀伤率[（9．18±2．52）％]明显减低，组间差异有统计学意义（F=963．43，P〈0．001）。负载食管癌抗原肽DC诱导的CTL对人食管癌细胞株TE-1、Eca-109，人肺腺癌细胞株K59和人肾透明细胞癌细胞株786-0的杀伤率依次减低，差异有统计学意义（F：680．87，P〈0．001）。结论以DC为提呈细胞的肿瘤免疫治疗有望成为有效治疗食管癌的新途径。     

创伤后反抑制T细胞的变化及其对细胞免疫功能的影响

创伤后Ｔ细胞的辅助—抑制免疫调节网络失衡是导致机体细胞免疫功能异常的重要环节，作为执行机体反抑制功能的重要成员——反抑制Ｔ细胞（ｃｏｎｔｒａｓｕｐｐｒｅｓｏｒＴｃｅｌｓ，Ｔｃｓ）是否也参与了这一过程，则是尚须探讨的问题。本课题利用细胞培养及分离技术，...     

树突细胞与T淋巴细胞相互作用及其免疫调节效应

细胞免疫是机体免疫反应的重要组成部分,而树突状细胞（dendritic cell,DC）是功能最强的抗原提呈细胞（APC）,广泛存在于淋巴和非淋巴组织中。近年来研究发现,DC是免疫系统的重要调节细胞,具有广泛的生物学效应,包括激活天然免疫系统、启动更持久的适应性免疫、诱导胸腺清除自身反应性T细胞、分化调节性T细胞（regulatory T cell,Tr）,起到维持自身免疫耐受的作用。DC被认为是免疫反应的发动者,发生炎症时,最先与抗原接触激活CD4^＋ T细胞,进而引起细胞因子的分泌并诱发免疫应答反应。目前,DC与T淋巴细胞的相互作用及其免疫调节效应受到高度关注,本文拟就相关研究进展做一综述。     

胃肠道腺癌患者与正常人PBMC诱生DC差异性研究

目的 对比胃肠道腺癌患者与健康志愿者外周血单核细胞(PBMC)在体外向树突状细胞(DC)分化并成熟的差异，探讨胃肠道腺癌对PBMC向DC转化及成熟能力的影响。方法 采集两组PBMC经IL-4、GM-CSF、TNF-α诱导使其向DC转化，以流式细胞仪测获得DC的纯度及CD83、CD1a表达情况。结果 胃肠道腺癌患者外周血分离PBMC时，收获细胞的数量明显低于来自健康人同等体积全血分离得到的PBMC数量。胃肠道腺癌患者PBMC可以向DC转化并表达B7共刺激因子，但CD83、CD1a表达与健康对照者存在显著差异。结论 胃肠道腺癌患者PBMC的数量以及向DC的分化成熟能力可能受到一定程度的抑制。     

骨髓基质细胞输注对外周血干细胞移植造血恢复的影响

为观察骨髓基质细胞输注对外周血干细胞移植（PBSCT）后造血恢复的影响，经放、化疗预处理的BALB／c小鼠，分别输入动员的外周血干细胞（PBSCT组）、外周血干细胞联合扩增的骨髓基质细胞（实验组），观察受体鼠4周的生存率、骨髓有核细胞（BMNC），粒细胞巨噬细胞集落形成单位（CFU－GM）、成纤维细胞集落形成单位（CFU－F）、外周血白细胞计数等指标。结果显示，实验组的生态率，BMNC、CFU－GM、CFU－F较PBSCT组显著升高（P＜0．005）；白细胞的最低值较PBSCT组高（P＜0．01），白细胞恢复较PBSCT组块（P＜0．01）。提示骨髓基质细胞输注有促进外周血干细胞移植造血恢复的作用。     

高原地区人群红细胞免疫粘附功能观察

本文采用红细胞免疫粘附（ＲＣＩＡ）花环试验测定了沱沱河（海拔４７００ｍ）和西宁（海拔２２６０ｍ）两地人群的红细胞免疫功能，并进行了对比观察。结果显示高度高原沱沱河地区人群ＲＣＩＡ花环率与中度高原西宁地区人群花环率相比呈机显著性下降（Ｐ＜０．００１），急进高度高原后，ＲＣＩＡ功能亦呈明显下降，循环免疫复合物（ＣＩＣ）升高组，ＲＣＩＡ活性亦显示明显降低，提示两者之间存在着一定的相关性，最后就高原地区人群ＲＣＩＡ功能下降的原因进行了简要讨论。     

急性运动对小鼠免疫细胞功能的影响

急性运动后小鼠脾脏淋巴细胞对ConA分裂原和抗原的增殖反应明显增强;辅助性T细胞和抑制性T细胞的比值上升;脾淋巴细胞培养液中IL-2活性明显增强。     

运动、锌缺乏对小鼠免疫细胞功能的影响

观察了运动、锌缺乏对小鼠免疫细胞功能的影响。结果表明锌缺乏和限制进食会损伤淋巴细胞对ＣｏｎＡ的增殖反应和ＩＬ－２分泌水平，运动会加重这种损伤作用；运动和饥饿诱导肝脏ＭＴ增加，但在锌缺乏和饥饿时运动对ＭＴ的诱导作用被掩盖；补锌能部分恢复受损的免疫细胞功能。     

抗乙肝胎盘转移因子的特异免疫活性观察

本研究由ＨＢＶＭ－Ａｂ阳性胎盘提取的抗乙肝胎盘转移因子（ＰＳＴＦ）的特异免疫活性证明，经注射，小鼠外周血淋巴细胞明显增多，胸腺重量和指数亦显著增加，酯酶染色证明７５％属Ｔ－样淋巴细胞，２５％属Ｔｈｙ－样淋巴细胞，人白细胞或小鼠白细胞体外转移ＰＳＴＦ特异免疫活性、或豚鼠和小鼠体内转移ＰＳＴＦ特异免疫活性，再取其白细胞作白细胞粘附抑制、白细胞移动抑制、特异淋巴细胞转化、小鼠足掌注射和诱生γ－干扰素试验     

苯那普利、芦沙坦治疗自发性高血压大鼠对肾功能及对碱性成纤维细胞生长因子、内皮素的影响

为与血管紧张素转换酶抑制剂（ＡＣＥＩ）苯那普利比较,研究新一代降压药血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂芦沙坦对自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）肾功能的影响,以及两药减轻 ＳＨＲ肾损害可能的机制,设立苯那普利治疗组、芦沙坦治疗组、未治疗组及正常血压对照组,治疗３个月后,检测肾功能、肾组织病理改变,血浆及肾组织内皮素（ＥＴ）水平和肾组织中碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的表达。结果显示,芦沙坦降压、延缓ＳＨＲ尿白蛋白排泄率与苯那普利比较差异无显著性意义,两治疗组肾组织病理损害轻,芦沙坦组血浆、肾组织中ＥＴ及苯那普利组肾组织中ＥＴ均明显降低,两组肾组织中ｂＦＧＦ的表达均减弱。结果表明,芦沙坦能延缓ＳＨＲ肾损害,苯那普利和芦沙坦减轻ＳＨＲ肾损害与其降低ＥＴ、抑制ｂＦＧＦ表达可能有关。     

成纤维细胞生长因子10对人角朊细胞表达GM-CSF的刺激作用

研究FGF 10对角朊细胞表达GM CSF的作用 ,以探讨FGF 10促进创面愈合的机制。按FGF 10的浓度分为 4、16、12 5和5 0 0ng/ml四组 ,细胞接种密度为低密度 (2 5 0 0细胞 /cm2 )和高密度 (5 0 0 0细胞/cm2 )两种 ,分别于FGF 10作用后 2 4、48和 72h收集细胞培养液上清并进行细胞计数 ,测定GM CSF的含量。结果显示 ,低密度接种时 ,2 4h收集的各组上清中均未能检测到GM CSF,48h上清中的12 5ng/ml和 5 0 0ng/mlFGF 10组GM CSF的浓度及单个细胞的GM CSF的分泌均显著高于阴性对照组(P <0 0 5 )。 72h的培养上清中仅5 0 0ng/mlFGF 10组GM CSF的分泌量显著高于对照组 (P<0 0 5 )。高密度接种时 ,2 4h的上清中 16、12 5、5 0 0ng/ml的FGF 10各组GM CSF浓度显著高于对照组 (P<0 0 5 ) ,但单个细胞GM CSF的分泌无显著性变化 (P >0 0 5 ) ,48h的培养上清中 ,FGF 10各组的GM CSF均未升高 ,且 48h各组单个细胞GM CSF的分泌与细胞总数呈负相关 (r2 =0 881,P <0 0 5 )。结果提示FGF 10可能通过刺激GM CSF的分泌来促进创面肉芽组织形成。     

福氏与宋内氏痢疾菌双价菌苗候选株安全和免疫效果的进一步观察

给恒河猴灌服福氏和宋内氏痢疾菌双价菌苗候选株Fs-18后无任何不良反应.用粪便中分离的该株培养物进行豚鼠Sereny试验,未见有毒力回复突变.Fs-18株经口免疫的恒河猴,对宋内氏毒株和福氏2a(F2a)毒株经口感染具有明显的双重保护效果.用Fs-18株经耳静脉免疫的家兔产生高滴度的抗宋内氏菌和F2a菌的二价血清抗体.DNA探针杂交试验表明,Fs-18株与宋内氏菌侵入质粒的4.1kb Hind Ⅲ片段无同源性.     

肝癌患者红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力的研究

对肝癌患者红细胞免疫粘附功能和血清中调节因子变化进行了研究。肝癌患者红细胞免疫粘附肿瘤细胞的活性低于正常人，并对其变化机制进行了探讨。肝癌患者（４０例）血清中，红细胞免疫促进因子［（４５．１±５．１）％〕低于正常人［（９８．８±８．１）％］；而红细胞免疫抑制因子［（５３．１±７．２）％）高于正常人［（２７．０±４．１）％］。研究表明在肝癌患者中，红细胞免疫功能减低与血清中调节因子变化密切相关。