黄曲霉毒素G1对体外培养HPBM增殖及TNF-α分泌的影响

目的:研究黄曲霉毒素G₁(AFG₁)对体外培养人外周血单个核细胞(HPBM)增殖及细胞TNF-α分泌的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)和MTT比色法研究AFG₁对HPBM增殖的影响。以双抗体夹心ELISA法检测AFG₁对HPBMTNF-α分泌的影响。结果:FCM检测结果显示,AFG₁作用6h,1000μg/L处理组HPBM的增殖指数明显高于对照组。AFG₁作用24h,200μg/L和1000μg/L浓度的AFG₁可明显刺激HPBM增殖;回归分析结果表明,AFG₁作用6h和24h,AFG₁浓度均与增殖指数呈正相关(r分别为0.5122和0.5119,P均＜0.05)。MTT比色法结果显示,2000μg/LAFG₁处理HPBM的A值明显高于对照组。AFG₁在100μg/L浓度下可显著抑制TNF-α分泌(P＜0.05)。结论:AFG₁对体外培养HPBM的增殖有刺激作用,在100μg/L浓度下对HPBMTNF-α的分泌有一定抑制作用。     

TNF-α、IL-1β、LPS对心肌细胞影响的研究

目的 :体外用TNF -α、IL - 1β、LPS刺激心肌细胞后 ,观察心肌细胞的变化。 方法 :体外培养心肌细胞 ,用不同浓度的TNF -α、IL - 1β、LPS等刺激心肌细胞后 ,分别于 8h、2 4h、4 8h观察心肌细胞有无发生肥大反应 ,于2 4h、4 8h、72h观察心肌细胞有无凋亡。结果 :在予TNF -α、IL - 1β、LPS刺激心肌细胞后 ,与对照组相比 ,10 μg/L、15μg/L的TNF -α、2 0 μg/L、10 0 μg/L的IL - 1β和 10mg/L、15mg/L、2 0mg/L的LPS均能明显促进心肌细胞肥大 ,以刺激后 2 4h明显。同时 2 0 μg/L的TNF -α、10 0 μg/L的IL - 1β和 3× 10 4g/L的LPS可引起心肌细胞凋亡 ,以 72h为明显。结论 :TNF -α、IL - 1β、LPS可以引起心肌细胞的肥大和凋亡 ,炎症反应增高可能是心血管疾病的主要原因。     

异烟腙类衍生物TJU103对人T细胞增殖和细胞因子分泌的影响

目的 :探讨异烟腙类衍生物TJU10 3体外对同种异体抗原刺激的T淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的影响。方法 :采用MTT法和酶联免疫吸附实验 (ELISA)分别观察了TJU10 3对T细胞增殖和分泌细胞因子的影响。结果 :TJU10 3在 5 0mg/L浓度时 ,能够明显降低HLA半相合供、受者间混合淋巴细胞反应 (MLR)以及肿瘤坏死因子α(TNF α)和γ干扰素 (IFN γ)等细胞因子的分泌 (P <0 0 1)。结论 :TJU10 3能够特异性地与CD4 T细胞结合 ,降低CD4 T细胞的增殖和细胞因子分泌。     

钙离子载体诱导人外周血单个核细胞向树突状细胞分化的信号转导

目的 :初步探讨钙离子载体 (calciumionophore,CI)诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)向树突状细胞 (DC)分化的细胞信号转导途径。方法 :分离健康献血者的PBMC ,加入rhGM CSF及A2 3187各 10 0 μg/L ,部分细胞预先用W 7(10 μmol/L)或CsA(0 .5mg/L)或KT5 92 6 (1μmol/L)处理 30min后 ,再加入rhGM CSF及A2 3187各 10 0 μg/L。体外培养 4 0h后 ,于相差显微镜下观察细胞的形态 ;流式细胞仪检测细胞的表面标志 ;用MTT比色法检测上述细胞刺激同种异体T细胞的增殖作用。结果 :与 10 0 μg/L的A2 3187及rhGM CSF共同培养 4 0h的健康献血者的PBMC ,出现典型的树突状突起 ,同时CD83、CD80及CD86分子的表达上调 ,CD14分子的表达下调 ,刺激同种异体T细胞增殖的能力增强 ;而预先用W 7或CsA或KT5 92 6处理 30min后、再给予rhGM CSF及A2 3187处理的PBMC ,其形态、表面标志物及对T细胞的刺激增殖能力 ,均不同程度的受到抑制。结论 :CI诱导的PBMC向DC的分化 ,可能受控于Ca2 /钙调蛋白及其下游的多个细胞信号转导途径的调节     

胰岛素样生长因子结合蛋白2、4在实验性肝细胞损伤中的表达及意义

目的：通过观察肿瘤坏死因子α (TNF -α)和转化生长因子β1（TGF-β1）两种细胞因子所致体外培养的肝细胞损伤时胰岛素样生长因子结合蛋白2、4(IGFBP2、IGFBP4)的表达变化,探讨IGFBP2和IGFBP4在肝损伤中的作用机制。方法：对人肝细胞株HL-7702分别给予不同浓度的TNF-α、TGF-β1两种处理因素作用24 h,采用免疫细胞化学染色法观察其IGFBP2和IGFBP4的表达变化,再在相同处理培养条件下用MTT比色法检测两种细胞因子对肝细胞抑制率的影响。根据MTT及预实验结果选择TNF-α 20 μg/L作用于人肝细胞株48h,采用Annexin-Ⅴ/PI双染色流式细胞分析法和TUNEL法检测肝细胞凋亡发生率。结果：与对照组相比,各处理组IGFBP2、IGFBP4的表达均显著增加(P<0.05),其中在TNF-α 20 μg/L组和TGF-β1 4 μg/L组表达最强,且与肝细胞抑制率呈正相关关系(P<0.05 or P<0.01)。TNF-α 20 μg/L处理48 h后肝细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论：IGFBP2、IGFBP4参与了肝细胞的损伤过程,在TNF-α、TGF-β1介导的肝细胞损伤中具有重要作用。     

ox-LDL诱导巨噬细胞TNF-α的时序表达

目的 :细胞因子在动脉粥样硬化发生发展过程中扮演重要角色。本课题旨在研究氧化型低密度脂蛋白 (ox -LDL)致巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α(Tumornecrosisfactor,TNF -α)的表达时序 ,以探讨TNF -α可能在动脉粥样硬化发生过程中的作用。方法 :人巨噬细胞株 2 8SC(由ATCC提供 )。用含有 10 0mg/L青霉素、10 0mg/L链霉素和 10 %胎牛血清的RPMI 16 4 0培养基于37℃ ,5 %的CO2 中培养。在培养基中加入终浓度为 15 0mg/L的ox-LDL ,37℃共育后 ,分别于 0h、3h、6h、12h、2 4h、36h收集细胞 ,分别为对照组、ox -LDL 3、ox -LDL 6、ox …     

G-CSF、AMD3100对大鼠间充质干细胞增殖、迁移和黏附能力影响的研究

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、AMD3100对大鼠间充质干细胞(MSCs)增殖、迁移和黏附的影响.方法 采用MTT比色法、Transwell迁移法和黏附试验分别检测体外G-CSF、AMD3100对间充质干细胞的增殖、迁移和黏附能力的影响.结果 在G-CSF质量浓度为200 μg/L、AMD3100质量浓度为0.5 mg/L时MSCs增殖能力最强;在G-CSF质量浓度为200 μg/L、AMD3100质量浓度为0 mg/L时MSCs迁移能力最强;在G-CSF质量浓度为200 μg/L、AMD3100质量浓度为0.5 mg/L时MSCs黏附能力最强.结论 体外G-CSF对间充质干细胞的增殖、迁移和黏附能力呈促进作用,而AMD3100呈抑制作用.     

TNF-α对兔软骨终板细胞增殖、凋亡及基质形成的影响

目的：探讨TNF-α对体外培养的兔软骨终板细胞增殖、凋亡及基质形成的影响。方法:分离培养并鉴定兔软骨终板细胞后，分别加入不同浓度的TNF-α，用 MTT测定不同时点软骨终板细胞增殖活性的变化；免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Fas、caspase-3 表达的变化；RT-PCR 检测培养过程中蛋白聚糖、Ⅱ型胶原 mRNA 的表达变化。结果:50 μg/L、100 μg/L浓度TNF-α可抑制细胞增殖；50 μg/L浓度TNF-α可降低 Bcl-2的表达，10 μg/L、50 μg/L浓度TNF-α均可促进Bax、Fas、caspase-3 的表达；10 μg/L、50 μg/L浓度TNF-α可降低collagen IIa mRNA 的表达，TNF-α 为50 μg/L浓度时才可降低aggrecan mRNA 的表达。结论:TNF-α可抑制软骨终板细胞的增殖及基质合成，促进软骨终板细胞促凋亡因子的生成。     

外用中药有效成分对血管内皮细胞增殖作用的影响

目的 :观察常用外用中药有效成分对血管内皮细胞增殖作用的影响 ,初步探讨其促进皮肤创伤愈合的机制。方法 :采用MTT比色法观察中药人参皂苷Rg1、Rh1、黄芪多糖、鹿茸多肽、麝香酮和桂皮醛、乳香水提物对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC ,从健康产妇脐带中分离 )增殖的影响。结果 :在 2 4 4mg/L - 0 5g/L浓度范围内黄芪多糖对HUVEC未表现出增殖促进作用 ;在1 94mg/L - 0 5g/L浓度范围内人参皂苷Rh1促进HUVEC的增殖 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,与对照组相比增殖率为 33 33% -111 11% ;在 1 94mg/L - 0 5g/L浓度范围内人参皂苷Rg1都有…     

HMGB1对淋巴细胞增殖、凋亡及Th1/Th2、Tc1/Tc2漂移的影响

目的:探索HMGB1是否参与淋巴细胞免疫功能的调节.方法:系列浓度HMGB1单独或与ConA联合刺激培养小鼠脾淋巴细胞.MTT法检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞表面CD3、CD8及细胞内IL-4、IFN-γ表达.结果:(1)HMGB1时间-剂量依赖性调节淋巴细胞增殖,而不影响其凋亡.(2)不同HMGB1浓度和刺激时间不影响淋巴细胞Th1、Th2及Th1/Th2变化,但10 μg/L和100 μg/L HMGB1刺激12～24 h,Th1亚群占优势;培养12～24 h,淋巴细胞Tc1亚群明显减少,Tc2无变化.Tc1/Tc2变化显示,1 μg/L和10 μg/L HMGB1刺激,Tc1亚群占优势.(3)培养12～24 h,上清中IL-2增加,sIL-2R减少,IL-2/sIL-2R比例升高20～50倍,尤以10 μg/L HMGB1刺激明显.结论:低剂量HMGB1可增强淋巴细胞免疫功能.     

PKC-α、PKA-Ⅰ反义核酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞生长增殖的影响

目的 :探讨PKC -α和PKA -Ⅰ反义核酸 (asODN)对鼻咽癌CNE - 2Z细胞生长增殖的影响。方法 :分别用脂质体 (lipofectin ,LP)介导asODN转染鼻咽癌CNE - 2Z细胞。实验组 :① 0 0 1- 1 0 0 μmol/LPKC -αasODN ;②0 0 1- 1 0 0 μmol/LPKA -ⅠasODN ;③ 0 5 0 μmol/LPKC -αasODN +0 5 0 μmol/LPKA -ⅠasODN。对照组 :相应浓度的随机序列 (rODN)。用免疫组化法检测CNE - 2Z细胞PKC -α和PKA -Ⅰ的表达 ,MTT法检测其生长指数 (growthin dex ,GI) ,软琼脂克隆形成率检测其体外增殖能力。结果 :PKC -αasODN或 /和PKA -ⅠasODN均可阻断其相应PKC-α或PKA -Ⅰ的表达 (P <0 0 5 )。PKC -αasODN或PKA -ⅠasODN均能显著降低CNE - 2Z细胞GI和软琼脂克隆形成率 (P <0 0 5 ) ,且具有量效依赖关系。PKC -αasODN +PKA -ⅠasODN共同作用可使其GI和软琼脂克隆形成率非常显著降低 (P <0 0 1) ,无明显量效依赖关系 ,两者对CNE - 2Z生长抑制作用强于PKC -αasODN或PKA -Ⅰa sODN(P <0 0 5 ) ,对其软琼脂克隆形成率的抑制作用与PKC -αasODN或PKA -ⅠasODN无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 :PKC -αasODN和PKA -ⅠasODN均可抑制CNE - 2Z细胞体外生长和增殖 ,两者具有协同作用。     

地龙提取物对小鼠腹腔MФ和脾细胞NO及TNF-α产生的影响

目的 :探讨地龙提取物 (AL)对小鼠腹腔MΦ 和脾细胞分泌NO和TNF α的影响。方法 :将不同剂量的AL与小鼠腹腔MΦ 或脾细胞孵育 2 4h ,收集上清液分别采用重氮化反应和MTT比色法 ,检测NO和TNF α的水平。结果 :0 .1g/L的AL组与正常对照相比较 ,可明显提高MΦ 和脾细胞分泌NO的水平 ,并可以拮抗地塞米松 (Dex)对MΦ 和脾细胞分泌NO的抑制作用。 1× 10 -4,1× 10 -3 g /L的AL组可促进MΦ 和脾细胞分泌TNF α ,并可拮抗Dex的抑制作用。结论 :AL可以激活ΜΦ 和脾细胞 ,使其分泌NO和TNF α的水平增加 ,并可拮抗Dex对ΜΦ 和脾细胞的抑制作用。     

FK506对NIT-1细胞增殖和胰岛素分泌的影响

目的 探讨他克莫司(FK506)对NOD鼠胰岛β细胞系(NIT-1)增殖、凋亡和胰岛素分泌的影响.方法 用MTT法、流式细胞术检测NIT-1细胞增殖;放射免疫法、real-time PCR检测NIT-1细胞胰岛素分泌和胰岛素分化相关基因PDX-1、GLUT2和GK mRNA的表达.结果 FK506(20 μg/L)抑制NIT-1细胞增殖(P＜0.05),诱导细胞凋亡(P＜0.05);FK506(10 μg/L)抑制NIT-1细胞释放胰岛素(P＜0.05),胰岛素分泌相关基因PDX-1(胰岛素促进因子-1)、GLUT2(葡萄糖转运载体2)mRNA表达下调(P＜0.05).结论 FK506(10 μg/L)可抑制NIT-1的增殖,诱导凋亡,可通过下调PDX-1和GLUT2 mRNA表达,抑制NIT-1胰岛素分泌.     

17-β-雌二醇对人B淋巴细胞系IM-9细胞的调节作用

目的:探讨17-β-雌二醇(17-β-estradiol,E2)在体外对人B淋巴细胞系IM-9细胞的调节作用.方法:MTT法检测IM-9细胞的增殖;RT-PCR检测IM-9细胞IgG及凋亡相关基因Bcl-2、 Bax的表达;流式细胞术(FCM)检测IM-9细胞凋亡情况.结果:10-6～10-4 mol/L浓度的 E2对IM-9细胞增殖有明显的抑制作用,呈现剂量依赖性,并抑制IM-9细胞免疫球蛋白IgG的分泌,FCM显示E2诱导IM-9细胞凋亡,Bcl-2表达降低而Bax表达增强.结论:不同浓度的E2可通过调节Bcl-2、 Bax基因表达及Bcl-2/Bax表达比调节B淋巴细胞增殖及其免疫球蛋白的分泌.     

胰岛素、地塞米松、肿瘤坏死因子α能调节脂联素的表达和分泌

目的通过体外培养的3T3-L1脂肪细胞模型,研究胰岛素、地塞米松和肿瘤坏死因子α(TNFα)对脂肪细胞因子脂联素(Acrp30)的mRNA表达和蛋白分泌的影响。方法用150nmol/L胰岛素、100nmol/L地塞米松和10ng/ml TNFα刺激分化完全的3T3-L1细胞16h,提取细胞RNA,运用半定量RT-PCR技术检测Acrp30mRNA表达量的变化;另外,用同样浓度的胰岛素、地塞米松和TNFα刺激分化完全的3T3-L1细胞1、2、4、16h,用Western印迹技术检测Acrp30分泌的变化。结果胰岛素、地塞米松和TNFα均能下调Acrp30mRNA的表达;地塞米松和TNFα减少Acrp30的蛋白分泌;而胰岛素仅能瞬时刺激Acrp30的蛋白分泌,作用时间超过4h对Acrp30的分泌并无影响。结论血浆脂联素蛋白浓度在翻译后水平被调节,包括翻译和(或)分泌水平。     

脂多糖预处理对人外周血单核细胞分泌TNFα和PGE2的影响

探讨不同剂量脂多糖预处理对健康人外周血单核细胞分泌细胞因子TNFα和PGE2的影响。分离健康志愿者外周血单核细胞，以不同剂量脂多糖(0、10、100、1000μg/L)预处理24h，然后测定其再次受到不同剂量脂多糖(0,10、100、1000μg/L)刺激后分泌TNFα和PGE2水平。采用ELISA方法测定TNFα，EIA方法测定PGE2。脂多糖可刺激人外周血单核细胞分泌TNFα和PGE2。脂多糖预处理导致外周血单核细胞分泌。TNFα减少，而明显增加PGE2的生成。脂多糖预处理可以引起人单核细胞产生耐受。     

全反式维甲酸对人胚肺成纤维细胞增殖及α-SMA表达的影响

目的: 研究全反式维甲酸(ATRA)对人胚肺成纤维细胞(HFL-I)增殖与分化的影响。方法: 体外培养HFL-I, MTT法检测不同浓度ATRA(0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L)作用3 d对HFL-I增殖能力的影响。5 μg/L 转化生长因子β₁(TGF-β₁)刺激0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA表达,刺激0 d、1 d、3 d、5 d后,Western blotting法检测α-SMA蛋白表达。不同浓度ATRA干预,24 h后RT-PCR方法检测α-SMA mRNA表达,3 d后用Western blotting方法检测α-SMA蛋白表达。结果: (1) MTT法检测显示不同浓度ATRA以浓度依赖性方式抑制HFL-I细胞的增殖(P<0.05)。(2)5 μg/L TGF-β₁诱导后,HFL-I细胞中α-SMA mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05)。(3) ATRA以浓度依赖性方式下调TGF-β₁诱导的α-SMA mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论: ATRA能够抑制HFL-I细胞的增殖和TGF-β₁诱导的分化,该作用可能是通过下调α-SMA mRNA和蛋白的表达实现的。     

干扰素-γ诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞表达细胞黏附因子-1和干扰素-γ受体α

目的 以体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMMVECs)为研究对象,探讨干扰素-γ(IFN-γ)对于体外培养的RIMMVECs表达细胞黏附因子-1(ICAM-1)和IFN-γ受体α(IFN-γRα)的影响.方法 体外分离培养RIMMVECs,用不同浓度的IFN-γ对所培养的RIMMVECs进行诱导,通过荧光定量RT-PCR法和流式细胞术,从mRNA和蛋白水平检测活化后的RIMMVECs表达ICAM-1和IFN-γRα的情况.结果 浓度为20 μg/L和40 μg/L的 IFN-γ可以激活RIMMVECs,在mRNA和蛋白水平均能提高ICAM-1的表达,并且6 h时达到高峰;20 μg/L的IFN-γ刺激RIMMVECs后,可使其上调表达IFN-γRα mRNA,但是蛋白表达量却随着刺激时间逐渐降低;而40 μg/L的IFN-γ刺激RIMMVECs 2 h后,IFN-γRα mRNA 达到峰值,6 h之后,其表达量呈下降趋势,IFN-γRα蛋白浓度也随之逐渐降低;10 μg/L的IFN-γ对于ICAM-1和IFN-γRα的表达无影响.结论 IFN-γ可能是通过影响微血管内皮细胞(MVECs)表面IFN-γRα分子和ICAM-1的表达,从而调控和参与细胞免疫反应和炎症反应.     

AngⅡ介导的血管平滑肌细胞增殖与迁移效应的实验研究

目的 :探讨单核细胞趋化蛋白 1单克隆抗体 (MCP 1mcAB)或Losartan拮抗血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )介导的血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖与迁移效应的可能性 ,为防治动脉硬化 (AS)提供一定的理论依据。方法 :采用改良的Boyden小室法检测VSMCs的迁移效应 ;以MTT法、3H TdR掺入法、3H 脯氨酸标记法和VSMCs计数评价VSMCs的增殖效应 ;将培养的VSMCs分为 5组 :2 %胎牛血清 ( 2 %FCS)组、AngⅡ组 (其浓度为 10 - 1 0 ～ 10 - 6 Mol/L)、Losartan组 (其浓度为 10 - 7～ 10 - 5Mol/L)、MCP 1mcAb组 (终浓度为 10 μg/ml)和阳性对照组 (含 5 %的酵母多糖活化血清 )。结果 :( 1)AngⅡ具有剂量依赖性地促进VSMCs的增殖与迁移效应 ;( 2 )MCP 1mcAb、Losartan能有效地拮抗AngⅡ介导的VSMCs增殖与迁移效应。结论 :MCP 1mcAb、Losartan拮抗VSMCs的增殖与迁移效应为其防治AS提供一定的理论依据。     

高糖对大鼠晚期内皮祖细胞增殖、迁移、黏附及分泌功能的影响

目的: 探讨不同浓度葡萄糖对骨髓来源的晚期内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移、黏附及分泌功能的影响。方法: 密度梯度法获取大鼠骨髓单个核细胞,体外培养EPCs并进行鉴定。以传至第3代的EPCs,即晚期EPCs为靶细胞,分别给予不同浓度的葡萄糖(5、10、20、40 mmol/L)干预,采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验及ELISA检测高糖对EPCs增殖、迁移、黏附及分泌单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素-8(IL-8)的影响。结果: 与5 mmol/L葡萄糖组(正常浓度组)相比,10 mmol/L﹑20 mmol/L和40 mmol/L葡萄糖处理可浓度依赖性地降低晚期EPCs的增殖、迁移能力。40 mmol/L葡萄糖处理有效地抑制了晚期EPCs的黏附,促进MCP-1和IL-8的释放。结论: 高糖抑制晚期EPCs的增殖、迁移和黏附能力,促进EPCs释放炎症细胞因子。