GM-CSF基因免疫治疗小鼠骨髓瘤的实验研究

目的:探讨mGM-CSF基因免疫小鼠是否可以诱发小鼠对肿瘤的免疫应答。方法:用SP2/0肿瘤细胞皮下接种Balb/c小鼠建立肿瘤动物模型,再以皮下或肌肉注射空质粒或重组质粒4次,共400μg。8周后观察小鼠的抑瘤率、肿瘤质量、肿瘤组织淋巴细胞的浸润情况,检测血清中IFN-γ和IL-2浓度,MTT法体外检测CTL、NK细胞活性。结果:基因免疫Balb/c小鼠8周后,重组质粒皮下注射组肿瘤质量[(0.880±0.405)g]轻于对照组[(1.548±0.221)g,P<0.01];重组质粒肌肉注射组肿瘤质量[(0.378±0.411)g]明显轻于对照组[(1.554±0.249)g,P<0.001];重组质粒肌肉注射组肿瘤组织可见淋巴细胞浸润;IFN-γ和IL-2的浓度及CTL、NK细胞活性显著高于对照组。结论:GM-CSF基因免疫能诱发小鼠抗肿瘤作用,肌肉注射比皮下注射效果好。     

热休克蛋白70肿瘤多肽复合物抗胶质瘤免疫效应的研究

目的探讨从小鼠胶质瘤组织中提取的热休克蛋白70肿瘤肽复合物(HSP70-PC)及其抗胶质瘤免疫保护效应.方法自小鼠胶质母细胞瘤G422肿瘤组织提取HSP70-PC,小鼠分别以HSP70-PC(10μg/只)、细胞裂解液(10μg/只)免疫后分别在其颅内和皮下接种肿瘤,比较颅内荷瘤组与未免疫组的成瘤率及生存时间;皮下荷瘤组与未免疫组的成瘤率、肿瘤重量,并应用流式细胞仪技术测定小鼠心腔血中淋巴细胞百分比、CD3 CD8 和CD3 CD4 T淋巴细胞的百分比.结果颅内荷瘤组小鼠成瘤率为100%、100%、83.3%,平均生存期为(16.00±0.58)d、(18.70±1.33)d、(25.33±1.86)d;皮下荷瘤组小鼠成瘤率为100%、100%、33.3%,肿瘤重量为(6.00±1.67)g,(2.30±1.23)g,(0.12±0.20)g,流式细胞仪检测小鼠淋巴细胞群为(32.65±9.06)%、(51.30±7.72)%、(67.42±6)%;CD3 CD8 T淋巴细胞为(4.30±1.97)%、(7.06±2.20)%、(11.75±3.57)%;CD3 CD4 T淋巴细胞为(14.28±6.75)%、(17.17±5.04)%、(22.5±5.18)%.结论热休克蛋白70肿瘤肽复合物可诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,延长小鼠生存期,具有明显的抗胶质瘤免疫保护作用.     

人免疫重建荷人肾癌SCID小鼠模型的建立及其鉴定

目的:建立具有人免疫学特性的肾癌SCID小鼠模型.方法:SCID小鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞,皮下接种人肾癌细胞,观察小鼠的生物学及免疫学特性.结果:(1)免疫重建荷人肾癌组小鼠成瘤率为100%,较荷瘤组成瘤潜伏期显著延长、肿瘤体积明显缩小(P＜0.01);(2)第2、4、6周时小鼠外周血中人IgG分别为(394.86±16.70)μg/ml、(629.83±35.03)μg/ml、(994.96±70.11)μg/ml;(3)第6周小鼠外周血中人CD30 T淋巴细胞为(12.31±0.86)%;(4)免疫组化检测小鼠肿瘤和脾脏中存在人CD30 T淋巴细胞.结论:成功建立免疫重建荷人肾癌SCID小鼠模型,为肾癌治疗的研究提供了理想动物模型.     

黄芪多糖联合顺铂治疗H22肝癌的实验研究

目的：观察黄芪多糖（APS）联合顺铂（DDP）对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制作用。方法：复制H22肝癌小鼠移植瘤模型,将40只接种H22肝癌细胞昆明小鼠随机分成4组,其腹腔分别注射生理盐水（对照组）、ASP组、DDP组以及APS＋DDP组,观察小鼠的毒副反应以及生存质量。实验19d后,处死全部小鼠,剥离皮下肿瘤,称小鼠肿瘤重量,计算出抑瘤率。结果：APS单用组的H22肝癌平均瘤重为（1.29±0.29）g,明显低于对照组的（1.86±0.73）g（t=3.9746,P〈0.001）。APS＋DDP组的H22肝癌平均瘤重为（0.52±0.31）g,均明显低于APS单用组（t=9.9351,P〈0.001）和DDP单用组（t=4.1970,P〈0.001）;其抑瘤率达72.0%,明显高于APS单用组（χ2=17.3756,P〈0.001）和DDP单用组（χ2=5.0794,P〈0.05）。APS＋DDP组小鼠毒副反应明显低于DDP组,生存质量优于DDP组。结论：黄芪多糖和顺铂合用对小鼠H22肝癌移植瘤的生长具有协同抑制作用,并能降低顺铂毒副反应,提高生存质量。     

微波消融联合CpG ODN治疗小鼠移植性结肠癌及对免疫状态的影响

目的 研究微波消融联合CpG ODN对小鼠移植性结肠癌的治疗作用及对免疫状态的影响.方法 Balb/c小鼠皮下接种结肠癌CT26细胞建立肿瘤模型,肿瘤分别给予瘤周注射PBS、微波消融、微波消融+瘤周注射CpG ODN和瘤周注射CpG ODN四种处理.定期测量肿瘤大小,利用流式细胞仪检测小鼠外周血中CD3+CD4T细胞、CD3℃D8+细胞的比例;采用ELISA检测小鼠外周血中IL-2、IL-12和IFN-γ含量.给予微波消融组和微波消融联合CpG ODN组治愈的小鼠再次接种CT26细胞,观察成瘤率.结果 微波消融组和微波消融联合CpG ODN组小鼠的肿瘤体积显著小于PBS组和CpG ODN组.4组小鼠外周血中的CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞比例无显著性差异,微波消融联合CpG ODN组及微波消融组的CD3+CD4+T/CD3+CD8+T细胞比值分别为1.58±0.10和1.53±0.13,与PBS组和CpG ODN组相比显著升高(P均<0.05).微波消融联合CpG ODN组小鼠外周血中IL-2浓度为(64.6±7.4)pg/ml,IL-12浓度为(314.1±26.9)pg/ml,IFN-γ浓度为(61.9±7.3)pg/ml,显著高于其他3组(P均＜0.05).肿瘤再次攻击实验中微波消融联合CpG ODN组成瘤率为25.0%,显著低于微波消融组的75.0%(P<0.05).结论 CpG ODN增强了微波消融治疗小鼠的免疫功能,减少了肿瘤再次攻击的成瘤率.     

长春新碱载体红细胞对小鼠S-（180）肿瘤生长的抑制作用

目的:探讨长春新碱载体红细胞对昆明小鼠S180肿瘤的抑瘤作用.方法:用昆明种小鼠右侧腋窝皮下接种S180肉瘤细胞建立荷瘤小鼠模型,将48只荷瘤小鼠随机分为长春新碱组、长春新碱载药红细胞组、未载药红细胞组和阴性对照组4组,每组各12只.分别经尾静脉注射长春新碱、长春新碱载药红细胞、洗涤红细胞及生理盐水,1次/3 d,共5次.所有治疗结束次日处死小鼠并称重,称瘤质量,计算各组瘤体平均质量及肿瘤抑瘤率.结果:长春新碱载药红细胞组的体质量增长幅度为(36.31±1.51) g,明显大于长春新碱组的(31.32±3.55) g(P＜0.01).长春新碱载药红细胞组平均瘤质量最轻,为(0.33±0.05)g,明显低于阴性对照组的(0.57±0.05) g(P＜0.05),该组抑瘤率达42.42%,是长春新碱组17.49%的2.43倍;未载药红细胞组瘤质量较阴性对照组大,抑瘤率呈负值,为-13.76%.结论:长春新碱载体红细胞体内抗肿瘤活性显著,有较强抑瘤作用,为临床肿瘤治疗提供新思路和可行方法.     

人源性荷三阴乳腺癌NOD/SCID小鼠模型建立及其免疫应答

目的建立具有人免疫学特征的NOD/SCID小鼠模型,并观察其对三阴乳腺癌的免疫应答。方法筛选无免疫渗漏NOD/
SCID小鼠24只,分成4组,免疫重建组提前3 d腹腔注射250 mg/kg环磷酰胺（CTX）,后经腹腔注射健康人外周血单个核细胞
（PBMC）同时背部皮下接种人三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231;单纯免疫组只注射CTX 及PBMC;单纯荷瘤组只接种
MDA-MB-231;空白对照组不作任何处理。定期观察各组小鼠生物学及免疫学特征。结果免疫荷瘤组成瘤潜伏期（10~12 d）
较单纯荷瘤组（8~10 d）延长,肿瘤生长速度减缓,第5周末肿瘤体积分别为1244.82±792.82 mm3和4308.77 mm3（P<0.01）,生存
率提高（P<0.01）。接受免疫重建的小鼠外周血人IgG于第2周即可测到,并逐渐上升,较未接受免疫重建小鼠差异有统计学意
义（P<0.01）。外周血中CD3+细胞比例于第2周逐渐下降,但于第9周仍可测到。第9周小鼠脾脏细胞中CD3+T细胞比例高达
55.3%（免疫荷瘤组）及52.7%（单纯荷瘤组）。免疫荷瘤组小鼠脾指数9.64 mg/g明显高于单纯免疫组3.82±0.31 mg/g及空白对
照组1.51±0.14 mg/g。结论成功构建稳定的具有人免疫学特征的NOD/SCID小鼠模型,并观察到其对三阴乳腺癌产生免疫应
答,可为三阴乳腺癌免疫治疗研究提供较为理想的动物模型。
     

声动力治疗对荷瘤鼠肿瘤微环境巨噬细胞的影响

目的检测声动力治疗前后荷瘤鼠肿瘤微环境中巨噬细胞数量以及细胞因子的变化。方法选取12只BALB/C小鼠制备荷瘤模型,随机分为2组,对照组6只,未予任何处理;SDT组6只,给予小鼠腹腔注射5-ALA(250 mg/kg),并进行超声照射,超声强度为2.0 W/cm~2;2周后停止治疗,检测肿瘤生长情况及荷瘤鼠体质量变化情况,并采用免疫组化染色检测CD68及细胞因子IFN-γ和IL-10水平变化。结果治疗期结束2周时,对照组小鼠肿瘤体积为(810±78)mm~3,SDT组为(432±58)mm~3,SDT组肿瘤体积抑制率为46.67%。对照组小鼠体质量为(24.00±0.58)g,SDT组小鼠为(24.20±0.61)g,2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,SDT组CD68表达水平提高(t=-3.756,P=0.032),IL-10表达下降(t=8.015,P=0.01),IFN-γ表达增高(t=-5.034,P=0.008)。结论声动力治疗可影响肿瘤微环境中巨噬细胞数量和细胞因子的变化。     

树突状细胞/结肠转移癌细胞融合疫苗治疗转移性结肠癌的动物实验研究

目的通过建立人免疫重建荷人结肠癌皮下种植瘤严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠模型,研究DC/结肠癌融合疫苗对人转移性结肠癌的发展及预后的影响。方法应用腹腔注射法对严重联合免疫缺陷SCID小鼠注射人外周血淋巴细胞（hu_PBL）免疫重建后,皮下注射法建立荷人结肠癌皮下种植瘤模型。应用聚乙二醇（PEG）制备DC/SW620融合疫苗。将DC/SW620融合疫苗于左、右后足底、尾根部皮下三点注射在人免疫重建的SCID小鼠结肠癌皮下移植瘤模型。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中人IgG含量;通过直接测量法观察人结肠癌皮下种植瘤成瘤性和小鼠生存期。结果融合疫苗治疗组的皮下肿瘤体积生长速度慢于其他各对照组;融合疫苗治疗组生存期为（109.00±17.17）d,明显长于单纯制模组（55.67±12.03,P〈0.001）、免疫重建组（81.83±9.06,P〈0.001）、肿瘤细胞疫苗组（87.33±12.85,P〈0.01）。结论 DC/SW620融合疫苗可抑制肿瘤生长,改善预后,DC/SW620融合疫苗比肿瘤细胞冻融物免疫治疗效果更佳。     

放化疗对IRM-2小鼠不同肿瘤模型治疗作用的研究

目的观察IRM-2小鼠的肿瘤易感性,探讨放化疗对IRM-2小鼠不同肿瘤模型的抑制作用。方法利用120只IRM-2近交系小鼠,分别接种肺腺癌(LA795)、宫颈癌(U14)、黑色素瘤(B16)、肝癌(HepA)细胞,造模24 h后,将荷瘤鼠随机分为对照组、照射组、环磷酰胺组,每组各10只。照射组于第4天开始进行1 Gy全身照射,每日1次,连续5 d,共照射5次。环磷酰胺组(25 mg/kg)腹腔注射隔日1次,0.2 mL/只,共4次。对照组注射相同体积生理盐水。小鼠于第12天处死,解剖瘤块、胸腺和脾脏称重,骨髓有核细胞计数,计算抑瘤率、胸腺及脾重指数。结果①IRM-2小鼠皮下移植4种肿瘤的成瘤率均为100%。②环磷酰胺组、照射组LA795的抑瘤率分别为(31.8±27.3)%、(68.2±18.2)%,差异有高度统计学意义(P<0.01)。环磷酰胺组、照射组瘤重[(0.07±0.04)、(0.15±0.06)g]均低于对照组[(0.22±0.15)g],差异有统计学意义(P<0.05);环磷酰胺组瘤重低于照射组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。③环磷酰胺组、照射组U14的抑瘤率分别为(37.3±3.5)%、(70.8±8.2)%,差异有统计学意义(P<0.05)。环磷酰胺组瘤重[(0.50±0.14)g]低于对照组[(1.71±0.60)g]及照射组[(1.14±0.06)g],差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。④环磷酰胺组、照射组对黑色素瘤B16的抑瘤率分别为(17.7±15.8)%、(63.6±15.9)%,差异有高度统计学意义(P<0.01)。环磷酰胺组脾重指数、瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);环磷酰胺组瘤重[(0.72±0.31)g]低于照射组[(1.63±0.51)g],差异有高度统计学意义(P<0.01)。⑤环磷酰胺组、照射组对肝癌HepA的抑瘤率分别为(31.5±21.7)%、(69.6±25.0)%,差异有高度统计学意义(P<0.01)。环磷酰胺组、照射组瘤重[(0.28±0.23)、(0.63±0.20)g]均低于对照组[(0.92±0.16)g],差异均有高度统计学意义(P<0.01);环磷酰胺组瘤重低于照射组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论 IRM-2近交系小鼠对肺腺癌、宫颈癌、黑色素和肝癌均能有效接种,放疗对接种肿瘤有一定杀伤作用,环磷酰胺能有效抑制IRM-2小鼠肿瘤的生长,疗效更佳。     

磁流体热疗联合 IL-2对小鼠Lewis肺癌治疗作用的实验研究

目的通过观察磁流体热疗（MFH）联合IL-2对小鼠Lewis肺癌的生长、凋亡及小鼠免疫系统的影响,探讨MFH联合免疫治疗肺癌的可行性。方法建立小鼠浅表Lewis肺癌皮下移植瘤模型,瘤体直径增至0.8cm左右时,将其分为IL-2组、MFH组、MFH＋IL-2组及对照组。MFH组瘤体内部注射0.2ml水平约75mg/ml的磁流体,24h后在交变磁场下加温1次,通过控制磁场的强度,加温温度稳定在43.0℃左右30min。IL-2组瘤体内部注射0.2ml（5×10^4U）的IL-2。MFH＋IL-2组热疗后24h,按上述方法向肿瘤内部注射0.2ml（5×10^4U）的IL-2。对照组瘤体内部注射0.2ml的0.9%氯化钠溶液。采用流式细胞术检测MFH法、MFH＋IL-2后小鼠外周血T淋巴细胞亚群的变化。采用免疫组化法检测治疗后肿瘤组织HSP70、CD4^＋、CD8^＋等免疫因子的表达,比较MFH组、MFH＋IL-2组对肿瘤的治疗效果。结果 MFH组和MFH＋IL-2组注射磁流体后肿瘤内部温度迅速升高至43℃,肿瘤细胞呈凋亡和坏死样改变,小鼠外周血T淋巴细胞水平明显升高（P＜0.05）,HSP70、CD4^＋、CD8^＋水平也均明显升高,小鼠瘤体生长均受到抑制,MFH＋IL-2组小鼠瘤体生长抑制更明显。结论43℃、30min条件下的MFH能抑制Lewis肺癌的生长,诱导荷瘤小鼠机体产生抗肿瘤免疫。IL-2单独对荷瘤小鼠肿瘤生长无明显抑制作用,但可以提高外周血CD4^＋、CD8^＋水平,从而增强MFH对Lewis肺癌抑瘤效果。     

新城疫病毒疫苗和IL-15治疗3AO裸鼠移植瘤实验研究

目的探讨新城疫病毒疫苗（ATV一NDV）和白细胞介素-15（IL一15）对3AO裸鼠皮下移植瘤的治疗作用及其机制。方法建立3AO裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,每组10只。Ⅰ组注射ATV一NDV0．2ml;Ⅱ组注射IL一151001xg／kg;Ⅲ组注射IL-151001zg／kg加ATV—NDV0．2ml;Ⅳ组为对照组,腹腔注射生理盐水（ATV—NDV右侧下肢皮下注射,IL-15腹腔注射,按每只裸鼠0．2ml配制）;观察各组裸鼠成瘤率、生存期和生存延长率及肿瘤生长曲线。流式细胞术（FCM）观察裸鼠移植瘤细胞凋亡率及细胞周期,双标记NK细胞群计数;测定裸鼠脾脏重量;移植瘤瘤体及各组裸鼠肝、脾、肾行常规病理学检查。结果实验组与对照组之间,联合治疗组与单独治疗组之间相比：荷瘤裸鼠生存延长率,移植瘤细胞凋亡率,NK细胞群计数。裸鼠脾脏重量具有明显差异。病理学检查各治疗组中均可见肿瘤坏死,凋亡细胞,肿瘤细胞周围及肿瘤内有明显的淋巴细胞浸润。ATV—NDV治疗组脾脏有增生,肥大。IL—15治疗组脾脏有充血增生,肝脏有肝细胞水肿,嗜酸性变性,周围有浊肿。对照组裸鼠肝、脾、肾未见明显病理改变。结论ATV—NDV、IL-15对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤具有明显抑制作用,IL-15对ATV一NDV有协同作用。其机制与ATV—NDV直接、特异地对肿瘤细胞产生细胞毒作用,提高了肿瘤抗原的免疫原性;IL一15增强NK细胞的细胞毒活性,诱导NK细胞及细胞因子产生有关。     

Effect of Allicin in Antagonizing Mice's Bladder Cancerin vitro and in vivo

Objective: To explore anti-tumor effect and mechanism of Allicin in treating murine bladder tumor. Methods: To observe Allicin's effect on MBT-2 tumor cells in vitro, 100 μg/ml Allicin was added to the tumor cell culture, and the morphology of tumor cells was observed by phase contrast microscope 6 hrs later. The direct effects of Allicin on tumor cell growth in vitro in the MTT Assay was also evaluated. To determine anti-tumor effect of Allicin in vivo, C3H/He mice were randomly grouped prior to initiation of experiment. The mice received 1×105 MBT-2 cells administered subcutaneously into the right posterior flank on the Day 0 the experiment started. Allicin was injected at the site near tumor transplantation on the Day 1. The mice were examined for tumor development and the tumors were measured in two dimensions with calipers twice a week. On Day 21 the tumors were resected and examined pathologically to see the immune response. Results: The observation of morphology of MBT-2 cells in vitro and MTT a     

白细胞介素-23基因修饰树突细胞获取凋亡癌细胞抗原诱导的抗胰腺癌免疫治疗

目的 探讨白细胞介素23（IL-23）基因转染的树突状细胞（DC）负载凋亡癌细胞抗原后诱导的免疫应答对小鼠胰腺癌的治疗作用。方法 克隆并构建IL-23基因真核双表达载体,转染DC后检测其表型及自分泌IL-23和IL-12的能力;观察各组脾脏T淋巴细胞γ干扰素（IFN-γ）和IL4的分泌量以及DC诱导的细胞毒T淋巴细胞（CTL）对胰腺癌细胞的杀伤作用。转染DC并负载肿瘤抗原后制备成疫苗对小鼠抗肿瘤的免疫保护作用和肿瘤抑制作用。结果基因测序证实IL-23基因克隆及双表达载体构建成功,转染后DC对共刺激分子MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ的表达增强;DC自分泌IL-23和IL-12的能力显著增强。DC介导的免疫应答促进了IFN-γ生成型Th1细胞的产生,IL-23转染组每24hIFN-γ的分泌（最高为535pg／ml／10^6）与其他各组比较（对照组每24h为60pg／ml／10^6）,P〈0．01;转染的DC疫苗在体内诱导出高水平的CTL活性（P〈0．05）。接种IL-23修饰DC疫苗后小鼠的免疫防御能力显著增强;对肿瘤的生长有明显抑制作用,治疗组荷瘤鼠生存期与其他各组比较差异有显著意义。结论IL-23使DC抗原递呈能力更强,IL-23修饰DC疫苗可强化宿主针对特异肿瘤的CTL免疫应答,使宿主不仅产生防御性免疫反应而且增强自动免疫能力。     

IRES增强mRNA在树突状细胞中的翻译效率有效地诱发抗肿瘤免疫

目的旨在寻求一种能完全替代目前常规体外转录合成肿瘤相关抗原（TAA）mRNA的方法。方法构建4个质粒包括pmRNA荧光素（Luc）、pmRNA IRES-Luc、pmRNA鸡卵清蛋白（OVA）和pmRNA IRES-OVA,用Luc报告系统检测不同形式的Luc mRNA转染小鼠树突状细胞（DC）后的蛋白表达水平;以OVA作为靶抗原,以小鼠黑色素瘤肺转移作为动物模型,通过体内细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤实验及荷瘤实验,比较Capped-OVA mRNA和IRES-OVA mRNA修饰DC所诱发的抗原特异性细胞免疫反应。结果将IRES序列插入mRNA转录模板编码基因cDNA序列前,不影响体外转录合成相应mRNA的产量。不同形式Luc mRNA转染DC后8h,IRES-Luc mRNA较Capped-Luc mRNA表达的酶活性高1倍,而较Uncapped-Luc mRNA高20倍;IRES-Luc mRNA和Capped-Luc mRNA转染DC96h后仍能检测到Luc活性。用Capped-OVAmRNA和IRES-OVA mRNA修饰DC免疫小鼠1周后行体内CTL杀伤实验,结果示Capped-OVA mRNA／DC免疫组4hCTL杀伤率为（284-3）％,而IRES-OVA mRNA／DC免疫组4hCTL杀伤率为（32±4）％。荷瘤实验显示,Capped-OVA mRNA／DC和IRES-OVA mRNA／DC免疫小鼠后均能保护小鼠肺部免受黑色素瘤转移结节形成。结论含IRES序列的TAA mRNA可作为一种更经济、适用的方法,完全可以取代Cap化mRNA修饰DC,并能诱导与Cap化mRNA修饰DC同样有效的抗原特异性细胞免疫反应。     

The attenuative effect of purified protein derivative sensitization on T helper 2 reaction and eosinophil infiltration of the lung in ovalbumin sensitized mice

OBJECTIVE To identify the effects of tuberculin purified protein derivative (PPD) sensitization on attenuating pulmonary T helper 2 (Th2) reaction and eosinophil infiltration in ovalbumin sensitized mice, and to search for the possibility of its clinical use in the management of asthma in a new way.

METHODS Sixty C57BL/6 mice were sensitized with PPD and then with ovalbumin and aluminum hydroxide, and randomized into 4 groups: ovalbumin (OVA), pre-PPD, post-PPD and control groups. Aerosol PPD were administered 3 h before or after ovalbumin challenge in the pre-PPD and post-PPD groups respectively, and control group received aerosol PPD only. IL-4, IL-5 expression was detected by immunocytochemistry in situ hybridization. Lung slides were stained with eosin and hemotoxylin, and pathological changes were observed.

RESULTS Ovalbumin aerosol inhalation caused a mixed inflammatory infiltration dominated by CD4+ T lymphocytes and eosinophils in the lung of sensitized mice. 87.5%-89.7% and 89.0%-89.2% of the CD4+ T lymphocytes were IL-4 mRNA+ and IL-5 mRNA+ respectively. 88.7%-91.2% of IL-4 mRNA+ cells and 89.8%-90.6% of IL-5 mRNA+ cells were CD4+ T lymphocytes in OVA group. Aerosol administration of PPD markedly suppressed IL-4 and IL-5 expression, and lung eosinophil infiltration. It was more effective in pre-PPD group. 76.6%-78.0% of IL-4 mRNA+ and 73.8%-79.7% of IL-5 mRNA+ cells were CD4+ and 78.1%-84.9% and 78.4%-85.3% of the CD4+ cells were IL-4 mRNA+ or IL-5 mRNA+ respectively in pre-PPD group, both were markedly lower than that of OVA group. CD4+ percentage of IL-4 mRNA+ and IL-5 mRNA+ cells were 80.7%-82.0% and 78.0%-83.9% in post-PPD group, which were markedly lower than that of OVA group.

CONCLUSIONS Sensitization with PPD by intraperitoneal injection and then challenged by PPD inhalation markedly suppressed IL-4, IL-5 expression and eosinophil infiltration, and attenuated pulmonary Th2 reaction in ovalbumin sensitized mice. This induces Th1 type reaction and inhibits Th2 cell differentiation. It may be beneficial for glucocorticoids dependent or resistant patients.

     

贝伐单抗结合紫杉醇对肺癌小鼠的治疗效果及对癌组织S100A4和MMP-9的影响

目的：探讨贝伐单抗结合紫杉醇对C57BL/6肺癌小鼠的治疗效果及对癌组织S100A4与MMP-9的影响。方法：应用鼠源性Leweis肺癌瘤株制备瘤液,对SPF级健康C57BL/6小鼠进行分组,将实验小鼠分为正常组（未接种瘤液）、模型组（接种瘤液）、贝伐单抗组（接种瘤液）、紫杉醇组（接种瘤液）、联合组（接种瘤液）,每组8只。正常组和模型组腹腔注射0.9%氯化钠溶液;贝伐单抗组腹腔注射15 mg/kg贝伐单抗;紫杉醇组腹腔注射10 mg/kg紫杉醇;联合组分别腹腔注射15 mg/kg贝伐单抗和10 mg/kg紫杉醇。所有小鼠2周后处死,摘眼球取血和取瘤称重。比较各组小鼠的抑瘤率,酶联免疫吸附法检测IL-2、IL-6、TNF-α、VEGF、S100A4与MMP-9含量,流式细胞技术检测T淋巴细胞亚群,Western blot法测定VEGF水平。结果：治疗后,贝伐单抗组、紫杉醇组、联合组瘤重,IL-2、IL-6及TNF-α含量、VEGF水平、S100A4与MMP-9含量显著低于模型组,联合组抑瘤率明显高于贝伐单抗组和紫杉醇组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;联合组IL-2、IL-6及TNF-α含量、VEGF水平、S100A4与MMP-9含量显著低于贝伐单抗组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。贝伐单抗组、紫杉醇组以及联合组的CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8的含量与模型组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：贝伐单抗结合紫杉醇能抑制C57BL/6肺癌小鼠肿瘤的生长,能改善其免疫功能,降低VEGF、S100A4与MMP-9的含量。     

E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究

目的：探讨腺病毒E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究。 方法：取对数生长期的CNE-2Z细胞5×105 /0.2 mL,接种于4周龄左右裸鼠右前肢腋部皮下致瘤,第7天裸鼠皮下肿瘤长至直径0.6～0.8 cm时,随机分为6组(n=10): PBS组, Ad-β-gal组,放射组,Ad-β-gal+放射组,Ad-E1A组,Ad-E1A+放射组。Ad-β-gal组/Ad-E1A组在第2周开始给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109 PFU/ 50μL 的Ad-E1A/ Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,放射组在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。Ad-β-gal+放射组/Ad-E1A＋放射组在第2周开始,给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109 PFU/ 50μL 的Ad-E1A/ Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。第1次治疗后,每隔4天用卡尺测量1次肿瘤的体积,记录其直径,裸鼠的生存时间。当肿瘤的直径超过2 cm时,处死裸鼠,分离肿瘤组织,采用免疫组织化学方法分析血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和CD34表达,TUNEL分析细胞凋亡。 结果：Ad-E1A+放射组较其他组能明显延缓移植瘤生长时间, Ad-E1A+放射组裸鼠的肿瘤平均体积比单独放射组小4.7倍,比单独用Ad-E1A组的小5.3倍。Ad-E1A+放射组的裸鼠生存率显著高于其他治疗组。Ad-E1A+放射组的VEGF蛋白表达和微血管密度较其他各组明显下降（P＜0.01)。TUNEL分析结果显示Ad-E1A组和Ad-E1A+放射组及放射组的肿瘤组织内均可明显观察到凋亡细胞。并且Ad-E1A+放射组肿瘤细胞凋亡数目明显高于Ad-E1A组或者放射组。结论：E1A基因通过抑制肿瘤血管的形成和诱导肿瘤细胞的凋亡来提高人鼻咽癌细胞对放射的敏感性。     

进展性大鼠肝纤维化组织中整合素αVβ3受体和血小板内皮细胞黏附分子的表达

目的 探讨整合素αVβ3和血小板内皮细胞黏附分子(CD31)表达与肝纤维化进展和间质重建的关系.方法 硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射和胆总管结扎(BDL)建立两种大鼠肝纤维化模型,TAA组和BDL组每组8只,分别在第3、9周末和第2、4周末取材.肝组织切片天狼猩红染色和计算机图像分析,整合素αVβ3、CD31免疫化学和荧光染色.整合素αVβ3与α-平滑肌肌动蛋白(SMA)荧光染色双重染色及激光共聚焦观察.实时定量PCR和Western印迹分析肝组织中整合素αVβ3、CD31的相对定量表达.结果 肝纤维化中αVβ3表达范围扩大并与α-SMA表达部位一致,CD31在肝血窦、扩大的汇管区和纤维隔表达明显增加,伴有血管新生.模型组和对照组比较肝组织中αVβ3、CD31表达水平差异均有统计学意义(TAA组F=28.66、P＜0.01,F=19.62、P＜0.01和BDL组F=32.60、P＜0.01,F=42.36、P＜0.01).TAA 3周和9周整合素αVβ3和CD31 mRNA的△Ct值分别为5.70±0.25、5.50±0.18和4.40±0.25、4.00±0.18.BDL组1周和4周分别为5.60±0.24、5.30±0.14和4.20±30.16、3.80±0.23,表达增加和纤维化进展一致.结论 肝纤维化进展中整合素αVβ3表达水平增加与星状细胞活化和血管新生有关,并与间质重建程度平行.     

Copolymer 1保护高眼压大鼠视神经的免疫学机制

目的 探讨Copolymer 1(Cop1)对实验性高眼压性青光眼视神经保护作用的相关免疫学机制.方法 对27只大鼠采用烧灼巩膜上静脉制作双眼高眼压模型,在眼压升高的第3周,取12只模型大鼠于后脚皮内注射100 μg Cop 1和等体积的完全弗氏佐剂(CFA)混合乳化液(实验组);另取12只模型大鼠作为对照组,后脚皮内注射等体积PBS和CFA的混合乳化液;其余3只模型大鼠作为空白对照组,不做任何处理.1周后取出大鼠脾淋巴细胞,采用流式细胞仪检测T细胞亚群的变化;ELISA法检测T细胞分泌细胞因子的变化;[3H] thymidine标记检测淋巴细胞的增殖.结果 实验组大鼠的CD4+ CD25+ Treg/CD4+比值显著高于对照组和空白对照组(P＜0.05).实验组IL-10分泌量和分泌浓度均显著高于对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),但三组间INF-γ分泌量和分泌浓度比较差异均无统计学差异(P＞0.05).三组间体外刺激淋巴细胞指数比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Cop 1能诱导CD4 +CD25-向CD4+ CD25+ Treg转化,促进Th1转化为Th2,并增加IL-10的分泌.