浙江省幽门螺杆菌cagA、vacA基因型的流行病学研究

目的 调查浙江地区幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)基因型的分布及其与临床疾病的关系.方法 采用特异引物聚合酶链反应(PCR)分析262株幽门螺杆菌的vacA基因多态性分布特点,并对其进行初步统计分析.结果 浙江8个地区分离培养的Hp菌株262株,VacA m1b基因型占27.10%(71/262);VacA m2基因型占64.89%(170/262);VacA m1b-m2基因型占4.20%(11/262);不同地区间VacA s区基因型和VacA m区基因型分布差异无统计学意义(P＞0.05).慢性胃炎分离株中VacA m1b基因型占26.47%(27/102);VacA m2基因型占66.67%(68/102);VacA m1bm2基因型占2.94%(3/102).消化性溃疡分离株中VacA m1b基因型占29.41%(40/136);VacA m2基因型占61.76%(84/136);VacA m1bm2基因型占3.68%(5/136).胃癌分离株中VacA m1b基因型占16.67%(4/24);VacA m2基因型占75.00%(18/24);VacA m1bm2基因型占4.17%(1/24).不同临床疾病间VacA m区基因型分布差异无统计学意义(P＞0.05).结论 浙江8个地区Hp菌株的优势基因型为cagA 、vacAs1/m2,vacA的s区和m区的分布与分布个体的临床类型无关.     

西安地区幽门螺杆菌vacA基因型与致病性研究

目的:探讨幽门螺杆菌菌株vacA基因型与上消化道疾病的关系。方法:从胃十二指肠疾病患者的胃粘膜活检组织中分离培养到幽门螺杆菌88株。按标准酚-氯仿抽提法提HP基因组DNA。用PCR扩增反应及鉴定,用卡方检验分析vacA在不同胃十二指肠疾病中幽门螺杆菌的差异。结果:88株幽门螺杆菌中vacA s1/m-的阳性率为17.0%,vacA s1/m2的阳性率为55.7%,vacA s1/m1a+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m1a的阳性率为2.3%,vacA s1/m1a+m1b的阳性率为1.1%,vacA s1/m1b+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m1b的阳性率为17.0%,vacA s2/m2的阳性率为2.3%。结论:西安地区幽门螺杆菌菌株的vacA基因型以s1/m2为主,但vacA各基因亚型均与临床结局无相关性。     

镇江地区胃肠病患者幽门螺杆菌vacA基因i、d区分型特点及临床关联

目的：研究镇江地区胃肠病患者感染的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)的主要毒力因子vacA基因i、d型的分布特点、cagA基因状态,以及与临床结果的相关性。方法：选取快速尿素酶试验和(或)组织学染色H.pylori阳性患者的胃窦活检黏膜,PCR法检测H.pylori cagA基因状态、vacA基因的s、m、i、d区分型。结果: 179例H.pylori患者,2例为混合感染(1.1%,2/179),剔除后,i1、i2亚型分别为96.6%(171/177)、1.1%(2/177);d1、d2亚型分别为98.9%(175/177)、1.1%(2/177);cagA阳性率为97.7%(173/177);s1/m2/i1/d1型为优势基因型(56.5%,100/177),s1/m1/i1/d1型次之(38.4%, 68/177)。s2/m2型与i2、d2型相关(P＜0.05),s1、i1、s1/i1型及cagA阳性均与d1型相关(P均＜0.05)。比较vacA基因的s、m、i、d分型及cagA基因状态在慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌中的分布,差异无统计学意义(P 均＞0.05)。结论: 镇江胃肠病患者感染的H.pylori菌株,96.6%表现为i1亚型、98.9%为d1亚型,vacA s1/m2/i1/d1/cagA(+)为优势基因型;幽门螺杆菌基因型之间存在关联;vacA基因型、cagA基因状态与胃肠疾病的分布无相关性。     

西安地区幽门螺杆菌cagA、cagE、vacA基因型与上消化道疾病的关系

目的:探讨西安地区就医人群幽门螺杆菌(HP)菌株vacA、cagA、cagE基因型与上消化道疾病的关系。方法:选取胃粘膜活检组织中分离培养到幽门螺杆菌的消化性溃疡58例,慢性胃炎30例,采用标准酚-氯仿抽提法提取HP基因组DNA,检测幽门螺杆菌cagA、cagE、vacA在消化性溃疡及慢性胃炎患者胃组织中的表达。结果:88株幽门螺杆菌中cagA的阳性率为100%,cagE的阳性率为100%,vacA s1/m-的阳性率为17.0%,vacA s1/m1a的阳性率为2.3%,vacA s1/m1a+m1b的阳性率为1.1%,vacA s1/m1a+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m2的阳性率为55.7%,vacA s1/m1b+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m1b的阳性率为17.0%,vacA s2/m2的阳性率为2.3%。结论:西安地区就医人群培养分离的HP菌株中,cagA和cagE阳性率均为100%,与本地区疾病类型和严重程度不相关,不能作为西安地区HP毒力强弱的标志。西安地区就医人群幽门螺杆菌菌株的vacA基因型以s1/m2为主,但vacA各基因亚型均与临床结局无相关性。     

对中国4个不同地区幽门螺杆菌菌株的多位点序列分析研究

目的 了解国内4个不同地区(北京、上海、重庆和广州)收集的幽门螺杆菌(H.pylori)临床株的遗传背景和可能的来源.方法 从胃肠疾病患者黏膜标本中分离培养幽门螺杆菌,应用多位点序列分析(multilocus sequence typing, MLST)对鉴定阳性的菌株进行ST分型比较,并且以PCR方法测定vacA基因型.结果 30株临床分离的幽门螺杆菌菌株,vacAs1a阳性25株(83.3 %),vacA s1b阳性5株(16.7 %),vacA m2阳性为30株(100 %),未发现s2型菌株,其中标准株NCTC11637为vacAs1a/ m1型.共确定了28种ST型.结论 MLST作为幽门螺杆菌分型方法,分辨率高,结果准确,易于标准化.通过信息学分析可以将MLST分型、vacA基因型和遗传背景、临床来源结合起来,适于进行分子进化学研究.     

PCR方法测定幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因

目的建立幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因的PCR测定方法.方法应用多聚酶链反应方法对62例慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌菌株的vacA基因型和cagA基因进行测定.结果62株幽门螺杆菌菌株均具有vacA基因,所有菌株的vacA基因型均为sla/m2型.cagA基因的总阳性率为56.45%;慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌的cagA基因阳性率分别为55.56%、54.17%和63.64%(P＞0.05).结论本研究建立的PCR测定幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因方法敏感性高、特异性强.     

PCR方法测定幽门螺杆菌vacA基因型和cagA 基因

目的：建立幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因的PCR测定方法，方法：应用多聚酶链反应方法对62例慢性胃炎，消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌菌株的vacA基因型和cagA基因进行测定，结果：62株幽门螺杆菌菌株均具有vacA基因，所有菌株的 vacA基因型均为sla/m2型，cagA基因的总阳性率为56．45％，慢性胃炎，消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌的cagA基因阳性率分别为55．56％，54．17％和63．64％（P＞0．05），结论：本研究建立的PCR测定幽门螺杆菌vac A基因型和cagA基因方法敏感性高，特异性强。     

幽门螺杆菌VacA基因型与胃疾病

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及关系.方法:从胃十二指肠疾病患者胃粘膜标本中分离培养H.pylori,PCR测定VacA基因型.结果:108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性为85株(79%),VacA s1b阳性22株(20%),VacA m1阳性29株(27%),VacA m2阳性77株(71%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为94%(15/16).结论:H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中,无s2型.     

人胃黏膜幽门螺杆菌基因亚型检测与胃疾病

目的 探讨利用胃黏膜直接提取DNA检测幽门螺杆菌(Hp)基因亚型,以进行临床Hp感染判定的可行性,并进而探讨各基因亚型Hp感染与胃疾病的关系.方法 选取已知病理诊断的胃黏膜活检标本217例,进行细菌培养,同时提取黏膜Hp-DNA及菌种DNA,利用聚合酶链反应分别检测幽门螺杆菌ureB、cagA、vacA、iceA和baba2基因亚型.结果 胃黏膜来源HP-DNA与菌种来源Hp-DNA检测ureB、cagA、vacAs1、vacAm1b、vacAm2、iceA1、iceA2和baba2亚型,两者符合率分别为74.23%,73.39%,93.69%,62.16%,78.16%,89.13%,88.37%和75%,差异均无统计学意义(P＞0.05).各疾病组间,幽门螺杆菌ureB、cagA、vacAs1、vacAm1b、iceA1、iceA2和baba2亚型分布频率差异均无统计学意义(P＞0.05);vacA s1m1基因型在浅表性胃炎组(22.22%)分布频率最高,与萎缩性胃炎组(5.71%)相比,差异有统计学意义(x2=8.416,P=0.004);vacA slm2基因型在萎缩性胃炎组(47.14%)分布频率最高,与浅表性胃炎组(18.89%)相比,差异有统计学意义(x2=13.336,P=0.000).结论 胃黏膜直接提取DNA检测Hp基因型可以用于Hp感染的快速诊断.VacA s1m1基因型与浅表性胃炎相关,VacA s1m2基因型与萎缩性胃炎相关.     

幽门螺杆菌VacA基因型与耐药性分析

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及其对常用抗生素的敏感性.方法 从胃十二指肠疾病患者胃黏膜标本中分离培养H.pylori,用PCR测定VacA基因型,并采用琼脂稀释法进行对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑3种抗生素的药物敏感性试验.结果 108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性85株(78.7%),VacA s1b阳性22株(20.4%),VacA m1阳性29株(26.9%),VacA m2阳性77株(71.3%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90.0%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为93.8%(15/16).对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑的耐药率分别为18.5%、5.6%、65.7%,对阿莫西林耐药的20株菌株中,19株为VacA s1a型.结论 H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中.本地区幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药率较低,对甲硝唑的耐药率较高,而对阿莫西林耐药的菌株多数为VacA s1a型.     

Dominant cagA/vacA genotypes and coinfection frequency of H. pylori in peptic ulcer or chronic gastritis patients in Zhejiang Province and correlations among different genotypes, coinfection and severity of the diseases

Background Almost half of the world’s population suffer from the Helicobacter pylori (H. pylori) infection, but only some individuals develop gastric diseases with clinical symptoms. One reason for the phenomenon may be the different pathogenicity of infected H. pylori strains. The presence of cytotoxin-associated gene A (cagA) and expression of vacuolating cytotoxin activity encoded by vacuolating cytotoxin gene A (vacA) are considered the two major virulent markers of H. pylori. The aim of this study was to detect dominant cagA/vacA genotypes and coinfection frequency of H. pylori in patients with peptic ulceration (PU) or chronic gastritis (CG), and to determine correlations among different cagA/vacA genotypes, coinfection and severity of the diseases. Methods For each of 139 patients in Zhejiang Province who had been diagnosed as PU or CG based on clinical symptoms and gastroscopy, two gastric biopsy specimens (one from antrum and the other from corpus) for H. pylori isolation were taken by two different disinfected biopsy forceps. One hundred and fifty-six H. pylori strains were isolated from both the antrum and corpus biopsy specimens of 78 patients (36 PU and 42 CG). PCRs were performed to detect cagA genes, and signal (s) and middle (m) regions of vacA genes in the H. pylori isolates. The amplified fragments of dominant vacA gene s and m subtypes from representative H. pylori isolates were sequenced after TA cloning. Dominant cagA/vacA genotypes of the H. pylori isolates, coinfection frequency and correlations among the different genotypes, coinfection and severity of the diseases were determined.Results Of the H. pylori strains isolated from the antrum specimens, 96.2% were cagA gene positive, as were 97.4% of the H. pylori strains isolated from the corpus specimens. Only one s region subtype (s1a) and four m region subtypes m1, m2, m1b and m1b-m2 of vacA gene were found. The proportions of vacA gene subtypes s1a/m1, s1a/m2, s1a/m1b and s1a/m1b-m2 in the 83 strains isolated from the antrum specimens were 7.2%, 61.5%, 30.1% and 1.2%, respectively, while those in the other 84 strains isolated from the corpus specimens were 9.5%, 58.3%, 28.6% and 3.6%, respectively. s1a/m2 (58.3% vs 30.1%, χ2=13.47, P<0.01) and then s1a/m1b (28.6% vs 9.5 %, χ2=9.88, P<0.01) were the dominant vacA gene subtypes in the H. pylori isolates. The dominant H. pylori genotype was cagA+s1a/m2 (59.0% from antrum specimens and 57.1% from corpus specimens), and followed by cagA+s1a/m1b (28.9% from antrum specimens and 27.4% from corpus specimens). Sixteen of 78 patients (20.5%) were infected with two or three H. pylori strains with different genotypes. However, no statistically significant differences among cagA occurrence, the different vacA subtypes and PU or CG could be found (each P>0.05). Similarities of the nucleotide sequences from vacA gene s region PCR products of six isolates and from vacA gene m region PCR products of four isolates were 93.2% to 98.3% and 93.8% to 97.6%, respectively, compared to the reported corresponding sequences.Conclusions The dominant genotypes of H. pylori in PU or CG patients in Zhejiang area may be cagA+ s1a/m2 and cagA+ s1a/m1b. Numerous coinfections with different H. pylori strains in PU or CG patients indicate diversity of the infected H. pylori origins. s and m regions of vacA gene from different H. pylori isolates show high nucleotide sequence similarities. cagA gene positive rate, different vacA gene subtypes and coinfection with different H. pylori strains are not closely associated with severity of the diseases.     

浙江地区幽门螺杆菌临床菌株vacA优势基因型及其核苷酸序列分析

目的 :了解浙江地区消化性溃疡和慢性胃炎患者感染的幽门螺杆菌 (Hp) vac A优势基因型及其序列特点。方法 :分别从 2 9例消化性溃疡和 34例慢性胃炎患者的胃窦、胃体粘膜组织中分离出 12 6株 Hp。采用聚合酶链反应检测 vac A基因的信号区 (s)和中间区 (m)亚型 ,部分优势基因型的扩增产物 T- A克隆后进行核苷酸序列测定。结果 :所有菌株均扩增出 vac A s区和 m区基因片段 ,发现 s1a/ m1、s1a/ m2、s1a/ m1b、s1a/ m1b- m2 4种基因型 ,其比例分别为 7.1% (9/ 12 6)、61.9% (78/ 12 6)、2 9.4 % (37/ 12 6)、1.6% (2 / 12 6)。 17.5 %患者 (11/ 63)存在不同 vac A基因型Hp菌株混合感染 ,但在胃炎组和溃疡组中的分布差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 6株 s1a型 Hp菌株的 s区扩增产物与报道的 s1a型 60 190株核苷酸序列同源性为 93.15～ 94 .86% ,4株 m2型 Hp菌株的 m区扩增产物与报道的 m2型 87-2 0 3株核苷酸序列之间同源性为 93.63～ 97.61%。结论 :s1a/ m2和 s1a/ m1b均是浙江地区消化性溃疡或慢性胃炎患者感染的 Hp菌株的 vac A优势基因型 ,部分优势 vac A基因型菌株的核苷酸序列与国外报道的参考菌株有较高的同源性 ;部分患者同时感染多株不同 vac A基因型 Hp。     

Lack of correlation of vacA genotype, cagA gene of Helicobacter pylori and their expression products with various gastroduodenal diseases

目的　研究幽门螺杆菌vacA基因型、cagA基因 ,空泡形成细胞毒素和血清CagA抗体与胃十二指肠疾病的关系。　方法　应用多聚酶链反应方法对 6 2例慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌菌株的vacA基因型和cagA基因进行测定 ;应用Hela细胞方法测定体外空泡形成细胞毒素活性 ;应用酶免疫测定方法检测同一患者的血清CagA抗体。结果　 6 2株幽门螺杆菌菌株均具有vacA基因 ,所有菌株的vacA基因型均为sla/m2型。cagA基因的总阳性率为5 6 4 5 % ;慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌的cagA基因阳性率分别为 5 5 5 6 %、5 4 17%和6 3 6 4 % (P >0 0 5 )。空泡形成细胞毒素的阳性率为 37 10 % ,慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌菌株表达空泡形成细胞毒素的阳性率分别为 33 33%、2 9 17%和 6 3 6 4 % (P >0 0 5 )。慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者血清CagA抗体分别为 70 37%、79 17%和 4 0 0 0 % (P >0 0 5 ) ,血清CagA抗体的总阳性率为 6 8 85 %。结论　幽门螺杆菌vacA基因型、cagA基因、空泡形成细胞毒素和血清CagA抗体不能预示H pylori感染个体将更可能发生何种类型胃十二指肠疾病。     

中国镇江地区幽门螺杆菌vacA基因型状况及其与胃十二指肠疾病关系的研究

目的：调查中国镇江地区幽门螺杆菌（H．pylori）vacA基因型状况及其与胃十二指肠疾病关系。方法：在微氧环境下取胃黏膜标本中分离培养出H．pylori共36株,以聚合酶链反应（PCR）方法检测其基因组DNA中vacA基因型。结果：36株H.pylori临床株中vacA信号序列类型中sla、s2所占比例分别为83．3％、13．9％,未发现slb型。vacA中间序列类型中m1、m2所占比例分别为16．7％、75％。分别有1株和3株vacA信号序列和中间序列未能分型。基因型组合sla／m2、sla／m1、s2／m2所占比例分别为61．1％、19．4％、8．3％。Hpylori菌株vacA各基因型在胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡和胃癌四组疾病中的分布差异均无显著性（P〉0．05）。结论：sla、m2和sla／,m2分别是中国镇江地区Hpylori菌株vacAs、m区及其组合的优势基因型。但本研究未能证实H．pylori菌株vacA基因型与胃十二指肠疾病的相关性。     

幽门螺杆菌vacA 基因表型与体外空泡毒性的关系

目的：研究不同vacA基因表型的幽门螺杆菌（HP）对HeLA细胞,RK－13细胞,SGC－7901细胞的空泡毒性作用,方法：分离培养30株临床胃粘膜标本中的HP菌株,抽提其总RNA和浓缩含空泡毒素（VacA)的培养上清,应用RT－PCR方法分析vacA基因表型,应用体外细胞空泡毒性试验观察其空泡毒性作用,结果：全部菌株的信号序列均为sla;vacA基因中区表型为m1型3株（10％）,m2型27株（90％）,m1型菌株对3种细胞均有空泡毒作用,m2型对HeLa细胞无空泡毒作用,但其中20株（（74％）对RK－13细胞,SGC7901细胞株有泡毒作用,结论：HP菌株vacA基因m区是与靶细胞结合的亚单位,不同m型菌株对同一种细胞产生不同的空泡毒性作用,表明靶细胞膜上可能存在不同的受体。     

幽门螺杆菌的细胞毒素分析

目的 探讨幽门螺杆菌临床分离株的毒素鉴定方法。方法:临床分离幽门螺杆菌HP1菌株,以国际标准株NCTC11637(VacA~+CagA~+)和NCTC11639(VacA~- CagA~+)为参照,运用细胞培养、PCR、Westernblot等技术对HP1进行细胞毒素鉴定。结果:HP1菌株可诱导Hela细胞发生空泡变性,经PCR检测含cagA基因,Western blot显示87kD及130kD处有蛋白条带。结论:HP1菌株为VacA~+ CagA~+菌株。     

幽门螺杆菌空泡毒素基因的单链构象多态性研究

目的 应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析幽门螺杆菌（Ｈｐ）的空泡毒素基因（ｖａｃＡ）多态性,借此区分不来源的Ｈｐ。方法 用ｖａｃＡ为模板设计的引物对１５９例各种胃,十二指肠疾病患者胃粘膜行ＰＣＲ扩增,其产物作ＳＳＣＰ分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交,对３例具不同ＳＳＣＰ带型的十二指肠溃疡（ＤＵ）患者的Ｈｐ进行基因序列分析。结果 ｖａｃＡ的两种产物ｖａｃＡ１和ｖａｃＡ２各占７６．５％（１１４／１４９）和２３．５     

幽门螺杆菌cagA基因全长克隆及序列分析

目的探索扩增cagA基因全长的PCR方法,克隆中国2株胃癌幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)分离株和1株十二指肠溃疡分离株及国际标准株SS1的cagA基因,初步探讨cagA序列和磷酸化位点变异及其临床意义.方法针对已知cagA基因两侧及cag致病岛右侧反转重复序列设计PCR引物,扩增cagA基因并克隆测序,分析已知cagA序列同源性及其酪氨酸磷酸化位点.结果3株中国Hp分离株cagA氨基酸序列的同源性约为94%(93.9%、94%、94.5%),并都有pY117/118/122和EPIYA-A、B、D 4个酪氨酸磷酸化位点.SS1株cagA与西方菌株同源性大于85%,而与中国菌株的同源性小于80%,具有pY117/118/122和EPIYA-A、B、C 4个酪氨酸磷酸化位点.结论建立的PCR方法可扩增cagA基因全长.CagA序列变异和磷酸化位点具有地区聚类特征,但与Hp感染临床结局无特殊关联.