不同孕期小鼠羊水对小鼠肝癌细胞H22增殖和凋亡的影响

目的 观察不同孕期小鼠羊水对小鼠肝癌细胞H22增殖和凋亡的影响.方法 用孕11、13、15 d和17 d的KM小鼠羊水-RPMI1640培养基培养H22细胞(培养液中羊水终浓度为10%),RPMI1640培养基培养的H22细胞作为对照组,采用MTT法检测细胞的增殖能力;Annexin V-FITC法检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞形态;S-P免疫荧光染色法经激光共聚焦显微镜分析H22细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和p53的表达.结果 羊水能明显抑制H22细胞的体外增殖和PCNA的表达,随孕期的延长而增高(P<0 05);并能促进p53的表达以及诱导H22细胞凋亡,随孕期的延长而降低(P<0 05).同时,PCNA和p53的表达强度具有明显的负相关性(r=-0.808,P<0 01).结论 孕11、13、15、17 d的小鼠羊水能抑制H22细胞增殖,诱导其凋亡,可能与PCNA和p53的表达有关,并且孕期越早、干预时间越长,效果越显著.     

羊水内胎儿细胞生长条件的探讨

35例孕妇(妊娠14～24周)的羊水标本,采用199混合培养液培养,羊水细胞生长良好。制片观察获得较好的效果。羊水内胎儿细胞生长的好坏取决于羊水采集时间、混合培养基的成份、pH值和培养过程等多种因素,其中培养基pH值和羊水pH值应接近是关键因素之一。羊水内有少量红细胞对羊水细胞生长无明显影响。     

Sertoli细胞对体外培养的大脑皮质神经元的营养作用

为研究睾丸支持细胞 (Sertolicells,SCs)对体外培养的大脑皮质神经元的营养作用 ,采用 2种实验方法 :1 )将Sertoli细胞与大脑皮质神经元共培养 ;2 )在神经元培养基内添加Sertoli细胞条件培养基 (Sertolipreconditionedmedium ,SCM)。结果 :在培养早期SCs能显著促进大脑皮质神经元的贴壁 ,对神经元胞体及突起的生长也有显著的效果 ,培养晚期SCs组的神经元生长状况也显著优于DMEM培养组和SCM组 ,说明SCs对神经元有显著的促生长作用 ;同时实验还证实SCM对神经元在体外的生长也具有一定的促进作用     

KSOM培养基营养成分调整对小鼠植入前期胚体外发育的影响

目的囊胚发育率低和发育迟缓是继““2-细胞阻滞““解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题.本实验通过对 KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成.方法采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊胚的比例、孵出比例以及注射hCG后120 h囊胚全细胞数作为判断培养效果的标准,比较 KSOM在葡萄糖、牛血清白蛋白、氨基酸3种营养物质不同浓度下对小鼠植入前胚体外培养的效果.结果在未加氨基酸时葡萄糖、牛血清白蛋白的变化对注射hCG后120 h囊胚形成率、囊胚全细胞数影响不大,添加氨基酸后,囊胚发育速度提高,部分孵出和全部孵出比例提高,囊胚全细胞数增大明显,且葡萄糖、牛血清白蛋白与氨基酸对囊胚的发育有共同促进的作用.结论通过添加适量的氨基酸、葡萄糖、BSA改良KSOM培养基能很好的促进小鼠植入前胚体外发育.     

KSOM培养基营养成分调整对小鼠植入前期胚体外发育的影响

目的 囊胚发育率低和发育迟缓是继“2-细胞阻滞”解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题。本实验通过对KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成。方法 采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊胚的比例、孵出比例以及注射hCG后120h囊胚全细胞数作为判断培养效果的标准,比较KSOM在葡萄糖、牛血清白蛋白、氨基酸3种营养物质不同浓度下对小鼠植入前胚体外培养的效果。结果 在未加氨基酸时葡萄糖、牛血清白蛋白的变化对注射hCG后120h囊胚形成率、囊胚全细胞数影响不大,添加氨基酸后,囊胚发育速度提高,部分孵出和全部孵出比例提高,囊胚全细胞数增大明显,且葡萄糖、牛血清白蛋白与氨基酸对囊胚的发育有共同促进的作用。结论 通过添加适量的氨基酸、葡萄糖、BSA改良KSOM培养基能很好的促进小鼠植入前胚体外发育。     

用混合脐带血清代替小牛血清作羊水细胞培养

目前国内作羊水细胞培养所用上海食品公司生产的混合胎牛血清及自采胎牛血分离血清，其细胞生长不理想，甚至无细胞贴壁。为此，我们自1982年5月至10月用脐带血清代替牛血清配制培养基培养羊水细胞。获得较佳效果。现报告于下：     

两种培养基的培养体系对CIK细胞增殖和功能的影响

目的 观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)增殖情况,检测CIK细胞的表面分子表型和体外对白血病细胞K562的杀伤作用.方法 通过用H3培养基培养的分别来源于脐带血和患者自体外周血分离的单个核细胞(PBMC),添加重组人γ干扰素(IFN-γ)与CD3单抗,体外诱导CIK细胞,在培养的第7天分别加入H3培养基和T551培养基继续诱导培养至14 d.计数观察CIK细胞增殖能力,流式检测细胞表面CD3、CD56的表达情况,CCK8法检测两组培养基条件下对白血病细胞K562的杀伤效果.结果 动态计数及表型分析结果表明,H3及H3+T551培养的CIK细胞扩增倍数(包括脐带血CIK总细胞数和自体CIK总细胞数)在第14天均分别达到76.9倍、62.3倍;两种培养条件下脐带血CIK细胞中CD3+ CD56+双阳性细胞含量分别是(16.70±2.72)％和(10.80±2.59)％,自体CIK细胞中CD3+ CD56+双阳性细胞含量分别是(11.23±6.64)％和(10.70±6.42)％;体外杀瘤实验表明,当效靶比为5∶1时,H3培养的脐带血CIK细胞杀伤率达到(33.50±9.99)％,显著高于H3+T551培养脐带血CIK细胞的(20.3±6.76)％,差异有统计学意义(P=0.011),而H3和H3+T551培养的自体CIK细胞杀伤率分别是(59.67±27.59)％和(42.13±19.47)％,差异无统计学意义(P=0.080).结论 H3培养的脐带血和自体CIK细胞具有较强的体外抗白血病癌细胞活性,可应用于临床上白血病的过继性免疫治疗.     

半固体培养基法制备单抗的可行性研究

目的 建立稳定的甲基纤维素半固体培养基一步法筛选和克隆化杂交瘤细胞的方法.方法 常规细胞融合后,用甲基纤维素半固体培养基重悬细胞沉淀,通过优化甲基纤维素半固体培养基中甲基纤维素、血清及L-谷氨酰胺三种成分的浓度,建立稳定高效的杂交瘤细胞克隆化方法 .并进行有限稀释法和甲基纤维素半同体培养基法筛选杂交瘤细胞的对照实验.阳性克隆扩大培养,ELISA检测后冻存,再次复苏后ELISA检测呈阳性为稳定杂交瘤细胞株.结果 甲基纤维素三种浓度中,甲基纤维素浓度1.0%和1.2%时获得的杂交瘤细胞团个数约为甲基纤维素浓度1.25%时的2倍.而甲基纤维素浓度1.2%时细胞团固定效果较甲基纤维素浓度1.0%更好.通过对梯度稀释的SP 2/0细胞培养后,选择半固体培养基中使用的胎牛血清浓度(25%),在半固体培养基中含4 mmol/L L-谷氨酰胺比含2 mmol/L L-谷氨酰胺得到多近一倍的杂交瘤.得到的5株阳性杂交瘤在扩大培养、冻存复苏后抗体分泌稳定,得到5株稳定阳性杂交瘤细胞株.有限稀释法和甲基纤维素半固体培养基法筛选杂交瘤细胞对照实验显示半同体培养基法可节省一半时间.结论 建立了稳定的甲基纤维素半固体培养基一步法筛选和克隆化杂交瘤细胞的方法 .该法缩短了克隆化的时间,节省了人力和材料,不需要添加饲养细胞和细胞因子,是一种稳定高效的杂交瘤细胞克隆化方法.     

用于人纤维母细胞及羊水细胞的一种无胎牛血清新培养基

本文介绍一种用于人纤维母细胞及羊水细胞的无胎牛血清新培养基,并与有胎牛血清常规培基比较其促进细胞生长能力。新培养基含小牛血清及人羊水各10％,并加入定量增补剂。结果表明:人纤维母细胞及羊水细胞于常规培基中生长较好且蛋白质含量亦较高,表明其细胞密度较大,然新培基亦能获得足供细胞学诊断用的细胞数。新培基的主要供献在于完     

不同培养方式对三尖杉培养细胞中生物碱组成和含量的影响

采用植物组织和细胞培养方法，研究固体和液体培养方式对三尖杉细胞生长及其有效成分组成与含量的影响。结果证实，在MS基本培养基上生长的三尖杉愈伤组织可以合成较多的三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱，分别为在White、Heller和6，7-V培养基上生长组织的5.6,14.6和2倍。液体培养方式培养的三尖杉细胞的生长速度比固体培养的增加3倍，总生物碱含量增加近1倍，其中具有生物活性的三尖杉酯碱增加54倍。结论：液体培养方式有利于通过大规模培养技术生产三尖杉培养细胞和抗癌药物。     

大鼠羊水与RBL-2H3肥大细胞共培养后脱颗粒的检测

[目的]探讨大鼠羊水与 RBL-2H3肥大细胞共培养后是否有脱颗粒现象发生。[方法]取大鼠不同稀释度的羊水与大鼠来源的RBL-2H3肥大细胞系共培养,用酶联免疫法测定不同时间样品上清的组胺、自发释放的组胺和总组胺,计算组胺释放率。对细胞用阿利新蓝染色,计算脱颗粒指数。用流式细胞仪测定RBL-2H3细胞Annexin Ⅴ标记后的阳性细胞率。[结果]与不同稀释度的羊水共培养后,细胞的组胺释放率有显著差异,组胺的释放和羊水浓度正相关。阿利新蓝染色后计算的脱颗粒指数与组胺释放率测定结果一致。细胞Annexin Ⅴ标记后的阳性率在羊水刺激后明显上升,进一步证明了脱颗粒的发生。[结论]羊水中的物质可以通过直接作用导致RBL-2H3肥大细胞脱颗粒,为羊水栓塞时肥大细胞脱颗粒机制的研究提供了一定的实验依据。     

羊水细胞培养及FISH技术用于产前诊断——附117例分析

目的:探讨羊水细胞培养及荧光原位杂交(FISH)技术在产前诊断中的实验方法及应用价值。方法:对117例孕17～27周有产前诊断指征者,在B超引导下抽取羊水,培养、制备羊水细胞分裂中期染色体,其中1例同时用未培养羊水做间期细胞FISH,另1例用培养后细胞生长不佳的羊水做FISH,两者均采用生物素标记的X、Y、21号染色体探针。结果:羊水细胞培养成功109例,占93.16%;培养失败8例,占6.84%。109例羊水细胞培养分裂中期染色体核型:正常核型46,XX(XY)有95例,占87.16%;异常核型14例,占12.84%。1例间期细胞FISH与羊水培养结果一致,另1例羊水细胞培养仅收到很少分裂中期染色体,改做FISH后可见到较好的荧光信号。结论:FISH技术与羊水细胞培养结合用于产前诊断,提高了诊断的准确性。     

羊水细胞培养成功与失败结果分析

目的探讨改善羊水细胞培养成功率的条件。方法在B超引导下经羊膜腔穿刺,抽取羊水,接种于斜面培养管中,37℃5%CO2培养箱中静止培养,用胰酶消化法收获细胞,常规G显带,进行核型分析。结果通过控制影响羊水培养的各个环节,改善细胞培养环境,缩短了羊水培养的时间,提高了羊水培养的成功率,增加了可供分析染色体核型。结论及时、正确处理羊水标本以及控制影响细胞培养成功的各个环节,准确判断羊水收获时机,可提高羊水细胞培养的成功率。     

羊膜细胞培养液对胎儿卵巢组织雌二醇分泌的实验研究

目的观察胎儿卵巢在体外培养条件下及羊膜细胞培养液条件培养液对分泌雌二醇(E2)的影响,旨在为卵巢移植提供较好的供体培养方法。方法取20～28周妊娠水囊引产的胎儿卵巢,将其切成碎块进行一般培养液直接培养(A组)及加羊膜细胞培养液培养(B组)。培养后测定两种不同培养液中E2含量并进行比较。结果胎儿卵巢在一般培养液和加羊膜细胞培养液培养条件下能产生E2,随培养时间延长,E2分泌量增加。而加羊膜细胞培养液组E2分泌量高于一般培养液直接培养(P<0.05)。结论胎儿卵巢在一般培养液培养条件下能分泌E2,而加羊膜细胞培养液能促进培养的卵巢组织的E2分泌,可作为卵巢移植的供体培养的较好培养液。     

孕中期及孕晚期胎儿羊水粪染与妊娠结局的分析

目的：探讨孕中期及孕晚期胎儿羊水性状与妊娠结局的关系。方法：回顾性分析400例孕中期行产前诊断的孕妇及同期晚期妊娠900例,分别检查胎儿羊水性状及粪染情况,并比较与妊娠结局关系。结果：孕中期羊水粪染发生率低,新生儿窒息率低,孕晚期羊水粪染发生率高,羊水粪染胎儿剖宫产率及出生窒息发生率、新生儿吸入性肺炎发生率均明显增高。结论：孕中期和孕晚期羊水粪染的主要原因可能不同,孕中期羊水粪染不能成为判断胎儿预后的重要指标,孕晚期羊水粪染是胎儿宫内窘迫的主要指标之一。     

改良羊水染色体的制备技术

目的：寻找一种简便,快速,效果稳定的羊水细胞染色体的制备方法。方法：总结19年来我们遗传室羊水细胞培养的工作经验。结果和结论：通过增加培养液中L－谷氨酰胺的含量以及应用Hepes,可使羊水细胞生长良好,而短时间高浓度的秋水侧素可获得较多的染色体分裂象。     

大肠癌原代细胞培养方法的探索

目的：探讨肿块大体类型、分化程度、取材位置以及不同培养方法等因素对大肠癌原代细胞培养成功率的影响,寻求一种简便而高效的大肠癌原代细胞培养方法。方法：分别对选材不同的人大肠癌细胞进行胶原酶消化法、组织块法培养,并比较不同培养基、细胞培养方法和细胞纯化方法对大肠癌细胞原代培养结果的影响,倒置显微镜下观察原代细胞的生长情况,免疫细胞化学法检测细胞表面标记物的表达情况。结果：肿块增生型肿瘤标本污染较少,肿瘤中心部位取材的肿瘤细胞活性好（2例培养出满意细胞均为肿块增生型中央深部取材获得）。低分化级别肿瘤短期生长可表现出明显活力,细胞数多于中分化,但长期生长结果未发现细胞数明显增多。2例培养出肿瘤细胞并顺利传代,1例分化为Broder Ⅱ级,1例分化为Ⅲ级。采用RPMI1640培养基,培养瓶瓶底用鼠尾胶原包被,加入适量生长激素,用组织块培养法进行原代培养,胰酶消化法纯化细胞,简便且效果好。免疫细胞化学检测培养的细胞来源于上皮组织。结论：肿块型肿瘤的中心部位、分化较差的肿瘤细胞活性好。大肠癌细胞原代培养,用组织块培养法和胰酶消化法纯化,采用RPMI 1640培养基,培养瓶瓶底用鼠尾胶原包被并加入适量生长激素,效果较好。     

添加RGD短肽的新型培养基对细胞生长、融合及外源基因表达的影响

目的在普通培养基中添加RGD短肽制备新型培养基,观察新型培养基对细胞生长状态、杂交瘤细胞融合和外源基因表达的影响。方法以普通培养基为对照,在普通培养基中添加不同质量浓度的RGD制备新型培养基,通过观察人胰腺上皮细胞株HPDE6-C7的生长增殖情况确定RGD的最佳质量浓度,然后,在培养基中接种不同浓度（5×104、105、5×105 mL－1）的HPDE6-C7细胞,通过倒置显微镜观察细胞的形态、贴壁、长势和密度情况;再分别用普通培养基和添加RGD短肽的新型培养基进行杂交瘤细胞的融合,比较两种培养基融合后克隆形成率和克隆阳性率的差异;通过转染含绿色荧光蛋白(GFP)的质粒观察其荧光强度的方法和转染过表达KRAS质粒观察其蛋白表达的方法,观察添加RGD短肽的新型培养基相比普通培养基在转染外源基因表达水平方面的优势。结果RGD短肽使用的最佳质量浓度为10 ng/mL;添加RGD短肽的新型培养基所培养的细胞相比普通培养基形态更佳、贴壁更好、增殖更快。同时,添加RGD短肽的新型培养基应用于细胞融合所形成克隆的百分率和克隆阳性率均高于普通培养基（PGFP后荧光强度更高（PKRAS的蛋白水平也更高（P<0.05）。结论添加RGD短肽的新型培养基在细胞生长状态、杂交瘤细胞融合及外源基因表达方面有突出优势,RGD短肽应用于细胞培养可能具有广泛前景和潜在的价值。     

104例羊水细胞培养染色体核型结果分析

目的分析羊水细胞染色体核型,探讨其在产前诊断中的应用。方法抽取104例孕16～29周孕妇的羊水,采用改良的羊水细胞培养方法进行培养。结果103例一次培养成功,1例培养失败后复穿培养成功。103例中98例原瓶培养即获得足够染色体分裂相,5例由于细胞克隆数少而依靠传代培养获得结果。共检出异态性4例,异常核型4例,其中21三体1例,结构异常3例。结论羊水细胞培养染色体检查进行产前诊断安全可靠。