大鼠口服葛根芩连微丸后葛根素、黄芩苷和小檗碱血药浓度测定及其药代动力学特征

目的建立大鼠灌胃给予葛根芩连微丸后血浆中同时测定葛根素、黄芩苷和小檗碱的高效液相色谱方法,并进行药动学研究。方法 8只SD大鼠灌胃给予葛根芩连微丸后于不同时间取样血样,100μL血浆样品预处理后采用2.5倍乙腈沉淀蛋白,HPLC-UV测定血药浓度。色谱柱为铂金ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(含0.025%磷酸+0.035%三乙胺),梯度洗脱,流速1 mL·min-1,检测波长270 nm,柱温30℃。采用DAS3.1.1处理药动学参数,采用spss16.0对药动学参数进行统计学处理。结果葛根素、黄芩苷、小檗碱分别在0.0795～31.7958μg.mL-1、0.0848～33.9152μg.mL-1、0.0555～22.2000μg.mL-1的范围内呈良好的线性关系。葛根素、黄芩苷和小檗碱的定量限分别为0.0795μg.mL-1、0.0848μg.mL-1、0.0555μg.mL-1。各成分低、中、高浓度日内和日间精密度(RSD)均小于15%,低、中、高浓度回收率均在75%～120%之间,RSD均小于15%。葛根素药时曲线为单峰,黄芩苷和小檗碱药时曲线均出现双峰现象。葛根素、黄芩苷和小檗碱的主要药动学参数分别为Tmax(0.68±0.26)h、(4.49±5.71)h和(3.05±3.29)h,Cmax(1316.85±624.18)μg/L、(7572.07±4059.72)μg/L和(221.52±93.12)μg/L;AUC0→t(7290.70±1284.25)μg/(L.h)、AUC0→t(87038.36±40665.16)ug/(L.h)和AUC0→t(2185.53±386.27)μg/(L.h)。结论该方法简便,准确,可作为葛根芩连微丸血中葛根素、黄芩苷和小檗碱血药浓度同时测定的定量分析方法,其药动学研究表明大鼠体内这3种成分,黄芩苷吸收最佳,其次是葛根素,小檗碱吸收较差。     

葛根素、黄芩苷、小檗碱及其在葛根芩连制剂(汤剂及微丸)中溶解度及油水分配系数的比较

目的 比较37℃下葛根素、黄芩苷、小檗碱及其在葛根芩连制剂(汤剂及微丸)中不同pH缓冲液中的溶解度及油水分配系数,为其口服吸收研究提供依据.方法 采用摇瓶-高效液相法测定葛根素、黄芩苷、小檗碱及其在葛根芩连制剂(汤剂及微丸)在不同pH缓冲液中的溶解度,及在正辛醇-缓冲液体系中的油水分配系数.结果 在pH1.2、4.5、6.8条件下,葛根素、黄芩苷、小檗碱单一成分的溶解度分别是27.088～ 30.805、0.007～ 11.694、0.181～2.169 mg·mL-1,3种成分在葛根芩连汤剂及微丸中溶解度范围分别是57.518～68.450、11.652～12.416、4.402～5.688 mg·mL-1和2.545～2.922、0.287～0.548、0.332～0.522 mg· mL-1;相应条件下,葛根素、黄芩苷、小檗碱单一成分的表观油水分配系数范围分别是0.081～0.136、0.689～3.706、0.244～0.579,3种成分在汤剂及微丸中的油水分配系数范围分别是0.290 ～0.603、3.032～10.019、1.110～3.952和0.150～0.217、0.486～8.305、0.440 ～0.838.结论 受到多种成分的相互影响及提取、制剂工艺的影响,制剂中有效成分的溶解度及油水分配系数与单一成分相比差异较大.与葛根芩连微丸相比,葛根芩连汤对复方中难溶性成分具有显著的增溶作用,可能有利于药物体内吸收,为中药剂改工艺研究提供参考.通过测定制剂中难溶性成分的溶解度及油水分配系数为研究中药复方有效成分的口服提供一定依据.     

葛根芩连微丸中指标成分的体外同步释放研究

目的使葛根芩连速释微丸中理化性质差异较大的各指标性成分葛根素、黄芩苷、小檗碱和甘草酸能达到同步释放。方法考察适宜的提高难溶性成分溶出速率的方法,在此基础上制备葛根芩连速释微丸,采用相似因子(f2)法统计分析释放曲线。结果黄芩苷、小檗碱、甘草酸与葛根素释放度的f2值分别为52.27、56.13和75.1。结论4种指标性成分葛根素、黄芩苷、小檗碱和甘草酸基本达到同步释放。     

高效液相色谱法同时测定葛根芩连汤煮散及汤剂中6种指标性成分的含量

目的 测定葛根芩连汤煮散与汤剂中6种指标性成分的含量。方法 采用高效液相色谱(HPLC)法测定葛根芩连汤煮散和汤剂中葛根素、大豆苷、黄连碱、黄芩苷、盐酸小檗碱和汉黄芩苷的含量,色谱柱为Phenomenex Gemini C₁₈(250.0 mm×4.6 mm, 5.0μm),流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸(B)溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量10μL。结果 葛根素、大豆苷、黄连碱、黄芩苷、盐酸小檗碱和汉黄芩苷在各自的线性范围内线性关系良好,精密度、重复性、稳定性均符合试验要求,平均加样回收率分别为99.03%,97.98%,98.77%,99.03%,99.02%,98.71%,RSD分别为0.13%,0.90%,0.94%,0.19%,0.24%,0.28%,且煮散中各指标性成分含量均高于汤剂。结论 本研究建立的含量测定方法简便、稳定、可行,可为煮散的质量控制、制备工艺及质量标准的制定提供参考。     

不同用药剂量葛根芩连汤药效组分比较研究

目的分析探讨不同用药剂量葛根芩连汤药效组分之间的含量及比例差异。方法运用反相高效液相色谱法对两种不同配伍比例(8∶3∶3∶2及5∶3∶3∶2)的葛根芩连汤四中药效组分的含量及比例进行测定,葛根芩连汤中的四种药效组分包括葛根素、黄芩苷、盐酸小檗碱以及甘草苷。结果当葛根芩连汤中四种药效组分的配伍比例为8∶3∶3∶2时,葛根素的含量和比例比配伍比例为8∶3∶3∶2有所升高,而其余药效组分没有显著性的变化;而在同一种配伍比例关系下,当用药剂量不同时,四种不同药效组分的含量,即葛根素、黄芩苷、盐酸小檗碱以及甘草苷随着用药剂量的升高而增高,而比例关系并没有显著性变化。结论葛根芩连汤中的四种药效组分,即葛根素、黄芩苷、盐酸小檗碱以及甘草苷的含量以及比例关系,随着其配伍比例以及用药剂量的不同而呈现出一定的规律变化,这将为葛根芩连汤的临床应用以及相关的研究提供借鉴和参考依据。     

RP-HPLC测定葛根芩连汤有效部位中黄芩苷和葛根素的含量

目的　建立葛根芩连汤有效部位中黄芩苷和葛根素的RP HPLC含量测定方法。方法　采用YWG C18色谱柱 (2 5 0mm× 4 6mm ,10 μm) ,黄芩苷含量测定流动相为甲醇 -水 -磷酸 (47∶ 5 3∶0 2 ) ,流速 :1 0mL/min ,检测波长 :2 80nm ;葛根素含量测定流动相为甲醇 -水 (2 5∶ 75 ) ,流速 :1 0mL/min ,检测波长 :2 5 0nm。结果　黄芩苷平均回收率为 98 61% ,RSD =2 77% (n =5 ) ;葛根素平均回收率为 10 2 4 % ,RSD =2 70 % (n =5 )。结论　所建立的方法简便、准确 ,可作为葛根芩连汤有效部位的质量控制方法     

黄连、黄芩药对提取物中黄芩苷和盐酸小檗碱药代动力学研究

目的:建立高效液相色谱法测定大鼠血浆中黄芩苷和盐酸小檗碱,进行药代动力学研究。方法:以紫草酸为内标,采用Agilent C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.3%磷酸三乙胺(22∶78),流速1.0 mL·min-1,检测波长278 nm,进样体积20μL。结果:黄芩苷和盐酸小檗碱呈良好线性关系;回收率分别为82.1%~87.1%、80.1%~87.5%,日内、日间精密度的RSD均小于10%。结论:为黄芩苷、盐酸小檗碱的药代动力学研究提供方法学依据。     

HPLC法同时测定葛根芩连片中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量

目的:测定葛根芩连片中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为PhenomenexC18柱,流动相为甲醇-0.1mol·L-1磷酸二氢钾溶液(45:55),检测波长为264nm。结果:盐酸小檗碱在10.05mg/l～40.20mg/l质量浓度内、黄芩苷在25.20mg/l～100.80mg/l内呈良好的线性关系。两者的平均回收率分别为100.1%和100.5%。结论本方法可用于葛根芩连片的质量控制。     

HPLC法测定人血浆中两性霉素B的浓度

目的建立HPLC法快速测定人血浆中两性霉素B的血药浓度。方法色谱柱为Agilent TC-C18反相柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.03 mol·L-1乙酸铵水溶液（体积比44∶56,pH=4.8）,流速为0.8 mL·min-1,检测波长为410 nm,柱温为40℃。以小檗碱为内标。结果两性霉素B血药浓度在0.04～10μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.997 2,n=7）。两性霉素B高（8μg·mL-1）、中（1μg·mL-1）、低（0.1μg·mL-1）3个血药浓度的方法回收率平均值分别为97.60%、93.90%和94.53%,日内（n=5）、日间（n=3）RSD值均小于10%。结论该方法简便、快速、灵敏,可用于两性霉素B的临床血药浓度监测和药动学研究。     

广东不同产地葛根中葛根素和大豆苷元的含量测定

目的对广东不同产地葛根中葛根素和大豆苷元的含量进行测定,为制定葛根药材质量标准和药材道地性选择提供参考依据。方法采用RP-HPLC法,色谱柱为Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为水(A)-甲醇(B)梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,柱温27℃,检测波长250 nm。结果葛根素在0.992～39.68μg.mL-1,大豆苷元在0.198～7.936μg.mL-1范围内,色谱峰面积与其质量浓度呈良好的线性关系(r=0.999 7)。葛根素回收率为101.3%,RSD为0.86%(n=6),大豆苷元回收率为98.0%,RSD为1.7%(n=6)。结论所建立的高效液相色谱法可作为葛根药材中葛根素和大豆苷元的质量控制标准和药材道地性选择的参考依据。     

HPLC法测定大鼠血浆中小檗碱的浓度

目的建立测定大鼠血浆中小檗碱浓度的高效液相色谱法。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水(每100 ml含乙酸铵1.54g,磷酸二氢钾0.14g,三乙胺0.2 ml)(35∶65)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长346nm。结果小檗碱在0.005～1.0μg/ml(r=0.9997,n=7)的范围内线性关系良好,定量下限0.005μg/ml,提取回收率80.03%～102.35%,相对回收率84.0%～100.3%,日内、日间精密度RSD均<11.1%。结论本方法快速、灵敏、准确,可用于小檗碱在大鼠体内的药物动力学研究。     

高效液相色谱法测定金铃子滴丸中延胡索乙素的含量

目的建立测定金铃子滴丸中延胡索乙素含量的高效液相色谱法。方法采用HPLC法测定延胡索乙素含量,色谱柱为依利特C18(4.6mm×200mm,5μm);流动相为甲醇∶0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH值至6.0)(55∶45);检测波长为280nm,流速为1.0mL·min-1,柱温为30℃,进样量10μL。结果延胡索乙素在0.01～0.20mg.mL-1范围内质量浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数r=0.9999(n=7);平均回收率为100.25%,RSD为1.71%(n=6);重复性实验的相对标准偏差RSD为1.87%(n=6)。结论该测定方法重复性好、灵敏度高并且简便、准确,可作为金铃子滴丸中延胡索乙素含量的测定方法。     

间接竞争ELISA法测定不同厂家葛根芩连片中黄芩苷的含量?

目的用所建立的黄芩苷间接竞争酶联免疫分析(ELISA)法检测不同厂家葛根芩连片中黄芩苷的含量差异。方法利用黄芩苷单克隆抗体,通过考察线性关系、精密度、加样回收率等方法学指标,建立黄芩苷的间接竞争ELISA法,并用所建立的方法测定7个不同厂家葛根芩连片中黄芩苷的含量。结果建立的黄芩苷间接竞争ELISA法的线性范围为16.157~1 280 mg/L,板间精密度RSD≤9.0%,板内精密度RSD≤5.1%,平均回收率为107.1%(RSD=4.9%)。7个厂家生产的葛根芩连片中黄芩苷含量从4.45 mg/片到13.41 mg/片不等。结论间接竞争ELISA法便捷、灵敏、精确、重现性好,可用于测定含黄芩的中药复方中黄芩苷的含量,该方法测得不同厂家的葛根芩连片中黄芩苷的含量差距较大。     

HPLC法同时测定双黄连制剂中绿原酸、黄芩苷和连翘苷的含量

目的：建立以HPLC法同时测定双黄连制剂中三种指标成分含量的方法。方法：采用Amethyst C18-P色谱柱,流动相为乙腈-0.4%磷酸,流速为1.0ml/min,检测波长为230nm,柱温为30℃。结果：绿原酸在7.52～150.40μg/ml、黄芩苷在4.98～99.60μg/ml、连翘苷在0.76～15.20μg./ml浓度范围内,三种指标成分线性关系良好,RSD均大于0.9988;三种指标成分的加样回收率分别为96.75%（RSD=1.28%）,99.58%（RSD=1.60%）,和104.48%（RSD=2.96%）。结论：本方法简便、结果准确可靠,可有效控制双黄连制剂的质量。     

葛根芩连汤配伍规律的研究

目的研究葛根芩连汤不同配伍对主要化学成分、药理效应变化的影响,综合分析该方的配伍规律。方法采用HPLC法测定各主要成分,考察HPCE指纹图谱的变化,药理指标采用体外抑菌、体内抑菌、解热试验、抗腹泻试验和病理损害模型。结果葛根和黄连降低黄芩苷的含量,黄连降低甘草酸的含量,葛根、黄芩、甘草使小檗碱的含量降低。配伍产生的沉淀,经分析含有黄芩苷、小檗碱、葛根素、甘草酸。各药配伍组合中,以黄连的体内外抑菌活性最强,不同的菌株强度有差异;解热试验中,最佳组合为葛根和黄芩;在抗腹泻试验中,最佳组合为黄连和炙甘草。结论从治疗“协热下利”证来说,全方4味药组合最佳。     

高效液相色谱法同时测定安博诺片中厄贝沙坦和氢氯噻嗪的含量

目的 建立HPLC法同时测量安博诺片中厄贝沙坦和氢氯噻嗪的含量.方法 安博诺片中厄贝沙坦和氢氯噻嗪的HPLC同时测定方法:采用Venusil XBP-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相是乙腈-0.1 mol·L -1 磷酸盐溶液(加入0.1%三乙胺,磷酸调pH值5.0)(60:40),流速1.0 mL·min-1,检测波长260 nm,进样量为20 μL.结果 安博诺片中厄贝沙坦和氢氯噻嗪的HPLC同时测定方法:厄贝沙坦和氢氯噻嗪分别在1.5～30 μg·mL-1 和1.2～25 μg·mL-1范围内线性关系良好;平均回收率(n=9)分别为100.4%和100.3%;精密度实验RSD分别为0.23%和0.15%;供试品在12小时内稳定.结论 建立的方法操作简便,测量结果准确、可靠.     

RP-HPLC法测定葛藤分散片中葛根素与大豆苷的含量

目的 建立同时测定葛藤分散片中葛根素与大豆苷含量的反相高效液相色谱法.方法 采用Agilent Zarbax Eclipse C18色谱柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相为甲醇-水（20：80,V/V）,流速1.0 mL·min-1,检测波长250 nm,柱温35℃,进样量10 μL.结果 葛根素和大豆苷在各自的线性范围内（葛根素：9.04 ～ 72.32 μg·mL-1;大豆苷：9.12 ～72.96 μg·mL-1）,峰面积与浓度呈良好的线性关系（r值均大于0.999）.葛根素和大豆苷的最低定量限分别为0.45和0.46 μg·mL-1,加样回收率分别为100.2％和101.7％,RSD分别为0.7％和0.9％（n=9）.结论 本方法简便、准确、灵敏、重现性好,专属性强,可用于葛藤分散片中葛根素和大豆苷的质量控制.     

HPLC测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷、黄芩苷及甘草酸的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷、黄芩苷和甘草酸含量的方法。方法:色谱柱为Kromasil C_(18),流动相为水(0.025%甲酸)-甲醇(0.025%甲酸),检测波长为250 nm。结果:柴胡皂苷在0.201 6μg/mL¹23.7μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 0),平均加样回收率为94.1%,RSD为1.62%(n=6)。黄芩苷在0.749μg/mL123.7μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 0),平均加样回收率为94.1%,RSD为1.62%(n=6)。黄芩苷在0.749μg/mL⁴58μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 5),平均加样回收率为95.2%,RSD为1.52%(n=6)。甘草酸在2.270μg/mL458μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 5),平均加样回收率为95.2%,RSD为1.52%(n=6)。甘草酸在2.270μg/mL¹35.5μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 5),平均加样回收率为94.8%,RSD为1.36%(n=6)。结论:该方法简便、灵敏、准确,可用于小柴胡颗粒的质量控制。