3种典型海洋微藻的细胞增殖特性研究

目的研究硅藻门的三角褐指藻Phaeodactylum tricornutum、甲藻门的东海原甲藻Prorocentrum donghaiense和金藻门的球形棕囊藻Phaeocystis globosa的细胞增殖情况,为认识其基本生物学特性,推动海洋微藻在医药保健食品行业的应用提供参考。方法选取上述3种海洋微藻为生物材料,以添加f/2营养液的人工海水为培养介质,在植物培养箱中利用三角瓶开展为期2周的一次性培养实验。利用倒置显微镜和血球计数板观测微藻细胞密度,采用最小二乘法拟合法计算微藻日生长速率。结果 3种海洋微藻的细胞生长均经历缓慢期、快速期和平稳期3个阶段;实验结束时,三角褐指藻、东海原甲藻和球形棕囊藻的细胞密度分别约为1.126×107、1.167×107和1.210×107个/mL;其最大生长速率分别出现在第2天(1.11/d)、第4天(1.13/d)和第3天(1.02/d)。结论 3种海洋微藻的细胞增殖具有多样性;它们的最大细胞密度和日生长速率出现的时间或程度均存在一定的差异,提示在进行经济微藻培养生长过程中必须考虑各藻种的细胞增殖特性。     

4株经济海洋微藻细胞生长的实验室研究

目的研究角毛藻Chaetocerossp．、绿色巴夫藻Pavlovaviridis、叉鞭金藻Dirateriainornate和杜氏盐藻Dunaliella salina4株经济海洋微藻的细胞生长特性,为微藻在医药学相关行业的开发与应用提供参考依据。方法采用室内实验方法,以添加f／2营养液的人工海水为培养介质,在植物培养箱中利用三角瓶进行微藻培养试验,测定微藻细胞密度,并计算细胞生长速率。结果4株经济海洋微藻的细胞生长呈现明显的缓慢期、快速期和平稳期阶段。角毛藻、绿色巴夫藻、叉鞭金藻和杜氏盐藻的最大细胞密度有明显差别,分别为6．71×10^6、4．916×10^7、1．225×10^7和4．64×10^6个／mL。对4株微藻在1—5d、5～9d、9～13d和13～17d几个时间段的生长速率进行比较分析,结果表明角毛藻、绿色巴夫藻、叉鞭金藻的生长速率在1～5d阶段最大,分别为0．57、0．48、0．55／d;而杜氏盐藻的生长速率在5～9d阶段最大,为0．68／d。结论实验选用的4株海洋微藻的细胞生长特征存在一定异同,在选育微藻株系开展微藻开发利用研究时应该考虑微藻细胞生长繁殖的差异性。     

不同培养容器和光照对2种微藻生长的影响

目的 研究具药用价值的海洋微藻杜氏盐藻Dunaliella salina和亚心形扁藻Platymonassubcordiformis在不同培养容器以及光照下的细胞生长情况,为促进海洋微藻生物资源的培养保存提供参考.方法 选取杜氏盐藻和亚心形扁藻2种海洋微藻为生物材料,在植物培养箱中分别利用三角瓶和试管,在正常光照和遮光光照条件下开展为期10 d的一次性培养试验,利用倒置显微镜和血球计数板观测微藻细胞密度,统计分析不同培养容器和光照对2种海洋微藻生长影响的作用.结果 在该实验条件下,2种海洋微藻的细胞生长均表现出初期生长缓慢、中期生长快速、后期生长放缓的趋势.杜氏盐藻在三角瓶中正常光照培养条件下的生长最好(504× 104个/mL),其次为在试管中正常光照培养的条件下(364× 104个/mL);亚心型扁藻细胞在三角瓶中正常光照培养的条件下生长最好(227×104个/mL),其次为在三角瓶中遮光处理的条件下(177× 104个/mL).结论 培养容器(三角瓶和试管)和光照(正常光照和遮光)对2种海洋微藻生长的影响均具有统计学意义,在进行微藻生物资源培养和保存时,应充分考虑或利用这2种因素的作用.     

三角褐指藻在多波长下藻液吸光度与细胞密度的关系研究

目的研究具潜在药用价值的三角褐指藻Phaeodactylum tricornutum在不同波长下,其藻液吸光度与细胞密度的关系。方法取对数生长后期的三角褐指藻藻液进行梯度稀释,利用显微镜观测微藻细胞密度,利用分光光度计分别测定藻液在8个波长下的吸光度,分析各波长下微藻细胞密度与吸光度的相关性。结果 6个稀释梯度下的细胞密度分别为923×104、453×104、207×104、94×104、47×104、22×104个/mL;不同波长下藻液吸光度有差别。8个波长下,细胞密度与吸光度均存在显著性相关关系,在680、663、420和450 nm波长处相关系数r值较大,分别为0.999 0、0.998 1、0.997 2和0.996 3。结论利用吸光度法检测三角褐指藻细胞生长是一种快速、简便、可行的方法;本试验条件下,在680、663、420和450 nm波长处测定三角褐指藻藻液的吸光度较为适宜。     

利用微载体悬浮培养人脂肪基质干细胞

目的: 观察微载体悬浮培养系统(RCCS)对成人脂肪基质干细胞Adipose tissue-derived stromal cells(ADSCs) 的培养效果,为大量、快速扩增组织工程种子细胞提供实验依据.方法: RCCS系统采用微载体Cytodex 3为贴壁依赖性细胞ADSCs提供贴壁条件,浓度为5 g/L.静止培养在12孔培养板中.两系统细胞接种密度均为1×108cells/L.分别观察细胞增殖情况,并对用RCCS培养的细胞进行细胞表型、分化能力进行检测.结果: 微载体悬浮培养9 d后达到最大活细胞密度(1.60×109cells/L),静止培养第7日就达到最大活细胞密度(3.38×108cells/L).在微载体悬浮培养条件下,ADSCs生长更为旺盛,细胞产量更高,优于静止培养.11 d后,ADSCs依然保持其干细胞特性.结论: 利用生物反映器以及微载体技术有利于ADSCs的大规模扩增,是扩增组织工程种子细胞的有效方法.     

胶原和微载体基质在脑星形胶质细胞培养中的应用

目的：研究脑星形胶质细胞在用一定量胶原、微载体基质制备的细胞培养环境中微载体上的贴壁分布,探讨胶原、微载体基质及其浓度与细胞生长的关系,并筛选出最佳技术参数。 方法：以乳化的微小球形颗粒载体为基质,用一定浓度胶原、微载体基质制备细胞培养微载体环境,对大鼠脑星形胶质细胞进行囊化高密度长期培养。结果：细胞贴壁率与胶原、微载体培养环境中胶原浓度有关,不同浓度胶原包埋微载体培养环境条件对细胞生长影响不同。在胶原、微载体基质培养环境下培养7 d后,脑星形胶质细胞密度由2×10⁵/15 mm平皿达到18×10⁵/15 mm平皿,培养6个月后达到40×10⁵/15 mm平皿,在该培养条件下所能达到的细胞最大密度明显高于常规培养,并以很高的细胞存活率维持更长时间。此时微载体量为4 g•L^-1,胶原溶液与微载体的比例为1∶3。 结论：在合适的培养条件下,细胞能维持在有限体积培养液中高密度长期生长。     

成年兔心耳组织体外培养扩增心肌细胞的生物学特性研究

目的探讨成年兔心耳组织体外培养扩增心肌细胞的生物学特性.方法选新西兰成年兔11只,分别取少量心耳组织,酶解法制成细胞悬液,体外培养.于培养0、12、26、40 d进行细胞计数;培养12、26 d测定细胞染色体含量;培养0、40 d,取部分细胞行免疫组化染色检查,计算心肌细胞百分比;培养26 d,电镜检查细胞的超微结构;培养12 d,取部分细胞置-80℃冷冻保存,8周后快速解冻,体外继续培养观察.结果细胞计数分别为(0.54±0.06)×107、(7.38±0.73)×107、(58.00±16.14)×107、(24.91±11.86)×107;DNA 含量测定S期细胞分别为22.2%、56.5%;免疫组化判定心肌细胞的比例分别为82%±11%、87%±18%;电镜下可见心肌细胞肌原纤维的横纹;冷冻的心肌细胞快速解冻后,体外培养可继续生长扩增.结论成年兔心耳组织来源的心肌细胞,在有限的体外传代培养过程中,数目可扩增,其亚显微结构和成分基本稳定.     

藻酸盐微球的制备及其对共培养的MSCs的影响

目的 检测藻酸盐微球对间充质干细胞生长的影响,探讨其在骨组织工程中可能的应用.方法 应用滴注法制备藻酸盐微球,检测不同浓度的藻酸盐微球pH值的动态变化及通过MTT法和流式细胞仪检测藻酸盐微球溶液中间充质干细胞的生长情况,评价藻酸盐微球对细胞的影响. 结果间充质干细胞可黏附在藻酸盐微球上生长,浓度为0.02 g/L、0.2 g/L和2.0 g/L的藻酸盐微球溶液的pH值分别在7.20、7.20和6.70左右波动,MTT法检测这3个浓度组同细胞对照组D(490)值几乎无差异,提示对间充质干细胞的生长影响不具有统计学意义.细胞周期分析显示,3 d时各组S期细胞比例均等于或大于对照组,且随着藻酸盐微球浓度的增加而增加;7 d时各组S期细胞比例与对照组相对差值在±3.15之间,0.2 g/L 组比例最高,达24.40%. 结论浓度等于或低于2.0 g/L的藻酸盐微球溶液对间充质干细胞生长影响很小,适合与之共培养进行有关研究.     

雨生红球藻fachb-712快速繁殖生长的适宜条件

目的 探讨雨生红球藻fachb-712快速繁殖生长的适宜条件.方法 利用分光光度法和显微镜计数法绘制光密度与细胞密度的关系曲线,从不同的pH值、光照强度、接种密度、温度等培养条件入手,对影响雨生红球藻生长的各种主要培养条件进行初步研究.结果 雨生红球藻生长的适宜培养条件为:pH 8.0;光照强度1 klx下连续培养24h;温度24 ℃;接种量1.95×105mL-1.结论 雨生红球藻细胞密度与培养物光密度值满足线性关系,pH 8.0、光照强度1 klx下连续培养24h、温度24 ℃、接种量1.95×105mL-1的培养条件适宜雨生红球藻快速繁殖生长.     

文摘

209 从巨大鞘丝藻中分得一新的有毒及抗真菌内酯 tanikolide〔英〕/Singh I P…//JNat Prod.-1999,62(9).-1333～1335海洋蓝绿藻是一个引人注目的新的具生物活性的天然产物资源。在众多蓝绿藻中,巨大鞘丝藻 Lyngbya majuscula Gomont 资源丰富,含100多种次生代谢产物,约有一半为脂肽类化合物,其中有些化合物显示细胞毒性、鱼毒性和杀软体动物活性。作者以生物活     

锶胁迫下亚心形扁藻生理生化的研究

目的：以亚心形扁藻为材料，在室内条件下研究SP胁迫对其生理生化的影响。方法：采用f／2配方灭菌人工海水培养基培养，用分光光度法测定其生长，硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定丙二醛(MDA)含量，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性，原子吸收光谱法测定其对SP的富集能力。结果：在实验设计的Sr^2 浓度下亚心形扁藻均能生长，但SP浓度较高时，生长受到不同程度的抑制，细胞密度分别减少10．1％和21．0％；叶绿素含量随着锶浓度的升高而降低，呈负相关关系；MDA含量随Sr^2 浓度的升高而升高，当Sr^2 浓度大于5．76mmol／L后急剧降低；SOD活性在SP存在时始终维持一个较高的水平，且随SP浓度的增高而先升高后降低，脂肪酸的种类随Sr^2 浓度的升高而减少；亚心形扁藻表现出对Sr^2 的高富集能力。结论：亚心形扁藻对锶胁迫具有较高的耐受能力和富集能力，有望通过进一步的研究为重金属污染的处理提供更多的资料。     

寻常型银屑病中医基本证候与疾病分期及病情的相关性探讨

【目的】了解银屑病中医基本证候在人群中的分布,探讨银屑病中医基本证候与疾病分期及病情严重程度的相关性。【方法】采用横断面调查的流行病学研究方法,纳入280例寻常型银屑病患者进行问卷调查,运用统计学方法分析寻常型银屑病基本证候与疾病分期及各项病情严重程度指标的相关性。【结果】(1)寻常型银屑病患者中医基本证候分布依次为:血瘀证(70.3%)>血燥证(17.3%)>风热证(12.4%);疾病分期依次为:稳定期(57.5%)>进行期(26.9%)>消退期(15.7%)。(2)中医基本证候与疾病分期的关系:风热证在进行期中所占比例较大,血瘀证和血燥证在静止期中所占比例较大。风热证与进行期相关,血瘀证与稳定期相关,消退期与血燥证相关。(3)中医基本证候与各项病情评判指标的关系:不同中医证型间银屑病的疾病严重程度具有显著差异(P<0.01),PASI评分风热证>血瘀证>血燥证;瘙痒评分风热证>血燥证>血瘀证。回归分析发现:躯干部的PASI评分和瘙痒评分对3种证型的影响程度不同,与血燥证和风热证正相关,与血瘀证负相关;年龄分段与血燥证负相关。【结论】血瘀证与稳定期的病人在本次研究中所占比例最高。不同中医证型间银屑病的疾病严重程度存在差异,证型与银屑病分期可能有对应关系:风热证与进行期相关,血瘀证与稳定期相关,消退期与血燥证相关。     

Microalgae as Bioabsorbents for Treating Mixture of Electroplating and Sewage Effluent

The effectiveness of copper and nickel uptake by microalgae grown in the mixture of electroplating effluent and sewage was studied. The results showed that a high percentage of copper removal (68.1%-88.2%) was achieved by Chlorellapyrenoidosa (strain No.26) reared in the mixture of 90% electroplating effluent and 10% raw sewage during the first 3 days despite the fact that cell growth was inhibited. Similar results were also obtained by using Chlorella HKBC-C3, another species collected from one of the heavy metal polluted sites in Hong Kong, isolated and cultured in the Biology Department. There was no significant difference (P>0.05) in the removal of copper and nickel from the effluent between these 2 algal species. However, it was noted that removal of nickel from the mixture by the two species were comparatively lower (<20%) than the removal of copper (>68%).     

绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞株BEL-7402的杀伤效应

目的探索绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402的杀伤效应。方法采用MTT法检测不同浓度的绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402增殖的作用,同时利用电子显微镜、透射电镜观察细胞BEL-7402的形态学变化。结果MTT检测表明：绿脓杆菌制剂为10×107/mL、5×107/mL、2.5×107/mL时对肝癌细胞生长杀伤作用与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）;电子显微镜、透射电镜观察发现肝癌细胞BEL-7402于12、24 h出现凋亡形态学改变,40 h形态学表现为凋亡与坏死并存。结论绿脓杆菌制剂对肝癌细胞BEL-7402生长有抑制作用,诱导细胞凋亡及坏死可能是主要作用机制。     

人乳癌细胞小球藻CVFad3基因的表达和作用

目的 构建真核表达载体pEGFP-C3-n-3,检测小球藻n-3脂肪酸脱氢酶基因CvFad3在人乳癌MCF-7细胞中的表达和作用.方法 通过RT-PCR法扩增得到CvFad3基因,将CvFad3基因cDNA插入到真核表达载体pEGFP-C3中,构建重组表达载体pEGFP-C3-n-3,并将其转染入MCF-7细胞中,设空载体pEGFP-C3为对照组.采用RT-PCR检测CvFad3基因的表达,MTT法分析CvFad3基因对MCF-7细胞增殖的影响,气相色谱检测CvFad3基因对MCF-7细胞n-3多不饱和脂肪酸含量的影响.结果 构建的重组载体pEGFP-C3-n-3转染入乳癌MCF-7细胞48 h后可检测到CvFad3基因mRNA的条带,而转染pEGFP-C3的MCF-7细胞48 h后检测不到CvFad3基因mRNA的条带.与对照组比较,转染pEGFP-C3-n-3的细胞MTT吸光度明显降低(t=6.039,P＜0.01);人乳癌细胞MCF-7细胞膜n-3多不饱和脂肪酸的含量显著升高.结论 重组载体pEGFP-C3-n-3构建成功,CvFad3基因能在MCF-7细胞内有效异源表达,且抑制了MCF-7细胞的增殖,增加了细胞膜n-3多不饱和脂肪酸的含量.     

镉低积累药用植物盆栽及大田筛选试验

目的 比较不同植物对重金属镉积累能力差异,筛选出镉低积累药用植物种类.方法 以夏枯草、益母草、薄荷为供试材料,通过盆栽和大田试验,采用原子吸收光谱法测定植物中镉的含量.结果 三种植物积累镉的能力存在差异,益母草>薄荷>夏枯草.益母草在镉污染土壤中其地上部分镉含量随土壤镉浓度增高而增高,而生长不受影响,属于抗性植物.在镉胁迫下,薄荷、夏枯草生长受到抑制,植物中镉含量较低,且随土壤镉浓度增加植物中镉含量变化较小,属于镉低积累植物.结论 益母草为镉高积累植物,且生长不受影响,可以作为富集植物治理镉污染;薄荷中镉主要积累在地下部分,而其以地上部分入药,夏枯草为镉低积累植物,两者均为可在镉污染地区种植的药用植物.     

单个shRNA质粒同时抑制LNCaP细胞人端粒酶催化亚单位和雄激素受体的表达

目的 探讨单个shRNA质粒联合抑制LNCaP细胞人端粒酶催化亚单位(hTERT)和雄激素受体(AR)基因表达的可行性.方法 使用RNAi-DNA载体技术,将hTERT和AR siRNA的DNA模板同时插入到载体Pgenesil,构建成重组质粒Pgenesil-hTERT-AR-shRNA,转染至LNCaP细胞,与空白对照、Pgenesil-HK-shRNA(通用阴性质粒)、Pgenesil-hTERT-shRNA和Pgenesil-AR-shRNA比较,利用实时荧光定量PCR技术观察其对LNCaP细胞hTERT和AR基因mRNA表达的影响.采用Annexin V方法检测细胞凋亡,MTF比色分析法测定细胞增殖活性.结果 空白对照组、Pgenesil-HK-shRNA组、Pgenesil-hTERT-shRNA组、Pgenesil-AR-shRNA组和Pgenesil-hTERT-AR-shRNA组细胞的hTERT基因mRNA分别为(1.51±0.08)×108、(7.32±0.43)×107、(2.94±0.15)×106、(4.45±0.25)×107、(3.17±0.18)×106 (copies/ml),各组AR基因mRNA分别为(1.92±0.11)×105、(6.47±0.32)×105、(3.70±0.24)×104、(1.22±0.06)×104、(7.21±0.41)×103 (copies/ml),提示Pgenesil-hTERT-shRNA对hTERT基因mRNA有抑制作用,Pgenesil-AR-shRNA对AR基因mRNA有抑制作用,Pgenesil-hTERT-AR-shRNA对hTERT和AR基因mRNA都有抑制作用(P＜0.05).Pgenesil-hTERT-AR.shRNA与Pgenesil-hTERT-shRNA、Pgenesil-AR-shRNA比较,引起的细胞凋亡、细胞生长抑制更加明显(P＜0.05).结论 含有hTERT-shRNA和AR-shRNA DNA模板的重组表达质粒Pgenesil-hTERT-AR-shRNA能够明显抑制hTERT和AR基因的表达和前列腺癌细胞的生长.     

干蟾皮药材中华蟾酥毒基的含量测定

目的建立了干蟾皮中华蟾酥毒基的含量测定方法。方法色谱法：采用Waters Xbridge C18反相色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相：0.5%磷酸二氢钠溶液∶乙腈（52∶48）加磷酸调pH 3.2;检测波长为294 nm;流速：1 mL/min;柱温为室温。结果华蟾酥毒基在进样量2.5~15.0μg（r=0.9999）范围内呈良好的线性关系,线性回归方程y=-4×107x-10 196（r=0.9999）;溶液精密度、重复性均良好;在12 h内测定,其稳定性最佳;溶液加样回收实验考察得平均回收率为97.4%,RSD=2.8%。5批干蟾皮药材的含量分别为0.012、0.009、0.013、0.011、0.007 mg/g,平均含量为0.010 mg/g。结论本方法建立的色谱条件科学、快速、稳定,可作为干蟾皮药材内在质量的控制方法。