中药何首乌促进黑色素生成的作用机理研究

目的;研究中药何首乌在B16黑素瘤细胞中促进黑色素生成的作用机理。方法;用MTT法、多巴氧化法及NaOH裂解法测定何首乌对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。RTPCR和Western blotting法分别检测何首乌作用前后酪氨酸酶、小眼相关转录因子（MITF）,酪氨酸酶相关蛋白1（TRP1）和酪氨酸酶相关蛋白2（TRP2）基因表达和蛋白合成的变化。结果;随何首乌加药浓度的增大,细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素合成能力明显增强;何首乌可明显促进酪氨酸酶和MITF的基因表达和蛋白合成,但对TRP1、TRP2的表达几乎没有影响。结论;何首乌在体外能显著刺激B16细胞中黑色素的生成,上述变化可能是通过促进酪氨酸酶和MITF的基因表达和蛋白合成以及激活酪氨酸酶的活性来实现的。      

驱虫斑鸠菊不同提取部位对小鼠B16细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的影响

目的 观察驱虫斑鸠菊不同提取部位对体外培养的小鼠B16细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响.方法 由驱虫斑鸠菊得到3种不同部位提取物,分别为母液(Q1)、乙酸乙酯提取物(Q2)及萃取后物质(Q3).以体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞为模型,以3个色素合成途径中的关键点为多靶点评价体系,其中采用MTT法测定提取物对B16小鼠黑素瘤细胞增殖的影响,采用L-DOPA氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响,采用NaOH裂解法检测黑素含量.结果 3种提取部位对B16细胞都有一定的增殖作用,其中Q1、Q2促进增殖作用明显(P＜0.01),Q3有轻微的促进增殖的作用.Q1、Q3对酪氨酸酶有不同程度的激活作用并促进黑素的合成,其中Q3 在20～80 μg/ml 范围内促进B16细胞黑素合成作用明显(P＜0.05或P＜0.01),且Q3以浓度依赖方式上调酪氨酸活性.结论 驱虫斑鸠菊残留的水溶性部分是稳定的调节B16细胞黑素合成的活性部位.     

白及多糖对酪氨酸酶活性及黑色素生成的影响

目的:观察白及多糖对酪氨酸酶(TYR)活性及黑色素形成相关蛋白TYR、小眼畸形相关转录因子(MITF)表达的影响。方法:超声提取白及多糖粗品。用不同浓度的白及多糖(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 g/L)和曲酸(阳性对照,0.1、0.2、0.4 g/L)作用于小鼠B16黑色素瘤细胞,用于检测细胞活性、TYR活性;各组细胞分别加入α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)及不同浓度药物共培养后检测黑色素含量;将细胞分为空白组、模型组(α-MSH)、曲酸组及白及多糖低、中、高剂量组,予相应干预48 h后,应用Western blot检测B16细胞TYR和小眼畸形相关转录因子(MITF)的蛋白表达情况。结果:不同浓度曲酸组、白及多糖(0.05~0.8 g/L)组、空白组间的细胞活性差异无统计学意义(P0.05)。与空白组比较,白及多糖在浓度0.1~0.8 g/L对TYR的活性有显著抑制作用(P0.05,P0.01),其作用与阳性对照曲酸相当;白及多糖在浓度0.1~0.8 g/L有较高的抑制黑色素生成作用(P0.05,P0.01);白及多糖浓度0.2~0.4 g/L对TYR、MITF蛋白表达水平有明显抑制作用(P0.05)。结论:白及多糖可能通过抑制TYR的活性和蛋白表达及MITF的蛋白表达,起到抑制黑色素生成的作用。     

熊果酸诱导B16黑色素瘤细胞分化作用的研究

目的 观察熊果酸(UA)诱导B16黑色素瘤细胞的分化作用.方法 采用MTT法测定UA对B16细胞增殖抑制作用;并以形态学、黑色素含量、酪氨酸酶活性和体内致瘤能力变化为指标,观测UA对B16细胞的诱导分化作用.结果 用4～64μM的UA作用于肿瘤细胞,可见有不同程度的抑制作用.MTT法测得UA作用B16细胞12、24和48 h的IC50分别为58.05、35.13和12.17μM.UA对B16细胞有较强的分化诱导作用,表现为UA作用后,细胞形态发生明显变化,出现细胞核变小,规则,核浆比变小,线粒体、粗面内质网等细胞器丰富等变化;B16细胞黑色素颗粒生成能力明显增多(P<0.01 or 0.05)并伴有酪氨酸酶活性的升高(P<0.01).而B16细胞体内成瘤能力显著下降(P<0.05).结论 UA对B16细胞有分化诱导作用,其机制有待进一步研究.     

负载酪氨酸酶抑制肽的牛奶外泌体抑制酪氨酸酶活性及黑色素生成研究

目的:探讨酪氨酸酶抑制肽（YRS）功能化的牛奶外泌体（mEXOYRS）,对酪氨酸酶活性及黑色素生成的抑制作用。方法:通过超速离心法获取牛奶外泌体（mEXO）;利用外泌体特异锚定肽CP05将YRS修饰在mEXO表面,获得mEXOYRS,随后通过流式细胞仪分析YRS的负载效率;在黑色素瘤细胞B16-F10中,检测细胞对mEXOYRS的摄取效率以及YRS与酪氨酸酶的共定位效率,评估mEXOYRS对B16-F10黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性的抑制效果及对黑色素合成的抑制作用;进一步将mEXOYRS均匀涂抹于Nude BALB/c小鼠黑色素瘤细胞B16-F10所成皮下瘤模型上,评估其在体内对黑色素合成的抑制作用;通过对C57BL/6小鼠表面皮肤涂抹mEXOYRS,评估其对小鼠毛囊的着色程度及小鼠皮肤的美白效果。结果:YRS通过外泌体特异锚定肽CP05高效负载至mEXO,并且不影响mEXO的形态结构及标志性蛋白的表达;在B16-F10黑色素瘤细胞摄取实验中,mEXO能够增强YRS与细胞内酪氨酸酶共定位的效率,在1周、2周及6周时均显著抑制细胞产生黑色素（F=56.117、48.954、560.006,均P＜0.05）;在Nude BALB/c小鼠黑色素皮下瘤模型中,与YRS组相比,mEXOYRS更好的抑制了黑色素的产生;在C57BL/6小鼠模型中,mEXOYRS降低了黑色素的产生,并显著降低了黑色素含量（F=173.083,P＜0.05）及酪氨酸酶活性指标（F=34.156,P＜0.05）,取得了美白效果。结论:YRS修饰的mEXO可通过内体转运途径,靶向运输到酪氨酸酶处,降低酪氨酸酶活性,并有效抑制黑色素生成,提高YRS的美白效果。     

盐酸小檗碱对B16细胞的抑制作用及其机制

目的：探讨盐酸小檗碱对体外培养B16细胞的抑制作用,并探讨其作用机制。方法：应用MTT法检测盐酸小檗碱对体外培养的小鼠黑色素瘤B16细胞增殖的抑制作用,利用相差显微镜观察盐酸小檗碱作用于B16细胞后的形态学改变,通过测定细胞黑色素含量及B16细胞体内成瘤能力观察小檗碱对B16细胞的诱导分化作用。结果：盐酸小檗碱可显著抑制体外培养的B16细胞的增殖;经盐酸小檗碱处理后的B16细胞形态呈趋向分化成熟的方向变化,细胞的克隆形成能力降低,细胞内的黑色素生成能力增强。体内成瘤能力降低。结论：小檗碱有较强的体外抗B16肿瘤活性作用,并能诱导B16细胞分化。     

强脉冲光及5-氨基酮戊酸对小鼠B16黑素瘤细胞的作用

目的 研究强脉冲光(IPL)及5-氨基酮戊酸(5-ALA)对小鼠B16黑素瘤细胞的影响.方法 以小鼠B16黑素瘤细胞为实验对象,分为阴性对照组(不加5-ALA,未辐射)、UVA阳性对照组(3、4、5 J/cm~2 UVA辐射)、5-ALA组(含5 mmol/L 5-ALA的细胞培养液孵育)、IPL组(20、30、40 J/cm~2 IPL辐射)及5-ALA+IPL组(含5 mmol/L 5-ALA的细胞培养液孵育细胞4 h后予20、30、40 J/cm~2 IPL辐射).辐射后1 d、2 d、3 d、4 d、5 d以噻唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖情况、NaOH溶解法测定黑素含量、氧化多巴反应法测定酪氨酸酶活性的变化.结果 5 mmol/L 5-ALA不影响B16黑素瘤细胞增殖、细胞黑素含量及酪氨酸酶活性.3～4 J/cm~2 UVA可促进B16黑素瘤细胞增殖,5 J/cm2时细胞增殖受到抑制.3～5 J/cm~2 UVA可提高酪氨酸酶活性、促进黑素合成,其作用呈剂量依赖性.IPL及5-ALA+IPL可降低黑素含量,5-ALA+IPL的作用较IPL更明显.IPL及5-ALA+IPL对细胞增殖及酪氨酸酶活性无明显影响.结论 UVA可提高酪氨酸酶活性,促进B16黑素瘤细胞的黑素合成.IPL及5-ALA+IPL可使B16黑素瘤细胞黑素合成减少,对细胞增殖、酪氨酸酶活性无影响.     

湘西龙山百合对小鼠B-16黑色素瘤细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响

目的 观察不同浓度湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞细胞活力、黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响.方法 选用同一传代小鼠B-16黑色素瘤细胞并分组,分别加入不同浓度百合提取液、维生素C二种溶液作用3d后,用MTT法测定B-16细胞活力;用Maeda等的方法测定B-16细胞酪氨酸酶活性;用Victoria等的方法测定B-16细胞黑色素含量.结果 湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞的酪氨酸酶活性、黑色素合成的抑制作用明显强于维生素C,组间差异有统计学意义(P＜0.05),且其抑制作用随浓度的增加而增加;同时湘西龙山百合提取液其细胞毒性作用同样强于维生素C,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 百合提取液对B-16细胞的生长、酪氨酸酶活性和黑色素合成的抑制作用强于维生素C,其抑制作用与浓度呈正相关.     

妇科再造丸含药血清对体外培养人黑色素细胞的抑制作用

目的 研究妇科再造丸对黑色素细胞增殖及细胞酪氨酸酶活性的影响.方法 体外培养人黑色素细胞,进行细胞鉴定后测定妇科再造丸的大鼠含药血清对黑色素细胞的增殖抑制率及对细胞酪氨酸酶活性的抑制率.结果 妇科再造丸3个剂量组对黑色素细胞增殖及细胞酪氨酸酶活性均有不同程度的抑制作用,其中以高剂量组抑制作用最强.结论 妇科再造丸对人黑色素细胞增殖及酪氨酸酶活性均有不同程度的抑制作用,提示妇科再造丸对皮肤色素沉着可能有一定的治疗效果,其作用机制可能与抑制酪氨酸酶活性有关.     

桃仁对酪氨酸酶激活作用的实验研究

目的：探讨中药桃仁提取物对酪氨酸酶活性的激活作用。方法：中药桃仁用乙醇提取制备成水溶液，与定量的左旋多巴和酪氨酸酶溶液一同温育后，测定酪氨酸酶活力值并计算酶活力增加百分率。结果：中药桃仁提取物在１０ｍｇ（相当于原生药量２０ｍｇ／ｍｌ）水平对酪氨酸酶的激活率为０．２８。酶动力学测定结果显示，桃仁提取物在酶促反应体系中并不影响底物与酶的结合，却能增加其最大转化速率，因而增加了黑色素的生物合成，该机理与临床上应用桃仁治疗白癜风的作用相吻合。结论：桃仁提取物对酪氨酸酶活性在体外有显著激活作用     

甘草黄酮对B16黑色素瘤细胞代谢的影响

目的 研究甘草黄酮对B16黑色素瘤细胞的作用，并与一些美白药物进行比较，探讨其美白的作用及安全性。方法 测定药物对体外培养的B16黑色素瘤细胞系的细胞活力、细胞酪氨酸酶活性及细胞内黑素含量的影响，并与氢醌、熊果苷及维生素C磷酸酯的结果比较。结果 几种化合物对B16细胞酪氨酸酶活性均有抑制作用，且呈浓度依赖性；药物作用后细胞黑素生成量显著减少。甘草黄酮和维生素C磷酸酯的细胞毒性较低，而氢醌和熊果苷具有明显的细胞毒性。结论 甘草黄酮有较强的抑制酪氨酸酶活性和黑素生成的作用，同时对黑素细胞的细胞毒性较低，是较为安全有效的美白药物。     

壬二酸对人黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞黑素合成功能的影响

目的 建立体外培养的正常人表皮黑素细胞系，检测壬二酸对人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞黑素合成的影响。方法 体外人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B．。细胞培养，TRP-1染色观察壬二酸作用后，细胞形态的变化；测定壬二酸对人表皮黑素细胞和鼠黑色素瘤B16细胞酪氨酸酶活性及黑素含量变化观察壬二酸的脱色素作用。结果 壬二酸作用于人表皮黑素细胞后，可见细胞树突明显减少；壬二酸作用于B16细胞后，细胞形态无明显改变。壬二酸抑制人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性，细胞黑素合成减少，而且具有浓度依赖性。结论 壬二酸对体外培养的人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成都有抑制作用，可临床应用于治疗色素性疾病。     

黑素生成过程中黄芩的调节作用

目的 :观察中药黄芩对B16F小鼠黑素瘤细胞增殖、黑素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法 :采用体外培养的小鼠B16F黑素瘤细胞株 ,用MTT法测定细胞增殖情况 ;NaOH裂解法测定黑素合成 ;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果 :在浓度为 0 .0 1～ 1.0 g·L-1时 ,黄芩可浓度依赖性促进B16F细胞增殖 ,酪氨酸酶活性和黑素含量 ,以 1.0 g·L-1为最佳。结论 :黄芩可促进细胞增殖 ,激活酪氨酸酶活性 ,提高黑素含量 ,从而为黄芩治疗白癜风的临床应用提供了实验依据。     

疏风活血方通过自噬途径对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞黑素代谢起调节作用

目的观察自噬在疏风活血方对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成中的作用。方法体外培养鼠B16细胞,设 立空白对照组（C组）,0.12、0.25、0.49、0.98、1.96 mg/mL疏风活血方组（S组）,自噬诱导剂雷帕霉素组（R组）,自噬诱导+疏风活 血方组（RS组）,采用MTT法测定各组对B16细胞增殖的影响,酶标仪检测法测定各组酪氨酸酶活性及黑素含量,Western blot 法测定自噬相关蛋白P62、p-mTOR、LC3B、Beclin1含量,比较分析结果。结果与C组相比,S组及RS组对B16细胞增殖均起浓 度依赖的抑制作用（P<0.05）;对酪氨酸酶活性及黑素合成有促进作用（P<0.05）;0.98 mg/mL疏风活血方组（R0.98）、自噬诱导+ 0.98 mg/mL疏风活血方组（RS0.98）、50 nmol/L自噬诱导剂雷帕霉素组（Rap50）均能上调自噬相关蛋白LC3B-II、Beclin1,下调 P62、p-mTOR含量。结论疏风活血方能通过激活自噬途径对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞黑素代谢起调节作用,对其细胞增 殖有抑制作用;对酪氨酸酶活性及黑素合成起促进作用。     

NF-κB特异性抑制剂PDTC对鼠黑素瘤B16细胞增殖及VEGF表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对鼠黑素瘤B16细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:不同浓度的PDTC作用于B16细胞不同时间后,MTT法测定其对B16细胞增殖的抑制率,ELISA检测PDTC作用下B16细胞VEGF的表达情况。结果:经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P0.01);与对照组相比,PDTC作用后B16细胞VEGF表达降低(P0.01)。结论:PDTC具有显著抑制鼠黑素瘤B16细胞生长及VEGF表达的作用,是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。     

细菌基序对黑素细胞及前列腺素E2的影响

目的：研究细菌基序（CpG-ODN）对黑素细胞形态、黑素生成及前列腺素E2（PGE2）的影响。方法：用CpG-ODN处理体外培养的B16黑素瘤细胞和melan-α黑素细胞,分别用MTT法、多巴氧化法、NaOH裂解法和ELISA法检测B16细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量以及上清中PGE2的水平,另外,观察CpG-ODN干预后melan-α细胞形态的变化。结果：干预24h后,5μg/mlCpG-ODN促进B16细胞增殖,10μg/ml对细胞增殖的影响与空白对照组无差异,而15μg/mlCpG-ODN则抑制细胞增殖。48h后,不同浓度CpG-ODN组的细胞增殖率趋于稳定,与正常对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）。10μg/mlCpG-ODN提高酪氨酸酶活性和黑素生成,作用近似于α-MSH（P〉0.05）。另外,此浓度CpG-ODN作用48h后的细胞上清液中PGE2含量也有所升高,但与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）,推测为检测时间滞后所致。10μg/mlCpG-ODN作用于melan-α细胞24h后,细胞树突数目增加,并有二级以致三级树突出现。结论：CpG-ODN作用于鼠黑素细胞的适宜浓度为10μg/ml,此浓度对黑素细胞的作用有时间依赖性。该实验为CpG-ODN作用于正常人黑素细胞的研究奠定了基础。     

验方祛斑汤含药血清对A375人黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的用血清药理学方法研允验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响，并探讨本方治疗黄褐斑的作用机制。方法用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）测定验方祛斑汤对细胞增殖的影响，酶学方法测定其封酪氨酸酶活性的影响，475nm比色法测定其对黑素含量的影响。结果验方祛斑汤含药血清封体外培养的A375人黑素瘤细胞具有抑制细胞增殖，降低酪氨酸酶活性和黑素含量作用。结论验方祛斑汤能抑制黑素细胞黑素合成，这可能是其治疗黄褐斑的作用机制之一。     

刺蒺藜对培养人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨刺蒺藜对培养的人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用MTT法测定刺蒺藜对人A375黑素瘤细胞活力的影响,NaOH裂解法测定黑素合成,并与8-MOP的结果进行比较。结果0．1、0．2和0．5mg／ml刺蒺藜对于人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量依赖性激活作用,0．2mg／ml及0．5mg／ml刺蒺藜与对照组相比有显著差异（P〈0．01）。结论刺蒺藜对于培养的人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量依赖性激活作用。