NOX1在糖化终末产物诱导主动脉内皮细胞氧化应激中的作用

目的 探讨非吞噬细胞氧化酶1（NOX1）的激活是否是糖化终末产物（AGEs）诱导主动脉内皮细胞（BAECs）氧化应激的始动因素.方法 将BAECs分为3组：对照组（5.6 mmol/L葡萄糖）,AGE组（200 mg/L AGEs）和NOX1沉默干预组（200 mg/L AGEs＋ NOX1 RNAi）.用2＇,7 ＇二氯双氢荧光素二乙酸酯（H2DCFDA）检测各组氧自由基的水平;同时免疫杂交法检测NOX1、NOX2和调节eNOS耦联状态的关键酶二氢叶酸还原酶（DHFR）的蛋白表达.结果 AGEs培养2天后,NOX1和NOX2均表达上调,而DHFR的表达下降,同时伴有氧自由基水平的升高.NOX1 RNAi转染后,NOX2的表达不受影响,DHFR的表达和氧自由基的产生则均恢复到正常对照水平.结论 AGEs对BAECs氧化应激的诱导是通过激活NOX1起始的,NOX1的激活也通过抑制DHFR的表达来促进内皮一氧化氮合成酶（eNOS）的解耦联而加重氧化应激.     

糖化终末产物与氧化应激及血管病变

葡萄糖与含氨基生物分子(主要为蛋白质,也包括核酸和脂类)可发生复杂的反应,最后形成一类结构复杂的化合物,称为糖化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)。AGEs结构极为复杂,与很多病理生理过程密切相关。     

糖化终末产物与阿尔茨海默病

糖化终末产物是蛋白质非酶促糖化的最终产物，具有不可逆性，与糖尿病慢性并发症、正常老化有关。糖化终末产物脑内沉积通过受体和非受体途径参与老年性痴呆的发病过程，与异常的脑内蛋白交联存积、氧化应激、神经元丧失有关。抗糖化终末产物治疗可能成为治疗阿尔茨海默病的新途径。     

糖基化终末产物诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表型和功能改变

目的 研究糖基化终末产物(AGEs)诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表型和功能的变化及相关机制.方法 SPF级雄性Wistar大鼠20只,7～8周龄,体重260～280 g,分离培养大鼠视网膜内皮细胞,采用免疫荧光染色、流式细胞术和体外形成毛细血管样网络结构的方法进行鉴定.视网膜内皮细胞在AGEs刺激后,用噻唑蓝(MTT)法分析细胞的增殖能力;用膜连蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染法检测细胞凋亡;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测细胞AGEs受体、人蛋白激酶C(PKC)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化.采用t检验进行统计学分析.结果 分离纯化的大鼠视网膜内皮细胞表达血管性血友病因子(vWF)并在人工基膜上形成毛细血管网络结构.AGEs以时间和剂量依赖的方式抑制大鼠视网膜内皮细胞增殖能力,在200 mg/L的AGEs组培养至第5天时细胞增殖能力低于对照组(t=8.9,P＜0.05),7 d和9 d时抑制作用更明显(t值分别为15.7和46.1,均P＜0.01).400 mg/L AGEs组在第3天开始出现细胞增殖减慢(t=12.5,P＜0.05),从第5天开始增殖速度明显低于对照组(t值分别为22.4、41.5和77.7,均P＜0.01).并且AGEs诱导视网膜内皮细胞凋亡.进一步分析发现AGEs上调了大鼠视网膜内皮细胞AGEs受体、PKC、ICAM-1和iNOS的mRNA表达(t值分别为91.8、9.22、16和42,均P＜0.01)和蛋白水平的表达(t值分别为20.2、12.3、7.7和13.9,均P＜0.01).结论 AGEs可能通过上调AGEs受体诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表型和功能的改变.     

分泌型糖化终末产物受体与糖尿病并发冠心病的关系

在高糖环境中，蛋白质或脂质经长时间糖化形成晚期糖化终末产物。有研究证实，后者与糖尿病进展及心脑血管并发症关系甚为密切。糖化白蛋白（GA）是体内一种早期糖化终末产物，可促进糖尿病血管并发症的发生和发展。内源性分泌型糖化终末产物受体（esRAGE）是糖化终末产物受体的一种剪接变体，通过与晚期糖化终末产物结合，中和后者的病理作用。本研究旨在探讨esRAGE和GA水平与2型糖尿病并发冠心病及其严重性的关系。     

糖基化终末产物对体外诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞血管形成的影响

目的 应用Matrigel建立大鼠视网膜微血管内皮细胞血管形成的体外培养体系,研究糖基化终末产物对诱导视网膜微血管内皮细胞血管形成的影响,从而探讨糖基化终末产物在糖尿病微血管病血管新生中的作用.方法 体外培养视网膜微血管内皮细胞,制备糖基化白蛋白.在Matrigel上建立血管形成的体外培养体系,实验分浓度效应组和时间效应组,并进行CD34免疫细胞化学染色.采用光镜下计数管腔数及计算机图像分析对结果进行测定和分析.结果 经分离培养的视网膜微血管内皮细胞在Matrigel上培养形成管腔样结构.糖基化白蛋白(糖基化终末产物)作用于培养的视网膜微血管内皮细胞后,可见管腔形成数目增加,且在一定范围内呈时间和剂量依赖效应(P<0.01).结论 糖基化终末产物可以促进Matrigel体外诱导视网膜微血管内皮细胞的血管形成.     

高级糖化终末产物与骨质疏松

本文介绍了高级糖化终末产物随年龄的增加在体内的积累及其对成骨细胞增殖和分化的影响以及高级糖化终末产物与人单核巨噬细胞和成骨细胞结合,并刺激这些细胞合成和释放细胞因子和生长因子。抑制骨形成,促进骨吸收,从而导致骨吸收和骨形成解偶联,使骨吸收大于骨形成,以此揭示老年性骨质疏松的发病机理。     

非酶糖化蛋白对体外培养血管内皮细胞生长的影响

目的 观察糖代蛋白终末产物（ＡＧＥｓ）及高糖对体外培养人血管内皮细胞增殖的影响。方法 采用＾３Ｈ标记的腺嘧啶（＾３－ＴｄＲ）掺入法测定细胞增殖情况。结果 在含ＡＧＥｓ的培养液（５μｇ／ｍｌ）中增培养的新生儿脐带静脉内皮细胞,其２小时＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入对照组的２．９５倍（Ｐ〈０．０１）,而在含３０ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的２液中培养的人胚胎脐带静脉内皮细胞,其２小时＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入对照组（１１ｍｍｏｌ／     

糖基化终末产物与动脉粥样硬化的关系

糖基化终末产物(AGE)的形成是糖尿病患者代谢记忆的一个关键因素。系列研究及国内外相关研究显示AGE促进了动脉粥样硬化病变区的炎症、氧化应激、凋亡、微钙化灶的形成,促使斑块由稳定向易损方向发展,最终趋于破裂、血栓形成,导致急性冠状动脉综合征等急性心脑血管事件的发生。文章从AGE的形成、来源、代谢、理化特性及其在炎症、脂质蓄积、凋亡、钙化中的作用机制等几个方面进行简要阐述,希冀为动脉粥样硬化斑块的形成发展机制及治疗策略提供一些新的观念。     

神经酰胺在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的 观察神经酰胺（CER）在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法分别以流式细胞术和TUNEL法、高压液相色谱法等检测细胞凋亡、CER和酸性鞘磷酯酶（ASM）。结果（1）高糖呈浓度依赖性引起细胞内CER和酸性ASM活性增加,左旋葡萄糖无类似效应;（2）地昔帕明可抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,外源性（CER）可逆转其抑制作用;（3）外源性CER及酸性ASM可诱导内皮细胞凋亡;（4）高糖诱导的细胞内CER增加与高糖浓度及细胞凋亡均正相关。结论由酸性ASM水解引起的细胞内神经酰胺增加参与了高糖诱导的内皮细胞凋亡。     

p53在神经酰胺诱导内皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨p53在外源性神经酰胺(C2-ceramide)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法:体外培养脐静脉内皮细胞,用不同浓度的C2-ceramide进行处理,Tunel检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测p53的表达;并用p53的抑制剂PFT-α(pifithrin alpha,PFT-α)预处理细胞,再加入C2-ceramide与对照组比较观察细胞凋亡指数。结果:C2-ceramide呈剂量依赖性诱导内皮细胞凋亡;p53的表达随着C2-ceramide浓度的增加呈现降低的趋势;PFT-α不能抑制C2-ceramide诱导的凋亡。结论:神经酰胺能诱导内皮细胞的凋亡,可能不依赖于p53途径。     

葡萄糖及胰岛素对牛血管内皮细胞凋亡的影响

目的通过对牛血管内皮细胞（ＥＣ）的体外培养研究糖尿病（ＤＭ）状况下葡萄糖（Ｇｌｕ）、胰岛素（Ｉｎｓ）对ＥＣ凋亡的影响。方法吖啶橙／溴乙锭（ＡＯ／ＥＢ）荧光染色及ＤＮＡ片段的琼脂糖凝胶电泳对ＥＣ凋亡定性,ＥＬＩＳＡ方法测定ＤＮＡ片段定量ＥＣ凋亡。结果高浓度Ｇｌｕ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ、４０ｍｍｏｌ／Ｌ）和Ｉｎｓ（３００ｍＵ／Ｌ、３０００ｍＵ／Ｌ）能够诱发ＥＣ发生凋亡。ＥＣ凋亡与Ｇｌｕ和Ｉｎｓ浓度成正比,并且为时间依赖性。低浓度Ｉｎｓ（３０ｍＵ／Ｌ）明显改善Ｇｌｕ４０ｍｍｏｌ／Ｌ下所致ＥＣ的凋亡,但高浓度Ｉｎｓ与Ｇｌｕ有正性协同作用,增加ＥＣ凋亡。高浓度甘露醇（Ｍａｎ２０ｍｍｏｌ／Ｌ、４０ｍｍｏｌ／Ｌ）不引起ＥＣ明显凋亡。结论ＤＭ环境下高血糖、高Ｉｎｓ血症能诱发ＥＣ凋亡,促进ＤＭ血管并发症的发生、发展     

高糖对血管内皮细胞凋亡的影响及卡托普利的干预作用

人脐静脉内皮细胞培养分5组：正常葡萄糖为对照,高糖浓度有20mmol/L,40mmol/L,20mmol/L糖联合10-5mol/L卡托普利,40mmol/L糖联合10-5mol/L卡托普利。细胞凋亡和Fas、Bcl-2基因表达均用流式细胞仪测定。高糖组均引起细胞凋亡增加,引起Fas表达增加和Bcl-2表达减少。卡托普利能够减少高糖所致细胞凋亡,减少Fas表达,增加Bcl-2表达。     

microRNA-223对糖基化终产物诱导人脂肪间充质干细胞凋亡和氧化应激影响的体外研究

目的观察microRNA-223(miR-223)对糖基化终产物(AGE)诱导人脂肪间充质干细胞(h ADSC)凋亡和氧化应激的影响。方法采用酶消化法分离培养h ADSC,并应用流式细胞术对表面抗原CD14、CD34、CD45、CD90、CD105和人类白细胞抗原DR(HLA-DR)进行检测。将h ADSC分为牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)作用组、miR-223模拟物转染组、miR-223模拟物转染+AGE-BSA组、miR-223抑制物转染组和miR-223抑制物转染+AGE-BSA组。应用CCK-8法和TUNEL染色检测各组细胞存活率和凋亡率,Western blot检测Cleaved Caspase3蛋白表达水平,应用双氯荧光素(DCFH-DA)试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)含量。结果流式细胞术检测结果表明,原代培养的h ADSC高表达CD14、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和HLADR。CCK-8法、TUNEL染色、Western blot和DCFH-DA法检测结果表明,与BSA对照组相比,AGE-BSA作用组h ADSC凋亡率、miR-223表达水平、Cleaved Caspase3蛋白表达水平、ROS生成显著升高,而细胞存活率下降(P0.05);与AGE-BSA作用组相比,miR-223模拟物转染能够进一步上调AGE-BSA引起的h ADSC凋亡率、Cleaved Caspase3蛋白表达水平和ROS生成增加,下调AGE-BSA引起的h ADSC存活率减少(P0.05);与AGE-BSA作用组相比,miR-223抑制物转染能够抑制h ADSC凋亡率、Cleaved Caspase3蛋白表达水平和ROS生成增加,拮抗AGEBSA引起的h ADSC存活率减少(P0.05)。结论 miR-223高表达能够促进AGE-BSA引起的h ADSC细胞凋亡和ROS生成,其可能作为调控h ADSC促进糖尿病创伤愈合的新靶点。     

替米沙坦通过上调大鼠视网膜ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴抑制细胞凋亡

目的 研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂替米沙坦对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertension rat,SHR)视网膜血管紧张素转化酶2(ACE2)-血管紧张素(1-7) [Ang-(1-7)]-G蛋白耦联受体Mas轴的影响,以及其对视网膜血管内皮细胞凋亡的作用.方法 SHR 36只,雄性,16周龄,随机数字表法分成3组,即SHR组、SHRT组和SHRTA组,每组12只.SHRT组给予替米沙坦10 mg·kg-1·d-1灌胃,SHRTA组给予替米沙坦10 mg· kg-1·d-1灌胃,并给予选择性Ang-(1-7)拮抗剂A-7790.5 mg·kg-1 ·d-1静注,SHR组不予药物处理,另设12只同周龄雄性京都种大鼠(WistarKyoto rat,WKY大鼠)作为对照组.分别测定给药前(16周龄时)及给药后(24周龄时)大鼠鼠尾收缩压,于24周处死大鼠,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白印迹法(Western blot)、免疫组织化学法分别检测视网膜ACE2、Mas mRNA和蛋白表达水平,ELISA检测血清Ang-(1-7)浓度,苏木素伊红(HE)染色观察视网膜血管铺片毛细血管情况,原位DNA末端酶标记技术(TUNEL)检测视网膜血管铺片细胞凋亡情况.结果 16周龄时SHR组、SHRT组和SHRTA组大鼠鼠尾收缩压均较对照组高(P均＜0.01),24周龄时SHRT组大鼠鼠尾收缩压较SHR组低(P＜0.01),SHRTA组则较SHRT组高(P＜0.05).24周龄时SHR组大鼠视网膜ACE2 mRNA和蛋白表达水平均低于对照组和SHRT组(P均＜0.01),而SHRT组与SHRTA组间差异无统计学意义(P＞0.05).24周龄时SHR组大鼠视网膜Mas mRNA和蛋白表达水平均低于对照组(P均＜0.01),SHRT组均高于SHR组(P均＜0.01),SHRTA组则均低于SHRT组(P均＜0.05).24周龄时SHR组大鼠血清Ang-(1-7)浓度低于对照组(P＜0.01),SHRT组高于SHR组(P＜0.05),SHRTA组则低于SHRT组(P＜0.01).24周龄时SHR组大鼠视网膜血管铺片TUNEL阳性细胞百分率高于对照组(P＜0.叭),SHRT组低于SHR组(P＜0.01),SHRTA组则高于SHRT组(P＜0.05).结论 替米沙坦可上调SHR视网膜ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴,从而发挥抗视网膜血管内皮细胞凋亡的作用.     

衰老血管内皮细胞增殖和凋亡与S1P2受体表达的关系

目的 研究衰老血管内皮细胞增殖和凋亡与S1P2受体表达的相关性.方法 采用RT-PCR检测年轻(Y)、中年(I)和衰老(S)内皮细胞的S1P2受体的表达;运用MTT法和流式细胞术(FCA)分别检测年轻(Y)、中年(I)和衰老(S)内皮细胞的增殖和凋亡.结果S1P2受体mRNA在衰老内皮细胞中的表达显著上调(P＜0.01);衰老内皮细胞的增殖能力显著下调(P＜0.01);衰老内皮细胞凋亡明显增加(P＜0.01).结论 衰老内皮细胞的S1P2受体表达上调与内皮细胞的增殖和凋亡改变相关联.     

内皮祖细胞与冠心病的研究新进展

冠心病是严重危害人类健康的常见病,其发病机制主要是“内皮损伤反应”。内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）是血管内皮细胞（endothelial cells,ECs）的前体细胞,参与人胚胎血管生成,促进出生后内皮损伤的修复和缺血组织的血管新生,维护血管内皮的完整性及功能。     

过量摄氟对大鼠脑组织氧化侵袭与细胞凋亡的影响

目的研究过量摄入氟对大鼠神经系统损伤过程脑细胞氧化应激相关指标和脑细胞周期变化与细胞凋亡率的关系。方法应用饮水加入氟化钠进行大鼠染毒实验,测定大鼠脑细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)产生水平以及脑细胞周期变化及细胞凋亡率。结果过量氟可使脑细胞氧化应激能力发生改变,SOD活力水平投氟实验组与对照组相比差异不明显(P>0.05),在投氟实验组MDA生成与对照组相比差异不明显(P>0.05),慢性氟中毒大鼠GSH-Px活力增高,在低钙投氟组高于低钙对照组差异显著(P<0.05);低钙饲养组脑细胞增殖能力普遍降低,S期细胞比例降低,脑细胞凋亡率高钙投氟组与高钙对照组相比差异不明显(P>0.05),低钙投氟组明显高于低钙对照组差异显著(P<0.001);低钙投氟组大鼠GSH-Px活力增高与脑细胞凋亡率呈正比。结论过量氟所致的大鼠脑细胞增殖能力下降和脑细胞凋亡率增高,与氟神经毒性作用机制有关,低钙营养可加重氟的神经毒性作用;过量氟可引起脑细胞抗氧化酶类发生不同程度的变化,其中抗氧化酶类活性增强可能是脑神经细胞对氧化侵袭的自身保护性生理调节作用的表现;氧化侵袭对神经系统损伤的确切机制尚需进一步研究。