沈阳市献血员抗巨细胞病毒抗体调查

沈阳市献血员抗巨细胞病毒抗体调查方德强，王义武，吉耀华（中国医科大学附属第二医院，沈阳１１０００３）输血导致人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染，国内外均有报道，因此检测献血员中巨细胞病毒特异性ＩｇＭ抗体（ＨＣＭＶ－ｓＩｇＭ）对预防输血传播及骨髓移植的失败，...     

用重组结构区抗原检测抗丙型肝炎病毒IgM抗体方法的建立

目的检测抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区蛋白ＩｇＭ抗体。方法采用丙型肝炎病毒Ｃ，Ｅ１，Ｅ２区重组抗原混合包被和分别包被酶标板；用兔抗人γ链血清处理人血清标本，再用固相包被羊抗兔抗体吸附兔抗人γ链－人ＩｇＧ复合物，建立了抗－ＨＣＶＩｇＭ检测方法。结果对７６例丙型肝炎病人血清进行抗－ＨＣＶＩｇＭ检测，同时与逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测结果进行比较，两者具有相关性（Ｐ＜０００５）；ＩｇＭ抗体组成分析结果表明采用全片段Ｃ、Ｃ＋Ｅ２区抗原血清标本中的抗－ＨＣＶＩｇＭ检出率分别可达９６６％和１００％。结论ＨＣＶ的Ｃ、Ｅ２重组抗原用于抗－ＨＣＶＩｇＭ检测具有较高的敏感度和特异性。     

庚型肝炎病毒IgM抗体检测方法的建立及其临床意义

目的建立一种早期、快速诊断庚型肝炎的血清学检测方法。方法以辣根过氧化物酶标记庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）多肽ＮＳ３,ＮＳ５区段抗原,建立了捕获酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,用于检测血清中ＨＧＶＩｇＭ抗体。结果本法不受特异性ＩｇＧ的竞争和类风湿因子的干扰;与其它致肝炎的病毒（ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＥＶ、ＣＭＶ、ＥＢＶ）无交叉反应。检测４６例非甲、乙、丙、戊型肝炎患者血清,抗－ＨＧＶＩｇＭ阳性１４例,阳性率３０．４３％,其中,６例同时为ＨＧＶＲＮＡ阳性,阳性符合率为４２．８６％（６／１４）,检测１２例庚型肝炎病人双份血清,其中,急性期血ＨＧＶＩｇＭ抗体均为阳性。结论该法检测ＨＧＶＩｇＭ抗体特异性强,敏感性高,且简便快速,适用于临床对庚型肝炎新近感染的早期诊断,有推广应用价值。     

TORCH抗体检测方法比较及其临床意义

ＴＯＲＣＨ抗体系指弓形虫Ｔｏｘ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ）、风疹病毒ＲＶ（Ｒｕｂｅｌｌａｖｉｒｕｓ）、巨细胞病毒ＣＭＶ（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）、单纯疱疹病毒ＨＳＶ２（Ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ）一组由非细菌性微生物感染机体引起的血清特异性抗体 ,包括ＩｇＭ和ＩｇＧ。由ＴＯＲＣＨ引起的感染目前认为主要危害孕妇可导致流产、死胎和胎儿畸形［１］。以往这方面工作以ＴＯＲＣＨＩｇＭ抗体研究较多 ,而同时分析ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体与孕期关系者国内尚未见报道。本文收集了来我院就诊的９１９例…     

CLONING AND SEQUENCE CHARACTERIZATION OF THE RE-ARRANDED VH GENE FROM HYBRIDOMA CELLS SECRETING ANTI-HUMAN C1-INHIBITOR McAb

由分泌抗人Ｃ１－ＩＮＨＭｃＡｂ的杂交瘤Ｆ７细胞株提取总ＲＮＡ，合成与ＶＨ基因ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，以ＲＮＡ反转录合成的第一链ｃＤＮＡ为模板，ＰＣＲ法克隆出Ｆ７ＶＨ基因的ＤＮＡ片段。将分离获得的目的ＤＮＡ片段亚克隆入ｐＵＣ１８／１９测序载体，从两头进行双脱氧核苷酸随机终止法的ＤＮＡ序列测定。结果显示：ＶＨ基因是由３３３个碱基组成，编码１１１个氨基酸残基。通过国际联机检索进行ＥＭＢＬ和Ｋａｂａｔ基因库扫描发现，Ｆ７ＶＨＤＮＡ仅与Ｉｇ同源，符合小鼠Ｉｇ的ＶＨ基因特征；同源性为６０％～８５％，应归属于Ｉｇ的ＶＨ基因。根据Ｋａｂａｔ分类方法，Ｆ７ＶＨ基因推导的氨基酸顺序属于小鼠Ｉｇ的ＶＨ基因的Ⅱ（Ａ）亚组，是由ＶＨ－Ｄ－ＪＨ３重排产生；其框架区的９和６７位点为脯氨酸（Ｐｒｏ）和赖氨酸（Ｌｙｓ）（非芳香族氨氨酸），符合Ⅱ（Ａ）亚组框架残基结构模式；其ＣＤＲ３区含有７个氨氨酸残基，表明Ｃ１－ＩＮＨ抗原表面结构并不复杂；ＦＲ２和ＦＲ３的２２和８９位点为半胱氨酸残基（Ｃｙｓ），与ＶＨ片段二硫键形成有关。成功获得Ｆ７ＶＨ基因为进一步构建和表达单链Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体打下良好的基础。     

人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。     

急性呼吸道感染患儿巨细胞病毒感染的研究

巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)在人群中感染非常普遍 ,但大多数呈亚临床不显性感染或潜伏感染 ,在宿主特殊的状态下 ,这种潜伏感染可被激活为其重要的生物学特征[1,2 ] 。为研究小儿急性呼吸道ＨＣＭＶ感染 ,根据 1994年全国小儿巨细胞病毒感染学术会议上拟定的诊断标准[3 ,4 ] ,选用ＨＣＭＶ ＩｇＭ为ＨＣＭＶ活动感染指标 ,对 2 5 0例冬春季急性呼吸道感染 (ＡＲＩ)患儿和 5 0名同期健康儿童进行了ＨＣＭＶ ＩｇＭ、呼吸道合胞病毒ＩｇＭ(ＲＳＶ ＩｇＭ) ,腺病毒ＩｇＭ(ＡｄＶ ＩｇＭ)特异抗体同步检测和部分临床资料分析。1　材料和方法1.1　病…     

肿瘤患者巨细胞病毒感染及与输血,临床关系的研究

应用间接酶联免疫吸附试验检测了７０例肿瘤患者血清人巨细胞病毒特异性抗体，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ和ＩｇＡ抗体的阳性率分别为６１．４２％和１４．２８％，明显高于对照组人群，恶性肿瘤组活动性ＨＣＭＶ感染率与良性肿瘤组相比有明显性差异。     

人巨细胞病毒感染致血小板减少性紫癜病因研究

血小板减少性紫癜 (ＩＴＰ)是临床上常见的一类出血性疾病 ,其中部分患者常发生于病毒感染后。目前发现人类巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)、人细小病毒Ｂ19、风疹病毒等感染后均有可能引起血小板减少。ＨＣＭＶ感染相关性ＩＴＰ的发病机理目前尚未完全定论。我们检测了合并有ＨＣＭＶ感染的ＩＴＰ患者的巨核系祖细胞内的ＨＣＭＶ晚期抗原ｍＲＮＡ ,以探讨ＨＣＭＶ感染相关性ＩＴＰ可能的发病机制。对ＩＴＰ患者抗凝外周血和非抗凝外周血分别进行ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ ＤＮＡ和ＥＬＩＳＡ检测ＣＭＶ ＩｇＭ。选择ＨＣＭＶ及ＣＭＶＩｇＭ均阳性的病例共…     

巨细胞病毒感染与可溶性白细胞介素2受体的关系

应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对１０４例育龄妇女的血清进行了巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体的检测，同时用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法测定了不同感染状态下血清中可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）的水平，并将ｓＩＬ－２Ｒ水平与未感染ＨＣＭＶ的正常育龄妇女进行了比较。结果，育龄妇女中抗－ＨＣＭＶＩｇＧ的阳性率为８９．４％，ＩｇＭ的阳性率为９．６％，感染ＨＣＭＶ的妇女血清中ｓＩＬ－２Ｒ水平均大于未感染的对照组（１７８．１±５７．３Ｕ／ｍｌ），Ｐ＜０．０５，其中ＩｇＭ阳性者和ＩｇＭ、ＩｇＧ同时阳性者血清中ｓＩＬ－２Ｒ水平最高，分别为９１０±４６５．６Ｕ／ｍｌ和９０５±３４７．８Ｕ／ｍｌ，两者间的差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５），但均大于仅抗－ＨＣＭＶＩｇＧ阳性者（４４６．８±１５８．９Ｕ／ｍｌ），Ｐ均＜０．０５。表明，ＨＣＭＶ感染可致ｓＩＬ－２Ｒ水平升高，并且活动性感染者上升明显。提示：ｓＩＬ－２Ｒ可能参与了ＨＣＭＶ的免疫致病机制。     

肾移植术后巨细胞病毒抗原检测及其临床意义

目的 建立一种早期、快速诊断人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ）感染的抗原检测方法,以了解肾移植术后受者的ＨＣＭＶ感染情况并探讨其临床意义。方法 利用抗ＨＣＭＶ前早期抗原和早期抗原的单克隆抗体,建立了免疫组化Ｅｎｖｉｓｉｏｎ＾ＴＭ二步法。用于检测外周血多形核白细胞（ＰＭＮＬ）中ＨＣＭＶ抗原（前早期抗原和早期抗原）,诊断ＨＣＭＶ活动性感染。结果 检测肾移植术后受者８６     

丙型肝炎病毒包膜糖蛋白高变区1多抗原肽设计及？…

目的 应用多抗原肽（ＭＡＰ）研究丙型肝炎病毒包膜糖蛋白高变区１（ＨＶＲ１）的抗原性。方法 根据已经获得的ＨＣＶ－ＢＪ株Ｅ２／ＮＳ１区氨基酸序列,参照国内外得所报道的ＨＶ ＨＶＲ１序列及抗原性参数,设计并合成含ＨＣＶ ＨＶＲ１３９０－４１１ａａ序列２２个氨基酸的线性表位多肽（以ＬＰ表示）及ＭＡＰ（对称８分枝）,分别以ＬＰ和ＭＡＰ免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠及家兔,比较其免疫原性。结果 ＭＡＰ免疫原性明显强于     

随机化CDR3抗体库的构建及不经免疫制备抗体的初步探索

为探索利用噬菌体抗体库技术不经免疫制备抗体，在已有的抗乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓ）人Ｆａｂ段基因的基础上，通过ＰＣＲ引入突变，对其ＶＨＣＤＲ３中１２个氨基酸残基（９５～１００Ｊ）进行了完全随机化，对９４和１００Ｋ位残基进行了有限随机化，构建了半合成噬菌体抗体库，库容为２×１０８，５８％含有随机化ＣＤＲ３序列，用无关抗原小鼠ＩｇＧ对该抗体库进行筛选，获得了三个可与小鼠ＩｇＧ结合而不与ＨＢｓ反应的克隆，经测定其ＣＤＲ３的ＤＮＡ序列，发现这三个克隆具有相同的ＣＤＲ３，证明单纯改变ＶＨＣＤＲ３可以得到新的特异性抗体，从而绕过免疫制备抗体。     

HCMV抗原（pp65）血症检测技术诊断活动性HCMV感染

人类巨细胞病毒（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＨＣＭＶ）感染在人群中广泛存在，自从１９８８年ＨＣＭＶ抗原血症检测技术建立以来，该技术发展迅速，检测外周血ＰＭＮＬｓ中的ＨＣＭＶ晚期结构抗原ｐｐ６５是早期、快速、准确、定量诊断活动性ＨＣＭＶ感染的主要手段。本综述主要涉及ＨＣＭＶ抗原（ｐｐ６５）血症检测技术及其临床意义的研究近况。     

乙脑病毒基因Ⅰ、Ⅲ型特异性全基因组引物

目的 为构建高通量乙脑病毒全基因组序列测定平台,设计两套分别针对基因Ⅰ型和基因Ⅲ型乙脑病毒全基因组的型特异性引物.方法 根据GenBank公布的乙脑病毒全基因组序列为参考信息,设计了两套基因Ⅰ型和基因Ⅲ型乙脑病毒的基因型特异性扩增测序引物.并由其测定本研究室采集并分离得到的121株乙脑病毒全基因组序列,含63株基因Ⅲ型乙脑病毒,58株基因Ⅰ型乙脑病毒.结果 设计得到基因Ⅲ型乙脑病毒全基因组扩增测序引物17对,基因Ⅰ型乙脑病毒型特异性扩增测序引物16对.使用两套引物完成121株乙脑病毒全基因组序列的测定.测定完成的基因Ⅰ型乙脑病毒全基因组序列平均值为40.037,基因Ⅲ型乙脑病毒全基因组序列平均质量值为40.857.结论 本研究设计的两套型特异性引物能高效特异地完成基因Ⅰ型和基因Ⅲ型乙脑病毒全基因组序列的扩增,为构建高效稳定的乙脑病毒全基因组序列测定平台奠定了基础.     

抗HCVNS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴定

丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)是一种单链正链ＲＮＡ病毒 ,可通过输血等方式传播 ,引起急、慢性肝炎。目前 ,ＨＣＶ的常规诊断方法主要有抗ＨＣＶ ＩｇＧ ,抗ＨＣＶ ＩｇＭ及ＨＣＶ ＲＮＡ的ＲＴ ＰＣＲ检测。对ＨＣＶ抗原的检测文献报道较少。我们利用基因工程表达的ＨＣＶＮＳ3蛋白作为免疫原 ,研制其单克隆抗体(ｍＡｂ) ,试图用于ＨＣＶ抗原诊断的研究。1材料和方法1 1　材料　Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 ,由南京军区实验动物中心提供。Ｓｐ2 / 0小鼠骨髓瘤细胞 ,从解放军 30 2医院引进 ,液氮保存。ＨＣＶＮＳ3蛋白及ＣＰ9,ＣＰ10抗原 ,由南京军区军事医学…     

巨细胞病毒宫内感染的诊断及对胎儿的影响

采用地高辛探针斑点杂交技术和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对５１例人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）血清学抗体ＩｇＭ阳性孕妇的羊水、脐血和产后两周内的新生儿尿液，进行ＨＣＭＶＤＮＡ检测。同时与酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测脐血、羊水中ＨＣＭＶ－ＩｇＭ的结果相比较。结果，地高辛探针斑点杂交检测ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的阳性率分别为：羊水２１．５７％，脐血３３．３３％，新生儿尿液２７．４５％。ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的阳性率分别为：羊水２９．４１％，脐血４３．１４％，新生儿尿液３Ｓ，２９％。羊水ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率为１１．７６％，脐血ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率为２３．５３％。脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性的新生儿平均出生体重明显低于脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的新生儿，而脐血ＨＤＷ－ＤＮＡ阳性的新生儿肝功能异常、血小板减少以及低Ａｐｇａｒ评分的发生率明显高于脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的新生儿。结果表明：采用ＥＲ技术检测羊水、脐血或产后两周内新生儿尿液ＨＣＭＶＤＮＡ有助于ＨＣＭＶ官内感染的早期诊断，便于临床早期干预，ＨＣＭＶ官内感染严重影响胎儿的生长发育，可造成胎儿肝功能异常、血小板减少和新生儿窒息的发生。     

HBV DNA/补体双特异性免疫复合物的检测

以羊抗人Ｃ１ｑ和Ｂ因子ＩｇＧ为捕捉抗体,分别用以捕捉通过经典和旁路途径激活补体的Ｄａｎｅ颗粒抗原抗体免疫复合物中的Ｃ１ｑ和Ｂ因子,再利用引物的特异性和ＰＣＲ的强大扩增能力对捕捉物中的ＨＢＶＤＮＡ进行检测,成功地建立了检测ＨＢＶＤＮＡ／补体双特异性循环...     

石家庄地区新生儿尿巨细胞病毒感染的临床分析

采用聚合的酶链反应（ＰＣＲ）检测１０５例出生后３日内新生儿尿中巨细胞病毒,同时应用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测脐血特异性ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体。结果,新生儿尿液ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者３３例,阳性率３１．４％,脐血ＩｇＧ抗体阳性率１００％,ＩｇＭ挤体阳性率１．９％。结果表明ＰＣＲ技术检测新生儿尿液ＨＣＭＶ－ＤＮＡ有利于ＨＣＭＶ先天性感染的早期诊断,早预防、早阻断。有利于更好地实行计划生育,有利于优生     

乙型肝炎病毒前C/C基因准种与变异特点的研究

近年来的研究提出ＨＢＶ感染者体内存在有准种的假说 ,我们以前Ｃ/Ｃ基因为研究靶区域 ,应用多聚酶链反应(ＰＣＲ)技术扩增慢性乙型肝炎患者血清中的靶序列 ,随机选择克隆测序 ,比较其结果 ,证明了ＨＢＶ准种的存在 ,并发现多种基因突变形式。试验用 4例患者诊断为病毒性肝炎 ,乙型、慢性 ,临床检测ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｃ阳性。提取 2 0 0 μｌ血清中的ＨＢＶＤＮＡ ,用于多聚酶链反应 (ＰＣＲ)。以甘人宝等发表的ＨＢＶａｄｒ亚型序列为依据 ,设计引物序列。其上游引物为 :5′ＡＣＴＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＴＧＣＡＡＣＴＴＴＴ…