二甲基亚砜(DMSO)对血小板体外聚集功能的影响

目前,DMSO冰冻保存血小板作为22±2℃液体保存血小板的补充产品,在外科手术应用中已取得良好的临床疗效[1].然而冰冻血小板仍缺乏统一的质量标准[2],而且现有体外功能测定并不一定能完全反映其在体内发挥功能的实际情况[3].必须寻求能如实反映血小板体内功能的指标及简便易行的质量控制方法才能控制生产工艺,提供质量可靠的冰冻血小板制品.为此,笔者通过检测花生四烯酸诱导的DMSO终浓度不同的液体血小板体外聚集功能,进一步分析讨论了聚集功能作为DMSO冰冻保存血小板质量控制的指标是否合适?现将结果报告如下.     

超低温保存血小板的制备与临床应用

血小板在成分输血中越来越显得重要,主要是血小板在止血和凝血过程中起到极其重要的作用.单采新鲜血小板于22±2℃条件下保存,容易发生细菌污染而引起输血反应,5 d保存期短很容易过期.不能满足临床输血紧急需求,供求矛盾突显.冰冻保存是延长血小板效期的最佳选择.冰冻保护剂有聚乙烯咯烷酮(PVD)、聚乙二醇(PEG)、Thrombosol,也有甘油、甘露醇、羟乙基淀粉等.目前常用的大多使用5%～6%的二甲基亚砜(DMSO)[1].笔者就当前超低温保存冷冻血小板(下称冷冻血小板)的制备和临床应用情况作简要的综述.     

冰冻保存血小板制备过程中的质量控制

22℃保存的血小板 ,保存期短 ,已不能满足日益增长的临床需求 ,且易受到细菌污染 ,而低温条件下贮存血小板 ,可使血小板得到长时间有效地贮存 ,从根本上解决了临床输注血小板供不应求的难题。冰冻保存血小板具有良好的临床止血效果 ,可有效防止细菌的污染 ,且具有长期大量保存稀有血型血小板的优点 [1] ,目前在临床已被广泛使用 ,但只有正确掌握冰冻血小板的制备和质量控制方法 ,才能提高冰冻血小板的数量和质量。1　制备过程中易出现的质量问题　冰冻保存血小板是由全血制备成富含血小板血浆 ( FPRP) ,在无菌条件下加入防冻剂二甲基亚砜 …     

去除白细胞和保存温度对用6%DMSO冰存3年的血小板的影响

背景 6％的DMSO冰冻PLT能够在-80℃存放2年,而 5％的 DMSO 冰冻血小板能够在-150℃存放 3年。-80℃下的冰冻血小板衰老更快,也许是由于粒细胞的存在。作者考查去除白细胞和保存温度对DMSO冰冻血小板的影响及-80℃和-135℃的保存温度对 PVC塑料袋破损量的影响。研究设计及方法 单采富血小板血浆(PRP)分为等量的 2份,一份去除白细胞,另一份不过滤分为等量的2份。用6％的DMSO冰冻在-80℃和-135℃下用PVC塑料袋存放3年。结果 -     

冰冻保存血小板再浓缩及临床应用

国内外就血小板冰冻保存的方法已进行了较多的研究 ,目前较典型的方法有 3类 :一是在富血小板血浆中加入终浓度为 4%的二甲基亚砜 ( DM-SO) ,- 80℃冻存 [1,2 ] 。二是先制备成浓缩血小板 ,再加入终浓度 4%～ 6%的 DMSO,- 80℃冻存 [3 ,4] ;或在浓缩血小板中加入 1 2 %的高浓度保护剂冻存 ,临用时需洗涤血小板[5] 。三是近年来开始应用的冰冻保存机采血小板。保存富血小板血浆 ,由于血浆量大 ,DMSO含量较多 ,对人体有一定副作用 ,限制了临床输注剂量 ,影响临床疗效。而先制成浓缩血小板后加 DMSO冻存的方法 ,由于高浓度的 DMSO在加…     

冰冻保存血小板的制备与临床应用现状

血小板在成分输血中越来越显得重要,主要是血小板在止血和凝血过程中起到及其重要的作用。机采新鲜血小板于(22±2)℃条件下保存,容易发生细菌污染而引起输血反应,5 d保存期短很容易过期。不能满足临床输血紧急需求,供应矛盾突显。冰冻保存是延长血小板效期的最佳选择。冰冻保护剂有聚乙烯砒咯烷酮(PVP)、聚乙烯二醇(PEG)、乙烯乙二醇(EG),也有甘油、羟乙基淀粉等。目前常用的大多使用5%～     

单采血小板冷冻保存的质量评价

[目的]研究单采血小板冰冻保存。[方法]在单采血小板中加入二甲基亚砜(DMSO)，终浓度为5％，-120℃保存。观察冰冻一周，一个月后血小板聚集功能和回收率的改变、血小板低渗休克反应回复率的变化。[结果]冻存一周，一个月后单采血小板仍具有较高的回收率，血小板聚集功能和低渗休克反应回复率有一定下降。[结论]单采血小板冰冻保存是可行的，具有较好的疗效。贮存期可以延长。     

冰冻保存营养肉汤的质量初探

营养肉汤是常用的液体增菌及稀释培养基,其有效期约1周至2周,常因水分蒸发或污染而失效.基层医院细菌标本量少,配制量不易掌握,易造成浪费[1].冰冻保存生化质控品有效期远远大于4℃或常温保存质控品的期限[2].为此,我们对营养肉汤培养基进行探索,将其置于-20℃冰冻条件下保存,可延长培养基的使用时间,不影响其质量,适用于基层医院.现将其结果报道如下.     

二甲基亚砜临床应用的安全性国内外研究现状

二甲基亚砜(DMSO)是一种极性有机溶剂,目前在医疗界被广泛应用于冰冻保存器官、组织、细胞及血小板。然而,DMSO冰冻保存的血小板输注前不洗涤DMSO,所以人们对DMSO是否会对人体产生毒副作用存在担忧。本文对国内外研究的DMSO临床应用的安全性综述如下。     

富含血小板血浆制备过程中血小板CD62p表达

为了探讨大批量制备冰冻保存富含血小板血浆（Cryo-PRP)全过程中影响血小板质量变化的因素，以优化Cryo-PRP制作过程，提高Cryo-PRP质量，采用流式细胞术测定Cryo-PRP全过程中血小板膜表面CD62p表达。冰冻保存血小板全过程包括血液采集，离心制备，添加DMSO，－80℃冰箱保存和38℃水浴解冻，结果表明，在血液采集、离心制备，添加DMSO过程中血小板膜CD62p阳性率有一个突然的升高，其幅度约占整个过程的82％，对血小板的损害较大，结论：在Cryo-PRP的制备过程中，血小板的离心制备和DMSO的添加方式均可以得到良好的优化的优化，而对冰冻富含血小板血浆的质量影响也易于控制，但冰冻保存的损害较大，且不可避免，因此，迫切需要一种新型的血小板冰冻保护液和改进冰冻保存方法，以冰冻损害，进一步提高冰冻血小板质量。     

冰冻保存对机采血小板释放5-HT的影响

目的 观察冰冻保存对机采血小板释放5-HT 的影响.方法 常规以二甲基亚砜(DMSO)为冷冻保护剂、-80 ℃冰冻保存机采血小板30 d;采用全自动血细胞分析仪检测并比较冰冻保存前后血小板计数(PLT)、血小板平均体积(MPV)和血小板体积分布宽度(PDW);ELISA法检测冰冻前后及在阳离子没食子酸丙酯(C-PG)、凝血酶(thrombin,THB)、二磷酸腺苷(ADP)、胶原(Collagen)等不同PLT诱导剂激活作用下PLT释放5-HT的数量.结果 冰冻复苏后机采血小板计数变化不大(P>0.05),但MPV和PDW 均增加,血小板制品血浆5-HT含量也显著增高(P<0.01).在不同诱导剂作用下,新鲜血小板释放5-HT均高于冰冻保存的血小板,差异有显著性(P<0.01).结论 (1)机采血小板冰冻保存与解冻过程中,会引起血小板膜形态和生物活性改变.(2)冰冻保存后PLT对不同诱导剂的反应下降.     

血小板保存的应用性研究进展

<正>血小板在临床常用于治疗血小板减少症患者的活动性出血、血小板功能障碍或预防恶性肿瘤相关的血小板减少症的出血。当前我国采供血机构血小板的常规保存条件为(22±2)℃,震荡保存,保存期限为5d。22℃震荡保存期限短且发生细菌污染概率远超低温保存,易导致输血不良反应的发生,影响输血安全。目前,主要从血小板添加剂溶液替代血浆保存血小板、4℃冷藏保存血小板、-80℃深低温冰冻保存血小板等方面进行研究,缓解储存过程造成的损伤,减少细菌污染,延长血小板保质期,笔者拟就以上几个方面对血小板保存的研究及应用进展综述如下。     

微量注射泵在制备冰冻血小板过程中的应用

冰冻血小板以保存期长、时效性高、疗效可靠及无不良反应等优点,为急救患者提供了满足需要的保证,本站自2001年9月开展冰冻机采血小板以来,已为临床供应524个治疗量,但有因融解后出现絮状物而影响血小板质量甚至导致报废,就此我们讨论、分析原因,在添加DMSO的方式上作调整,收到了良好的效果,现报告如下。1材料与方法1.1材料MCS 血细胞分离机及耗材、HELMER循环式血浆融化箱、血小板保存箱(美国血液技术公司);-80℃深低温冰箱(SANYO公司);二甲基亚砜DMSO;WZ-50C2系列微量注射泵(浙江大学医学仪器有限公司);回旋振荡仪(金坛医用仪器…     

加入第二信使效应剂,降低二甲亚砜浓度的单一供者血小板的低温保存提高血小板体外机能活性

背景 细菌污染的可能性限制了血小板在22℃5天后的保存,这问题能通过低温贮存而允许血小板长期保存来解决。已经证实了含第二信使效应剂的混合液(血小板保存液)的血小板,冷藏保存后血小板保持良好的体外功能活性。分析第二信使效应混合液在冷藏期间保护血小板和减少低温保护剂的需要量应进行认真分析。方法 将新鲜单一供血者血小板单位(n=8)分成3个样本,并分别加入6％的二甲亚砜(DMSO),2％的DMSO,或血小板保存液和2％DMSO,将样本直接放入-80℃的冷藏箱中保存一个星期,待融化后分析他们的体外功能活性。结果用血小板贮存液和2％DMSO低温保存的血小板在统计学上显示在保持功能活性和存活力——包括细胞数,盘状细胞     

海藻糖对液态低温保存机采血小板凋亡的影响

目前供应临床的血小板成分主要是常温(22±2)℃液态连续振荡保存的血小板,但研究表明22℃常温振荡储存易使血小板遭受细菌污染,污染几率是低温储存的50倍,输人体内后可能会造成机体败血症的发生,并且储存时间不足5 d[1].深低温可长期大量储存血小板,并能够进行远距离运输,有效利用全血中的血小板成分,但血小板在深低温储存时所用的保护剂二甲基亚砜对患者有毒副作用,在洗涤去除的过程中会激活、损伤血小板而使其丧失临床应用价值[2-3].     

冰冻血小板制备研究

[目的]探讨冰冻单采血小板制备的可行性,为其临床应用提供可靠依据.[方法]通过认真选择献血员,单采血小板,并对40袋新鲜血小板进行计数等质控,用二甲基亚砜（DMSO）作冰冻保护剂,-80℃深低温保存1年内,解冻后观察外观,分别进行计数、计算回收率、测定PH值、粘附率、无菌试验,并且与新鲜血小板进行比较.[结果]-80℃保存冰冻单采血小板1年内血小板计数、pH值、粘附率与冻前新鲜血小板进行比较差异无显著性（P〉0.05）;血小板平均体积、血小板体积分布宽度冰冻前后差异有显著性（P〈0.01）,保存1年内平均回收率为90.49% , 无菌实验无细菌生长.[结论]-80℃深低温保存冰冻血小板质量达到标准要求,可以应用于临床.     

应用小剂量第2信使调节剂混合物冰冻保存血小板的体外功能研究

目的探讨应用小剂量第2信使调节剂混合物[thrombosol(TS):250μmol/L阿米洛利、50μmol/L硝普钠、100μmol/L腺苷和2%二甲基亚砜(DMSO)]冰冻保存血小板的体外功能变化。方法新鲜浓缩血小板应用终浓度2%DMSO、1×TS或2%DMSO+1/2TS中浓度的阿米洛利和硝普钠为冰冻保护剂-80℃保存,分别在冰冻前,冻存1周、1个月、3个月和6个月复温后,检测Plt、平均血小板体积(MPV)、凝血酶诱导的聚集反应、血小板表面CD42b、CD62p和CD63分子改变。结果2%DMSO+1/2TS中浓度的阿米洛利和硝普钠冰冻保存血小板的Plt、凝血酶诱导的聚集反应和CD42b表达水平明显高于2%DMSO组(P<0.05或<0.01),CD62p和CD63表达显著低于2%DMSO组(P<0.05或P<0.01),所有检测结果均与TS组血小板差异无统计学意义(P>0.05),而且随冰冻保存时间的延长无明显改变(P>0.05)。结论2%DMSO+1/2TS中浓度的阿米洛利和硝普钠冰冻保存6个月血小板的体外功能与TS冰冻保存血小板相当。     

红细胞冰冻前的最佳保存期探讨

背景:既能适当延长冰冻红细胞在冰冻前的保存期,又能保证冰冻红细胞的质量,是十分有意义的研究课题。目的:适当延长稀有血型红细胞冰冻前在(4±2)℃的保存期,满足急症稀有血型患者的输血,降低血液成本,减轻工作强度。方法:将冰冻前(4±2)℃保存1~6d和冰冻前(4±2)℃保存7~12d制备的冰冻红细胞进行质量比较;根据血液保养液的红细胞保护原理、美国AABB相关标准及质检结果将含添加剂的红细胞在冰冻前的保存期设定为自采血之日起14d内,对采取此措施前后2001/2009本中心的Rh(D)阴性供血情况进行统计分析。结果与结论:质量检测结果达到国家标准,两组质量检测数据比较差异无显著性意义;将含添加剂的红细胞在冰冻前的保存期设定为自采血之日起14d内,本中心Rh(D)阴性血年供血量虽逐年增加,但冰冻红细胞的供血量却未增加,其占供血的比例还在逐年下降,(4±2)℃保存血的供血比例则逐渐增加。冰冻前在(4±2)℃保存14d再制备的冰冻红细胞发往临床均未发现因此而产生的血液质量问题。结果可见增加Rh(D)阴性(4±2)℃保存血供血量,减少冰冻红细胞供血量,能及时满足急症Rh(D)阴性患者的输血,降低制备冰冻红细胞导致的高血液成本,减轻员工制备冰冻红细胞的工作强度。     

细胞低温损伤机理与血小板冰冻保存

近年来 ,冰冻保存的血小板用于临床已取得实效。但在冰冻血小板复融时常发生纤维蛋白析出等不利情况 ,多为血小板损伤造成 ,影响冰冻血小板质量。掌握细胞低温损伤原理 ,对冰冻血小板制备、保存中需要注意的事项具有很好的指导意义。现综述如下。1　细胞低温保存的基本原理　　低温下 ,活细胞内的生物新陈代谢急剧减弱 ,使细胞或组织可长期保存。可供科研和医疗使用 ,如 :输血、骨髓移植、人工受精等。2　进行低温保存的主要步骤2 .1　细胞或组织中加入防冻剂 ,如二甲亚砜 (DMSO)。2 .2　一同降温至某一温度值下 ,如 :- 80℃ (超低温冰柜 …     

不同温度保存的血小板的代谢情况及功能变化

目的:对比分析4℃冷藏保存和22℃振荡保存的血小板的代谢情况及功能差异,为制定冷藏保存血小板技术提供实验依据。方法:分别对4℃冷藏保存的血小板和22℃振荡保存的血小板于保存时间点d 2、4、6、11、15和21取样,检测不同保存条件下的血小板各代谢指标以及血栓弹力图(TEG)。结果:4℃保存6 d时,血小板的p H、PO2、PCO2、MPV、GLU值均无明显变化(P 0. 05),Plt数降低,PDW和LDH升高(P 0. 05);而22℃保存6 d时,仅血小板的MPV值无明显变化(P 0. 05); p H、PCO2、GLU、Plt降低,PO2、LDH、PDW升高(P 0. 05)。同一保存期内,PO2、p H、Plt、MPV、LDH、GLU在2组间比较均有差异,4℃保存的血小板p H值、MPV明显低于22℃保存的血小板,而GLU、PO2、LDH和Plt明显高于22℃保存的血小板(P 0. 05)。从d 15开始,4℃保存的血小板的PCO2检测不出,Plt计数也突然迅速降低。在功能方面,随着保存期延长,4℃保存的血小板MA值降低不明显,而22℃保存的血小板MA值降低明显,且同一保存期内4℃保存的血小板的MA值高于22℃保存的血小板。结论:4℃保存的血小板比22℃振荡保存的血小板代谢慢,且同一保存期内,4℃保存的血小板的聚集功能强于22℃保存的血小板。