母鼠边缘性碘缺乏影响其仔鼠脑发育相关蛋白的表达

目的 探讨边缘性碘缺乏对后代神经智力发育的影响及其机制.方法 根据流行病学特点及文献报道的大鼠碘代谢特点建立边缘性碘缺乏大鼠模型.边缘性碘缺乏大鼠每日给予3μg碘,正常对照鼠每日给予4μg碘,低碘鼠每日给予1.2μg碘.用Western印迹方法检测仔鼠7d龄时海马脑源性神经营养因子(BDNF)及早期生长反应因子1(EGR1)的蛋白水平,用免疫组化方法检测仔鼠40d龄时海马CA1区的c-jun、c-fos蛋白表达,用水迷宫方法评估仔鼠学习及空间记忆能力.结果 边缘性碘缺乏组大鼠妊娠期间FT4水平下降约30％.边缘性碘缺乏组仔鼠7d龄时海马BDNF及EGR1的蛋白水平比正常对照组明显下降(均P＜0.05),边缘性碘缺乏组仔鼠40d龄时海马CA1区的c-jun、c-fos蛋白表达也明显下降(均P＜0.05),仔鼠的空间学习记忆能力有下降趋势.结论 大鼠妊娠前边缘性碘缺乏时,妊娠后FT4水平下降,影响仔鼠脑内相关蛋白的表达,对智力产生一定影响.     

碘缺乏和甲状腺功能减退对大鼠仔鼠小脑CaM和CaN表达的影响

目的观察碘缺乏及甲状腺功能减退对大鼠仔鼠小脑发育的影响,以及对CaM、CaN表达的影响。方法W istar大鼠交配妊娠后,取孕鼠28只按体重随机分成对照组、甲状腺功能减退-1组、甲状腺功能减退-2组和碘缺乏组。自妊娠第6日起,对照组继续饲以普通饲料;甲减-1组、甲减-2组分别给予5 ppm、15 ppm丙基硫尿嘧啶饮水,饲以普通饲料;碘缺乏组饲以缺碘地区粮食配制的饲料,至仔鼠生后第28 d（PN28）。PN7、PN14、PN21、PN28、PN42取仔鼠小脑皮质进行CaM、CaN蛋白免疫组化染色。结果PN14、PN21、PN28及PN42时,甲减-2组和碘缺乏组仔鼠小脑皮质CaM的平均积分光密度值显著低于对照组和甲减-1组,具有统计学意义（P〈0.05）;碘缺乏组仔鼠小脑皮质CaN表达均显著高于对照组,具有统计学意义（P〈0.05）。结论碘缺乏和甲状腺功能减退可影响大鼠仔鼠小脑CaM、CaN蛋白的表达,从而损害仔鼠小脑,导致脑神经发育障碍。     

甲状腺机能减退对仔鼠中枢神经系统Ⅱ型脱碘酶mRNA表达的影响

目的观察甲状腺激素机能减退(甲减)时仔鼠中枢神经系统Ⅱ型脱碘酶mRNA(D2-mRNA)的表达,研究甲状腺激素对脑发育调控的机制。方法怀孕Wistar雌鼠随机分为甲减组和对照组,从怀孕15d开始甲减组每日经胃灌注1%丙基硫氧嘧啶2.5ml,所生鼠即为甲减仔鼠。对照组每日经胃灌注生理盐水2.5ml。分别于出生时、出生后14、21和45d处死仔鼠,利用荧光定量PCR的方法,分析各组动物大脑皮质、小脑、脑干、海马及脊髓中D2的表达。结果甲减仔鼠大脑、脑干及脊髓中D2mRNA在出生时及出生后14d时表达量高于对照组,在21d和45d时与对照组无显著性差异;在小脑和海马中D2mRNA的表达量在出生时及出生后14、21d时都高于对照组,只有在45d时与对照组接近。结论甲减时仔鼠中枢神经系统D2表达增加,通过调节甲状腺激素水平对其生长发育起着重要作用。     

碘缺乏和甲状腺功能减退对大鼠仔鼠小脑发育的损伤及CaMKⅡ表达的影响

目的观察碘缺乏及甲状腺功能减退大鼠仔鼠小脑发育的影响,以及对CaMKⅡ表达的影响。方法雌性Wistar大鼠,交配妊娠后,取孕鼠28只按体重随机分成对照组、甲状腺功能减退-1组、甲状腺功能减退-2组和碘缺乏组。自妊娠第6日起,对照组继续饲以普通饲料;甲减-1组、甲减-2组分别给予5ppm、15ppm丙基硫尿嘧啶饮水,饲以普通饲料;碘缺乏组饲以缺碘地区粮食配制的饲料,至仔鼠生后第28天(PN28)。PN7、PN14、PN21、PN28、PN42取仔鼠小脑皮质进行尼氏染色及CaMKⅡ蛋白免疫组化染色。结果 PN14、PN21、PN28及PN42各组大鼠仔鼠小脑神经元的尼氏小体的平均积分光密度值显著低于对照组,具有统计学意义(P<0.05);仔鼠小脑皮质CaMKⅡ表达均显著低于对照组,具有统计学意义(P<0.05)。结论碘缺乏和甲状腺功能减退可影响大鼠仔鼠小脑CaMKⅡ蛋白的表达,从而损害仔鼠小脑,导致脑神经发育障碍。     

碘过量对仔鼠脑形态学的影响及硒的干预作用

目的观察碘过量对Balb／c仔鼠脑组织形态结构的影响及硒的干预作用。方法选择45只Balb／c小鼠随机分为3组：对照组（饮用自来水）、碘过量组（饮用水含碘量为3000μg／L）、碘过量加硒组（饮用水含碘、硒量分别为3000、200μg／L）。饲养4个月后，雌雄交配。光、电镜下观察0、14日龄仔鼠大脑组织形态和海马CA1区神经元超微结构的变化。结果与对照组相比，碘过量组0、14日龄仔鼠大脑皮层和海马CA1区神经细胞体积减小，细胞数目增多，海马CA1区神经元核膜变薄，细胞器减少，神经元的发育较幼稚．碘过量加硒组介于对照组和碘过量组之间。结论碘过量导致仔鼠大脑发育落后，补硒具有缓解作用。     

缺碘性甲状腺功能低下大鼠脑中微量元素的研究

目的验证碘缺乏病(IDD)是一种涉及多种微量元素的疾病,探讨缺碘大鼠脑中微量元素的变化.方法复制缺碘致甲状腺功能低下(甲低)大鼠模型,同龄正常大鼠为对照,取不同脑区行冰冻切片,置聚碳酸酯膜上干燥后,用同步辐射X射线荧光分析法,测定各脑区的微量元素.用SPSS软件包数据处理.结果①大鼠模型血中T4和FT4分别为(3.50±0.66)nmol/L和(0.59±0.12)pmol/L,明显低于正常组的相应值(104.68±20.10)nmol/L和(16.86±2.70)pmol/L;②碘的同族元素氯溴在低碘组含量以(counts,c)计与正常者相比在海马分别是78c46c和20c15c;在皮质中含量分别为50c35c和9c7c,均显著升高;上丘脑中则降低.其它元素P、S、K、Ca、Mn、Fe、Cu、Zn、Br和Rb在低碘组海马和皮质中普遍升高,而上丘脑中降低.特别是Zn,低碘鼠中比正常鼠升高1倍或近1倍(海马中为110c56c;皮质中为105c54c),而在上丘脑中则相差不大.这与甲状腺激素受体数目的分布和变化相符,因为低碘鼠海马和皮质中T3受体含量显著升高(见另文).而T3受体恰是细胞核内的含Zn蛋白,故Zn含量受碘营养状况的影响最敏感.但无核红细胞在甲低时其Zn含量也升高,是值得进一步研究的有趣现象.结论缺碘组海马与皮质中所测P、S、Cl、K、Ca、Mn、Fe、Cu、Zn、Br和Rb等元素均有升高,而且上丘脑大部分元素降低.结果表明IDD致甲低会对其它微量元素的代谢产生深刻影响.     

碘缺乏和甲状腺功能减退对大鼠仔鼠小脑细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达的影响

目的 观察碘缺乏和甲状腺功能减退(甲减)对大鼠仔鼠小脑细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulate kinase,ERK1/2)蛋白表达的影响.方法 健康Wistar大鼠28只,雌性,60日龄.将大鼠按体质量随机分为对照组、碘缺乏病组、甲减组,甲减组根据饮水中含丙基硫尿嘧啶(PTU)剂量分为5 mg/L组和15 mg/L组.每组各7只.母鼠妊娠后,分别选用低碘饲料及PTU饮水诱导建立低碘及甲减大鼠动物模型.仔鼠出生7、14、21、28、42 d时分别处死,测定仔鼠小脑质量;取小脑组织进行镀银染色和免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)染色,光镜下观察小脑形态学变化,图像分析仪下观察ERK1/2蛋白表达.结果 仔鼠出生14、21、28、42 d时,小脑质量各组间比较差异有统计学意义(F=6.325、8.870、16.191、21.574,P均<0.05);碘缺乏病组仔鼠小脑质量[(0.0945±0.0233)、(0.1347±0.0046)、(0.1542±0.0094)、(0.1949±0.0048)g]明显低于对照组[(0.1856±0.0123)、(0.2049±0.0098)、(0.2268±0.0065)、(0.2606±0.0086)g,P均<0.05]和甲减组[5 mg/L组:(0.1741±0.0172)、(0.1927±0.0103)、(0.2181±0.0064)、(0.2583±0.0054)g,P均<0.05;15 mg/L组:(0.1604±0.0083)、(0.1682±0.0103)、(0.1996±0.0073)、(0.2579±0.0067)g,P均<0.05].出生7 d时,对照组、甲减组仔鼠小脑皮质具有典型的层状结构,各层之间界限清晰,但碘缺乏病组各层之间界限模糊;出生21 d时,与对照组比较,15 mg/L组和碘缺乏病组仔鼠小脑外颗粒细胞消失延迟,仍有2～3层外颗粒细胞;出生28、42 d时,甲减组和碘缺乏病组仔鼠小脑分子层厚度低于对照组.小脑组织ERK1/2平均积分光密度,在出生7 d时,组间比较差异无统计学意义(F=1.102,P>0.05);在出生14、21、28、42 d时,各组间比较差异有统计学意义(F=16.131、13.543、26.953、41.583,P均<0.01);碘缺乏病组(7.3245±0.5070)、(8.3606±1.0683)、(9.1217±1.0402)、(12.1587±0.7581)和甲减组[5 mg/L组:(11.4307±15200)、(14.919±0.8497)、(169082±1.1130)、(15.7721±0.82913);15 ms/L组:(7.8538±0.9775)、(11.2461±0.8138)、(12.7800±1.3783)、(13.0871±1.1450)]明显低于对照组[(16.2831±0.5143)、(20.2653±0.9551)、(22.7485±1.0267)、(22.1725±0.9939),P均<0.01].结论 碘缺乏和甲减可使仔鼠小脑产生明显的形态学改变,降低大鼠仔鼠小脑组织ERK1/2蛋白表达.影响神经系统的发育.     

甲状腺激素对仔鼠大脑皮质和海马细胞凋亡的影响

目的研究甲状腺素(T4)对发育期大鼠大脑皮质、海马细胞程序化死亡(PCD)的影响。方法采用甲巯咪唑(MM)复制甲状腺功能减退(甲减)孕鼠模型,出生后仔鼠为先天甲减鼠,同时设正常对照组:应用原位末端标记(TUNEL)方法检测出生后7、14、21d仔鼠大脑皮质、海马PCD阳性细胞。结果 (1)MM组各日龄仔鼠血清FT3、FT4水平明显低于对照组。(2)正常大鼠生后早期大脑皮质、海马均存在细胞凋亡,以生后7d TUNEL阳性细胞数最多,此后逐渐减低。甲减使各脑区各时点凋亡细胞数均明显增加。结论正常大鼠发育期大脑皮质和海马即存在细胞凋亡,甲状腺激素对大脑皮质、海马细胞凋亡有影响,可能是甲减性脑功能障碍的机制之一。     

碘缺乏和碘过量对成年大鼠海马神经元特异性烯醇化酶的影响

目的　研究碘缺乏和碘过量对Wistar成年大鼠海马神经元功能的影响。方法　断乳1个月Wistar大鼠60只,雌雄各半,随机分为6组:低碘组(LI) ,适碘组(NI) ,5倍碘组(5HI) ,10倍碘组(10HI) ,5 0倍碘组(5 0HI)和10 0倍碘组(10 0HI)。给予不同浓度碘化钾水喂养6个月后,处死取大脑,应用免疫组织化学技术观察海马CA3 区神经元,并对神经元特异性烯醇化酶NSE反应阳性细胞进行形态计量学分析。结果　LI组、5 0HI组、1OOHI组海马神经元特异性烯醇化酶NSE阳性细胞细胞质的平均灰度值较NI组明显降低(P <0 .0 5 )。结论　碘缺乏和碘过量(5 0HI组、10 0HI组)使Wistar成年大鼠海马神经元NSE活性降低,影响神经元的能量代谢。     

碘缺乏和碘过量对仔二代大鼠海马神经元特异性烯醇化酶活性的影响

目的探讨碘缺乏和碘过量对仔二代Wistar大鼠海马神经元特异性烯醇化酶(NSE)发育的影响。方法按照饮用水含碘(KIO_3)量不同,将大鼠随机分为6组(NI、5HI、10HI、50HI、100HI、LI),取1、20、60日龄仔二代鼠大脑,应用免疫组织化学技术观察海马CA3区神经元,并对NSE反应阳性细胞进行形态学计量分析。结果1日龄:各组仔鼠大脑海马CA3区NSE阳性反应极微弱。20日龄:LI组NSE阳性细胞的细胞核直径、细胞体直径、面数密度和灰度值均比NI组明显减小(P<0.05或<0.01);100HI组面数密度和灰度值小于NI组,差异亦有统计学意义(P<0.05)。60日龄:与NI组比较,LI、100HI组NSE阳性细胞的细胞核直径、细胞体直径、核质比和面数密度均明显减小(P<0.05或<0.01);LI、50HI、100HI组的NSE阳性细胞灰度值均比NI组明显降低(P<0.05或<0.01)。结论碘缺乏和长期严重碘过量使仔二代大鼠大脑海马神经元NSE活性降低,影响神经元的能量代谢,其机制可能与碘缺乏和严重碘过量所致的甲状腺功能低下有关。     

血府逐瘀汤对血管平滑肌细胞c-fos及c-jun蛋白表达影响的实验研究

目的 探讨血府逐瘀汤及其拆方对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞MAPK下游效应因子c-fos、c-jun蛋白表达的影响.方法 采用高脂饲料复制动脉粥样硬化模型,免疫组织化学法检测主动脉c-fos、c-jun的表达.结果 与空白组比较,模型组c-fos、c-jun表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,血府逐瘀汤组和桃红四物组c-fos表达均降低(P<0.05或P<0.01);血府逐瘀汤组、桃红四物组和四逆散组c-jun蛋白表达均降低(P<0.05);四逆散组c-fos差异无统计学意义(P>0.05).结论 血府逐瘀汤可以有效降低血管平滑肌c-fos、c-jun阳性颗粒的表达,可能是其抗动脉粥样硬化血管平滑肌细胞增殖的机制之一.     

胆囊癌hTERT、c-myc表达及相关性研究

目的观察端粒酶催化亚基（hTERT）、c-myc在胆囊癌中的表达，探讨hTERT及c-myc与胆囊癌的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测15例胆囊癌组织、癌旁组织、正常胆囊黏膜及20例胆囊腺瘤性息肉组织hTERT、c-myc的表达。结果①正常胆囊黏膜、胆囊腺瘤性息肉组织、癌旁组织及胆囊癌组织hTERT的阳性表达率分别为6，67％（1/15）、10．00％（2／20）、33．33％（5／15）及80％（12／15）；c-myc阳性表达率分别为20．00％（3／15）、45．00％（9／20）、40％（6／15）及86．67％（13／15）；胆囊癌组织中hTERT与c-myc阳性表达率明显高于其它组织（P〈0．05）；②胆囊癌组织hTERT和c-myc表达与淋巴结转移有关，伴淋巴结转移的胆囊癌hTERT及c-myc阳性表达率明显高于无淋巴结转移者（P〈0．05）；③c-myc在hTERT阳性的胆囊癌组织的表达率明显高于hTERT阴性组（P〈0．05）。结论hTERT过度表达在胆囊癌的发生发展过程中具有重要作用，c-myc在转录水平上调控hTERT的表达，进而激活端粒酶促进胆囊癌的形成。     

肝细胞癌尿激酶型纤溶酶原激活物受体mRNA、VEGF和c-erbB2的表达及意义

探讨尿激酶型纤溶酶原激活物受体（UPAR）mRNA、血管内皮细胞生长因子（VEGF）和癌基因c—erbB2在肝细胞癌（HCC）的表达与其病理学特性和肿瘤转移的关系。采用原位杂交方法检测肝细胞癌UPA mRNA表达,免疫组化法检测VEGF和c—erbB2的表达。肝癌转移组的UPAR mRNA、VEGF和c—erbB2阳性表达率及表达强度均明显高于无转移组,二者相比均有显著性差异（P〈0．05）,但它们的表达与肝癌的大小、分化程度却无关;UPAR mRNA与VEGF及c—erbB2的表达强度均呈正相关（r=0．656、0．653,P〈0．05）。UPA mRNA、VEGF和c—erbB2的表达可作为肝细胞癌的侵袭表型、判断疗效以及估计预后的重要指标。     

Interleukin-6 gene -174g>c and -572g>c promoter polymorphisms are strong predictors of plasma interleukin-6 levels after coronary artery bypass surgery

Interleukin-6 (IL-6) synthesized in response to diverse stimuli may play an important role in bridging the inflammatory and atherosclerotic processes. The acute-phase response after coronary artery bypass graft surgery (CABG) is associated with the induction and release of cytokines, such as IL-6. We have examined the effect of common polymorphisms in the IL-6 gene promoter (-174G>C, -572G>C, and -597G>A) on IL-6 levels after elective CABG. DNA extracted from the peripheral blood of 127 patients was amplified by polymerase chain reaction. IL-6 genotypes were resolved by gel electrophoresis after restriction enzyme digestion. Serum IL-6 was measured before surgery and in serial samples at 6, 24, 48, and 72 hours after CABG. Genotype distribution was as expected for a population in Hardy-Weinberg equilibrium for all polymorphisms. Rare allele frequencies (+/-95% CIs) were similar to those reported previously: -597A 0.36 (0.30 to 0.42), -572C 0.07 (0.04 to 0.10), and -174C 0.37 (0.31 to 0.43). The -174G>C and -597G>A genotypes were in strong allelic association (Delta=0.97, P<0.001). Baseline IL-6 levels did not significantly differ between patients with different genotypes for any polymorphism. However, 6 hours after CABG, peak IL-6 levels were significantly higher (P=0.03) in carriers of the -572C allele than in those of the -572GG genotype (355+/-67 versus 216+/-13 pg/mL, respectively) and in those with genotype -174CC compared with -174G allele carriers (287+/-31 versus 227+/-15 pg/mL, respectively; P=0.04). These effects remained statistically significant after adjusting for possible confounders, including age, sex, smoking, duration of cardiopulmonary bypass, aortic cross-clamp time, and total duration of surgery. These data demonstrate that IL-6 promoter polymorphisms influence peak IL-6 production after CABG, suggesting that these polymorphisms, which are functional in vitro, are also functional in vivo, suggesting a genetic influence on IL-6 levels after acute severe injury.